一種促進骨折愈合的淫羊藿衍生物透皮吸收劑的制備方法和臨床應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】取淫羊藿粉末乙醇用浸泡，加熱回流提取得到含淫羊藿總黃酮提取物。淫羊藿總黃酮提取物再經(jīng)羧甲基化制取衍生物。淫羊藿羧甲基化衍生物加羧甲基纖維素(或聚乙烯醇)2-10g、甘油1g、蓖麻油1g、氮酮1-2g。稱取海藻酸鈉共10g，加入水100ml，羧甲基纖維素2-10g制備成透皮制劑。該制劑，制備方法簡單，易溶于水，原料來源廣，成本低廉，無副作用。
【專利說明】一種促進骨折愈合的淫羊藿衍生物透皮吸收劑的制備方法和臨床應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學臨床用藥，具體說是涉及一種適用于骨折、骨不連、股骨頭壞死、骨質(zhì)疏松的治療與預(yù)防的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002]如何早期促進骨折愈合一直是骨傷科領(lǐng)域研究的重點課題，隨著人們對骨折愈合機理認識的不斷拓展，近年在探討促進骨折愈合方法及機制方面的研究取得了令人矚目的進展。自上世紀六十年代以來，中藥促進骨折愈合的研究成果引起了國內(nèi)外藥學界的注意。
[0003]淫羊藿(Herba Epimedii),別名仙靈脾、棄杖草、千兩金、黃連祖,系小蘗科多年生草本植物心葉淫羊藿或箭屬植物的地上部分，性甘、辛、溫，無毒，入肝。
淫羊藿具有補腎助陽，強筋健骨，祛風除濕，洗瘡殺蟲，消瘰化癰之功效....淫羊藿苷作為其主要有效成分之一，近年來吸引了國內(nèi)外眾多學者的關(guān)注，并對其藥理作用進行了深入而廣泛的研究.迄今的結(jié)果發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷的主要生理活性在于改善心腦血管系統(tǒng)功能、增強機體免疫力及調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，同時還具有抗腫瘤、抗病毒、抗缺氧，再氧合和健骨等作用.[0004]對骨代謝的影響:淫羊藿具有促進骨骼生長，阻止鈣質(zhì)流失，預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用。淫羊藿可促進成骨細胞的增殖，實驗研究表明，淫羊藿的抗骨質(zhì)疏松作用部分是通過刺激成骨細胞增殖而實現(xiàn)的。淫羊藿總黃酮可通過保護性腺、抑制骨吸收和促進骨形成等途徑，使機體骨代謝處于骨形成大于骨吸收的正平衡狀態(tài)，抑制骨量丟失，防止骨質(zhì)疏松的發(fā)生。淫羊藿提取液對分化成熟的破骨細胞無明顯影響，但可抑制骨髓細胞誘導破骨細胞的形成，從而減少破骨細胞的產(chǎn)生，具有間接或直接增加骨形成的作用，這與古方記載的淫羊藿的強筋骨的作用相吻合。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的本發(fā)明的目的在于提供一種淫羊藿羧甲基衍生物透皮制劑的制備方法。是提供一種制備方法簡單，易溶于水，原料來源廣泛的治療和預(yù)防骨折的藥物。
[0006]本發(fā)明的優(yōu)點是制備方法簡單，易溶于水，原料來源廣，成本低廉，無副作用。
[0007]本發(fā)明的淫羊藿羧甲基衍生物透皮制劑的制備方法，包括以下步驟:
[0008]提取方法:取淫羊藿粉末(過40目篩)100gJP 10倍量70%乙醇，浸泡20h，加熱回流提取2h，提取2次。過濾后合并2-3次濾液，濾液減壓回收溶劑，濃縮，干燥。干燥物用甲醇溶解，活性碳脫雜質(zhì)再除去甲醇溶劑，濃縮，干燥，得到淫羊藿素提取物。淫羊藿總黃酮提取率為3-4%，淫羊藿素的主要有效成分淫羊藿苷為黃酮類化合物。
[0009]淫羊藿羧甲基衍生物制備:
按每100g淫羊藿提取物加入200-250ml(2mol / L)的氫氧化鈉液體混合均勻，35°C下攪拌0.5h ;然后按每100g淫羊藿提取物再加入一氯乙酸20g與氫氧化鈉20g的混合物，在70-80°C條件下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)產(chǎn)物用95%乙醇洗滌，沉淀24h，得到羧甲基淫羊藿提取物生成物，生成物干燥。
[0010]淫羊藿羧甲基化衍生物透皮制劑的制備:
I淫羊藿羧甲基化衍生物log、羧甲基纖維素2-10g、甘油lg、蓖麻油lg、氮酮l_2g。稱取淫羊藿羧甲基化衍生物共10g，加入水100ml，羧甲基纖維素2-10g，攪拌至澄明膠液。攪拌下依次加入氮酮l_2g、甘油lg、蓖麻油lg，混勻，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH值為7-7.5左右,超聲15min。使用時涂布于紗布上，覆蓋在治療部位。
2.淫羊藿羧甲基化衍生物10g、聚乙烯醇2-10g、甘油lg、蓖麻油lg、氮酮l_2g。稱取淫羊藿羧甲基化衍生物共10g，加入水100mL，聚乙烯醇2-10g攪拌至澄明膠液。攪拌下依次加入氮酮l_2g、甘油lg、蓖麻油lg，混勻，用碳酸氫鈉調(diào)節(jié)PH值為7-7.5左右,超聲15min。使用時涂布于紗布上，覆蓋在治療部位。[0011]所述的藥物組合物，在制備促進人或動物骨折愈合的治療中的應(yīng)用。
[0012]為了進一步的驗證本發(fā)明成品制劑的療效，我們將上述具體制備方法1-3中制備的藥物進行了相應(yīng)的動物試驗，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。
[0013]試劑:骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP-2)抗體購于北京博奧森生物技術(shù)有限公司
[0014]動物:昆明小鼠30只，體重18_22g，雄性。
[0015]方法:把30只體重20~30g，2~3月齡昆明小白鼠股骨骨制成骨折動物模型，分成A，B兩組。A組每只每天用淫羊藿羧甲基化衍生物透皮制劑貼覆與骨折部位附近，B組小白鼠不處理，每組小鼠分別于7 \ 14 \ 21d各處死5只。取小白鼠股骨制病理切片。標本經(jīng)10%甲醛固定后脫鈣，免疫組化染色。結(jié)果兩組差異顯著，A組3-4周即可形成連續(xù)性骨痂，臨床愈合，最短14天即可形成連續(xù)骨痂。
[0016]結(jié)果:BMP-2蛋白的免疫陽性產(chǎn)物表達于骨基質(zhì)內(nèi)和骨母細胞胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色。采用半定量法判斷BMP-2蛋白的表達情況:選10個高倍視野，顯色的陽性反應(yīng)細胞數(shù)〈25%為+，25~50%為++，> 75%為+++，無明顯陽性反應(yīng)細胞為_。計數(shù)資料的統(tǒng)計學分析采用卡方檢驗。檢驗標準α=0.05。
術(shù)后7d，15d, 21d兩組BMP-2蛋白的表達情況比較顯示兩組小鼠有顯著性差異，A組小鼠用淫羊藿羧甲基化衍生物透皮制劑治療后，BMP-2蛋白的表達明顯增高(P〈0.05)。
[0017]表1術(shù)后7d，15d, 21d兩組BMP-2蛋白的表達情況比較(n=15)
【權(quán)利要求】
1.一種淫羊藿羧甲基衍生物透皮制劑的制備方法，其特征在于淫羊藿粉末(過40目篩)經(jīng)乙醇提取，減壓回收溶劑，濃縮，干燥；干燥物用甲醇溶解，活性碳脫雜質(zhì)再除去甲醇溶劑，濃縮，干燥，得到淫羊藿素提取物。淫羊藿提取物再加入一氯乙酸與氫氧化鈉的混合物，在70-80°C條件下攪拌反應(yīng)3h，反應(yīng)產(chǎn)物用95%乙醇洗滌，沉淀24h，得到羧甲基淫羊藿提取物生成物，生成物干燥。
2.淫羊藿羧甲基化衍生物透皮制劑的組方:淫羊藿羧甲基化衍生物10g、羧甲基纖維素(或聚乙烯醇)2-10g、甘油lg、蓖麻油lg、氮酮l_2g。
3.權(quán)利2全乙酰化補骨脂衍生物透皮制劑在制備促進人或動物骨折愈合的治療中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P19/08GK103919831SQ201310576191
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2013年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月19日
【發(fā)明者】牛秉軒, 范文艷, 許娜, 趙永新, 趙慧 申請人:新鄉(xiāng)醫(yī)學院