專利名稱：一種防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵中草藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種利用益生菌發(fā)酵植物中草藥制成的具有防治豬傳染病的高效活性保健液的制備方法。
背景技術(shù)：
目前飼料市場上的飼料添加劑種類繁多，雖然對豬能催肥、增重，但這些添加劑中一般都含有化學(xué)藥品或激素類的藥物，同樣影·響豬肉的質(zhì)量和藥物殘留造成食品的污染，而且上述飼料添加劑均不能防治豬的圓環(huán)病毒II型、豬瘟、豬肺疫及變異混感高熱病、皮膚發(fā)紅、耳朵變藍(lán)、后肢無力、行走困難、糞便干燥、嘔吐、咳嗽、氣喘、呼吸困難、免疫力低下等疾病，飼養(yǎng)過程仍需定時注射各種疫苗，不能從根本上解決豬肉污染問題。而中藥可以抗豬傳染病已被臨床和實驗所證實，能抗豬傳染病毒的中草藥多屬于解表藥和清熱藥。中草藥可以通過發(fā)汗、解熱、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳祛痰平喘、抗炎、抗過敏、抗菌、抗病毒及促進(jìn)機(jī)體免疫功能(解表藥)和抗病原微生物、抗細(xì)菌毒素、解熱抗炎、促進(jìn)機(jī)體免疫功能及抗血凝、抗DIC、改善血液流變性、保肝利膽(清熱藥)等藥理作用達(dá)到防治豬傳染病的目的?，F(xiàn)有防治禽流感的專利基本上都是將中草藥或直接加入飼料中或進(jìn)行煎取提取，但都存在有效成份利用率低，添加量高等缺點。將中國傳統(tǒng)的中醫(yī)藥配方與生物技術(shù)相結(jié)合，直接利用益生菌群發(fā)酵中草藥，能破壞中草藥的細(xì)胞壁，大大提高中草藥的有效成份的利用率，并在發(fā)酵過程中產(chǎn)生多種促生長因子與新的活性物質(zhì)，能夠防治豬傳染病，有效改善肉質(zhì)，提高抗病力，增強(qiáng)免疫力改善豬的腸道群菌的功效，并具有易于使用，中草藥用量少，活菌含量高以及具有無殘留、無耐藥性等優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供具有防治豬傳染病效果的中草藥活性發(fā)酵保健液的一種制備方法。本發(fā)明的另外一個目的提高中草藥的有效成份的利用率，減少中草藥的用量。本發(fā)明用于防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵保健液是在大量調(diào)查及研究的基礎(chǔ)上，根據(jù)產(chǎn)品的設(shè)計功用要求對180多種中草藥進(jìn)行篩選，依據(jù)傳統(tǒng)的中藥的君臣佐使、七情配伍、十八反、十九畏等理論，逐個篩選并對篩選出的中草藥有效成份、抑菌作用進(jìn)行提取、驗證，最終確定配方。再從400多種有益微生物中篩選出5種能夠共生共存，大大提高中草藥的有效成份的利用率，并在發(fā)酵過程中產(chǎn)生多種促生長因子的益生菌。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種的防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液的制備方法，包括如下步驟
(I)、將從市場上購買的各種中草藥單獨粉碎成100目細(xì)粉；
⑵、在發(fā)酵罐中依次加入黃芪2-5份、大青葉2-5份、黃柏2-5份、金銀花4-6份、連翹4-6份、桑葉2-5份、杭菊花2-5份、桔梗2-5份、牛蒡子4-6份、竹葉1_3份、蘆根8-12份、甘草1-2份、糖蜜40-60份、鹽2_4份、水850份。浸泡2小時后，加熱至80度，保溫30分鐘，冷卻至40度；(3)、在步驟⑵制取的冷卻液加入神曲2-5份、薄荷1-2份、60億/毫升光合細(xì)菌5-15份、5億/毫升酵母菌5-15份、100億/毫升乳酸菌5-15份、10億/毫升雙歧桿菌5_15份、80億/毫升枯草芽孢桿菌5-15份；
⑷、30-35度靜止培養(yǎng)120-150小時，檢測其pH低于3. 8，活菌含量達(dá)到IO8個/毫升，即可結(jié)束發(fā)酵；
(5)、放出菌液，包裝成品。在步驟⑶中的光合細(xì)菌、酵母菌、乳酸菌、雙歧桿菌、枯草芽孢桿菌的生產(chǎn)可采用現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供以下方法。①、乳酸菌液體菌種的制備
取出菌種保藏管，用MRS固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37度厭氧培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種50毫升MRS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37度厭氧培養(yǎng)24小時。種子采用5% 的接種量，接種至IOL大三角瓶中，37度厭氧培養(yǎng)20-28小時，檢測其菌液濃度，菌含量超過100億/毫升，即可作為乳酸菌液體菌種接種。其中所述的MRS培養(yǎng)基蛋白胨10g/L，酵母提取物5 g/L，牛肉膏10 g/L，葡萄糖20 g/L，醋酸鈉5 g/L，檸檬酸二銨2 g/L，吐溫-80 I1111/1，硫酸鎂0.6 8/1，硫酸錳0.05 g/L，磷酸氫二鉀2 g/L，瓊脂20 g/L，碳酸鈣20 g/L,固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%。其中所述的乳酸菌種子培養(yǎng)基葡萄糖5%，蛋白胨I. 5%，牛肉膏O. 75%，氯化鈉O. 1%，硫酸錳O. 001%,硫酸鎂O. 02%,醋酸鈉O. 05%,碳酸鈣5%，ρΗ6· O。各培養(yǎng)基滅菌的條件為0. 10-0. 15MPa，121°C滅菌30分鐘。②、酵母菌液體菌種的制備
取出菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30度培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種50毫升PDA培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中30度震蕩培養(yǎng)24小時。種子采用5%的接種量，接種至5L大三角瓶中，30度震蕩培養(yǎng)20-28小時，檢測其菌液濃度，菌含量超過5億/毫升，即可作為酵母菌液體菌種接種。其中所述的PDA培養(yǎng)基土豆200g，蔗糖20g，水lOOOmL，固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%。其中所述的酵母菌種子培養(yǎng)基葡萄糖10 g/L，酵母膏3 g/L，蛋白胨5 g/L，硫酸銨5 g/L，硫酸鎂O. 5 g/L。各培養(yǎng)基滅菌的條件為
O.10-0. 15MPa, 121°C滅菌 30 分鐘。③、枯草芽孢桿菌液體菌種的制備
取出菌種保藏管，用LB固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37度培養(yǎng)48小時。在平板下挑取單個菌落接種50毫升LB培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37度震蕩培養(yǎng)24小時。種子采用5%的接種量，接種至5L大三角瓶中，37度震蕩培養(yǎng)20-28小時，檢測其菌液濃度，芽孢含量超過80億/毫升，即可作為枯草芽孢桿菌液體菌種接種。其中所述LB培養(yǎng)基蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，水lOOOmL，pH7. 2，固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%。其中所述枯草芽孢桿菌液體菌種培養(yǎng)基葡萄糖10g/L，玉米粉8 g/L,豆柏粉25 g/L，硫酸鎂0.5 g/L，硫酸錳0.5 g/L,磷酸二氫鈉0. 5 g/L，磷酸氫二鈉2. 3 g/L，pH7. 2。各培養(yǎng)基滅菌的條件為0. 10-0. 15MPa，121°C滅菌30分鐘。④、光合細(xì)菌液體菌種的制備
取出菌種保藏管，用光合細(xì)菌固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，在光照培養(yǎng)箱中35度培養(yǎng)72小時。光照強(qiáng)度10001ex-60001ex。在平板下挑取單個菌落接種50毫升光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基中，在光照培養(yǎng)箱中35度厭氧培養(yǎng)120小時。種子采用10%的接種量，接種至5L大三角瓶，在光照培養(yǎng)箱中35度厭氧培養(yǎng)72-96小時，檢測其菌液濃度，菌含量超過60億/毫升，即可作為光合細(xì)菌液體菌種種子接種。其中所述光合細(xì)菌固體培養(yǎng)基磷酸二氫鉀lg，氯化鈣O. Ig,碳酸鈉3g，醋酸鈉lg，氯化鎂O. 5g，氯化銨lg，氯化鈉lg，瓊脂20g，pH7. 5，水lOOOmL。其中所述光合細(xì)菌液體培養(yǎng)基磷酸二氫鉀lg，氯化鈣O. lg，碳酸鈉3g，醋酸鈉lg，氯化鎂O. 5g，氯化銨lg，氯化鈉lg，pH7. 5，水lOOOmL。各培養(yǎng)基滅菌的條件為
O.10-0. 15MPa, 121°C滅菌 30 分鐘。⑤、雙歧桿菌菌種的制備 取出菌種保藏管，用雙歧桿菌固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，37度厭氧培養(yǎng)72小時。在平板下挑取單個菌落接種50毫升雙歧桿菌培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37度厭氧培養(yǎng)48小時。種子采用5%的接種量，接種至10L大三角瓶中，37度厭氧培養(yǎng)20-28小時，檢測其菌液濃度，菌含量超過10億/毫升，即可作為雙歧桿菌液體菌種接種。其中所述的雙歧桿菌培養(yǎng)基蛋白胨5. 0g/L，酵母提取物5 8/1，牛肉膏5.0 8/1，胰蛋白胨10.(^/1，葡萄糖10.0 g/L，醋酸鈉5. O g/L，檸檬酸二銨2.0 g/L，吐溫-80 1.0 ml/L，硫酸鎂0. I g/L，硫酸鋅0.25g/L，磷酸氫二鉀2 g/L,固體培養(yǎng)基中加入瓊脂2%。培養(yǎng)基滅菌的條件為0. 10-0. 15MPa，121°C滅菌30分鐘。預(yù)防豬流感的使用方法為添加在日常豬飼料中攪拌均勻，添加比例控制在
0.5-1% ;配合飲水添加0. 2-0. 5%，效果更佳。治療豬流感的使用方法直接灌服，使用量為小豬10-20毫升每日，中豬30-50毫升每日，大豬50-80毫升每日。本發(fā)明所述的防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液的制備方法具有以下優(yōu)點
(I)、益生菌發(fā)酵中草藥，中草藥的有效成份能完整提取出來，同時這些有效物質(zhì)能夠在發(fā)酵過程中大大增強(qiáng)其活性及功效，減少了中草藥的使用量；
⑵、益生菌發(fā)酵中草藥的過程中，以中草藥為培養(yǎng)基，會合成一些新的中草藥官能團(tuán)活性因子以及促生長因子，以增強(qiáng)其治病，防病的效果；
⑶、益生菌發(fā)酵中草藥過程中，還保留了大量活的益生菌、菌體分泌物及菌體自溶物，這些物質(zhì)本身就具有增強(qiáng)豬的抵抗力與免疫力。本發(fā)明的優(yōu)異效果是能有效預(yù)防豬呼吸道病、傳染性胸膜肺炎、豬病毒性混感、豬高熱病、豬瘟等傳染病及其并發(fā)癥，而且有很好的促生長的效果。本發(fā)明的技術(shù)方案通過多年的微生態(tài)研究以及養(yǎng)豬經(jīng)驗反復(fù)試驗而成的，符合傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)的理論。本發(fā)明的中草藥活性發(fā)酵保健液中的中草藥的有效成份能完整提取出來，同時這些有效物能夠在發(fā)酵過程中大大增強(qiáng)其活性及功效，含有發(fā)酵中草藥過程中產(chǎn)生新的中草藥官能團(tuán)活性因子、多種促生長因子與益生菌，對豬的生長發(fā)育，能夠有效改善肉質(zhì)，提高抗病力，增強(qiáng)免疫力的功效，并具有易于使用，中草藥用量少，活菌含量高以及具有無殘留、無耐藥性等優(yōu)點。
具體實施例方式以下是本發(fā)明的一些實施個例，本發(fā)明的實際使用不局限于實施例。實施例1，用于治療豬傳染病的益生菌中草藥活性保健液的制備 一種的治療豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液的制備方法，包括如下步驟
(I)、將從市場上購買的各種中草藥單獨粉碎成100目細(xì)粉；⑵、在I噸發(fā)酵罐中依次加入黃芪3份、大青葉3份、黃柏3份、金銀花5份、連翹5份、桑葉3份、杭菊花3份、桔梗3份、牛蒡子5份、竹葉2份、蘆根10份、甘草I份、糖蜜50份、鹽2份、水850份。浸泡2小時后，加熱至80度，保溫30分鐘，冷卻至40度；
⑶、在步驟⑵制取的冷卻液加入神曲2份、薄荷I份、60億/毫升光合細(xì)菌10份、5億/暈升酵母菌10份、100億/暈升乳酸菌10份、10億/暈升雙歧桿菌10份、80億/暈升枯草芽孢桿菌10份；
⑷、30-35度靜止培養(yǎng)120-150小時，檢測其pH低于3. 8，活菌含量達(dá)到IO8個/毫升，即可結(jié)束發(fā)酵。使用方法治療豬流感的使用方法直接灌服，使用量為小豬15毫升每日，，中豬40毫升每日，大豬80毫升每日，連服三日。根據(jù)實驗，在30頭發(fā)病小豬，三日治愈25頭，五日治愈29頭；在23頭發(fā)病中大豬身上，飼喂一日后效果非常明顯，三日全治愈。實例2，用于預(yù)防豬傳染病的益生菌中草藥活性保健液的制備 預(yù)防豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液的制備方法，包括如下步驟
(1)、將從市場上購買的各種中草藥單獨粉碎成100目細(xì)粉；
⑵、在I噸發(fā)酵罐中依次加入黃芪2份、大青葉2份、黃柏4份、金銀花6份、連翹6份、桑葉2份、杭菊花3份、桔梗3份、牛蒡子5份、竹葉I份、蘆根8份、甘草I份、糖蜜50份、鹽2份、水850份。浸泡2小時后，加熱至80度，保溫30分鐘，冷卻至40度；
⑶、在步驟⑵制取的冷卻液加入神曲3份、薄荷2份、60億/毫升光合細(xì)菌10份、5億/暈升酵母菌10份、100億/暈升乳酸菌10份、10億/暈升雙歧桿菌10份、80億/暈升枯草芽孢桿菌10份；
⑷、30-35度靜止培養(yǎng)120-150小時，檢測其pH低于3. 8，活菌含量達(dá)到IO8個/毫升，即可結(jié)束發(fā)酵；
(5)、放出菌液，包裝成品。預(yù)防豬流感的使用方法為添加在日常豬飼料中攪拌均勻，添加比例控制在
O.5-1% ;配合飲水添加O. 2-0. 5%，效果更佳。根據(jù)實驗，在600頭30日齡的豬飼料中添加100天，試驗組比對照組每天平均增重55克(與對照組中正常豬對比)，在傳染病流行期間，試驗組無一頭豬發(fā)病，保護(hù)率100%，對照組發(fā)病53頭，發(fā)病率為17. 67%。
權(quán)利要求
1.一種防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液的制備方法，其特征在由以下重量份的原料組成黃芪2-5份、大青葉2-5份、黃柏2-5份、金銀花4-6份、連翹4_6份、桑葉2_5份、杭菊花2-5份、桔梗2-5份、牛蒡子4-6份、竹葉1-3份、蘆根8_12份、薄荷1_2份、甘草1-2份、神曲2-5份、糖蜜40-60份、鹽2-4份、水850份、5億/毫升酵母菌5_15份，100億/毫升乳酸菌5-15份，60億/毫升光合細(xì)菌5-15份，10億/毫升雙歧桿菌5_15份，80億/毫升芽孢桿菌5-15份；將上述中草藥經(jīng)粉碎、浸泡、加熱保溫、發(fā)酵而制得防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 (I)、將從市場上購買的各種中草藥單獨粉碎成100目細(xì)粉； ⑵、在發(fā)酵罐中依次加入黃芪2-5份、大青葉2-5份、黃柏2-5份、金銀花4-6份、連翹4-6份、桑葉2-5份、杭菊花2-5份、桔梗2-5份、牛蒡子4-6份、竹葉1_3份、蘆根8-12份、甘草1-2份、糖蜜40-60份、鹽2_4份、水850份；浸泡2小時后，加熱至80度，保溫30分鐘，冷卻至40度； (3)、在步驟⑵制取的冷卻液加入神曲2-5份、薄荷1-2份、60億/毫升光合細(xì)菌5-15份、5億/毫升酵母菌5-15份、100億/毫升乳酸菌5-15份、10億/毫升雙歧桿菌5_15份、80億/毫升枯草芽孢桿菌5-15份； ⑷、30-35度靜止培養(yǎng)120-150小時，檢測其pH低于3. 8，活菌含量達(dá)到IO8個/毫升，即可結(jié)束發(fā)酵； (5)、放出菌液，包裝成品。
3.一種防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液的制備方法，其特征在預(yù)防豬流感的使用方法為添加在日常豬飼料中攪拌均勻，添加比例控制在O. 5-1% ;配合飲水添加O. 2-0. 5%，效果更佳。
4.一種防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液的制備方法，其特征在治療豬流感的使用方法直接灌服，使用量為小豬10-20暈升每日，中豬30-50暈升每日，大豬50-80暈升每日。
全文摘要
本發(fā)明提供了以有益菌群發(fā)酵中草藥作為飼料添加劑來防治豬傳染病的一種方法。所述中草藥包含黃芪、大青葉、黃柏、金銀花、連翹、桑葉、杭菊花、桔梗、牛蒡子、竹葉、蘆根、薄荷、甘草、神曲等。上述中草藥經(jīng)粉碎、浸泡、加熱保溫、利用益生菌發(fā)酵而制得防治豬傳染病的中草藥活性發(fā)酵液，在發(fā)酵過程中使用益生菌種主要為酵母菌，乳酸菌，雙歧桿菌，光合細(xì)菌，芽孢桿菌等。本發(fā)明的中草藥活性發(fā)酵液具有防治豬傳染病兼具促生長、增強(qiáng)免疫力、改變豬腸道菌群的功效，并具有易于使用，中草藥用量少，活菌含量高以及具有無殘留、無耐藥性等優(yōu)點。
文檔編號A61K36/899GK102920946SQ20121049444
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月28日
發(fā)明者蔣常德, 胡艷暉, 蔣常銀 申請人:蔣常德