專(zhuān)利名稱(chēng)：一種具有自由基清除活性的藍(lán)莓葉提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有自由基清除活性的藍(lán)莓葉提取物。
背景技術(shù)：
自由基是機(jī)體氧化反應(yīng)中產(chǎn)生的有害化合物，具有強(qiáng)氧化性，可損害機(jī)體的組織和細(xì)胞，進(jìn)而引起慢性疾病及衰老效應(yīng)，因此，研制一種具有自由基清除活性的提取物是很有必要的。DPPH法是一種被廣泛認(rèn)可的篩選自由基清除劑、評(píng)價(jià)抗氧化活性的簡(jiǎn)便方法。DPPH是一種穩(wěn)定的自由基，結(jié)構(gòu)中含有3個(gè)苯環(huán)，I個(gè)氮原子上有一個(gè)孤對(duì)電子。其乙醇溶液呈紫色，在517nm附近有強(qiáng)吸收。當(dāng)DPPH溶液中加入自由基清除劑時(shí)，孤對(duì)電子被配對(duì)，顏色由紫色向黃色變化，從而在517nm處的吸光度變小，吸光度變小的程度與自由基清除能力呈定量關(guān)系。由于該法操作簡(jiǎn)單，快速，且靈敏度高，被廣泛用于測(cè)定化合物或植物提取物的自由基清除能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種具有自由基清除活性的藍(lán)莓葉提取物。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:將藍(lán)莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸提取三次，過(guò)濾后合并濾液并濃縮再用大孔樹(shù)脂富集有效成分，分別以去離子水和不同濃度的乙醇溶液洗脫，所得各分段溶液溶劑回收、冷凍干燥后保存，其中50%乙醇洗脫得到的部位即為本發(fā)明的提取物。

本發(fā)明的提取物是將IOOg藍(lán)莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，過(guò)濾后合并濾液，濃縮提取液至400mL，先得到樣品溶液；樣品溶液加入DlOl大孔樹(shù)脂(IOOg)層析柱，分別以去離子水(2L)和不同濃度的乙醇溶液(各濃度2L)為洗脫劑，流速約為6mL/min ;將50%乙醇溶液洗脫得到的部位溶液溶劑回收，濃溶液冷凍干燥后，進(jìn)行稱(chēng)重并密封保存，即為本發(fā)明的提取物。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明:實(shí)施例1 一種具有自由基清除活性的藍(lán)莓葉提取物的制備將IOOg藍(lán)莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，過(guò)濾后合并濾液，濃縮提取液至400mL，先得到樣品溶液；樣品溶液加入DlOl大孔樹(shù)脂(IOOg)層析柱，分別以去離子水(2L)和不同濃度的乙醇溶液(各濃度2L)為洗脫劑，流速約為6mL/min ;將50%乙醇溶液洗脫得到的部位溶液溶劑回收，濃溶液冷凍干燥后，進(jìn)行稱(chēng)重并密封保存，即為本發(fā)明的提取物。實(shí)施例2樣品的自由基清除活性實(shí)驗(yàn)稱(chēng)取20mg DPPH.，以適量無(wú)水乙醇溶解，并定容至250mL(濃度為2 X I(T4M);各化合物用二甲亞砜(DMSO)配成200 μ g/ml的母液，于_4°C保存。使用前以DMSO稀釋至所需濃度；取0.2mM的DPPH溶液0.1mL與0.1mL樣品液(無(wú)水乙醇溶解)混勻，于25°C水浴中孵育30min,然后測(cè)定其517nm處的吸光度。以加入等體積的無(wú)水乙醇作為空白對(duì)照?；衔飳?duì)DPPH的清除率可按照以下公式計(jì)算(A為吸光值):DPPH.scavenging activity (% )=[1-A (sample)/Ao (control) ] X 100 %，根據(jù)結(jié)果計(jì)算 EC50 值，即清除 50% 的 DPPH 時(shí)的化合物濃度。取樣品200 μ g/ml母液，逐級(jí)稀釋成100，50，25，10，5，2.5，1.0，0.5，0.25，0.1 μ g/ml溶液；在當(dāng)樣品濃度在 5 25 μ g/ml之間時(shí)，其對(duì)DPPH的清除率呈直線型，其EC50 為 1324.98ng/ml。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明是一種具有自由基清除活性的藍(lán)莓葉提取物。
2.本發(fā)明的提取物是將IOOg藍(lán)莓葉粉碎后，以水為溶液加熱煮沸，每次加入水IOOOmL提取三次，過(guò)濾后合并濾液，濃縮提取液至400mL，先得到樣品溶液；樣品溶液加入DlOl大孔樹(shù)脂(IOOg)層析柱，分別以去離子水(2L)和不同濃度的乙醇溶液(各濃度2L)為洗脫齊U，流速約為6mL/min ;將50%乙醇溶液洗脫得到的部位溶液溶劑回收，濃溶液冷凍干燥后，進(jìn)行稱(chēng)重并密 封保存，即為本發(fā)明的提取物。
全文摘要
本發(fā)明是一種具有自由基清除活性的藍(lán)莓葉提取物，是由藍(lán)莓葉用水煎煮、大孔樹(shù)脂富集、乙醇洗脫所得，50％乙醇洗脫部位在DPPH實(shí)驗(yàn)中可顯著清除自由基。
文檔編號(hào)A61P39/06GK103211852SQ20131017231
公開(kāi)日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年5月9日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月9日
發(fā)明者於紅, 賀善安, 王天壽, 張劍 申請(qǐng)人:南京紫玉藍(lán)莓科技有限公司