新環(huán)脂肽抗生素羅克霉素（locillomycin）A、B、C及其制造方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一組新環(huán)脂肽抗生素羅克霉素（Locillomycin）A、B、C及其制造方法，以羅克霉素A、B、C為活性成分的藥物組合物以及羅克霉素A、B、C在制備抗真菌、細(xì)菌和病毒藥物中的應(yīng)用，所說羅克霉素A、B、C是由枯草芽胞桿菌Bs916菌株（Bacillus?subtilis?Bs916）培養(yǎng)物中分離得到的新環(huán)脂肽類抗生素（cyclic?lipopeptides），體外活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，羅克霉素A、B、C對(duì)病原真菌、細(xì)菌和病毒都具有很強(qiáng)的抑制活性，作為新的抗真菌、細(xì)菌和病毒藥物，具有良好的開發(fā)前景。
【專利說明】新環(huán)脂肽抗生素羅克霉素(I OCi I lomycin) A、B、C及其制造
方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及的是一組新的環(huán)脂肽抗生素(cyclic lipopeptides):羅克霉素A、B、C及其制備方法，以羅克霉素A、B、C為活性成分的藥物組合物以及羅克霉素A、B、C在制備抗真菌、細(xì)菌、病毒藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]迄今發(fā)現(xiàn)來源微生物的抗生素已超越萬余種，其中許多作為醫(yī)藥、農(nóng)藥和工業(yè)添加劑已得到廣泛應(yīng)用。環(huán)脂肽抗生素是20世紀(jì)40年代從芽胞桿菌發(fā)現(xiàn)的一類具有廣泛生物活性的抗生素，其結(jié)構(gòu)是由含7~10氨基酸殘基的短肽和長鏈?zhǔn)杷灾舅峤M成的環(huán)狀次生代謝產(chǎn)物。脂肽抗生素一般具有較強(qiáng)的抗真菌活性和溶血性能，具有一定的抗細(xì)菌和病毒活性，甚至有些還具有抗腫瘤活性，在醫(yī)藥、農(nóng)藥和工業(yè)上具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。由于環(huán)脂肽抗生素具有廣泛的生物活性，引起世界許多研究機(jī)構(gòu)的重視，并對(duì)這類抗生素進(jìn)行了深入研究。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)環(huán)脂肽抗生素20幾種，根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異可分為表面活性素(Surfactin),結(jié)構(gòu)如下:
[0003]
【權(quán)利要求】
1.一組環(huán)脂肽抗生素，包括羅克霉素A、羅克霉素B、羅克霉素C，其結(jié)構(gòu)式分別如下:
2.權(quán)利要求1所述環(huán)脂肽抗生素的制備方法，其特征是所說方法包括以下步驟: 1)羅克霉素Α、B、C的發(fā)酵培養(yǎng)； 2)羅克霉素Α、B、C的提取分離； 3)羅克霉素Α、B、C的色譜檢測；` 4)羅克霉素Α、B、C的結(jié)構(gòu)鑒定。
3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是發(fā)酵培養(yǎng)系將生長于斜面的枯草芽胞桿菌Bs916菌株(保藏編號(hào)為=CGMCC N0.0808)接種于試管培養(yǎng)基，在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng)，然后轉(zhuǎn)入搖瓶培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，收獲發(fā)酵液。
4.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是提取分離系在發(fā)酵培養(yǎng)液中，發(fā)酵液離心除去菌體，用濃鹽酸調(diào)pH至2.8，離心得到沉淀，甲醇抽提，過0.22 μ mol.L（-1）微孔濾膜后即為粗提物；粗提物先經(jīng)氨基固相萃取柱對(duì)含有目標(biāo)化合物的組分進(jìn)行分離，洗脫溶劑為采用含有不同劑量甲酸的甲醇溶液；對(duì)含有目標(biāo)化合物的組分然后采用碳18固相萃取柱進(jìn)行純化，洗脫溶劑為含有不同梯度的甲醇水溶液；對(duì)含有目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液氮?dú)獯蹈杉状己?，真空干燥得到白色固體粉末即為目標(biāo)化合物羅克霉素組合物的純化物；羅克霉素組合物的純化物最后繼續(xù)采用碳18固相萃取柱進(jìn)行分離，洗脫溶劑為更為精細(xì)梯度的甲醇水溶液，依次收集含有目標(biāo)化合物的洗脫液，收集洗脫液氮?dú)獯蹈杉状己?，真空干燥得到白色固體粉末依次為目標(biāo)化合物羅克霉素A、B、C的純化物。
5. 如權(quán)利要求2或4所述的制備方法，其特征是高效液相色譜檢測條件為:采用C18(5μπι ；250by4.6mm ；VYDAC218TP ；VYDAC, Hesperia, CA)柱；流動(dòng)相為乙腈:水:三氟乙酸(50: 50: 0.5vol/vol);流速為0.5mL.min_l ;紫外檢測波長為230nm ;檢測結(jié)果表明提取的羅克霉素A、B、C已達(dá)到色譜純，保留時(shí)間分別為9.0min, 13.0min, 17.8min。
6.如權(quán)利要求2或4所述的制備方法，其特征是結(jié)構(gòu)鑒定系根據(jù)根據(jù)紫外光譜、氨基酸分析、Edman降解測序、多級(jí)質(zhì)譜MS-MS、NMR實(shí)驗(yàn)(主要包括1H-NMRj3C-NMI^ 13C_editedHSQC、HMBC、COSY、TOCSY、NOESY或ROESY等)數(shù)據(jù)的綜合分析，確定了羅克霉素A、B、C的結(jié)構(gòu)。確定目標(biāo)化合物羅克霉素A、B和C的結(jié)構(gòu)。
7.含有權(quán)利要求1所述環(huán)脂肽抗生素的藥物組合物，其特征是所說組合物系以羅克霉素A、B、C為有效成分，分別與一種或多種藥上可以接受的載體所組成。
8.權(quán)利要求1所述環(huán)脂肽抗生素在制備抗真菌、細(xì)菌、病毒藥物中應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P31/04GK103524600SQ201310416487
【公開日】2014年1月22日 申請(qǐng)日期:2013年9月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月13日
【發(fā)明者】羅楚平, 陳志誼, 劉雪輝, 郭俊堯, 王曉宇, 劉郵洲 申請(qǐng)人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院