專利名稱：一種含茶多酚提取物的乳膏及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種皮膚屏障保護劑，特別涉及一種含茶多酚提取物的乳膏及制備方法，以及在制備皮膚屏障保護劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
皮膚屏障對維持人體正常生理功能具有重要意義，其結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)主要是角質(zhì)層以及表皮脂質(zhì)，天然保濕因子等。皮膚屏障的主要功能是防止水分丟失和外界環(huán)境侵害，其中角質(zhì)層含水量是皮膚屏障保持完整的關(guān)鍵。生理狀況下角質(zhì)層含水量約占表皮的20-35%，如果含水量低于10%，就會發(fā)生干燥、脫屑，進而加速皮膚老化及皮膚病的發(fā)生。角質(zhì)層的皮膚屏障功能與表皮脂質(zhì)及天然保濕因子等有關(guān)。表皮的角質(zhì)形成細胞表面富含水通道蛋白(aquaporin, AQP),可以通透水和甘油到達角質(zhì)層，為表皮提供內(nèi)源性水分。皮膚中分布的水通道蛋白主要是AQP3，與皮膚水分含量有關(guān)。當(dāng)表皮屏障功能破壞時，角質(zhì)層不能有效保持水分，導(dǎo)致經(jīng)皮水分丟失增多。因此，如何保持角質(zhì)層的含水量，是皮膚屏障功能的關(guān)鍵所在。紫外線照射可以導(dǎo)致表皮中天然保濕因子減少，經(jīng)皮水分丟失增加，皮膚屏障功能下降，進一步發(fā)生皮膚光老化，表現(xiàn)為皮膚干燥脫屑、皺紋形成等現(xiàn)象。近年來研究證實水通道蛋白3(AQP3)主要表達于表皮基底層，體內(nèi)循環(huán)中的水分和甘油可以通過AQP3轉(zhuǎn)運至表皮，促進角質(zhì)層的水合作用，維持皮膚屏障功能。中波紫外線UVB照射可以導(dǎo)致角質(zhì)形成細胞AQP3表達下降。我們以往研究證實，茶多酚提取物中的EGCG對UVB所致的光老化具有保護作用，茶多酚可以上調(diào)人角質(zhì)形成細胞CaspaseH表達，對皮膚屏障可能具有保護作用。茶多酚是否可以調(diào)節(jié)UVB照射引起的AQP3表達變化，其具體信號傳導(dǎo)機制如何，目前尚未清楚。慢性濕疹臨床表現(xiàn)常為皮膚干燥、脫屑，嚴(yán)重者出現(xiàn)皸裂。其病理生理基礎(chǔ)是各種內(nèi)外因素破壞了皮膚的屏障功能，導(dǎo)致角質(zhì)層水份含量下降有關(guān)。Elias等提出皮膚屏障功能破壞對于濕疹不是單純的結(jié)果，可能是重要致病因素。水通道蛋白AQP3在維持皮膚正常屏障功能中具有重要作用。濕疹的外用藥物多為激素類藥物，長期應(yīng)用反而會導(dǎo)致皮膚的屏障功能顯著下降，不利于治療。所以濕疹的輔助治療藥物主要是減少皮膚水分丟失及對皮膚屏障具有保護作用的藥物。如何通過調(diào)節(jié)AQP3的表達促進皮膚屏障恢復(fù)，對濕疹具有輔助治療作用以及防治激素等藥物的副作用具有重要意義。綠茶多酚提取物中的EGCG具有抗氧化作用，可以抑制紫外線誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞凋亡，在防止紫外線光老化中發(fā)揮重要調(diào)控作用。目前尚無明確的可以通過調(diào)節(jié)AQP3的表達促進皮膚屏障恢復(fù)的藥物，而茶多酚既往研究多集中在抗氧化，抗腫瘤等的作用，對皮膚屏障修復(fù)未有深入研究。因此本發(fā)明即對茶多酚提取物EGCG對皮膚屏障是否具有修復(fù)作用進行探討。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種含茶多酚提取物的乳膏及其制備與在制備皮膚屏障保護劑中的應(yīng)用，所述乳膏可以促進水通道蛋白3的表達，促進皮膚屏障修復(fù)，從而實現(xiàn)保護皮膚的功用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種含茶多酚提取物的乳膏，所述每克乳膏由如下質(zhì)量配比的原料組成
茶多酚提取物1.0 3,0%
三乙醇胺0.2~C14%
111_酸5 ,(K 10.0%
單硬歷酸蓄油酸3.0 5.0%
白凡士林4.0-6.0%
甘油8.0 12.0%
液體 51115.0-20.0% 水余量(即補足至100%) 所述茶多酚提取物為含有表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的茶多酚提取物，推薦Sigma-Aldrich公司生產(chǎn)的茶多酌·提取物(polyphenon 60 from green tea,編號P1204)；所述的含茶多酚提取物的乳膏按如下方法制備取油相成份硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、白凡士林、液體石蠟置水浴中加熱至70 80°C ;取水相成份甘油、三乙醇胺加純化水溶解，加熱至70 80°C ;在油相與水相相同溫度時，將油相緩緩加入水相中，邊加邊攪拌，使其乳化，待溫度降至60°C以下時加入用適量純化水溶解的茶多酚提取物溶液(優(yōu)選每克茶多酚提取物加入IOml純化水)，繼續(xù)攪拌至冷凝，即得含茶多酚提取物的乳膏。進一步，優(yōu)選所述每克乳膏由如下質(zhì)量配比的原料組成茶多酚提取物I,O 3.0%
三乙醇胺0.2 0.3%
硬脂酸5.0 7.0%
單硬脂酸甘油 3.0-4.0%
白凡士林4.0 5.0%
It 油10.0-12.0%
液體石蠟17,0-20.0%
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7K余 ja所述茶多酚提取物為含有表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的茶多酚提取物。進一步，優(yōu)選所述每克乳膏由如下質(zhì)量配比的原料組成
茶多酚提取物丨.0%
三乙8 胺0.2% 硬脂酸5.0%
單硬脂酸廿油蘭4.0%
白凡:f:林4.0%
甘油12.0%
液體石蠟19.0%
水54.8% ο進一步，優(yōu)選所述每克乳膏由如下質(zhì)量配比的原料組成茶多酚提取物3.0%
二乙醇肢0.2%
硬脂酸5.0%
單硬脂酸甘油 4.0%
白凡士林4.0%
It 油12.0%
液體石蠟19.0%
水52,8%。進一步，本發(fā)明所述每克乳膏還含有占添加防腐劑后乳膏總重量O. 3^0. 5wt%的防腐劑，所述防腐劑為山梨酸、苯甲酸或苯氧乙醇，優(yōu)選山梨酸。本發(fā)明還涉及所述含茶多酚提取物的乳膏在制備皮膚屏障保護劑中的應(yīng)用。本發(fā)明所述甘油即丙三醇，相對密度1. 26362，熔點17. 8°C，沸點290°C ;所述液體石蠟密度(比重)0.86-0. 905 (25。。)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在本發(fā)明提供一種含茶多酚提取物的乳膏，不同濃度的含EGCG的茶多酚乳膏均可以增加皮膚的含水量，減少經(jīng)皮水分丟失，發(fā)揮保護皮膚屏障的作用。不同濃度的EGCG處理培養(yǎng)的角質(zhì)形成細 胞均可以上調(diào)UVB照射導(dǎo)致的AQP3表達下降，從而可以促進表皮水分和甘油的通透，在防止紫外線照射引起的皮膚干燥中可能發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。EGCG可以促進皮膚屏障修復(fù)，可以抑制UVB誘導(dǎo)的EGFR/ERK信號途徑激活，從而上調(diào)AQP3表達，在防護UVB引起的皮膚干燥等光老化現(xiàn)象中發(fā)揮重要作用，在臨床中每日外用I次涂抹皮膚，連續(xù)應(yīng)用2周，可輔助治療濕疹、銀屑病等皮膚病的干燥脫屑現(xiàn)象。


圖1 Western印跡檢測不同劑量UVB及不同濃度EGCG處理角質(zhì)形成細胞AQP3的蛋白表達1、正常對照組，2、10mJ/cm2UVB照射組，3、20mJ/cm2UVB照射組，4、30mJ/cm2UVB照射組，5、3011^/0112^^組，6、10 _7mol/L EGCG +30mJ/cm2UVB 組，7、l(T6mol/L EGCG +30mJ/Cm2UVB 組，8、l(T5mol/L EGCG +30mJ/cm2UVB 組；A 為 AQP3 (36000 道爾頓)，B 為 β -肌動蛋白(42000道爾頓)。具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此茶多酌·提取物及EGCG單體均購自Sigma-Aldrich公司(St. Louis, MO, USA)。實施例1單純基質(zhì)乳膏(質(zhì)量配比)三乙醇胺O. 2%硬脂酸5.0%單硬脂酸甘油酯4. 0%
白凡士林4. 0%甘油12. 0%液體石蠟19. 0%加水至100.0%。將單純基質(zhì)乳膏按照配方比，按如下方法制備取油相成份硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、白凡士林、液體石蠟置水浴中加熱至70 80°C ;取水相成份甘油、三乙醇胺加入純化水加熱至70 80°C溶解；在油相和水相溫度相同時,將油相緩緩加入水相中,邊加邊攪拌,使其乳化。實施例2含茶多酚提取物的乳膏，即皮膚屏障保護劑的制備lwt%茶多酚乳膏(質(zhì)量配比)茶多酚提取物1.0%三乙醇胺0.2%硬脂酸5.0%單硬脂酸甘油酯4. 0%白凡士林4. 0%甘油12. 0%`
液體石蠟I9· 0%加水至100.0%將含lwt%茶多酚提取物的乳膏根據(jù)配方比按如下方法制備取油相成份硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、白凡士林、液體石蠟置水浴中加熱至70 80°C ;取水相成份甘油、三乙醇胺加入純化水加熱至70 80°C溶解；于兩相溫度相同時,將油相緩緩加入水相中，邊加邊攪拌，使其乳化。待溫度降至60°C以下時加入用適量純化水溶解的茶多酚提取物溶液(優(yōu)選每克茶多酚提取物加入IOml純化水)，繼續(xù)攪拌至冷凝，即獲得含茶多酚提取物的乳膏。實施例3 3wt%茶多酚乳膏(質(zhì)量配比)茶多酚提取物3.0%三乙醇胺0.2%硬脂酸5.0%單硬脂酸甘油酯4. 0%白凡士林4. 0%甘油12. 0%液體石蠟19. 0%加水至100.0%。將含3wt%茶多酚提取物乳膏根據(jù)配方比按如下方法制備取油相成份硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、白凡士林、液體石蠟置水浴中加熱至70 80°C ;取水相成份甘油、三乙醇胺加入純化水加熱至70 80°C溶解；于兩相溫度相同時,將油相緩緩加入水相中，邊加邊攪拌，使其乳化。待溫度降至60°C以下時加入用適量純化水溶解的茶多酚提取物溶液(優(yōu)選每克茶多酚提取物加入IOml純化水)，繼續(xù)攪拌至冷凝，即獲得含茶多酚提取物的乳膏。實施例4將白凡士林配方量改為5. 0wt%，甘油配方量改為10. 0wt%，其它配方及制備方法與實施例2相同。實施例5將白凡士林配方量改為5. 0wt%，其它配方及制備方法與實施例2相同。實施例6將白凡士林配方量改為6. 0wt%，甘油配方量改為10. 0wt%，其它配方及制備方法與實施例2相同。實施例7將液體石蠟配方量改為16. 0wt%,白凡士林配方量改為5. 0wt%，其它配方及制備方法與實施例2相同。實施例8將液體石蠟配方量改為15. 0wt%,白凡士林配方量改為6. 0wt%，其它配方及制備方法與實施例2相同。實施例9將液體石蠟配方量改為20. O Wt %，白凡士林配方量改為5. O Wt %，其它配方及制備方法與實施例2相同。實施例10 將甘油配方量改為10. 0wt%，液體石蠟配方量改為20. 0wt%，其它配方及制備方法與實施例2相同。實施例11添加O. 3%的山梨酸，其它配方及制備方法與實施例2相同。實施例12添加O. 5%的山梨酸，其它配方及制備方法與實施例3相同。實施例13.不同濃度茶多酚提取物乳膏對健康人皮膚屏障功能的影響20名健康人，年齡20-30歲，男6例，女14例。簽署知情同意書。將雙小腿分為左上、右上、左下、右下4個區(qū)域，每個區(qū)域選取直徑5cm左右的圓形區(qū)域，分別外涂含3wt%茶多酚提取物乳膏(實施例3制備)，含1%茶多酚提取物乳膏(實施例2制備)，單純基質(zhì)乳膏(實施例1制備)，不涂乳膏的為空白對照。每日早晨外涂I次，在外涂藥膏2周后分別進行測量。皮膚含水量及經(jīng)皮水分丟失(Transepidermal water loss, TEWL)測定采用皮膚多功能測試儀(MPA9,德國Courage Khazaka electronic公司)，皮膚含水量檢測探頭CM825,皮膚TEWL檢測探頭TM300，在工作環(huán)境溫度為22-24°C，相對濕度為46% -55%的條件下測定。每個部位分別測3次，取平均值。20名健康人小腿外涂不同濃度茶多酚提取物乳膏2周后測定皮膚含水量，其中空白對照組皮膚含水量值為39. 38 ± 3. 56 g/m2/h，單純基質(zhì)組，Iwt%茶多酚提取物組，3wt%茶多酚提取物組與空白對照組相比皮膚含水量明顯增加，統(tǒng)計學(xué)分析差異均有顯著性(P〈0. 05) ;lwt%茶多酚提取物組，3被％茶多酚提取物組皮膚含水量與單純基質(zhì)組相比明顯增加，統(tǒng)計學(xué)分析差異均有顯著性(P〈0. 05) ;3被％茶多酚提取物組皮膚含水量與1被％茶多酚提取物組相比較無顯著差異(P>0. 05)。20名健康人小腿外涂不同濃度茶多酚提取物乳膏2周后測定TEWL值(經(jīng)皮水分丟失)，其中空白對照組TEWL值為13.04±2. 73 g/m2/h，單純基質(zhì)組，lwt%茶多酚提取物組，3wt%茶多酚提取物組與空白對照組相比TEWL明顯下降，統(tǒng)計學(xué)分析差異均有顯著性(P〈0. 05) ；lwt%茶多酚提取物組，3wt%茶多酚提取物組TEWL與單純基質(zhì)組相比明顯下降，統(tǒng)計學(xué)分析差異均有顯著性(P〈0.05) ;3被％茶多酚提取物組TEWL與1被％茶多酚提取物組相比較無顯著差異(P>0. 05)，結(jié)果見表I所示。表1:不同濃度茶多酚提取物乳膏對健康人皮膚屏障功能的影響(X 土SEM)
權(quán)利要求
1.一種含茶多酚提取物的乳膏，所述每克乳膏由如下質(zhì)量配比的原料組成 茶多酚提取物I,O 3.0% 三乙醇胺0.2 0,4% 硬脂酸5.0 10.0% 單硬脂酸廿油酯3.0 5.0% 白凡:t 林4.0~6.0% 甘油8.0 丨2.0% 液體 5蠟15.0~20,0% 水余量 所述茶多酚提取物為含有表沒食子兒茶素沒食子酸酯的茶多酚提取物； 所述的含茶多酚提取物的乳膏按如下方法制備取油相成份硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、白凡士林、液體石蠟置水浴中加熱至70 80°C ;取水相成份甘油、三乙醇胺加入純化水中加熱至70 80°C溶解；在油相與水相相同溫度時，將油相緩緩加入水相中，邊加邊攪拌，使其乳化，待溫度降至60°C以下時加入用適量純化水溶解的茶多酚提取物溶液，繼續(xù)攪拌至冷凝，即得含茶多酚提取物的乳膏。
2.如權(quán)利要求1所述含茶多酚提取物的乳膏，所述每克乳膏由如下質(zhì)量配比的原料組成 茶多酚提取物10 3.0% 二乙醇胺0.2 0,3% 硬脂酸5.0 7.0% 單硬脂酸甘油酷3.. 0—4,0% 白凡士林4.0-5.0% +11—油10.0 12.0%液體石蠟17.0 20.0% 水余量 所述茶多酚提取物為含有表沒食子兒茶素沒食子酸酯的茶多酚提取物。
3.如權(quán)利要求1所述含茶多酚提取物的乳膏，其特征在于所述每克乳膏由如下質(zhì)量配比的原料組成茶多酚提取物1.0% 二乙醇肢0.2% 硬脂酸5.0% 單硬脂酸甘油 4.0% 白凡士林4.0% It 油12.0% 液體石蠟19.0% 水54,8%。
4.如權(quán)利要求1所述含茶多酚提取物的乳膏，其特征在于所述每克乳膏由如下質(zhì)量配比的原料組成 茶多酚提取物3.0% 二乙醇胺0.2% 硬脂酸5.0% 單硬脂酸丨!*_蘭4.0% Cj凡十林4.0% 油12.0% 液體厶蠟丨9.0% 水52.8%。
5.如權(quán)利要求f4之一所述含茶多酚提取物的乳膏，其特征在于所述每克乳膏還含有0. 3 0. 5wt%的防腐劑。
6.如權(quán)利要求5所述含茶多酚提取物的乳膏，其特征在于所述防腐劑為山梨酸、苯甲酸或苯氧乙醇。
7.—種權(quán)利要求1所述含茶多酚提取物的乳膏在制備皮膚屏障保護劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含茶多酚提取物的乳膏及應(yīng)用，所述每克乳膏由如下質(zhì)量配比的原料組成茶多酚提取物1~3%、三乙醇胺0.2~0.4%、硬脂酸5.0~10.0% 、單甘酯3.0~5.0%、白凡士林4.0~6.0%、甘油8.0~12.0%、液體石蠟15.0~20.0%和水余量；本發(fā)明所述含茶多酚提取物的乳膏可以增加皮膚的含水量，減少經(jīng)皮水分丟失，發(fā)揮保護皮膚屏障的作用；在防護UVB引起的皮膚干燥等光老化現(xiàn)象中發(fā)揮重要作用，在臨床中可輔助治療濕疹、銀屑病等皮膚病的干燥脫屑現(xiàn)象。
文檔編號A61K8/37GK103040674SQ201210475979
公開日2013年4月17日 申請日期2012年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月20日
發(fā)明者宋秀祖, 許愛娥 申請人:杭州市第三人民醫(yī)院