輪狀病毒亞單位疫苗及其制備和使用的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了在動物或人中引發(fā)抗輪狀病毒的免疫反應(yīng)的輪狀病毒抗原性多肽或抗原、包含所述輪狀病毒多肽的組合物、接種以抗輪狀病毒的方法，以及用于這樣的方法和組合物的試劑盒。本發(fā)明還提供了用于產(chǎn)生疫苗抗原性多肽的新型表達(dá)載體。
【專利說明】輪狀病毒亞單位疫苗及其制備和使用的方法 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本申請要求2012年2月14日提交的美國臨時專利申請系列No. USSN 61/598,624 的優(yōu)先權(quán)，將所述美國臨時專利申請通過引用整體并入本文。
[0002] 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明總地來說涉及亞單位疫苗，具體地包含已被工程化以在遺傳和抗原性上與 由感染目標(biāo)動物群體的病毒表達(dá)的肽幾乎相同的輪狀病毒肽的那些疫苗。通過毒素/解毒 劑選擇系統(tǒng)在細(xì)菌細(xì)胞群體中維持表達(dá)抗原性肽或亞單位蛋白的質(zhì)粒。細(xì)菌細(xì)胞產(chǎn)生毒性 蛋白，該毒性蛋白被由質(zhì)粒編碼的具有肽的解毒蛋白中和，從而使得非轉(zhuǎn)化細(xì)胞不能存活。
[0004] 背景
[0005] 輪狀病毒是嬰兒和幼兒中嚴(yán)重腹瀉的最常見原因 （Dennehy PH，2000)，并且是引 起通常稱為腸胃感冒（stomach flu)(盡管與流感無關(guān)）的的感染的幾種病毒之一。其屬于 呼腸孤病毒科（Reoviridae)的雙鏈RNA病毒屬。該病毒有五個種，稱為A、B、C、D和E(ICTV 病毒分類學(xué)：2009發(fā)布）。表1提供了已知輪狀病毒蛋白的概述。輪狀病毒A(最常見的） 引起超過90%的人的感染。該病毒通過糞口途徑傳播，感染和破壞沿著小腸排列的細(xì)胞， 引起胃腸炎。除了其對人死亡的影響外，輪狀病毒還感染動物，為家畜的病原體（Dubovi EJ，2010)。
[0006] 例如，根據(jù)最近的研究，輪狀病毒主要（65% )發(fā)現(xiàn)于來自具有腹瀉的豬的糞便或 腸內(nèi)容物中。大部分動物被單個組（A，B，C)感染，超過一個輪狀病毒組的合并感染確實也 有發(fā)生（Yoon, KJ, Epidemiology of rotaviruses, ISUVDL submissions, 2010-2011, Iowa State)。將近1/3的動物被至少組C輪狀病毒感染。直至現(xiàn)在，豬的輪狀病毒的預(yù)防牽涉 相當(dāng)神秘的實踐，例如給健康豬喂飼感染的仔豬組織。該實踐是必需的，因為組C輪狀病毒 不能體外生長，從而妨礙了常規(guī)滅活/減毒的全病毒疫苗的產(chǎn)生。因此，存在對更安全、更 有效的預(yù)防性措施的明確、緊迫的需要。
[0007] 表1.輪狀病毒蛋白概述
[0008]
【權(quán)利要求】
1. 一種免疫組合物，其包含： a) 選自輪狀病毒多肽或其片段的一種或多種多肽；和 b) 藥學(xué)上或獸醫(yī)學(xué)上可接受的媒介物、稀釋劑或賦形劑。
2. 權(quán)利要求1的組合物，其還包含佐劑。
3. 權(quán)利要求2的組合物，其中所述佐劑是水包油型的。
4. 權(quán)利要求2或3的組合物，其中所述佐劑為TRIGEN或ULTRAGEN或PRIMAVANT、TS6 或 LR4。
5. 權(quán)利要求1至3中任一項的組合物，其中所述多肽與SEQ ID N0:17、19、21、23、25、 27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69 或 71 中所示 的序列具有至少80 %的序列同一性。
6. 權(quán)利要求1-3或5中任一項的組合物，其還包含與除輪狀病毒外的病原體相關(guān)的至 少一種另外的抗原。
7. 權(quán)利要求6的組合物，其中所述至少一種另外的抗原能夠在豬中引發(fā)抗肺炎支原 體、PCV2、PRRSV、SIV或其它病原體的免疫反應(yīng)，所述其它病原體能夠感染豬并引起疾病或 對疾病的易感性。
8. -種用于產(chǎn)生權(quán)利要求1_3、5或7中任一項的自體組合物的方法，包括步驟： (a) 從已知感染有或懷疑感染有一種或多種類型的輪狀病毒的動物獲得生物樣品； (b) 如果感染狀態(tài)未知，則確定所述動物是否被輪狀病毒感染； (c) 從被所述一種或多種類型的輪狀病毒感染的動物收獲RNA ; (d) 使用與至少一個組C輪狀病毒基因互補(bǔ)的引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄酶PCR ; (e) 將來自步驟（d)的PCR產(chǎn)物插入適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體； (f) 將步驟（e)中產(chǎn)生的載體置于適當(dāng)?shù)乃拗鞅磉_(dá)系統(tǒng)中； (g) 收獲輪狀病毒多肽；和 (h) 添加任何另外的疫苗組分，從而產(chǎn)生疫苗組合物。
9. 權(quán)利要求8的方法，其中所述另外的組分選自佐劑、載體、稀釋劑和與除輪狀病毒外 的病原體相關(guān)的抗原。
10. 權(quán)利要求9的方法，其中所述另外的組分為TRIGEN或ULTRAGEN。
11. 權(quán)利要求9的方法，其中所述另外的組分為能夠在豬中引發(fā)抗肺炎支原體、PCV2、 PRRSV、SIV或其它病原體的免疫反應(yīng)的抗原，所述其它病原體能夠感染豬并引起疾病或?qū)?疾病的易感性。
12. -種接種動物的方法，包括權(quán)利要求1至7中任一項的組合物或載體的至少一次施 用。
13. 權(quán)利要求12的方法，其中所述動物是豬。
14. 權(quán)利要求13的方法，其中所述豬是分娩前約3周至約6周的母豬。
15. 權(quán)利要求12的方法，其中所得的豬崽相較于來自未接種的母豬的豬崽具有降低的 發(fā)病率和/或死亡率。
【文檔編號】A61K39/15GK104203274SQ201380015512
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2013年2月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月14日
【發(fā)明者】R·F·柏, R·R·西蒙遜, K·R·斯里吉雷迪, B·M·豪瑟 申請人:梅里亞有限公司