專利名稱：一種螺旋藻多糖滴眼液的制作方法
一種螺旋藻多糖滴眼液技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于滴眼液技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種螺旋藻多糖滴眼液，即一種預(yù)防和治療細(xì)菌性角膜炎的滴眼液。
背景技術(shù)：
細(xì)菌是角膜炎的最常見病因，細(xì)菌性角膜炎是主要的致盲眼病之一，治療不當(dāng)可以導(dǎo)致永久性視力下降，甚至失明。目前針對角膜炎的治療最有效的途徑就是局部應(yīng)用抗生素。但是抗生素容易產(chǎn)生耐藥性，因此，尋找安全有效的具有抗菌活性的生物活性物質(zhì)對于預(yù)防和治療眼細(xì)菌性角膜炎相關(guān)疾病是非常必要的，近年來開始受到各國學(xué)者的重視， 但是尚沒有相關(guān)的應(yīng)用報導(dǎo)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種螺旋藻多糖滴眼液，以彌補(bǔ)現(xiàn)有細(xì)菌性角膜炎治療及預(yù)防藥物的缺乏。
本發(fā)明的滴眼液，為包含有效活性濃度的螺旋藻多糖的眼用緩沖液。
其中的螺旋藻多糖濃度優(yōu)選為100 μ g/ml ；
所述緩沖液為眼用滴眼液中常用溶液體系，例如人工淚液或氯化鈉滴眼液。
本發(fā)明所用到的螺旋藻多糖,是以鈍頂螺旋藻(Spirulina platensis)藻粉為原材料，提取制備而得。
本發(fā)明的螺旋藻多糖滴眼液應(yīng)用于眼部角膜炎疾病的治療。
本發(fā)明首次將螺旋藻多糖制成滴眼液應(yīng)用到防治眼細(xì)菌性角膜炎疾病。本發(fā)明的滴眼液制備方法簡單，便于實施，對于眼新生血管的防治效果顯著，具有廣闊的應(yīng)用開發(fā)前旦-5^ O具體實施方式
螺旋藻是最古老的多 細(xì)胞原始海藻。據(jù)報導(dǎo)螺旋藻具有顯著的降血糖、降血壓、降血脂等功效。螺旋藻化學(xué)成分中僅占2-3%的螺旋藻多糖，具有廣泛而復(fù)雜的生物活性，在抗腫瘤及抗輻射上存在有藥用療效，是一種安全有效的生物活性物質(zhì)。但目前螺旋藻僅用于保健品及食品當(dāng)中，申請人長期研究發(fā)現(xiàn)螺旋藻多糖不但能夠有效的抑制細(xì)菌的生長， 還可以控制眼部新生血管的生成，從而促成了本發(fā)明。
本發(fā)明所用的螺旋藻多糖(Spriulina polysacchrides),又稱為藻多糖,從螺旋藻提取出的生理活性多糖，無毒；為無色的或淡黃色粉末。溶于水，不溶于醇和油脂。本發(fā)明所用的滴眼液可選用任一款醫(yī)藥食品領(lǐng)域應(yīng)用的螺旋藻多糖商品化產(chǎn)品。
本發(fā)明將螺旋藻多糖溶于眼用緩沖液中完成產(chǎn)品的制備，其中眼用緩沖液可以為人工淚液，人工淚液就是模仿人體淚液的成分做出的一種替代品。它是一種眼藥水，可以起到滋潤眼睛的作用。本發(fā)明可選用任一款的人工淚液。
作為一個具體的實施，本發(fā)明所用到的螺旋藻多糖以鈍頂螺旋藻藻粉(山東富施特生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))為原材料，提取制備了螺旋藻多糖，然后用人工淚液稀釋成一種以生物活性物質(zhì)為主要成分的眼用滴眼液，用于治療細(xì)菌性角膜炎。其中的螺旋藻多糖濃度可以根據(jù)病人的情況選擇，優(yōu)選為100yg/ml。
具體的制備方法如下
步驟一、螺旋藻多糖的制備以如下工藝制備本發(fā)明所需的螺旋藻多糖。
(I)取鈍頂螺旋藻干粉加95%乙醇，浸泡過夜；
(2)離心37°C烘干，按質(zhì)量比I 12比例加雙蒸水；
(3)用 NaOH 調(diào) pH 至 10. 0，80°C水浴 4 6h ；
(4)離心，將沉淀中加質(zhì)量體積比為5%三氯乙酸沉淀，4°C過夜；
(5)離心，取上清液，再加質(zhì)量體積比為5%三氯乙酸沉淀3h ；
(6)離心，取上清液，加5倍體積乙醇沉淀，4°C過夜；
(7)以純丙酮清洗沉淀2次，真空冷凍干燥；
(8)將上述沉淀物置于_20°C保存3日以上，以確保丙酮完全揮發(fā)；
(9)加入生理鹽水充分溶解沉淀，離心，去除未能溶解的物質(zhì)；
(10)使用0.22 ym濾膜過濾除菌，得到了無菌的螺旋藻多糖溶液。
步驟二、將上述的螺旋藻多糖溶液使用人工淚液稀釋到螺旋藻多糖含量100 μ g/ ml,即得到本發(fā)明的螺旋藻多糖滴眼液。本發(fā)明所用的人工淚液為不加防腐劑的人工淚液如O. 1%透明質(zhì)酸鈉和羥丙基甲基纖維素。
上述人工淚液可以用氯化鈉滴眼液來替代(如替若復(fù)方氯化鈉滴眼液)。
下面對于本發(fā)明制備的滴眼液的效果進(jìn)行描述
首先建立兔細(xì)菌性角膜炎動物模型模型動物選用2. 5-3kg新西蘭大白兔，兔全身麻醉，鹽酸丙美卡因滴眼液點眼，用基質(zhì)注射針頭在角膜中央進(jìn)行基質(zhì)注射5μ I濃度為 2X104CFU/ml的菌液(即100個菌)，造成兔角膜細(xì)菌性角膜炎感染。
對上述建立的兔細(xì)菌性·角膜炎動物模型，分為3組，每組12只動物，于角膜基質(zhì)注射菌液8小時后，開始點眼給藥，分別給予本發(fā)明制備的螺旋藻多糖滴眼液、左氧氟沙星和生理鹽水。滴眼方案如下先是15min/次，連續(xù)滴眼5次，然后30min/次，連續(xù)滴眼14次， 于最后一次滴眼結(jié)束后的Ih觀察兔實驗眼并按如下評分標(biāo)準(zhǔn)給分，統(tǒng)計學(xué)分析。
病變評分標(biāo)準(zhǔn)見下表
裂隙燈評分標(biāo)準(zhǔn)
權(quán)利要求
1.一種滴眼液，其特征在于，所述的滴眼液為包含有效活性濃度的螺旋藻多糖的眼用緩沖液。
2.如權(quán)利要求1所述的滴眼液，其特征在于所述的螺旋藻多糖在滴眼液中的濃度為100 μ g/mlο
3.如權(quán)利要求1或2所述的滴眼液，其特征在于，所述的螺旋藻多糖的制備包括如下步驟(1)取鈍頂螺旋藻干粉加95%乙醇，浸泡過夜；(2)離心37°C烘干，按質(zhì)量比1:12比例加雙蒸水；(3 )用 NaOH 調(diào) pH 至 10. O，80 V 水浴 4 6h ；(4)離心，將沉淀中加質(zhì)量體積比為5%三氯乙酸沉淀，4°C過夜；(5)離心，取上清液，再加質(zhì)量體積比為5%三氯乙酸沉淀3h；(6)離心，取上清液，加5倍體積乙醇沉淀，4°C過夜；(7)以純丙酮清洗沉淀2次，真空冷凍干燥；(8)將上述沉淀物置于_20°C保存3日以上，以確保丙酮完全揮發(fā)；(9)加入生理鹽水充分溶解沉淀，離心，去除未能溶解的物質(zhì)；(10)使用O.22 μ m濾膜過濾除菌，得到了無菌的螺旋藻多糖溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的滴眼液，其特征在于所述的眼用緩沖液為人工淚液或氯化鈉滴眼液。
5.權(quán)利要求1所述的滴眼液應(yīng)用于眼部角膜炎疾病的治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種螺旋藻多糖滴眼液，為包含有效活性濃度的螺旋藻多糖的眼用緩沖液。本發(fā)明首次將螺旋藻多糖制成滴眼液應(yīng)用到防治眼細(xì)菌性角膜炎疾病。本發(fā)明的滴眼液制備方法簡單，便于實施，對于眼角膜炎的防治效果顯著，具有廣闊的應(yīng)用開發(fā)前景。
文檔編號A61K31/715GK103040735SQ20121059454
公開日2013年4月17日 申請日期2012年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月31日
發(fā)明者楊玲玲, 吳祥根, 王瑤, 周慶軍 申請人:山東省眼科研究所