抗黃病毒的抗病毒組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種預(yù)防或治療人類或動(dòng)物中黃病毒感染或由其所產(chǎn)生的疾病的具有抗病毒活性的組合物，其特征在于該組合物中包含黃芩素、其類似物或其衍生物。該組合物可進(jìn)一步包含醫(yī)藥上可接受的載劑。所述抗病毒活性可包括對(duì)病毒附著于宿主細(xì)胞的抑制、細(xì)胞內(nèi)病毒復(fù)制的抑制、及直接殺病毒活性。黃病毒可包含登革熱病毒1型、登革熱病毒2型、登革熱病毒3型、登革熱病毒4型及日本腦炎病毒。
【專利說明】抗黃病毒的抗病毒組合物
[0001] 發(fā)明背景

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及一種預(yù)防或治療正鏈RNA病毒感染或疾病的具有抗病毒活性的組 合物，更具體而目，涉及用以預(yù)防或治療黃病毒（flavivirus)感染的含有類黃酮黃零素 (baicalein)的組合物。
[0003] 相關(guān)技術(shù)描述
[0004] 包含黃病毒科的正鏈RNA病毒包括許多醫(yī)藥上重要的病毒，包括登革熱病毒，一 種于世界上的熱帶及亞熱帶區(qū)常見的嚴(yán)重的蚊子傳播的疾病。登革熱已每年引起許多死亡 且有數(shù)百萬人罹病并威脅生活于此區(qū)域中的幾乎250萬人。其為最迅速蔓延的蚊子傳播的 病毒感染。
[0005] 登革熱是由登革熱病毒引起，其為黃病毒科黃病毒屬的一員，為一種正鏈RNA 病毒。此科中其他常見的醫(yī)學(xué)上重要病毒包括日本腦炎病毒（Japanese encephalitis virus)、黃熱病病毒（Yellow fever virus)、C型肝炎病毒、西尼羅腦炎病毒（West Nile encephalitis virus)、墨累山谷腦炎病毒（Murray Valley encephalitis virus)、蜱傳 腦炎病毒（Tick-borne encephalitis virus)、圣路易腦炎病毒（St. Louis encephalitis virus)及卡薩諾爾森林病病毒（Kyasanur Forest disease virus)。感染這些病毒中的 任一者都會(huì)造成廣范圍的臨床病癥，由無表現(xiàn)的無癥狀或輕微發(fā)熱感染、自限性感染至嚴(yán) 重腦炎、肝炎及死亡。相似地，登革熱可表現(xiàn)為自限性登革熱發(fā)燒（self-limited dengue fever(DF))至嚴(yán)重登革熱出血熱（dengue hemorrhagic fever(DHF))及登革熱休克癥 候群（dengue shock syndrome(DSS))。有四種登革熱病毒的血清型或基因型，登革熱病 毒1型（DENV-1)、登革熱病毒2型（DENV-2)、登革熱病毒3型（DENV-3)及登革熱病毒4 型（DENV-4)，其是通過至少二種蚊蟲傳染至人類，埃及斑蚊（Aedesaegypti)及白線斑蚊 (Aedesalbopictus)。所有四種病毒基因型引起相似的臨床癥狀。怎樣的機(jī)制引起嚴(yán)重的 登革熱仍未知。登革熱的嚴(yán)重度被認(rèn)為是與存在于個(gè)體血液中的病毒量直接相關(guān)。
[0006] 迄今，對(duì)于大多數(shù)黃病毒感染的治療并無有效的治療劑或抗病毒療法，若非其中 所有的病毒感染，包括登革熱。并無可幫助減少病患中登革熱病毒負(fù)載的有效的抗病毒以 預(yù)防嚴(yán)重的登革熱DHF或DSS的表現(xiàn)。由于全球性快速擴(kuò)展登革熱病，發(fā)展有效的抗病毒 藥或抗登革熱的可接受的疫苗是急迫的。使用疫苗預(yù)防登革熱的嘗試被許多可能的議題及 風(fēng)險(xiǎn)所困擾。因此，可幫助減少于感染早期登革熱病毒負(fù)載的有效藥物是極被期望的。
[0007] 由于植物和衍生自植物的化合物具有較低的副作用及其于自然界中無所不在的 可親近性，使得植物和衍生自植物的化合物仍然是新抗病毒藥物一個(gè)重要來源。已有抗登 革熱病毒的各種植物化學(xué)劑的抗病毒活性的許多報(bào)告。其中包括類黃酮。類黃酮是在不同 植物形式中廣泛被發(fā)現(xiàn)的低分子量酚化合物。不同型的類黃酮可于植物的果、根、堅(jiān)果、種 子、樹皮、蓮及花中發(fā)現(xiàn)。黃零素（ 5,6, 7-三輕基黃酮（flavone))，為類黃酮的一型，于許多 草本植物的根中被發(fā)現(xiàn)。
[0008] 黃芩素抗許多常見人類病毒的抗病毒活性已被評(píng)估，包括雙鏈DNA病毒，皰疹病 毒，及少數(shù)負(fù)鏈呼吸道病毒，但無一者證實(shí)其作為正鏈RNA病毒復(fù)制的抑制劑。黃芩素作為 正鏈RNA病毒的有效抑制劑的應(yīng)用，更具體而言為黃病毒登革熱病毒的復(fù)制，于本發(fā)明中 被強(qiáng)調(diào)。
[0009] US專利申請(qǐng)公開案No. 2010/0004325 A1公開了一種黃芩素的新分子及細(xì)胞效 果，其是通過使用化合物庫(kù)的脯胺酰輕化酶2(proxlylhydroxylase 2(PHD2))抑制劑篩選 法而被選出。所引述的先前技術(shù)分析細(xì)胞中黃芩素誘導(dǎo)的缺氧誘導(dǎo)因子（HIF)蛋白質(zhì)表 達(dá)，定量分析黃芩素抗PHD 2的抑制效果，確認(rèn)抗抑制HIF因子的抑制效果，并通過使用報(bào)導(dǎo) 子分析及ELISA確認(rèn)是否VEGF被表達(dá)。所引述的先前技術(shù)證明黃芩素可被使用作為治療 缺血性及其他相關(guān)疾病的藥物。盡管如此，所引述的先前技術(shù)并未提及黃芩素的特定組合 物，其作用為抗黃病毒復(fù)制的抑制劑。因此，有需要具有某種可作用的組合物或黃芩素的濃 度，其展現(xiàn)抗病毒性，尤其是抗登革熱病毒。此外，有需要最大化黃芩素減少病毒RNA復(fù)制 的潛力，以治療及預(yù)防由屬于黃病毒屬的RNA病毒激發(fā)的感染疾病，其通過具有不同濃度 的黃芩素以展現(xiàn)直接的殺病毒活性、預(yù)防性質(zhì)、及抗附著活性。
[0010] us專利申請(qǐng)公開案No. 2〇08/0176932 A1是關(guān)于一種具有協(xié)同性抗腫瘤效果的醫(yī) 藥組合物的發(fā)明，更具體而言為一種含有類黃酮的醫(yī)藥組合物。所引述的先前技術(shù)進(jìn)一步 是關(guān)于此組合物的制備及醫(yī)藥用途，其含有黃尊素（baicalein)及黃苳苷（baicalin)或野 黃芩甙（scutellarin)。所引述的先前技術(shù)也公開了呈現(xiàn)抗腫瘤效果的黃芩素及黃芩苷或 野黃芩甙及其相關(guān)化合物的組合物，但并未提及此組合物與黃病毒復(fù)制有關(guān)。因此，有需要 具有展現(xiàn)抗病毒性質(zhì)及抑制黃病毒復(fù)制的組合物或化合物，尤其是登革熱病毒及日本腦炎 病毒。
[0011] US專利申請(qǐng)案No. 6, 083, 921 -般而言是關(guān)于具有抗病毒、抗細(xì)菌、或免疫調(diào)節(jié) 性的醫(yī)藥組合物，具體而言是關(guān)于有用于治療或預(yù)防副流行性感冒（parainfluenza)病 毒或呼吸道融合病毒感染的醫(yī)藥組合物。此醫(yī)藥組合物是獲自含黃芩苷的植物、氯原酸 (chlorogenic acid)、及連翹酯試（forsythiaside)的組合，尤其是經(jīng)分離及純化的形式。 此醫(yī)藥組合物有用性并未擴(kuò)展至正鏈RNA病毒，尤其是黃病毒。因此，有通過具有由黃芩素 作為活性抗病毒成分所構(gòu)成的組合物以解決所引述的先前技術(shù)的需求，以治療及預(yù)防由正 鏈RNA病毒諸如黃病毒引起的感染，例如登革熱病毒及日本腦炎病毒。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的一目的是提供一種預(yù)防或治療黃病毒感染或由其所產(chǎn)生的疾病的具有 抗病毒活性的組合物。
[0013] 本發(fā)明的一目的是提供一種預(yù)防或治療登革熱病毒感染或日本腦炎病毒感染的 具有抗病毒活性的組合物。
[0014] 本發(fā)明的又一目的是提供一種具有包含抑制病毒復(fù)制、減少病毒產(chǎn)量、殺病毒活 性及抑制病毒附著至宿主細(xì)胞的抗病毒活性的組合物。
[0015] 因此，這些目的可通過本發(fā)明的下列及延伸的釋明而達(dá)成。本發(fā)明是關(guān)于一種于 人類或動(dòng)物中預(yù)防或治療黃病毒感染或其所產(chǎn)生的疾病的具有抗病毒活性的組合物，其特 征為所述組合物由黃芩素、其類似物或其衍生物所構(gòu)成。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 由下列詳細(xì)說明并結(jié)合的本發(fā)明較佳實(shí)施例中的圖式來說明，本發(fā)明的特征將可 更容易被了解及知悉，其中：
[0017] 圖1(a)顯示于登革熱病毒感染前添加不同濃度的黃芩素的Vero細(xì)胞于處理登革 熱病毒感染后的登革熱病毒灶減少百分比（RF% )的圖。
[0018] 圖1 (b)顯示于登革熱病毒感染前添加不同濃度的黃芩素的Vero細(xì)胞于處理登革 熱病毒感染后的登革熱病毒RNA減少量的圖。
[0019] 圖2(a)顯示于登革熱病毒感染期間同時(shí)添加不同濃度的黃芩素的Vero細(xì)胞于處 理登革熱病毒感染后的登革熱病毒灶減少百分比（RF%)的圖。
[0020] 圖2(b)顯示于登革熱病毒感染期間同時(shí)添加不同濃度的黃芩素的Vero細(xì)胞于處 理登革熱病毒感染后的登革熱病毒RNA減少量的圖。
[0021] 圖3 (a)顯示于登革熱病毒感染后添加不同濃度的黃芩素的Vero細(xì)胞于處理登革 熱病毒感染后的登革熱病毒灶減少百分比（RF% )的圖。
[0022] 圖3 (b)顯示于登革熱病毒感染后添加不同濃度的黃芩素的Vero細(xì)胞于處理登革 熱病毒感染后的登革熱病毒RNA減少量的圖。
[0023] 圖4(a)顯示直接以不同濃度的黃芩素處理登革熱病毒的登革熱病毒灶減少百分 比（RF% )的圖。
[0024] 圖4(b)顯示直接以不同濃度的黃苳素處理登革熱病毒的登革熱病毒RNA減少量 的圖。
[0025] 圖5顯示于JEV感染后添加不同濃度的黃芩素的Vero細(xì)胞于處理JEV感染后日 本腦炎病毒（JEV)灶減少百分比（RF% )。
[0026] 圖6是黃芩素的分子結(jié)構(gòu)。

【具體實(shí)施方式】
[0027] 依據(jù)要求，本發(fā)明的詳細(xì)實(shí)施例中揭示于本文；然而，應(yīng)了解所揭示的具體實(shí)施例 僅為發(fā)明的示范，其可以各種形式被體現(xiàn)。因此，本文揭示的特定結(jié)構(gòu)及功能上的細(xì)節(jié)不被 解釋為限制而僅作為權(quán)利要求的基礎(chǔ)。應(yīng)了解圖式及其詳細(xì)說明并未被意圖用來限制本 發(fā)明為所揭示的特定形式，相反地，本發(fā)明是涵括落入添附的權(quán)利要求所定義的本發(fā)明范 疇的所有變體、相等物、及替換物。如本申請(qǐng)案全文所使用，〃可〃一詞是用于允許的意義 (即，意指具有潛力），而非強(qiáng)迫的意義（即，意指必須）。相似地，〃包括〃、〃包含〃及〃含 "意指包括，但未限于。又，〃一"或"一種"意指"至少一個(gè)"且"復(fù)數(shù)"一詞意指一或 多個(gè),除非另有陳述。于使用技術(shù)詞語的縮寫時(shí)，表示此項(xiàng)【技術(shù)領(lǐng)域】中己知的通常被接受的 意義。為了容易參照，當(dāng)引述圖式的共通的相同或相似特征時(shí)，全部圖式使用共通的標(biāo)號(hào)。 現(xiàn)參照?qǐng)D1-5以描述本發(fā)明。
[0028] 本發(fā)明是關(guān)于一種用于預(yù)防或治療人類或動(dòng)物中黃病毒感染或其所產(chǎn)生的疾病 的具有抗病毒活性的組合物，其特征為所述組合物包含黃芩素、其類似物或其衍生物。如本 文使用的"其類似物或其衍生物"一詞亦包括黃芩素的鹽類、溶劑化物、水合物、前藥、及包 括互變異構(gòu)物及立體異構(gòu)物的異構(gòu)物。
[0029] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，所述黃芩素的濃度范圍為約〇· 1至100重量％。
[0030] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，所述組合物的有效濃度范圍為 ml(1. 56 μ g/ml)至 100. 〇 μ g/ml。
[0031] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，所述黃芩素是萃取自植物黃零 (Scutellariabaicalensis)的根。
[0032] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，所述組合物以醫(yī)藥上可接受的載劑被調(diào)配。
[0033] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，所述具有抗病毒活性的組合物的有效濃度包含 50 μ g/ml - 100 μ g/ml 的黃苳素。
[0034] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，抗病毒活性是殺病毒活性。
[0035] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，所述具有殺病毒活性的組合物的有效濃度包含 12. 5ug/ml的黃芩素。
[0036] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，用于人類或動(dòng)物中預(yù)防黃病毒感染或由其所產(chǎn)生 的疾病的所述組合物的有效濃度包含50 μ g/ml的黃芩素。
[0037] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，抗病毒活性是抑制病毒附著于宿主細(xì)胞。
[0038] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，所述具有抑制病毒附著至宿主細(xì)胞的組合物的有 效濃度包含25 μ g/ml的黃芩素。
[0039] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，黃病毒是選自包含登革熱病毒1型、登革熱病毒2 型、登革熱病毒3型、登革熱病毒4型、及日本腦炎病毒所組成的群組。
[0040] 在本發(fā)明的一優(yōu)選的實(shí)施例中，所述組合物是用于革熱病毒2型及日本腦炎病毒 的預(yù)防或治療。
[0041] 所屬領(lǐng)域技術(shù)人員于相似于本發(fā)明的目的上可企圖修飾黃芩素的分子結(jié)構(gòu)。通過 加入、移除或取代黃芩素化合物中的基團(tuán)，此種修飾是可能的。通過于一或多個(gè)位置的酷 化、水解、皂化、造成取代、或任何化學(xué)制法的手段，所述黃芩素可被加以修飾。
[0042] 圖6呈示黃芩素的分子結(jié)構(gòu)。
[0043] 黃本素仆會(huì)物
[0044]

【權(quán)利要求】
1. 一種預(yù)防或治療人類或動(dòng)物中黃病毒感染或由其所產(chǎn)生的疾病的具有抗病毒活性 的組合物，其特征在于所述組合物中包含黃芩素、其類似物或其衍生物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中黃芩素的濃度范圍為〇. 1至100重量％。
3·根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物的有效濃度范圍為L(zhǎng) 6 μ g/ ml (1· 56 μ g/ml)至 100. 0 μ g/ml。
4·根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物萃取自植物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物是與醫(yī)藥上可接受的載劑一起調(diào) 配。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中抗病毒活性是指預(yù)防性感染后抗病毒活性。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中具有預(yù)防性抗病毒活性的所述組合物的有效濃 度為50 μ g/ml的黃芩素。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中抗病毒活性是指直接殺病毒活性。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中具有殺病毒活性的所述組合物的有效濃度為 12. 5 μ g/ml的黃苳素。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中抗病毒活性是指對(duì)病毒附著至宿主細(xì)胞的抑 制。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，其中具有抑制病毒吸附至宿主細(xì)胞的所述組合物 的有效濃度為25 μ g/ml的黃芩素。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中抗日本腦炎病毒復(fù)制活性為預(yù)防性感染后抗 病毒活性。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其中具有預(yù)防性抗日本腦炎病毒復(fù)制活性的所述 組合物的有效濃度為50 μ g/ml的黃芩素。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中黃病毒是選自包含登革熱病毒1型、登革熱病 毒2型、登革熱病毒3型、登革熱病毒4型及日本腦炎病毒的群組。 $ ,
15. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物是用于預(yù)防或治療登革熱病毒2型 及曰本腦炎病毒。
【文檔編號(hào)】A61K38/20GK104203265SQ201380018609
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2013年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月30日
【發(fā)明者】沙札利·阿布·貝克爾 申請(qǐng)人:馬來亞大學(xué)