從地錦草里提取總黃酮的新方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草總黃酮的方法。其特點(diǎn)是：超臨界CO2流體萃取技術(shù)在萃取過程中保持著藥用植物的有效成分，萃取過程中不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，安全性好，不僅萃取的效率高而且能耗較少，提高了生產(chǎn)效率也降低了費(fèi)用成本。應(yīng)用大孔吸附技術(shù)分離純化總黃酮，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量30％以上的總黃酮半成品和含量95％以上的總黃酮終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點(diǎn)。
【專利說明】從地錦草里提取總黃酮的新方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種地錦草總黃酮的純化方法，特別是涉及一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草中總黃酮的方法。
【背景技術(shù)】:
[0002]地錦草一年生匍匐草本。莖纖細(xì)，近基部分枝，帶紫紅色，無毛。葉對生；葉柄極短；托葉線形，通常3裂；葉片長圓形，長4-10mm，寬4_6mm，先端鈍圓，基部偏狹，邊緣有細(xì)齒，兩面無毛或疏生柔毛，綠色或淡紅色。杯狀花序單生于葉腋；總苞倒圓錐形，淺紅色，頂端4裂，裂片長三角形；腺體4，長圓形，有白色花瓣狀附屬物；子房3室；花柱3，2裂。蒴果三棱狀球形，光滑無毛；種子卵形，黑褐色，外被白色蠟粉，長約1.2mm，寬約0.7mm。花期6-10月，果實7月漸次成熟。主治:痢疾；泄瀉；黃疸；咳血；吐血；尿血；便血；崩漏；乳汁不下；跌打腫痛及熱毒瘡瘍。生態(tài)環(huán)境:生于平原、荒地、路旁及田間，為習(xí)見雜草。
[0003]地錦草含有三種黃酮甙，其中兩個甙的甙元為山柰酚(kaempferol)，另一個甙的甙元為槲皮素(quercetin)。還含香豆精類成分:東莨菪素(scopoletin)，傘形花內(nèi)酯(umbelliferone),阿牙潘澤蘭內(nèi)酯(ayapin)。又含棕櫚酸(palmitic acid),沒食子酸(Gallic acid),沒食子酸甲 酯(methylgallate)和內(nèi)消旋肌醇(mesoinositol)。近年來，人們發(fā)現(xiàn)天然植物地錦草中含有大量的總黃酮，由于原料地錦草來源較廣，從中提取總黃酮已取得了可喜進(jìn)展。目前國內(nèi)對總黃酮的提取方法主要是微波逆流提取或甲醇制備工藝，其工藝主要為干品粉碎后用甲醇浸泡過夜，在用布氏濾斗過濾，提取4次，合并濾液，最后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、減壓濃縮、噴霧干燥得總黃酮，所用的提取分離方法其效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如超臨界CO2流體萃取后進(jìn)行大孔吸附樹脂分離的效果。

【發(fā)明內(nèi)容】
:
[0004]本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對較低、提取純度低等缺點(diǎn)，提供一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草中總黃酮的方法。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0006]一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草中總黃酮的方法，其步驟如下:
[0007](I)將干地錦草粉碎，加入到CO2超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，萃取壓力為20MPa~40MPa，溫度為50°C~60°C，萃取時間IOOmin~140min，得萃取物；
[0008](2)將經(jīng)步驟(1)處理的地錦草萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為3.0~4.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得總黃酮粗提物；
[0009](3)將所得總黃酮粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附；
[0010](4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗
脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液；
[0011](5)將總黃酮各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得總黃酮半成品，其含量為在30%以上；
[0012](6)將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；
[0013](7)將所收集的總黃酮濃縮液用溶劑結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得總黃酮，其含量在95%以上。
[0014]所述步驟(1)中，地錦草粉碎過80~100目篩；
[0015]所述步驟(3)中，所用的大孔吸附樹脂為DlOl型、HPD400型、S_8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型樹脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附。
[0016]本發(fā)明應(yīng)用超臨界CCV流體萃取可確保原有的色、味不因受熱破壞，更能確保其中熱敏性，易氧化物質(zhì)不被破壞；還可在萃取的過程中同時對萃取物進(jìn)行分離純化；大孔吸附技術(shù)分離純化總黃酮，對總黃酮的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35%以上的總黃酮半成品和含量95%以上的總黃酮終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的特點(diǎn)。
[0017]本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機(jī)械強(qiáng)度高、抗污染能力強(qiáng)、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，不容于酸、堿及有機(jī)媒，對有機(jī)物選擇性較好，不受無機(jī)鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附總黃酮，吸附快、解析也快，吸附容量較大。
【具體實施方式】:
[0018]實施案例1:一種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草中總黃酮的方法，其步驟如下:
[0019](I)將1000g干地錦草粉碎后過80目篩，加入到0)2超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為3%，萃取壓力為20MPa，溫度為55°C，CO2流量為2mg/g生藥.min,萃取時間IOOmin,得萃取物；
[0020](2)將經(jīng)步驟(1)處理的地錦草萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為3.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得總黃酮粗提物；
[0021](3)將所得總黃酮粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹脂為HPD400型樹脂；
[0022](4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗
脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液；
[0023](5)將總黃酮各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得總黃酮半成品，其含量為30.2% ；
[0024](6)將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；
[0025](7)將所收集的總黃酮濃縮液用無水乙醇結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得總黃酮0.169g，其含量在97.2%。
[0026]實施案例2: —種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草中總黃酮的方法，其步驟如下:
[0027](I)將1000g干地錦草粉碎后過90目篩，加入到CO2超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力為30MPa，溫度為55°C，CO2流量為2mg/g生藥.min,萃取時間120min,得萃取物；
[0028](2)將經(jīng)步驟(1)處理的地錦草萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為3.8，靜置、抽濾、減壓濃縮得總黃酮粗提物；
[0029](3)將所得總黃酮粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹脂為DlOl型樹脂；
[0030](4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗
脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液；
[0031](5)將總黃酮各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得總黃酮半成品，其含量為31.5% ；
[0032](6)將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；
[0033](7)將所收集的總黃酮濃縮液用無水乙醇結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得總黃酮0.197g，其含量在96.6%。
[0034]實施案例3: —種利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草中總黃酮的方法，其步驟如下:
[0035](I)將1000g干地錦草粉碎后過100目篩，加入到CO2超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力為40MPa，溫度為60°C，CO2流量為3mg / g生藥.min,萃取時`間140min,得萃取物；
[0036](2)將經(jīng)步驟(1)處理的地錦草萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為4.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得總黃酮粗提物；
[0037](3)將所得總黃酮粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，所用的大孔樹脂為AB-8H型樹脂；
[0038](4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗
脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液；
[0039](5)將總黃酮各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得總黃酮半成品，其含量為33.7% ；
[0040](6)將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑；
[0041](7)將所收集的總黃酮濃縮液用無水乙醇結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得總黃酮0.186g，其含量在98.3%。
【權(quán)利要求】
1.一種利用超臨界CCV流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草中總黃酮的方法，其步驟如下: (1)將干地錦草粉碎，加入到CO2超臨界萃取器中，用乙醇作為夾帶劑，萃取壓力為20MPa~40MPa，溫度為50°C~60°C，萃取時間IOOmin~140min，得萃取物； (2)將經(jīng)步驟(1)處理的地錦草萃取液用鹽酸調(diào)其pH值為3.0~4.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得總黃酮粗提物； (3)將所得總黃酮粗提物用大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附； (4)用40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進(jìn)行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液； (5)將總黃酮各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得總黃酮半成品，其含量為在30%以上； (6)將所得總黃酮半成品上硅膠層析柱，并以丙酮:甲醇以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5: 1、6: 1、7: I不同體積比例進(jìn)行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集總黃酮各階段洗脫液，減壓濃縮，回收溶劑； (7)將所收集的總黃酮濃縮液用溶劑結(jié)晶，分離結(jié)晶，洗滌，干燥精制得總黃酮，其含量在95%以上。 所述步驟(1)中，干地錦草粉碎過80~100目篩； 所述步驟(3)中，所用 的大孔吸附樹脂為DlOl型、HPD400型、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型樹脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附。
2.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草中總黃酮的方法，其特征是:所述的步驟(1)中，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為3%~6%。
3.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用超臨界CO2流體萃取和大孔吸附樹脂耦合法富集純化地錦草中總黃酮的方法，其特征是:所述的步驟(7)中，濃縮液結(jié)晶所用的溶劑為無水乙醇。
【文檔編號】A61K36/47GK103655677SQ201310706335
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月10日
【發(fā)明者】萬莉, 姚德坤, 張亞紅 申請人:大興安嶺嘉迪歐營養(yǎng)原料有限公司