專利名稱：一種防紫外線具有保護皮膚效果的藍莓葉提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可以防紫外線具有保護皮膚效果的藍莓葉提取物。
背景技術(shù)：
紫外線UV(Ultraviolet)可分為長波黑斑效應(yīng)紫外線UVA (320 400nm)、中波紅斑效應(yīng)紫外線UVB (275 320nm)、短波滅菌效應(yīng)紫外線UVC(200 275nm)和真空紫外線UVD(100 200nm)。大量研究表明，在紫外線(UV)輻射下，皮膚會產(chǎn)生急性光毒性反應(yīng)，導(dǎo)致彌散性灰黑色色素沉著和炎癥因子的產(chǎn)生，而且細(xì)胞內(nèi)氧自由基(ROS)產(chǎn)生超過其清除速度，過多的ROS可直接攻擊細(xì)胞膜脂質(zhì)和蛋白質(zhì)DNA，導(dǎo)致了表皮和真皮細(xì)胞的廣泛氧化損傷并抑制細(xì)胞增殖，最終引起皮膚炎癥反應(yīng)、免疫抑制、皮膚癌變及皮膚光老化等。其中以長波黑斑效應(yīng)UVA為主的紫外線有很強的穿透力能夠直達皮膚真皮層破壞彈性纖維和膠原蛋白纖維，能造成表皮和真皮層的廣泛損傷，對真皮層的成纖維細(xì)胞損傷作用尤為明顯，是皮膚真皮衰老的主要原因。因此，研制一種可以抗紫外線、減少紫外線對真皮層的成纖維細(xì)胞損傷作用的提取物是很有必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種防紫外線具有保護皮膚效果的藍莓葉提取物。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:將藍莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸提取三次，過濾后合并濾液并濃縮再用大孔樹脂富集有效成分，分別以去離子水和不同濃度的乙醇溶液洗脫，所得各分段溶液溶劑回收、冷凍干燥后保存，其中50%乙醇洗脫得到的部位即為本發(fā)明的提取物。本發(fā)明的提取物是將IOOg藍莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，過濾后合并濾液，濃縮提取液至400mL，先得到樣品溶液；樣品溶液加入DlOl大孔樹脂(IOOg)層析柱，分別以去離子水(2L)和不同濃度的乙醇溶液(各濃度2L)為洗脫劑，流速約為6mL/min ;將50%乙醇溶液洗脫得到的部位溶液溶劑回收，濃溶液冷凍干燥后，進行稱重并密封保存，即為本發(fā)明的提取物。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明:實施例1 一種防紫外線具有保護皮膚效果的藍莓葉提取物的制備將IOOg藍莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，過濾后合并濾液，濃縮提取液至400mL，先得到樣品溶液；樣品溶液加入DlOl大孔樹脂(IOOg)層析柱，分別以去離子水(2L)和不同濃度的乙醇溶液(各濃度2L)為洗脫劑，流速約為6mL/min ;將50%乙醇溶液洗脫得到的部位溶液溶劑回收，濃溶液冷凍干燥后，進行稱重并密封保存，即為本發(fā)明的提取物。

實施例2提取物在UVA氧化損傷模型中對成纖維細(xì)胞的保護作用
原代成纖維細(xì)胞的提取與培養(yǎng):取出生于24小時內(nèi)的新生鼠背部皮膚若干塊，用組織塊法培養(yǎng)法分離真皮和表皮，眼科剪剪碎，每塊約1mm2，剪切過程中可適量滴加培養(yǎng)液，保持濕潤。取培養(yǎng)瓶，用眼科鑷小心將剪碎的組織塊夾入培養(yǎng)瓶中，用探針將組織塊擺好，每塊間距約5mm，每瓶20-30塊/50ml左右，可滴加4_6滴胎牛血清。輕輕將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)，注入6ml含20%胎牛血清(4ml/25ml，6ml/50ml)的培養(yǎng)基，蓋好瓶蓋放入孵箱靜置2_4h。待組織塊貼附牢固后，緩慢側(cè)面翻轉(zhuǎn)平放，靜置培養(yǎng)(若組織塊不易貼壁，可預(yù)先在瓶底壁貼薄層血清或者鼠尾膠原)。即得原代成纖維細(xì)胞。UVA氧化損傷模型建立:將貼滿培養(yǎng)瓶80%成纖維細(xì)胞以0.25%胰蛋白酶消化，收集細(xì)
胞懸液。細(xì)胞計數(shù)，以密度為5X IifVmL接種于96孔板，每孔IOOuL,予37°C5%C02孵
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箱中孵育，細(xì)胞貼壁后取出細(xì)胞培養(yǎng)板。用0.5%dDMSO溶解樣品，分為純空白組(不含DMSO
培養(yǎng)基)、空白組對照組(含DMSO培養(yǎng)基，不給藥不照射)模型組(含DMSO培養(yǎng)基，不給藥照射)、給藥組(梯度為2.5ug/ml)。模型和給藥組分別用5J/cm2UVA照射5min，光源離細(xì)胞15cm。照射完棄原培養(yǎng)液加入新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)孵育每組設(shè)6個復(fù)孔。設(shè)3個板平行MTT法檢測細(xì)胞增殖活性通過酶標(biāo)儀測各孔的吸光度(A)值。結(jié)果:如表I所示，在2.5ug/ml的濃度下，藍莓葉提取物能明明顯逆轉(zhuǎn)紫外線照射對細(xì)胞增長的抑制作用。表I提取物對UVA損傷的對抗
權(quán)利要求
1.本發(fā)明是一種防紫外線具有保護皮膚效果的藍莓葉提取物。
2.本發(fā)明的提取物是將IOOg藍莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，過濾后合并濾液，濃縮提取液至400mL，先得到樣品溶液；樣品溶液加入DlOl大孔樹脂(IOOg)層析柱，分別以去離子水(2L)和不同濃度的乙醇溶液(各濃度2L)為洗脫齊U，流速約為6mL/min ;將50%乙醇溶液洗脫得到的部位溶液溶劑回收，濃溶液冷凍干燥后，進行稱重并密封 保存，即為本發(fā)明的提取物。
全文摘要
本發(fā)明是一種可以防紫外線具有保護皮膚效果的藍莓葉提取物，是由藍莓葉用水煎煮、大孔樹脂富集、乙醇洗脫所得，該提取物在體外實驗中均顯著表現(xiàn)出抗紫外線、保護皮膚的活性。
文檔編號A61K36/45GK103230429SQ20131017231
公開日2013年8月7日 申請日期2013年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月9日
發(fā)明者於紅, 賀善安, 王天壽, 張劍 申請人:湖北紫玉藍莓科技有限公司