專利名稱：固公果根提取物在制備治療炎癥性腸病的藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物提取物的用途，特別涉及一種固公果根提取物在制備治療炎癥性腸病的藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
固公果根是#族民間用藥，為薔薇科植物固公果(Rose odorata Sweet var.gigantea(Coll.et Hems 1.) Rehd.et Wils)的根入藥。固公果根性平、味酸,具有潘腸止 寫的功效，常用于治療腹瀉、菌痢等疾病[1]。到目前為止尚沒有關(guān)于固公果根化學(xué)成分研究的詳盡文獻(xiàn)報道，只是通過分析1974年云南地方藥品標(biāo)準(zhǔn)(滇Q/WS269-1974)中關(guān)于固公果根藥材的資料[2]和目前國家藥品監(jiān)督管理局制定的腸舒片試行標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)于固公果根藥材的定性定量鑒別方法[3]確定固公果根中含有鞣質(zhì)和生物堿類化學(xué)成分。炎癥性腸病(inflammatoryboweldisease ；IBD)是一種慢性、復(fù)發(fā)性的腸道炎癥疾病。病理學(xué)檢測可見炎性細(xì)胞的浸潤和粘膜完整性被破壞M。在發(fā)達(dá)國家，IBD的發(fā)病率達(dá)到了 1/1000[5]。到目前為止，IBD的病因還沒有完全研究清楚，被認(rèn)為是基因，環(huán)境，微生物和機(jī)體免疫系統(tǒng)的相互作用造成的[6]。由于確切的病因不清，常規(guī)的治療策略主要是抗炎和非特異性的抑制免疫反應(yīng)，包括使用非留體類抗炎藥(5-氨基水楊酸)、皮質(zhì)激素和免疫抑制劑(6-巰基鏢吟)m。但是研究表明非留體類抗炎藥(5-氨基水楊酸)存在一定的副作用，如大劑量使用大劑量不良反應(yīng)有高熱、消化不良、腹瀉、轉(zhuǎn)氨酶升高、脂酶水平升高等，皮質(zhì)激素和免疫抑制劑存在長期使用的劑量依賴性。近年來，學(xué)者開始關(guān)注中醫(yī)藥治療炎癥性腸病，研究表明 中藥的療效穩(wěn)定，且具有綜合性雙向調(diào)節(jié)作用，既可調(diào)節(jié)免疫功能又能抵御病原微生物的侵襲，并可減輕或緩解癥狀等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明選取的固公果根是彝族傳統(tǒng)藥物，具有悠久的使用歷史，具有安全有效的特點(diǎn)。參考文獻(xiàn):[I]任潔，何廣新.苗藥-固公果阿江制劑-“腸康膠囊”的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J]，中國民族民間醫(yī)藥雜志，1998，31:41 42.
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供固公果根提取物在制備治療炎癥性腸病的藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下:固公果根提取物在制備治療炎癥性腸病的藥物的應(yīng)用。所述固公果根提取物的劑型優(yōu)選為硬膠囊劑、軟膠囊劑、散劑、顆粒劑、片劑、丸齊U、蜜膏劑、口服液、栓劑、酒劑或注射劑。固公果根提取物的制備方法，包括如下步驟:(I)采用下述方法之一種進(jìn)行提取:方法一:以質(zhì)量比為1:4 — 8的比例，將原料固公果根加入到pH為2-3的酸性水溶液中，在60 - 80°C浸泡提取6-8小時，提取2-3次，過80-120目篩，得提取液；方法二:以質(zhì)量比為1:4 一 8的比例，將原料固公果根加體積百分比濃度為10°/Γ60%的pH為2-3的乙醇酸性水溶液或體積百分比濃度為10°/Γ60%的pH為2_3的甲醇酸性水溶液中，在60 - 80°C浸泡提取6-8小時，提取2-3次，過80-120目篩，得提取液，在溫度30-50°C，真空度為0.06、.08MPa減壓濃縮至糖度2_10，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:1飛的比例分散至水中；(2)將所述步驟(I)獲得的的產(chǎn)物經(jīng)大孔樹脂吸附，用水及體積百分比濃度為30%飛0%的乙醇水溶液洗 脫，或水及體積百分比濃度為30%飛0%的甲醇水溶液洗脫，洗脫體積為2-5倍柱床體積，棄水洗脫液；收集醇洗脫液，洗脫液在溫度30-60°C，真空度為0.06、.0SMPa減壓濃縮，得糖度為1(Γ40的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位。所述酸為鹽酸、硫酸、冰醋酸、磷酸或甲酸。所述大孔樹脂的型號為ΑΒ-8型、ΗΡ20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、Χ-5型，NKA-1I 型、DlOl 型或 DA201 型。實驗證明:固公果根提取物具有治療炎癥性腸病的作用，且療效確切。挖掘出彝族藥材固公果根的新用途。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實施例1鞣質(zhì)含量測定方法儀器:島津1601分光光度計；HZQ_QX型電動振蕩機(jī)(東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司)標(biāo)準(zhǔn)品與試劑:沒食子酸對照品(含量98%);干酪素(化學(xué)純)；碳酸鈉；鎢酸鈉；鑰酸鈉；硫酸鋰(以上試劑均為分析純)。磷鑰鎢酸試劑的配制:取鎢酸鈉100g，鑰酸鈉25g，加水700mL使溶解，加鹽酸IOOmL,磷酸50mL，加熱回流10h，放冷，再加硫酸鋰150g，水50mL和溴0.2mL,煮沸除去殘留的溴(約15min),冷卻,加水稀釋至IOOOmL,濾過，即得。干酪素法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
對照品溶液的配制精密稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品0.050g，置于IOOmL棕色容量瓶中，加水溶解，定容，混勻后，精密吸取5.0mL置于IOOmL棕色容量瓶中，定容,混勻，備用(每mL含沒食子酸0.025mg)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取對照品溶液0.5mL、l.0mL,2.0mL,3.0mL,4.0mL,5.0mL 分別置于 25mL 棕色容量瓶中，各加入磷鑰鶴酸試液ImL,再分別加入水11.5mL、llmL、10mL、9mL、8mL、7mL,用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30min，以相應(yīng)試劑為空白，按照紫外一可見分光光度法(中國藥典2005年版二部附錄IV A)，在760nm的波長處測定吸光度，以濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
·
線性回歸方程為Y = 4.0662X — 0.0434 (R = 0.9997)鞣質(zhì)含量的測定總酚的測定:取固公果根提取液1.0mL，稀釋400倍后，精密量取2.0mL置于25mL棕色容量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“加入磷鑰鎢酸試液lmL”起，再分別加入水10mL，依法測定吸光度，代入線形回歸方程，計算，即得。不被吸附的多酚的測定:精密量取供試品溶液25mL，加至已盛有干酪素0.6g的IOOmL具塞錐形瓶中，密塞，置于30°C水浴中保溫Ih，時時振搖，取出，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2.0mL，置于25mL棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“加入磷鑰鎢酸試液lmL”起，再分別加入水10mL，依法測定吸光度，代入線形回歸方程，計算，即得。按下式計算鞣質(zhì)的含量:鞣質(zhì)含量=總酚量一不被吸附的多酚量實施例2固公果根中總?cè)坪繙y定方法試驗材料:無水乙醇、95%乙醇、冰乙酸、高氯酸、香草醛、濃硫酸等均為分析純試劑；熊果酸標(biāo)準(zhǔn)對照品·(中國藥品生物制品檢定所)；UV-1601紫外可見分光光度計(日本島津公司)。試驗方法:(I)熊果酸對照品最佳檢測波長的確定及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精確稱取烘至恒重的熊果酸對照品4.0mg,加無水乙醇溶解后定容至50mL,質(zhì)量濃度為0.08mg/mL。取一定量的熊果酸對照品溶液于IOmL的試管中，加入新配置的香草醛-5%冰醋酸0.2ml及高氯酸0.8ml60C時水浴加熱15min，冰水冷卻，加冰醋酸5ml，靜置，UV-1601型紫外分光光度計在200 700nm波長范圍內(nèi)掃描，顯示熊果酸在550nm處有最大的吸光度。然后分別精密吸取對照品溶液0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2mL按相同方法處理，在550nm處測定其吸光度，以吸光度(A)與熊果酸質(zhì)量求得回歸方程并繪制出熊果酸對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過線性回歸計算，得出回歸方程為:y=0.1015x+0.0065,線性相關(guān)系數(shù)r=0.9992，熊果酸質(zhì)量在0.016 0.096mg范圍內(nèi)與吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(2)提取物樣品溶液的配制和含量測定。稱取50mg固公果根提取物置于IOOmL容量瓶中，用95%乙醇溶解并定容至刻度。準(zhǔn)確移取1.0mL于25mL容量瓶中，95%乙醇定容，即為樣品待測液，然后準(zhǔn)確移取0.5mL待測液按(I)方法測定其吸光度，通過回歸方程求出吸光度對應(yīng)的三萜質(zhì)量，計算總?cè)坪俊?br> 實施例3—種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:(1)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量4倍的鹽酸水溶液(pH=2)，在60°C浸泡提取8小時，過濾，濾渣再加鹽酸水溶液，共提取3次，每次6小時，過80目篩，得提取液；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行大孔樹脂吸附，大孔樹脂的型號為AB-8型，分別用水洗脫3倍柱床體積、體積百分比濃度為30%的乙醇水溶液洗脫5倍柱床體積，棄水洗脫液，收集醇洗脫液，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度60°C，真空度為
0.06、.0SMPa減壓濃縮，得糖度為20的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為61%，得率為91.1%，總?cè)坪繛?2.1%,得率為70.1%。實施例4一種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:(I)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量8倍的冰醋酸水溶液(pH=3)，在80°C提取2次，每次6小時，過120目篩，得提取液；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行大孔樹脂吸附，大孔樹脂的型號為HP20型，分別用水洗脫2倍柱床體積、體積百分比濃度為60%的乙醇水溶液洗脫2倍柱床體積，棄水洗脫液，收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度30°C，真空度為0.06、.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為66%，得率為90，1% ;總?cè)坪繛?3.5%，得率為72.3%。實施例5一種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:(1)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量8倍的體積百分比濃度為60%的乙醇磷酸水溶液(pH=2.5)，在70°C提取3次，每次7小時，過80目篩，得提取液，在溫度40°C，真空度為0.06、.0SMPa減壓濃縮至糖度10，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:5的比例分散至水中；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行大孔樹脂HPD100型吸附，分別用水洗脫3倍柱床體積、再用體積百分比濃度為40%的乙醇水溶液梯度洗脫，棄水洗脫液，收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度40°C，真空度為0.06 0.08MPa減壓濃縮，得糖度為10的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為71%，得率為92% ;總?cè)坪繛?2.6%。得率為71.8%實施例6一種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:( I)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量4倍的體積百分比濃度的10%的乙醇硫酸水溶液(pH=2)，在80°C提取3次，每次6小時，過80目篩，得提取液，在溫度50°C，真空度為0.06、.0SMPa減壓濃縮至糖度2，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:1的比例分散至水中；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行大孔樹脂HPD100A型吸附，先用水洗脫4柱床體積，再用體積百分比濃度為50%的乙醇水溶液梯度洗脫3倍柱床體積，棄水洗脫液,收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度50°C，真空度為0.06 0.08MPa減壓濃縮，得糖度為30的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為62.4%，得率為91.4%，總?cè)坪繛?2.3%，得率為71.5%。實施例7一種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:(I)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量6倍的體積百分比濃度為30%的乙醇甲酸水溶液(pH=3)為提取溶劑，在70°C提取I次，每次7小時，過120目篩，得提取液，在溫度30°C，真空度為0.06、.0SMPa減壓濃縮至糖度4，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:4的比例分散至水中；；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行大孔樹脂HPD300型吸附，先用水洗脫3倍柱床體積、再用體積百分比濃度為30%的乙醇水溶液梯度洗脫，棄水洗脫液，收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度<60°C，真空度為0.06、.08MPa減壓濃縮，得糖度為30的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為60.4%%，得率為93.1%，總?cè)坪繛?2.1%，得率為72.9%o
實施例8一種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:(I)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量8倍的10%的甲醇鹽酸水溶液(pH=2)為提取溶劑，在80°C提取2次，每次6小時，過100目篩，得提取液，在溫度50°C，真空度為0.06、.0SMPa減壓濃縮至糖度2，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:1的比例分散至水中；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行大孔樹脂DlOl型吸附，用水洗脫2倍柱床體積，再用體積百分比濃度為60%的乙醇水溶液梯度洗脫3倍柱床體積，棄水洗脫液,收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度60°C，真空度為0.06、.08MPa減壓濃縮，得糖度為10的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為61.2%，得率為90.2%,總?cè)坪繛?br> 13.9%,得率為 70.8%o實施例9—種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成: (I)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量6倍的體積百分比濃度60%的甲醇冰醋酸水溶液(pH=2.5)為提取溶劑，在60°C提取3次，每次7小時，過100目篩，得提取液，在溫度30°C，真空度為0.06、.08MPa減壓濃縮至糖度5，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:2的比例分散至水中；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行大孔樹脂DlOl型吸附，先用水洗脫5倍柱床體積、再用體積百分比濃度為40%的乙醇水溶液梯度洗脫2倍柱床體積，棄水洗脫液，收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度30°C，真空度為0.06 0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為69.4%，得率為91.5%，總?cè)坪繛?br> 12.8%o 得率為 70.8%o實施例10一種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:( I)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量4倍的體積百分比濃度為10%的甲醇水溶液為提取溶劑，在80°C提取2次，每次6小時，過100目篩，得提取液，在溫度40 V，真空度為0.06、.0SMPa減壓濃縮至糖度2，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:1的比例分散至水中；；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行DlOl型大孔樹脂吸附吸附，用水洗脫2倍柱床體積、再用體積百分比濃度為60%的甲醇水溶液梯度洗脫2倍柱床體積，棄水洗脫液，收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度< 60°C，真空度為0.06、.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為62.1%，得率為93.2%，總?cè)坪繛?3.8%，得率為70.1%。實施例11—種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:(I)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量7倍的體積百分比濃度為50%的甲醇硫酸水溶液(pH=3)為提取溶劑，在70°C提取3次，每次7小時，過80目篩，得提取液，在溫度40°C，真空度為0.06、.0SMPa減壓濃縮至糖度4，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:4的比例分散至 水中；；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行DA-201型大孔樹脂吸附，先用水洗脫4倍柱床體積、再用體積百分比濃度為30%的甲醇水溶液梯度洗脫5倍柱床體積，棄水洗脫液，收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度< 60°C，真空度為0.06、.08MPa減壓濃縮，得糖度為20的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為61.5%，得率為91.1%，總?cè)坪繛?2.4%，得率為71.3%。。實施例12一種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:(I)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量5倍的甲酸水(pH=2)溶液，在50°C提取3次，每次8小時，過120目篩，得提取液；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行X-5型大孔樹脂吸附，用水洗脫2倍柱床體積，再用體積百分比濃度為40%的甲醇水溶液梯度洗脫4倍柱床體積，棄水洗脫液，收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度< 60°C，真空度為0.06 0.08MPa減壓濃縮，得糖度為40的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為67.2%，得率為90.7%，總?cè)坪繛?2.6%，得率為70，4%。實施例13一種固公果根提取物的制備方法，由如下步驟組成:(I)以固公果根500g為原料，加入所述原料質(zhì)量6倍的體積百分比濃度為60%的乙醇冰醋酸水溶液(pH=2)為提取溶劑，在80°C提取3次，每次7小時，過100目篩，得提取液，在溫度< 60°C，真空度為0.06、.08MPa減壓濃縮至糖度30，得到提取物，將所述提取物以質(zhì)量比為1:4的比例分散至水中；；(2)將所述步驟(I)獲得的產(chǎn)物進(jìn)行NKA-1I型大孔樹脂吸附，先用水洗脫4倍柱床體積、再用體積百分比濃度為45%的乙醇水溶液梯度洗脫3倍柱床體積，棄水洗脫液，收集醇洗脫液，洗脫液通過薄層層析方法并結(jié)合分析型HPLC檢測，收集富含鞣質(zhì)和三萜的組分，將其合并，在溫度< 60°C，真空度為0.06、.08MPa減壓濃縮，得糖度為10的濃縮物，干燥，得到固公果根中治療腹瀉的有效部位，其中鞣質(zhì)含量為64.2%，得率為90.7%，總?cè)坪繛?2.4%，得率為71.3%。實施例14固公果根提取物抗炎藥效試驗(I) 二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗[4]:小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分5組，灌服固公果根植物提取物(實施例3制備)溶液、阿司匹林水溶液或等容水后lh，于小鼠右耳用微量注射器滴二甲苯0.02ml并令二甲苯浸滿鼠耳兩面，40min后小鼠拉頸處死，沿鼠耳根部基線用眼科剪剪下兩耳，稱取左、右耳片重量，以右耳與左耳重量差的mg數(shù)表示炎癥反應(yīng)強(qiáng)度，結(jié)果見表I。測試結(jié)果顯示固公果根提取物能夠顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，且呈現(xiàn)量效依賴關(guān)系，具有抗炎作用。表I固公果根提取物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響
權(quán)利要求
1.固公果根提取物在制備治療炎癥性腸病的藥物的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是所述固公果根提取物的劑型為硬膠囊劑、軟膠囊劑、散劑、顆粒 劑、片劑、丸劑、蜜膏劑、口服液、栓劑、酒劑或注射劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了固公果根提取物在制備治療炎癥性腸病的藥物的應(yīng)用。實驗證明固公果根提取物具有治療炎癥性腸病的作用，且療效確切。本發(fā)明挖掘出彝族藥材固公果根的新用途。
文檔編號A61K125/00GK103110712SQ20131005065
公開日2013年5月22日 申請日期2013年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月8日
發(fā)明者劉岱琳, 趙艷敏, 延慧君, 高穎, 張靜澤, 陳虹 申請人:中國人民武裝警察部隊后勤學(xué)院