一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系及其制備方法和應用，所述納米管緩釋體系包括鈦合金植入體，采用陽極氧化的方法在鈦合金植入體表面制備二氧化鈦納米管涂層，并在鈦合金植入體上負載生長因子。本發(fā)明的優(yōu)點在于：（1）本發(fā)明通過真空抽吸這一簡單有效的方法提高納米管裝載藥物量；（2）本發(fā)明還提供了一種rhPDGF-BB納米管緩釋體系，可以顯著促進骨質(zhì)疏松狀態(tài)下骨整合，rhPDGF-BB已被FDA批準可以用于臨床骨再生治療，對于該緩釋體系的臨床應用提供了可能；（3）包括納米管制備在內(nèi)，本發(fā)明不需專門、復雜和昂貴的設備，操作流程簡單，有利于推廣使用。
【專利說明】一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系及其制備方法和應用

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及骨組織再生和骨整合領域，具體地講，涉及一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系及其制備方法和應用。

【背景技術】
[0002]骨質(zhì)疏松是由于骨代謝過程中骨吸收和骨形成的偶聯(lián)出現(xiàn)缺陷，導致骨密度降低和骨質(zhì)破壞，嚴重影響骨修復及骨整合的速度和質(zhì)量；由于尚缺乏有效的手段解決這一問題，骨質(zhì)疏松癥仍被列為牙種植手術的禁忌癥。隨著納米技術的不斷發(fā)展和成熟，多種納米修飾涂層已被用于提高鈦種植體表面的成骨誘導性能，其中通過陽極氧化技術制備的納米管涂層不僅具有明顯的調(diào)控干細胞成骨分化的能力，而且在骨質(zhì)疏松動物體內(nèi)還具有一定的促進骨整合的作用。為了進一步提高鈦表面納米管涂層的修復效果，尚可借助納米管的中空管狀結構及高比表面積進行藥物投遞來協(xié)同促進骨整合，然而該方面研究尚未見文獻報道。
[0003]可用于促進骨整合的生長因子包括重組人血小板源生長因子(rhTOGF-BB)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)、堿性成纖維生長因子(bFGF)、血管表皮生長因子(VEGF)、Nel樣I型分子等，目前常采用直接物理吸附或殼聚糖等材料包被等方式將生長因子固載于種植體表面，然而這些方法存在以下缺點:緩釋效果差，常存在暴發(fā)性釋放；生長因子的生物活性無法長期維持；額外添加緩釋材料還可能覆蓋種植體表面的微納米結構并消除其生物學性倉泛。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的第一個目的在于提供一種生長因子納米管緩釋體系。
[0005]本發(fā)明的第二個目的在于提供一種提高納米管裝載藥物量的生長因子納米管緩釋體系的制備方法。
[0006]本發(fā)明的第三個目的在于提供生長因子納米管緩釋體系在制備促進骨整合材料中的應用。
[0007]本發(fā)明的第四個目的在于提供真空抽吸技術在制備應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系中的應用。
[0008]為實現(xiàn)本發(fā)明第一個發(fā)明目的，公開以下技術方案:一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系，包括鈦合金植入體，其特征在于，采用陽極氧化的方法在鈦合金植入體表面制備二氧化鈦納米管涂層，并在鈦合金植入體上負載生長因子。
[0009]作為一個優(yōu)選方案，所述生長因子是重組人血小板源生長因子rhTOGF-BB、骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMPs、堿性成纖維生長因子bFGF、血管表皮生長因子VEGF和Nel樣I型分子中的一種或幾種。
[0010]作為一個優(yōu)選方案，所述生長因子是重組人血小板源生長因子rhroGF-BB。
[0011]為實現(xiàn)本發(fā)明第二個發(fā)明目的，公開以下技術方案:一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟:
將鈦合金植入體表面進行直徑為3(Tl00的納米管修飾，然后浸泡于裝有濃度為50^300 μ g/ml的生長因子溶液的器皿中，將器皿放入真空抽氣泵中，抽吸10-20分鐘后取出鈦合金植入體，置于4°C自然干燥。
[0012]作為一個優(yōu)選方案，抽吸時間為10分鐘。
[0013]作為一個優(yōu)選方案，所述生長因子是重組人血小板源生長因子rhTOGF-BB、骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMPs、堿性成纖維生長因子bFGF、血管表皮生長因子VEGF和Nel樣I型分子中的一種或幾種。
[0014]作為一個優(yōu)選方案，所述生長因子是重組人血小板源生長因子rhH)GF-BB。
[0015]為實現(xiàn)本發(fā)明第三個發(fā)明目的，公開以下技術方案:一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系在制備促進骨整合材料中的應用。
[0016]為實現(xiàn)本發(fā)明第四個發(fā)明目的，公開以下技術方案:真空抽吸技術在制備應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系中的應用。
[0017]本發(fā)明對真空抽吸條件下納米管的生長因子(rhPDGF-BB為例)裝載量、緩釋特性以及蛋白生物活性進行了檢測；在體外，觀察該緩釋體系對骨質(zhì)疏松大鼠來源骨髓干細胞的作用效果；在體內(nèi)，將鈦植入體植入骨質(zhì)疏松大鼠股骨內(nèi)，評估骨整合效果。研究結果表明:(I)真空抽吸提高了納米管對rhPDGF-BB的裝載量；(2) rhPDGF-BB在體外可以緩慢釋放長達14天之久并且仍保持生物活性；(3)裝載rhTOGF-BB的納米管涂層促進了干細胞的粘附、增殖和成骨分化活性；(4)裝載rhTOGF-BB的納米管涂層促進了骨質(zhì)疏松狀態(tài)下骨整八口 ο
[0018]本發(fā)明的優(yōu)點在于:(I)本發(fā)明通過真空抽吸這一簡單有效的方法提高納米管裝載藥物量；(2)本發(fā)明還提供了一種生長因子(rhPDGF-BB為例)納米管緩釋體系，可以顯著促進骨質(zhì)疏松狀態(tài)下骨整合，rhPDGF-BB已被FDA批準可以用于臨床骨再生治療，對于該緩釋體系的臨床應用提供了可能；(3)包括納米管制備在內(nèi)，本發(fā)明不需專門、復雜和昂貴的設備，操作流程簡單，有利于推廣使用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1為真空抽吸促進rhH)GF-BB負載于納米管的SEM圖(A組)，未經(jīng)過真空抽吸的自然吸附組作為對照(B組)。
[0020]圖2為載藥二氧化鈦納米管體外緩釋曲線(a)，紅色方框所示區(qū)間內(nèi)緩釋得到的rhPDGF-BB仍保持其生物活性，可以激活骨髓干細胞Erk和Akt通路(b)。
[0021]圖3通過IntegrinP I免疫突光檢測骨質(zhì)疏松大鼠骨髓干細胞在不同涂層表面的粘附情況(對照組為未裝載藥物的納米管涂層)。
[0022]圖4通過Edu檢測骨質(zhì)疏松大鼠骨髓干細胞在不同涂層表面的增殖情況。
[0023]圖5通過OCN免疫熒光檢測骨質(zhì)疏松大鼠骨髓干細胞在不同涂層表面的成骨分化情況。
[0024]圖6為骨質(zhì)疏松大鼠股骨內(nèi)種植實驗X線結果。
[0025]圖7為骨質(zhì)疏松大鼠股骨內(nèi)種植實驗結果，Ca)苦味酸-品紅染色，(b)骨-種植體結合率，(C)拔出試驗結果(★★, P < 0.01)。

【具體實施方式】
[0026]下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0027]實施例1.鈦片表面納米管修飾及藥物裝載步驟一、鈦片表面納米管修飾
規(guī)格為10 X 10 X I mm大小的鈦合金材料，放置于乙醇溶液中超聲清洗30分鐘；然后換成去離子水繼續(xù)超聲清洗30分鐘，重復該操作2遍；將清洗后的鈦片置于5 wt%草酸溶液中100° C條件下酸蝕2小時；最后置于1.0 wt%氫氟酸電解液中采用恒電流直流陽極氧化(電壓20V)方法作用30分鐘，制備出直徑70nm左右的納米管涂層。
[0028]步驟二、真空抽吸促進鈦片表面納米管裝載rhTOGF-BB
商品化的GEM 21S試劑盒中，rhPDGF-BB原溶液的濃度為300 μ g/ml，使用醫(yī)用滅菌水將其稀釋為50 μ g/ml的工作濃度，吸取50 μ I該工作溶液滴附于步驟一中制備的納米管涂層修飾鈦表面，放入真空抽氣泵中抽吸10分鐘，將鈦片置于4°C過夜自然干燥。
[0029]實施例2.鈦片表面納米管修飾及藥物裝載步驟一、鈦片表面納米管修飾
規(guī)格為10 X 10 X I mm大小的鈦合金材料，放置于乙醇溶液中超聲清洗30分鐘；然后換成去離子水繼續(xù)超聲清洗30分鐘，重復該操作2遍；將清洗后的鈦片置于5 wt%草酸溶液中100° C條件下酸蝕2小時；最后置于1.0 wt%氫氟酸電解液中采用恒電流直流陽極氧化(電壓20V)方法作用30分鐘，制備出直徑70nm左右的納米管涂層。
[0030]步驟二、真空抽吸促進鈦片表面納米管裝載rhTOGF-BB
商品化的GEM 21S試劑盒中，rhPDGF-BB原溶液的濃度為300 μ g/ml，使用醫(yī)用滅菌水將其稀釋為100 μ g/ml的工作濃度，吸取50 μ I該工作溶液滴附于步驟一中制備的納米管涂層修飾鈦表面，放入真空抽氣泵中抽吸10分鐘，將鈦片置于4°C過夜自然干燥。
[0031]實施例3.鈦片表面納米管修飾及藥物裝載步驟一、鈦片表面納米管修飾
規(guī)格為10 X 10 X I mm大小的鈦合金材料，放置于乙醇溶液中超聲清洗30分鐘；然后換成去離子水繼續(xù)超聲清洗30分鐘，重復該操作2遍；將清洗后的鈦片置于5 wt%草酸溶液中100° C條件下酸蝕2小時；最后置于1.0 wt%氫氟酸電解液中采用恒電流直流陽極氧化(電壓20V)方法作用30分鐘，制備出直徑70nm左右的納米管涂層。
[0032]步驟二、真空抽吸促進鈦片表面納米管裝載rhTOGF-BB
商品化的GEM 21S試劑盒中，rhPDGF-BB原溶液的濃度為300 μ g/ml，吸取50 μ I該溶液滴附于步驟一中制備的納米管涂層修飾鈦表面，放入真空抽氣泵中抽吸10分鐘，將鈦片置于4°C過夜自然干燥。
[0033]實施例4.鈦片表面納米管修飾及藥物裝載步驟一、鈦片表面納米管修飾
規(guī)格為10 X 10 X I mm大小的鈦合金材料，放置于乙醇溶液中超聲清洗30分鐘；然后換成去離子水繼續(xù)超聲清洗30分鐘，重復該操作2遍；將清洗后的鈦片置于5 wt%草酸溶液中100° C條件下酸蝕2小時；最后置于1.0 wt%氫氟酸電解液中采用恒電流直流陽極氧化(電壓10V)方法作用30分鐘，制備出直徑30nm左右的納米管涂層。
[0034]步驟二、真空抽吸促進鈦片表面納米管裝載rhTOGF-BB
商品化的GEM 21S試劑盒中，rhPDGF-BB原溶液的濃度為300 μ g/ml，使用醫(yī)用滅菌水將其稀釋為100 μ g/ml的工作濃度，吸取50 μ I該工作溶液滴附于步驟一中制備的納米管涂層修飾鈦表面，放入真空抽氣泵中抽吸10分鐘，將鈦片置于4°C過夜自然干燥。
[0035]實施例5.鈦片表面納米管修飾及藥物裝載步驟一、鈦片表面納米管修飾
規(guī)格為10 X 10 X I mm大小的鈦合金材料，放置于乙醇溶液中超聲清洗30分鐘；然后換成去離子水繼續(xù)超聲清洗30分鐘，重復該操作2遍；將清洗后的鈦片置于5 wt%草酸溶液中100° C條件下酸蝕2小時；最后置于(乙二醇+0.25 wt%氟化銨+lvol%水)配比電解液中采用恒電流直流陽極氧化(電壓50V)方法作用3小時，制備出直徑10nm左右的納米管涂層。
[0036]步驟二、真空抽吸促進鈦片表面納米管裝載rhTOGF-BB
商品化的GEM 21S試劑盒中，rhPDGF-BB原溶液的濃度為300 μ g/ml，使用醫(yī)用滅菌水將其稀釋為100 μ g/ml的工作濃度，吸取50 μ I該工作溶液滴附于步驟一中制備的納米管涂層修飾鈦表面，放入真空抽氣泵中抽吸10分鐘，將鈦片置于4°C過夜自然干燥。
[0037]實施例6.rhPDGF-BB納米管緩釋體系在體外的緩釋特性及生物學性能步驟一、鈦片表面納米管修飾
規(guī)格為10 X 10 X I mm大小的鈦合金材料，放置于乙醇溶液中超聲清洗30分鐘；然后換成去離子水繼續(xù)超聲清洗30分鐘，重復該操作2遍；將清洗后的鈦片置于5 wt%草酸溶液中100° C條件下酸蝕2小時；最后置于1.0 wt%氫氟酸電解液中采用恒電流直流陽極氧化(電壓20V)方法作用30分鐘，制備出直徑70nm左右的納米管涂層。
[0038]步驟二、真空抽吸促進鈦片表面納米管裝載rhTOGF-BB
商品化的GEM 21S試劑盒中，rhPDGF-BB原溶液的濃度為300 μ g/ml，使用醫(yī)用滅菌水將其稀釋為100 μ g/ml的工作濃度，吸取50 μ I該工作溶液滴附于步驟一中制備的納米管涂層修飾鈦表面，放入真空抽氣泵中抽吸10分鐘，將鈦片置于4°C過夜自然干燥。
[0039]蛋白在納米管表面的粘附情況見附圖1，真空抽吸實驗組(A組)鈦片表面的蛋白吸附量明顯高于自然吸附組(B組)，并且在A組鈦表面，由于真空抽吸作用，可見rhTOGF-BB蛋白顆粒突入納米管腔內(nèi)(紅色箭頭所示)。
[0040]步驟三、rhPDGF-BB的緩釋曲線測定
將實驗例二中制備的載有rhH)GF-BB的鈦片置于24孔板中，每孔加入Iml PBS浸沒鈦片并放置于37°C細胞培養(yǎng)箱中，分別在1、2、4、8、12和24小時以及2、4、7和14天時，收集PBS浸提液并更換新的PBS。將收集的PBS浸提液暫時凍存于-30°C保存，待各時間點樣品收齊后，使用rhH)GF-BB特異性Elisa試劑盒(購買自BD公司)，按照說明書操作檢測浸提液中rhH)GF-BB的濃度，并繪制rhH)GF-BB的緩釋曲線。
[0041]rhPDGF-BB的緩釋曲線見附圖2a，真空抽吸實驗組(A組)的蛋白裝載量明顯高于自然吸附組(B組)，約為其2倍。
[0042]步驟四、負載rhH)GF-BB的活性檢測
骨髓干細胞取自卵巢摘取大鼠，細胞接種于6孔板中，待細胞生長至90%匯合，使用步驟一中第14天收取的浸提液作用于該細胞15分鐘,提取細胞總蛋白，進行Western Blot實驗，分別檢測Erk、p-Erk、Akt和ρ-Akt的表達情況，Erk和Akt兩條通路是rhFOGF-BB發(fā)揮生物學效應的兩條經(jīng)典信號通路。
[0043]結果上述兩條通路均被第14天收取的浸提液激活(見附圖2b)，提示納米管所負載的rhH)GF-BB可長期保存生物活性。
[0044]步驟五:rhH)GF-BB納米管緩釋體系在體外對骨質(zhì)疏松大鼠骨髓干細胞的作用效果
一、細胞粘附能力檢測:將載有rhH)GF-BB的鈦片置于24孔板中，將I ml骨質(zhì)疏松大鼠骨髓干細胞懸液接種于孔中；4小時后，吸棄培養(yǎng)液并用PBS洗兩遍,使用4 wt%多聚甲醛溶液于4°C固定30分鐘；使用0.1% Triton X-100溶液于37°C處理30分鐘；山羊血清封閉30分鐘；加入integrin β I 一抗，4°C孵育過夜,隨后加入DyLight 549標記紅色二抗；細胞骨架使用FITC-Phalloidin于37°C染色2小時；細胞核使用DAPI溶液于室溫復染5分鐘。突光顯微鏡鏡下觀察。
[0045]實驗結果見附圖3,鈦表面負載rhFOGF-BB促進了 integrin β I的高表達,促進了細胞早期粘附，并且真空抽吸實驗組(Α組)的效果優(yōu)于自然吸附組(B組)。
[0046]二、細胞增殖能力檢測:將載有rhH)GF-BB的鈦片置于24孔板中，將I ml骨質(zhì)疏松大鼠骨髓干細胞懸液接種于孔中；DMEM培養(yǎng)10天后，使用Cell-Light TM Edu試劑盒(購買自廣州市銳博生物科技有限公司)，按照其說明書進行如下操作:Edu標記，細胞固定化，Edu染色以及細胞核復染，隨后熒光顯微鏡鏡下觀察。
[0047]實驗結果見附圖4，鈦表面負載rhH)GF-BB提高了 Edu細胞的陽性率，促進了細胞增殖，并且真空抽吸實驗組(A組)的效果優(yōu)于自然吸附組(B組)。
[0048]三、細胞成骨分化能力檢測:將載有rhH)GF-BB的鈦片置于24孔板中，將I ml骨質(zhì)疏松大鼠骨髓干細胞懸液接種于孔中；吸棄培養(yǎng)液并用PBS洗兩遍，使用4 wt%多聚甲醛溶液于4°C固定30分鐘；使用0.1% Triton X-100溶液于37°C處理30分鐘；山羊血清封閉30分鐘；加入OCN—抗，4°C孵育過夜，隨后加入DyLight 549標記紅色二抗；細胞核使用DAPI溶液于室溫復染5分鐘。熒光顯微鏡鏡下觀察。
[0049]實驗結果見附圖5，鈦表面負載rhH)GF-BB促進了 OCN的高表達，促進了細胞成骨分化，并且真空抽吸實驗組(A組)的效果優(yōu)于自然吸附組(B組)。
[0050]實施例7.rhPDGF-BB納米管緩釋體系在體內(nèi)骨質(zhì)疏松大鼠股骨內(nèi)種植骨整合中的作用效果
步驟一、鈦棒表面納米管修飾
規(guī)格為直徑2mm、長度8mm大小的鈦合金鈦棒，放置于乙醇溶液中超聲清洗30分鐘；然后換成去離子水繼續(xù)超聲清洗30分鐘，重復該操作2遍；將清洗后的鈦片置于5 wt%草酸溶液中100° C條件下酸蝕2小時；最后置于1.0 wt%氫氟酸電解液中采用恒電流直流陽極氧化(電壓20V)方法作用30分鐘，制備出直徑70nm左右的納米管涂層。
[0051]步驟二、真空抽吸促進鈦棒表面納米管裝載rhH)GF-BB
商品化的GEM 21S試劑盒中，rhH)GF-BB原溶液的濃度為SOOyg/ml，使用醫(yī)用滅菌水將其稀釋為工作濃度，將步驟一中制備的納米管涂層修飾的鈦棒浸泡于100 μ g/ml的rhPDGF-BB工作液中，放入真空抽氣泵中抽吸10分鐘，將鈦棒取出置于4°C過夜自然干燥。
[0052]步驟三、rhPDGF-BB納米管緩釋鈦棒植入骨質(zhì)疏松大鼠股骨
骨質(zhì)疏松大鼠模型建立以及股骨內(nèi)鈦種植體植入手術過程參見之前已發(fā)表文獻(Kurth AHA, Eberhardt C，Miiller S，Steinacker M, Schwarz M, Bauss F.The bisphosphonate ibandronate improves implant integrat1n in osteopenicovariectomized rats.Bone.2005; 37:204-10.)?大鼠雙側股骨按照隨機原則分別植入以下三組不同材料:A組(真空抽吸負載rhH)GF-BB實驗組，n=12), B組(自然吸附rhPDGF-BB實驗組，n=12)，對照組(未負載藥物的納米管涂層組，n=12)。
[0053]步驟四、種植體-骨結合率測定
術后8周，大鼠安樂處死，其中每組隨機選擇6個標本固定于福爾馬林固定液中；固定后行X線影像學檢測(結果見附圖6);隨后進行梯度酒精脫水，依次浸入50%，75%，85%，95%和100%兩次各24小時，二甲苯透明處理8小時，滲透液(二甲苯與包埋液I以1:1體積混合配制)中室溫浸泡24小時，包埋液I中4°C浸泡24小時，最后放置于包埋液II (甲基苯烯酸甲酯)中，經(jīng)真空抽氣處理后放置于37°C硬化；待包埋液完全硬化后，取出標本，使用SP1600硬組織切片機切片，切片厚度約150 μ m，最終打磨拋光至40 μ m左右，再進行苦味酸品紅染色(結果見附圖7a);鏡下拍照、計算種植體-骨結合率(BIC)。
[0054]實驗結果見附圖7b，對照組的BIC指數(shù)為41.32 土 4.79%，B組的BIC指數(shù)為53.65 土 5.18%，A組的結果高達65.08 土 6.08%，各組之間均存在顯著性差異ip <0.01)。
[0055]步驟五、拔出實驗檢測
術后8周，大鼠安樂處死后每組余下的6個標本凍存于_80°C，小心修剪標本使其暴露鈦棒兩端，使用自凝塑料為每個標本制備個性化支架，固定標本并使鈦棒長軸與水平面垂直。使用萬能材料試驗機進行測試，加載速度設置為lmm/min，其應力峰值記為拔出試驗結果用以表示種植體結合強度。
[0056]實驗結果見附圖7c，對照組的應力峰值為50.12 土 5.28 N，B組的應力峰值為65.10 土 8.26 N，A組的結果高達94.97 土 9.92 N，各組之間均存在顯著性差異(/7 <0.01)。
[0057]綜上所述，真空抽吸提高了納米管對rhH)GF-BB的裝載量；rhH)GF-BB在體外可以緩慢釋放長達14天之久并且仍保持生物活性；裝載rhTOGF-BB的納米管涂層促進了干細胞的粘附、增殖和成骨分化活性；裝載rhH)GF-BB的納米管涂層促進了骨質(zhì)疏松狀態(tài)下骨整入口 ο
[0058]本發(fā)明不僅適用于rhH)GF-BB的裝載與緩釋，對BMPs、bFGF、VEGF和Nell-1等生長因子也同樣適用。
[0059]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應當指出，對于本【技術領域】的普通技術人員，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，例如擴大真空抽吸促進藥物負載的應用范圍，包括使用其它具有微納米級管狀、孔隙狀和凹坑狀類等結構的載體，以及使用其它因子、藥物、離子溶液等，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。
【權利要求】
1.一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系，包括鈦合金植入體，其特征在于，采用陽極氧化的方法在鈦合金植入體表面制備二氧化鈦納米管涂層，并在鈦合金植入體上負載生長因子。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系，其特征在于，所述生長因子是重組人血小板源生長因子rhH)GF-BB、骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMPs、堿性成纖維生長因子bFGF、血管表皮生長因子VEGF和Nel樣I型分子中的一種或幾種。
3.根據(jù)權利要求2所述的一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系，其特征在于，所述生長因子是重組人血小板源生長因子rhH)GF-BB。
4.權利要求1所述的一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟: 將鈦合金植入體表面進行直徑為3(Tl00的納米管修飾，然后浸泡于裝有濃度為50^300 μ g/ml的生長因子溶液的器皿中，將器皿放入真空抽氣泵中，抽吸10-20分鐘后取出鈦合金植入體，置于4°C自然干燥。
5.根據(jù)權利要求4所述的一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系的制備方法，其特征在于，抽吸時間為10分鐘。
6.根據(jù)權利要求4或5所述的一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系的制備方法，其特征在于，所述生長因子是重組人血小板源生長因子rhH)GF-BB、骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMPs、堿性成纖維生長因子bFGF、血管表皮生長因子VEGF和Nel樣I型分子中的一種或幾種。
7.根據(jù)權利要求6所述的一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系的制備方法，其特征在于，所述生長因子是重組人血小板源生長因子rhH)GF-BB。
8.權利要求1一3任一所述的一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系在制備促進骨整合材料中的應用。
9.真空抽吸技術在制備權利要求1一3任一所述的一種應用于骨整合的生長因子納米管緩釋體系中的應用。
【文檔編號】A61L31/16GK104436313SQ201310414679
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年9月12日 優(yōu)先權日:2013年9月12日
【發(fā)明者】張文杰, 蔣欣泉 申請人:上海交通大學醫(yī)學院附屬第九人民醫(yī)院