專利名稱：一種組合藥物在淋巴瘤的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物應用，具體地說，是關(guān)于一種組合藥物在淋巴瘤的應用。
背景技術(shù)：
T細胞白血病/淋巴瘤之產(chǎn)生，與一種反轉(zhuǎn)錄病毒HTLV-1之感染有關(guān)。臨床上患有成人T-細胞白血病/淋巴瘤的病患會出現(xiàn)淋巴腺腫大、肝脾腫大、皮膚病癥如紅斑、骨骼溶蝕性病癥、及高鈣血癥等癥狀。病患之周邊血液內(nèi)也可能會出與典型之細胞核呈花瓣狀之T-淋巴球。病患罹病后對感染之抵抗力會降低，因此容易得到伺機性病原菌之感染。此病預后甚差，無論以何種化療組合其緩解期均十分短暫，且大部分病人于診斷確立后十二個月內(nèi)死亡，平均存活期不到一年(急性期的病患約為五個月，而淋巴瘤型者約為十個月)。中國專利文獻CN:101732329A，公開了一種具有協(xié)同作用的治療T細胞淋巴瘤的組合藥物及其應用，但是關(guān)于治療淋巴瘤的西藥和中藥的組合是否能夠協(xié)同治療腫瘤的，是否能在治療腫瘤疾病中的應用，目前還未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種組合藥物在制備治療淋巴瘤疾病藥中的應用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:一種組合藥物在制備治療淋巴瘤疾病藥中的應用，所述的組合藥物由西藥和中藥藥物組成，所述的西藥是硼替佐咪，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成:苦參5-15份、玄參5-10份、丹皮10-20份，所述的淋巴瘤是T細胞淋巴瘤。所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成:苦參8-12份、玄參6-9份、丹皮12-18 份。所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成:苦參10份、玄參7份、丹皮15份。所述的硼替佐咪和中藥藥物比例為5-100nM:l-30mg/ml。所述的硼替佐咪和中藥藥物比例為25nM:20mg/ml。本發(fā)明優(yōu)點在于:通過使用本發(fā)明的組合藥物，發(fā)揮組合藥物的協(xié)同作用，可以協(xié)同抑制T淋巴瘤細胞生長增殖，協(xié)同誘導T淋巴瘤細胞凋亡。藥物組合在提高療效的同時下可大幅降低費用，降低副作用。使用本發(fā)明的組合藥物可以克服現(xiàn)有技術(shù)中單獨使用一種藥物引起耐藥的缺點。


圖1顯示流式細胞儀檢測JURKAT凋亡對照組的效果圖。圖2顯示單用西藥JURKAT凋亡的效果圖。圖3顯示單用中藥藥物JURKAT凋亡的效果圖。圖4顯示合用藥物JURKAT凋亡的效果圖。
圖5顯示流式細胞儀檢測HUT78凋亡對照組的效果圖。圖6顯示單用西藥HUT78凋亡的效果圖。圖7顯示單用中藥藥物HUT78凋亡的效果圖。圖8顯示合用藥物HUT78凋亡的效果圖。
具體實施例方式下面對本發(fā)明提供的具體實施方式
作詳細說明。實施例1 中藥藥物制備(一)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(2次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(2次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材5mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例2 中藥藥物制備(二)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(I次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(2次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材lmg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例3 中藥藥物制備(三)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(2次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(3次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材10mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例4 中藥藥物制備(四)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例5 中藥藥物制備(五)
取中藥苦參100g、玄參70g、丹皮150g置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(2次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(2次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材30mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例6 中藥藥物制備(六)
取中藥苦參50g、玄參100g、丹皮IOOg置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。 實施例7 中藥藥物制備(七)取中藥苦參150g、玄參50g、丹皮200g置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例8 中藥藥物制備(八)
取中藥苦參80g、玄參60g、丹皮180g置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例9 中藥藥物制備(九)
取中藥苦參120g、玄 參60g、丹皮120g置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例10 中藥藥物制備(十)
取中藥苦參150g、玄參100g、丹皮200g置煎煮容器內(nèi)，加入750 g的冷水浸泡lh，煮沸30 min，過濾(3次)。藥渣加入450 g水繼續(xù)煎煮，煮沸20 min，過濾(4次)。合并兩次濾液，于水浴上濃縮成相當于原生藥材20mg/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4°C冰箱備用。實施例11 藥效實驗
(一)試劑
硼替佐咪，苦參、玄參、丹皮，
(二)細胞培養(yǎng)
本研究應用了以下兩種細胞株:人T-細胞性淋巴瘤細胞株JURKAT和HUT78，細胞在5%C02-95%空氣，飽和濕度以及37° C的條件下，培養(yǎng)于RPM1-1640培養(yǎng)液中(Gibco/BRL)，并加入10%胎牛血清。在每次實驗中，細胞接種密度為3X IO5/ml。細胞的存活率采用臺盼蘭拒染實驗檢測。細胞形態(tài)學觀察采用瑞氏染色法。(三)MTT實驗
在96孔板中，用硼替佐咪終濃度選用O、5、10、25、50和IOOnM，中藥藥物(苦參、玄參和丹皮)組終濃度選用O、1、5、10、20和30mg/ml處理細胞。O劑量組用1640培養(yǎng)液代替。72小時后，向每孔中加入0.1 mg MTT，在37°C下孵育4小時后，在分光光度計570nm處測量標本吸光度值。(四)流式細胞儀檢測annexin-V和線粒體跨膜電位:
細胞凋亡用ApoAlert Annexin V-FITC Apoptosis kit(BD)進行分析。在檢測線粒體跨膜電位中，細胞用PBS洗后，在37°C下與10 mg/ml Rhl23孵育30分鐘，然后再用50 mg/ml PI染色。熒光強度用流式細胞儀進行測量。(五)免疫印跡分析:
用 200 ml Laemmli 裂解緩沖液(0.5 M Tris-HCl, pH 6.8，2mM EDTA, 10%glycerol, 2% SDS and 5% b-mercaptoethanol)裂解 5xl06 細胞。蛋白裂解物(20 mg)用于10%聚丙烯酰胺凝膠電泳，再轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上。硝酸纖維素膜在溶于TBS/0.05%Tween 20的5%脫脂牛奶中封閉，之后與一抗在室溫孵育2小時，與辣根過氧化物酶標記的二抗孵育I小時。免疫復合物用辣根過氧化物酶化學發(fā)光檢測試劑盒檢測。(六)核蛋白分離:
每IX IO7細胞與裂解緩沖液(10 mM HEPES, IOmMKCl, 1.5 mM MgCl2, 0.5 mM DTT,pH 7.9)洗后，重懸于提取緩沖液(20 mM HEPES, pH 7.9，420 mM NaCl, 0.5 mM DTT, 0.2mM EDTA and 25%甘油)中，冰上孵育20分鐘。12000Xg離心10分鐘后，上清即為核蛋白。(七)統(tǒng)計分析:
實驗結(jié)果用三次獨立實驗的平均值和標準差表示，用t檢驗來比較差異。P值小于0.05則認為具有統(tǒng)計學差異。所有的統(tǒng)計采用SAS8.2軟件。

(A)結(jié)果:
采用JURKAT，HUT78細胞進行培養(yǎng)，通過分析觀察硼替佐咪、中藥藥物組單獨及聯(lián)合應用對細胞生長增殖的影響。硼替佐咪(25nM)聯(lián)合中藥藥物(20mg/ml)應用48小時可顯著抑制JURKAT，HUT78細胞的增殖。用流式細胞儀檢測單用及合用藥后細胞的凋亡(Annexin V和PI雙染法)。JURKAT (細胞株I)經(jīng)硼替佐咪(25 nM)、中藥藥物(20mg/ml)及硼替佐咪(25 nM)聯(lián)合中藥藥物(20mg/ml)處理的48小時后，Annexin V陽性細胞分別為:對照組3.4%(見圖1);硼替佐咪組17.3% (見圖2);中藥藥物組7.3% (見圖3);硼替佐咪與中藥藥物合用組36.7% (見圖4)。在HUT78 (細胞株2):對照組3.0 % (見圖5);硼替佐咪組4.2 % (見圖6);中藥藥物組6.4% (見圖7);硼替佐咪與中藥藥物合用組32.7% (見圖8)。同時我們應用Berenbaum建立的等效應線圖法分析硼替佐咪與中藥藥物的聯(lián)合應用是協(xié)同、相加或拮抗。
權(quán)利要求
1.一種組合藥物在制備治療淋巴瘤疾病藥中的應用，所述的組合藥物由西藥和中藥藥物組成，其特征在于，所述的西藥是硼替佐咪，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成:苦參5-15份、玄參5-10份、丹皮10-20份，所述的淋巴瘤是T細胞淋巴瘤。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成:苦參8-12份、玄參6-9份、丹皮12-18份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成:苦參10份、玄參7份、丹皮15份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述的硼替佐咪和中藥藥物比例為5-100nM: 1-30 μ g/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述的硼替佐咪和中藥藥物比例為25nM:.20 μ g/mlο
全文摘要
本發(fā)明涉及一種組合藥物在制備治療淋巴瘤疾病藥中的應用，所述的組合藥物由西藥和中藥藥物組成，所述的西藥是硼替佐咪，所述的中藥藥物是由下列重量份的原料藥制成苦參5-15份、玄參5-10份、丹皮10-20份，所述的淋巴瘤是T細胞淋巴瘤。本發(fā)明優(yōu)點在于通過使用本發(fā)明的組合藥物，發(fā)揮組合藥物的協(xié)同作用，可以協(xié)同抑制T淋巴瘤細胞生長增殖，協(xié)同誘導T淋巴瘤細胞凋亡。藥物組合在提高療效的同時下可大幅降低費用，降低副作用。使用本發(fā)明的組合藥物可以克服現(xiàn)有技術(shù)中單獨使用一種藥物引起耐藥的缺點。
文檔編號A61K36/71GK103191406SQ20131012478
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月11日
發(fā)明者夏飛 申請人:太倉市勝舟生物技術(shù)有限公司