一種高活性柏子提取物及其用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種高活性柏子提取物及其用途。具體地，本發(fā)明高活性柏子提取物具有以下特征：(a)所述提取物的分子量分布為280-310；(b)所述提取物中不飽和脂肪酸總含量≥80wt％；(c)所述提取物中來源于柏子的二萜類物質(zhì)總含量≤0.5wt％；和(d)所述的柏子提取物在0.01-50mg/kg體重計量下施用時，具有促智活性，較佳地，0.02-11mg/kg體重(人)。本發(fā)明的柏子提取物在較低劑量下表現(xiàn)出高活性的促智作用，且具有良好的抗疲勞效果。
【專利說明】一種高活性柏子提取物及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥提取物領(lǐng)域，具體地，涉及一種從柏子中提取的高活性成分，作為 促智尤其是提高認(rèn)知能力、改善認(rèn)知功能障礙以及抗疲勞藥物和功能食品的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 認(rèn)知功能是指人腦加工、儲存和提取信息的能力，包括記憶、語言、視空間、執(zhí)行、 計算和理解判斷等方面的能力。認(rèn)知功能障礙是指上述一項或多項能力受損，常見于各種 類型的癡呆患者，其中最高發(fā)的是阿爾茨海默病（Alzheimer's disease，AD)和血管性癡呆 (vascular Dementia, VaDX
[0003] AD是發(fā)生于老年前期或老年期，以進行性癡呆、認(rèn)知障礙為主要癥狀，同時伴有精 神行為異常的神經(jīng)退行性疾病。其特征性臨床表現(xiàn)為嚴(yán)重的學(xué)習(xí)記憶功能下降、分析判斷 能力衰退、情緒改變、行為失常、甚至意識模糊。隨著人類社會年齡結(jié)構(gòu)老齡化，老年性癡呆 癥發(fā)病率日趨上升，已成為僅次于心腦血管疾病和腫瘤的第三大健康殺手。據(jù)報道，65歲以 上老年人口中,AD患病率占總?cè)丝诘?wt % -7wt %，80歲以上的老年人可達20wt %;至2015 年，我國老年人口將超過2億，本世紀(jì)40年代后期可能突破4億。AD發(fā)病率隨著人口老齡 化的進展呈逐年上升的趨勢，尋找治療AD的有效藥物已成為醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點之一。
[0004] AD的臨床表現(xiàn)主要為智能和認(rèn)知功能障礙，屬于中醫(yī)呆病、善忘、癡呆、文癡等范 疇。中藥具有效性確切和安全低毒的特點，在以AD為代表的認(rèn)知功能障礙病癥的預(yù)防和治 療方面具有更大的潛力。
[0005] 柏子仁（arboruitae seed)，又稱柏實，為裸子植物柏科側(cè)柏（Platycladus orientalis(L. )Franco)的干燥成熟種仁。主產(chǎn)于山東、河南、河北等地。柏子仁味甘、性 平，有養(yǎng)心安神、斂汗、潤腸通便之功效。柏子仁應(yīng)用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為 上品?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》記載"主驚悸、安五臟、益氣、除風(fēng)濕搏，久服令人潤澤美色、耳目聰明、 不饑不勞、輕身延年";《本草綱目》記載：柏子仁具有"養(yǎng)心氣，潤腎燥，安魂定魄，益智寧神， 燒浙，澤頭發(fā)，治疥癬"功效，用于驚悸怔忡，失眠健忘，盜汗，腸燥便秘。明代倪朱漠在《本 草匯言》中提到，"柏子仁味甘氣平……，此藥氣極蜂芬芳，則脾胃所喜；質(zhì)及潤澤，則肝腎所 宜。故前古謂安養(yǎng)五臟、主驚悸、定心神、悅顏色、聰耳目，為延年卻痛之上劑也。"
[0006] 近年化學(xué)研究表明，柏子仁含脂肪酸、柏木醇、谷留醇和二萜類成分，其中二萜 類成分主要紅松內(nèi)脂（pinusolide)、15, 16-雙去甲-13-氧代半日花-8(17) -烯-19 酸（15, 16_bisnor-13-〇x〇-8 (17)-labdene-19-oic acid)、15, 16-雙去甲-13-氧代半 日花-8(17) ; IlE-二烯-19-酸、二輕基半日花三烯酸（12R, 13RS_dihydroxyconmunic acid)。另有α -雪松醇（a -cedrol)，柏子仁雙醇（platydiol)，5-輕基松柏酸 (5-hydroxypinusolidie acid)。酚酸性化合物包括：（+)-兒茶精[(+)-Catechin]、 (-)-表兒茶精[(-)-epicatechin]及其聚合體丙氰定 BI, B3 (Proeyanidin BI, B3)、5-輕 基-7,4-二甲氧基黃酮（5-117(11'(?7-7,4-(1;[11161:11(?7；1^13￥0116)和木質(zhì)素等。
[0007] 近年藥理研究表明，柏子仁具有促智、鎮(zhèn)靜、潤暢通便的作用。1992年日本學(xué)者 西山信好[西山信好等，國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)藥分冊，1992, 14(4)，53-54.]通過小鼠被動學(xué)習(xí)回 避試驗探討了柏子仁對破壞杏仁核小鼠學(xué)習(xí)障礙的作用，明暗室法試驗中表明，柏子仁乙 醇提取物250, 500mg/kg 口服給藥對對杏仁核破壞后小鼠的學(xué)習(xí)障礙無效，但在跳臺試驗 中能明顯改善、保持、恢復(fù)記憶，但對大腦皮層、海馬、丘腦下部的乙酰膽堿酯酶活性未見 影響。日本學(xué)者楮鵬江[楮鵬江等，國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)藥分冊，1993，15(2)，40-41.]研究柏 子仁對前腦基底核破壞小鼠被動回避學(xué)習(xí)障礙的影響時發(fā)現(xiàn)，避暗法和跳臺試驗表明，柏 子仁乙醇提取物250, 500mg/kg 口服給藥后對前腦基底核破壞小鼠的被動學(xué)習(xí)障礙有改 善作用，但對運動低下無拮抗作用。Nishiyama等[Nishiyama N，et al. ,Phytotherapy Research, 1992, 6, 289-293. ]〇
[0008] 研究表明，柏子仁乙醇提取物250, 500mg/kg 口服給藥對扁桃體損傷引起的記憶 獲得障礙有改善作用，但未能改善記憶保持，對皮質(zhì)、海馬和下丘腦中的膽堿乙酸基轉(zhuǎn)移酶 的活性未見作用，對扁桃體損傷引起的顯微病理改變未見影響。
[0009] 因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種對提高認(rèn)知能力、改善認(rèn)知功能障礙有良好效果、 活性成分高且易獲得的提取物及其組合物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明提供了的柏子提取物，具有活性高、劑量低、能夠提高認(rèn)知能力、改善認(rèn)知 功能障礙、抗疲勞效果明顯的優(yōu)點。
[0011] 本發(fā)明提供了一種柏子提取物，所述的提取物中具有以下特征：
[0012] (a)所述提取物的分子量分布為280-310 ;
[0013] (b)所述提取物中不飽和脂肪酸總含量彡80wt% ;
[0014] (c)所述提取物中來源于柏子的二萜類物質(zhì)總含量< 0. 5wt% ;和
[0015] (d)所述的柏子提取物在0. 01_50mg/kg體重計量下施用時，具有促智活性，較佳 地，2-10mg/kg體重（小鼠），更佳地0· 2-llmg/kg (人)。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述的施用的對象為哺乳動物，較佳地，為小鼠、大鼠、人。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述的提取物還具有以下一個或多個特征：
[0018] (e)所述的提取物中的二萜類總含量小于0. 5wt%或無；
[0019] (f)所述的提取物還含有IO-Hwt %的飽和脂肪酸；
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述的二萜類物質(zhì)包括選自以下一種或多種的化合物：紅 松內(nèi)脂、15, 16-雙去甲-13-氧代半日花-8 (17)-烯-19酸、15, 16-雙去甲-13-氧 代半日花-8 (17) ; IlE-二烯-19-酸、二羥基半日花三烯酸、南洋杉酸、13-表柏酸 (13-epicupressic acid)。
[0021] 在另一優(yōu)選例中，所述的提取物中，南洋杉酸的含量< 0. 5wt% ;和/或13-表柏 酸（13-epicupressic acid)的含量<0· 5wt%。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述的提取物中，南洋杉酸的含量為無；和/或13-表柏酸 (13-epicupressic acid)的含量為無。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，其中，所述的飽和脂肪酸包括棕櫚酸、硬脂酸；
[0024] 所述的不飽和脂肪酸包括油酸、亞油酸、亞麻酸、9-二十碳烯酸、11-二十碳烯酸、 5, 11-二十烷二烯酸、12, 17-二十烷二烯酸、8, 11，14-二十烷三烯酸、5, 11，14, 17-花生四 烯酸。
[0025] 在另一優(yōu)選例中，所述的亞麻酸含量為25wt % ;
[0026] 在另一優(yōu)選例中，所述的提取物是用以下方法制備的：
[0027] (i)獲得成熟柏子并粉碎，從而形成柏子粉；
[0028] (ii)將步驟（i)中獲得的柏子粉經(jīng)提取形成柏子提取物。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，所述的提取包括超臨界二氧化碳萃取和石油醚提取。
[0030] 本發(fā)明第二方面，提供了一種組合物，所述的組合物包括（i)本發(fā)明第一方面所 述的柏子提取物作為活性成分；（ii)藥學(xué)上可接受的載體、或食品上可接受的載體。
[0031] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合物為藥品組合物或食品組合物或保健品組合物。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述柏子提取物的含量被配制成每日施用劑量，按柏子提取物 計為0· 01-50mg/kg體重；較佳地,為2?10mg/kg體重（小鼠）；更佳地,為4-6mg/kg體重 (小鼠）；和/或較佳地為〇· 〇2-llmg/kg (人）；更佳地為0· 04-6mg/kg(人）。
[0033] 本發(fā)明第三方面，提供了一種本發(fā)明第一方面所述的柏子提取物的用途，用于制 備改善認(rèn)知功能障礙的藥物和/或食品和/或保健品，且所述的藥物和/或食品和/或保健 品中柏子提取物的含量被配制成每日施用劑量為〇. 01?50mg/kg體重；更佳地，為0. 02? llmg/kg 體重（人）。
[0034] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物和/或食品和/或保健品還用于抗疲勞。
[0035] 本發(fā)明第四方面，提供了一種改善認(rèn)知功能，尤其是促智的方法，給需要的對象施 用0. 01?50mg/kg體重本發(fā)明第一方面所述的柏子仁提取物。
[0036] 在另一優(yōu)選例中，所述的施用量為每日施用劑量為0. 01_50mg/kg體重；更佳地， 為2?10mg/kg體重（小鼠），為0· 02?I lmg/kg體重（人）。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述的對象是哺乳動物，較佳地包括小鼠、大鼠、人，更佳地，所 述的對象是人。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，所述的對象包括幼兒、兒童、青少年、老年人、和/或AD患者。
[0039] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0040] 圖IA-B顯示了柏子經(jīng)不同提取方法得到的活性部位以及市售魚油對東莨菪堿致 小鼠記憶障礙均有不同程度記憶改善作用，其中，帶殼柏子的提取物BZ-I-SFC的效果優(yōu)于 其他方法獲得的提取物，與其效果相當(dāng)?shù)臑橐掖及刈尤侍崛∥顱ZR-E，但BZR-E的劑量為 BZ-I-SFC 的 10 倍。
[0041] 圖2A顯示了柏子提取物BZ-I-SFC多個劑量下均能不同程度的縮短小鼠到達逃脫 平臺的時間，而6mg/kg表現(xiàn)出最佳改善作用；圖2BBZ-1-SFC多個劑量下均能減少小鼠進入 盲端的錯誤次數(shù)，在6mg/kg時作用也最明顯。其作用強度與陽性對照石杉堿甲相當(dāng)。
[0042] 圖3顯示了 BZ-I-SFC隨著測試濃度的增加，抗疲勞作用效果也隨之增強。其中 36mg/kg能明顯改善小鼠體力疲勞現(xiàn)象，有顯著性統(tǒng)計意義。

【具體實施方式】
[0043] 本發(fā)明人通過廣泛而深入的研究，首次發(fā)現(xiàn)了對帶殼柏子進行提取，所獲得的提 取物在很低的劑量下即對提高認(rèn)知能力、改善認(rèn)知功能障礙有良好的作用，本發(fā)明人同時 通過實驗證明，本發(fā)明提取物具有極高含量的不飽和脂肪酸，大大降低了柏子仁提取物中 對提高認(rèn)知能力、改善認(rèn)知功能障礙無活性的雜質(zhì)成分。在此基礎(chǔ)上，完成了本發(fā)明。
[0044] 術(shù)語
[0045] 如本文所用，術(shù)語"本發(fā)明柏子提取物"、"本發(fā)明柏子有效部位"、"本發(fā)明柏子活 性部位"、"BZ-1-SFC"可互換使用，均指將帶殼柏子通過提取后獲得的柏子提取物，且所述 的柏子提取物均具有不飽和脂肪酸含量> 80wt%，二萜類物質(zhì)< 0. 5wt%，并在低劑量下 具有提高認(rèn)知能力、改善認(rèn)知功能障礙的特性。
[0046] 術(shù)語"促智"、"促智活性"可以互換使用，均指對人體或動物施用藥物后，具備提高 認(rèn)知能力、改善認(rèn)知功能障礙的效果。
[0047] 柏子提取物
[0048] 本發(fā)明提供的柏子提取物為一種通過將帶殼柏子經(jīng)過超臨界萃取、石油醚提取等 方法獲得的高活性提取物。柏子提取物具有極高含量(大于80wt%)的不飽和脂肪酸，且 對提高認(rèn)知能力、改善認(rèn)知功能障礙無活性的物質(zhì)等物質(zhì)含量極小，其中二萜類物質(zhì)含量 彡0. 5wt %。由此，本發(fā)明柏子提取物可以在極低的劑量下（0. 01-50mg/kg體重，較佳地， 2-10mg/kg體重（小鼠），0· 02-llmg/kg體重（人），更佳地，為4-6mg/kg體重（小鼠）， 0· 04-6. 6mg/kg體重（人）），對提高認(rèn)知能力、改善認(rèn)知功能障礙有良好作用。
[0049] 本發(fā)明柏子提取物可通過超臨界萃取、石油醚提取等方法進行提取。
[0050] 其中，超臨界萃取的方法如下：帶殼或去殼柏子仁粉碎后，置于超臨界萃取裝置的 萃取釜(設(shè)備：江蘇南通華安超臨界萃取有限公司，HA221-40-11型超臨界萃取裝置）中，在 萃取釜溫度為32°C、壓力為25MPa、CO 2流速為30-341711的條件下萃取1.5小時，萃取完畢 后提取液轉(zhuǎn)移至分離釜，在分離釜溫度為38°C、壓力為6MPa條件下分離出柏子仁SFC提取 物。
[0051] 石油醚萃取的方法如下：帶殼或去殼柏子仁粉碎后，至于3000ml的錐形瓶中，力口 等量的石油醚(沸點60-90°C )超聲提取3次，每次Ih ;提取液合并減壓蒸干即得柏子仁石 油醚提取物。
[0052] 在本發(fā)明柏子提取物中，不飽和脂肪酸含量占> SOwt %，所述不飽和脂肪酸包括 油酸、亞油酸、亞麻酸、9-二十碳烯酸、11-二十碳烯酸、5, 11-二十烷二烯酸、12, 17-二十烷 二烯酸、8, 11，14-二十烷三烯酸I、5, 11，14, 17-花生四烯酸；
[0053] 本發(fā)明柏子提取物中所述的二萜類物質(zhì)含量<0. 5wt%，包括紅松內(nèi)脂、15, 16-雙 去甲-13-氧代半日花-8 (17)-烯-19酸、15, 16-雙去甲-13-氧代半日花-8(17) ; IlE-二 烯-19-酸、二輕基半日花三烯酸、南洋杉酸、13-表柏酸（13-epicupressic acid);其中，代 表性的二廠類物質(zhì)包括南洋杉酸、13-表柏酸（13-epicupressic acid)。
[0054] 本發(fā)明柏子提取物中，還包括10?15wt%的飽和脂肪酸，所述的飽和脂肪酸包括 棕櫚酸、硬脂酸。
[0055] 本發(fā)明柏子提取物在低劑量下（0. 01_50mg/kg，較佳地2-10mg(小鼠）， 0· 02-llmg/kg(人）；更佳地4-6mg/kg(小鼠），0· 04-6. 6mg/kg(人））具有改善記憶、促智 的作用，且還具有一定的抗疲勞效果。因此，本發(fā)明也提供了通過給需要的受試者施加有效 量的所述柏子提取物來預(yù)防、改善或治療所述疾病的方法。
[0056] 組合物
[0057] 本發(fā)明提供一種組合物，以所述組合物總重量計，它含有重量百分比為l-99wt% 的本發(fā)明提供的柏子提取物作為活性成分和藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體。
[0058] 在本發(fā)明中，各種組合物可以按本領(lǐng)域熟知的方法配制，可以將柏子提取物與藥 學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體混合配制。藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體的成分是適用于 人和/或動物而無過度不良副反應(yīng)（如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng)）的，即有合理的效益/風(fēng)險 比的物質(zhì)。所述的有藥學(xué)上或食品學(xué)上可接受的載體中還可以包含甘草提取物等天然提取 物、維生素和微量元素等營養(yǎng)強化劑及膳食纖維、糊精。
[0059] "藥學(xué)上可接受的載體"指用于治療劑給藥的載體，包括各種賦型劑和稀釋劑。該 術(shù)語指這樣一些藥劑載體：它們本身并不是必要的活性成分，且施用后沒有過分的毒性。合 適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這 些載體中還可能存在輔助性的物質(zhì)，如填充劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、泡騰劑、潤濕劑或 乳化劑、矯味劑、pH緩沖物質(zhì)等。
[0060] 在本發(fā)明的另一優(yōu)選方式中，所述的食品學(xué)上可接受的載體或賦形劑可含有：填 充劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、泡騰劑、矯味劑、包覆材料、膳食制品、或緩釋劑。
[0061] 對于本發(fā)明所述的組合物的劑型沒有特別的限制，可以是任何適用于哺乳動物服 用的劑型；優(yōu)選的，所述的劑型可選自膠囊、軟膠囊、粉劑、片劑、顆粒劑、口服液、噴霧劑、霜 劑、乳劑、水劑或膏體等。
[0062] 本發(fā)明的組合物包括藥物組合物、食品組合物、保健品組合物、食品配料組合物、 膳食補充劑組合物、天然藥物原料組合物、或化妝品功能成分組合物；也可以是保健飲料、 酒類等。只要它們含有或基本上由柏子提取物組成即可。
[0063] 本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說明書所揭示 的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個特征，可以任何可提供相同、 均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特 征的一般性例子。
[0064] 柏子提取物BZ-I-SFC促智活性總結(jié)與成人劑量換算
[0065] 按照《藥理試驗方法學(xué)》（人民衛(wèi)生出版社，第四版）中附表資料，小鼠和人的體表 面折算的等效劑量比值為387. 9。以小鼠 lmg/kg劑量為例，計算人給藥劑量=1*0. 02kg(小 鼠平均體重）*387. 9/70kg (人平均體重）=0· llmg/kg。
[0066] 在另一優(yōu)選例中，根據(jù)本發(fā)明示范例數(shù)據(jù)，帶殼柏子提取物有效劑量范圍為 l-50mg/kg，折算成人的劑量為0. l-5mg/kg。然而，由于藥物在不同種屬動物代謝的差異以 及不同種屬動物分子生物學(xué)的差異可能導(dǎo)致藥物效應(yīng)的浮動。因此在上述計算劑量下上下 各浮動10倍，折算成人的劑量應(yīng)為〇. 01_50mg/kg。
[0067] 同理，在確定了應(yīng)用于小鼠的最佳劑量后，通過此方法同樣能夠方便地推算的應(yīng) 用于成人的最佳劑量。
[0068] 本發(fā)明的有益效果：
[0069] 1.柏子提取物活性高，施用劑量?。罕景l(fā)明提供的帶殼柏子提取物在低劑量 下（0· 01-50mg/kg，較佳地 2-10mg/kg(鼠），0· 02-llmg(人），更佳地 4-6mg/kg(小鼠）， 0. 04-6. 6mg/kg (人））即有提高認(rèn)知能力、改善認(rèn)知功能障礙的作用，活性較傳統(tǒng)柏子仁提 取物大幅上升（250、500mg/kg體重（小鼠）），更易于施用，從而有助于改善施用對象的服用 依從性。
[0070] 3.提取方法來源充足、經(jīng)濟、方便：本發(fā)明采用對帶殼柏子的提取，取代了傳統(tǒng)去 殼柏子仁提取，效果優(yōu)于去殼柏子仁的同時，大幅提升了原料獲得的便利性、經(jīng)濟性，從而 降低了生產(chǎn)成本，更有利于工業(yè)生產(chǎn)推廣。
[0071] 實施例1 :柏子提取物的制備
[0072] I. ISFC提取：取帶殼柏子288g粉碎后至于SFC中（SFC儀器型號HA221-40-11，江 蘇南通華安超臨界萃取有限公司），萃取條件：萃取釜溫度：32°C，萃取釜溫度壓力：25MPa ; 分離釜溫度：38°C，分離釜溫度壓力：6MPa ;超臨界CO2流速；30-40L/h ;萃取時間：1. 5h。得 柏子提取物BZ-1-SFC23. 2g，得率為8. Owt %。
[0073] 1. 2石油醚提取：取帶殼柏子5. 2g粉碎后至于500ml的錐形瓶中，加入250ml石 油醚，超聲提取3次，每次lh。石油醚提取液合并，減壓蒸餾得活性部位BZR-1-PE1. 2g，得 率為 23. Iwt%。
[0074] 對比例1柏子仁提取物的制備
[0075] I. Ic SFC提?。喝∪ぐ刈尤?70g粉碎后至于SFC中（SFC儀器型號 HA221-40-11，江蘇南通華安超臨界萃取有限公司），萃取條件：萃取釜溫度：32°C，萃取釜溫 度壓力：25MPa ;分離釜溫度：38°C，分離釜溫度壓力：6MPa ;超臨界CO2流速；30-40L/h ;萃 取時間：1. 5h。得柏子仁提取物BZR-SFC23. 0g，得率為8. 5wt%。
[0076] I. 2c石油醚提?。喝∪ぐ刈尤?g粉碎后至于500ml的錐形瓶中，加入250ml石 油醚，超聲提取3次，每次lh。石油醚提取液合并，減壓蒸餾得活性部位BZR-PE1. 2g，得率 為 24wt %。
[0077] I. 3c乙醇提?。喝∪ぐ刈尤?0. 45g按照文獻（Nishiyama N, et al. , Phytotherapy Research, 1992, 6, 289-293)提供的方法制得柏子仁提取物 BZR-E2. llg，得率為 10. 3wt%。
[0078] 實施例2 :柏子或柏子仁提取物中半日花烷型二萜南洋杉酸和13-表柏酸 (13-epicupressic acid)含量的測定
[0079] 2. L柏子仁提取物中半日花燒型二廠南洋杉酸（imbricatolic acid)和13-表柏 酸（13-epicupressic acid)的分離與純化：
[0080] 按文獻（Wang YZ. et al.，Phytochemistry, 2008, 69, 518-526.)的方法將干燥柏 子仁（10. 2kg)碾碎后，在室溫下用95wt%工業(yè)乙醇（20LX3)提取，經(jīng)過不同的柱層析手 段得化合物南洋杉酸（imbricatolic acid) 81. 8g，得率為8. 2wt% ;得化合物13-表柏酸 (13-epicupressic acid) 2. 54g?；衔锬涎笊妓岷?13-表柏酸（13-epicupressic acid) 的波譜數(shù)據(jù)如下：
[0081] 南洋杉酸，imbricatolic acid
[0082] 白色粉末，[a ]D(20°C )+50(cl. 5, CHC13) jH-NMlUCDCls，300MHz) : δ 〇· 60(3H，s，C H3-20)，0· 90 (3H，d，J=6. 4Hz，CH3-16)，I. 22 (3H，s，CH3-18)，3· 68 (2H，m，H-15)，4· 50 (1H，s，H -17)，4. 84 (1H，s，H-17) · 13C-NMR (CDCl3, 75MHz) : δ 12. 7 (q，C-20)，19. 8 (q，C-16)，19. 9 (t，C -2)，21.1(t，C-ll)，26.0(t，C-6)，28.9(q，C-18)，30.2(t，C-13)，36.4(t，C-12)，38.0(t，C-3)，38. 7 (t，C-7)，39. I (t，C-l)，39. 5 (t，C-14)，40. 5 (s，C-10)，44. I (s，C-4)，56. 3 (d，C-5)， 56. 6 (d, C-9)，61. 2 (t, C-15)，106. 3 (t, C-17)，148. 2 (s, C-8)，183. 3 (s, C-19)。上述數(shù)據(jù)與文 獻報道[Su, W. C.，F(xiàn)ang, J. Μ·，Cheng, Y. S. Labdanes from Cryptomeria japonica. Phytoch emistry，1994, 37, 1109-1114.] -致。
[0083] 13-表柏酸（13-epicupressic acid)
[0084] 白色粉末，[a ]D(2(TC )+57(c4. 5, CHCl3) !1H-NMR(O)Cl3, 300MHz) : δ 〇· 58(3H，s，C H3-20), I. 22 (3H, s, CH3-I8), I. 26 (3H, s, CH3-16), 4. 43 (1H, s, H-17), 4. 82 (1H, s, H-17), 5. 0 2 (1H, dd, J=IO. 7, I. 0Hz, H-15), 5. 20 (1H, dd, J=17. 3, I. 0Hz, H-15), 5. 90 (1H, dd, J=17. 3, 10 .7Hz,H-14) ; 13C-NMR (CDCl3, 75MHz) : δ 12. 7 (q, C-20), 17. 8 (t, C-I I), 19. 8 (t, C-2), 26. 0 (t ,C-6), 27. 9 (q, C-16), 28. 9 (q, C-18), 37. 9 (t, C-3), 38. 7 (t, C-7), 39. I (t, C-l), 40. 6 (s, C-10), 41. 3 (s, C-12), 44. I (s, C-4), 56. 3 (d, C-5), 56. 4 (d, C-9), 73. 8 (s, C-13), 106. 5 (t, C-I 7)，111. 7 (t, C-15)，144. 7 (d, C-14)，148. 0 (s, C-8)，183. 5 (s, C-19)。上述數(shù)據(jù)與文獻報道 [Su, ff. C. , Fang, J. Μ. , Cheng, Y. S. Labdanes from Cryptomeria japonica. Phytochemistry ，1994, 37, 1109-1114.] -致。
[0085] 2. 2.柏子提取物中南洋杉酸和13-表柏酸（13-epicupressic acid)含量測定
[0086] 柏子活性部位中半日花燒型二廠南洋杉酸和13-表柏酸（13-epicupressicacid) 的含量測定采用高效液相色譜（HPLC)法，液相條件為 ：
[0087] 流動相：二氯甲烷：乙腈=30:70等梯度洗脫
[0088] 檢測器：蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD)
[0089] 流速：lml/min
[0090] 柱色譜：Waters Acquity Column BEH RP-C18, 1. 7 μ m, 2. I X 100mm
[0091] 柱溫：40°C
[0092] 測定方法：
[0093] 供試品溶液的制備：精密稱取活性部位20. Omg，二氯甲烷溶解后轉(zhuǎn)移至100ml的 容量瓶中并定容至刻度，作為供試溶液；
[0094] 對照品溶液的制備：分別稱取半日花烷型二萜南洋杉酸和13-表柏酸 (13-epicupressic acid)各IOmg,精密稱定，加二氯甲燒制成Iml含200 μ g的溶液，即得。 [0095] 分別精密量取20μ 1對照品和供試品溶液，加入到高效液相色譜儀自動進樣器 中，測定。
[0096] 2. 3.含量測定結(jié)果如表1所示
[0097] 表1:柏子仁或柏子活性部位二萜的含量

【權(quán)利要求】
1. 一種柏子提取物，其特征在于，所述的提取物中具有以下特征： (a) 所述提取物的分子量分布為280-310 ; (b) 所述提取物中不飽和脂肪酸總含量彡80wt% ; (c) 所述提取物中來源于柏子的二萜類物質(zhì)總含量< 0. 5wt % ;和 (d) 所述的柏子提取物在0. 01_50mg/kg體重計量下施用時，具有促智活性。
2. 如權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述施用時的施用對象為哺乳動物，較佳 地，為小鼠、大鼠、人，更佳地，為人。
3. 如權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述的提取物還具有以下一個或多個特 征： (e) 所述的提取物中的二萜類總含量小于0. 5wt %或無； (f) 所述的提取物還含有l(wèi)〇-14wt%的飽和脂肪酸。
4. 如權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述的二萜類物質(zhì)包括選自以下一種或 多種的化合物：紅松內(nèi)脂、15, 16-雙去甲-13-氧代半日花-8 (17)-烯-19酸、15, 16-雙去 甲-13-氧代半日花_8 (17) ; 11E-二烯-19-酸、二羥基半日花三烯酸、南洋杉酸、13-表柏酸 (13-epicupressic acid)。
5. 如權(quán)利要求3所述的提取物，其特征在于，其中，所述的飽和脂肪酸包括棕櫚酸、硬 脂酸； 所述的不飽和脂肪酸包括油酸、亞油酸、亞麻酸、9-二十碳烯酸、11-二十碳烯酸、 5, 11-二十烷二烯酸、12, 17-二十烷二烯酸、8, 11，14-二十烷三烯酸、5, 11，14, 17-花生四 烯酸。
6. 如權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，所述的提取物是用以下方法制備的： (i) 獲得成熟柏子并粉碎，從而形成柏子粉； (ii) 將步驟（i)中獲得的柏子粉經(jīng)提取形成柏子提取物。
7. -種組合物，其特征在于，所述的組合物包括（i)權(quán)利要求1所述的柏子提取物作為 活性成分；（ii)藥學(xué)上可接受的載體、或食品上可接受的載體。
8. 如權(quán)利要求7所述的組合物，其特征在于，所述的組合物為藥品組合物或食品組合 物或保健品組合物。
9. 如權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于，所述柏子提取物的含量被配制成每日施 用劑量，按柏子提取物計為〇. 01_50mg/kg體重。
10. -種權(quán)利要求1所述的柏子提取物的用途，其特征在于，用于制備改善認(rèn)知功能障 礙的藥物和/或食品和/或保健品，且所述的藥物和/或食品和/或保健品中柏子提取物 的含量被配制成每日施用劑量為〇. 01?50mg/kg體重。
【文檔編號】A61K36/14GK104367603SQ201310349927
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2013年8月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月12日
【發(fā)明者】葉陽, 唐希燦, 章海燕, 姚勝, 王維, 季萍 申請人:中國科學(xué)院上海藥物研究所