專利名稱：一種中成藥在制備抑制bgc-823細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中成藥的新用途，尤其涉及雙虎清肝顆粒在制備抑制BGC-823細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
胃腺癌是胃癌的一種，是由胃腺體細(xì)胞惡變來的，所以叫做腺癌。胃腺癌的發(fā)生率占胃惡性腫瘤的95%，相對少見的是淋巴瘤(只能主要位于胃一類)和平滑肌肉瘤。.世界各地胃癌的發(fā)生率各不相同；例如，日本，智利和冰島發(fā)病率非常高。在美國，胃癌最常見于北方人，窮人和黑人，但其發(fā)病率已降低到約810萬，是引起癌腫死亡的第七位原因，然而，在日本，胃癌發(fā)病率已有降低，但仍是最常見的惡性腫瘤，它的發(fā)病率隨年齡增長而增加，75% 以上的患者年齡大于50歲。雙虎清肝顆粒是北京華神藥業(yè)股份有限公司的獨家產(chǎn)品，目前還沒有其抑制胃腺癌(BGC-823)細(xì)胞增殖的文獻(xiàn)報道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供雙虎清肝顆粒在制備抑制BGC-823細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。技術(shù)方案雙虎清肝顆粒在制備抑制BGC-823細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。雙虎清肝顆粒主要成分金銀花、虎杖、黃連、白花蛇舌草、蒲公英、丹參、野菊花、紫花地丁、法半夏、甘草、瓜萎、枳實，每袋裝12g，口服，開水沖服。一次1-2袋，一日2次，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制BGC-823細(xì)胞增殖。有益效果雙虎清肝顆粒抑制BGC-823細(xì)胞增殖，效果良好。
具體實施例方式雙虎清肝顆粒抑制BGC-823細(xì)胞增殖的實驗研究資料I實驗材料I. I實驗用細(xì)胞株胃腺癌(BGC-823)，來自本公司實驗室細(xì)胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。I. 2實驗藥物研究藥物雙虎清肝顆粒，北京華神藥業(yè)股份有限公司，批號20110613藥液儲液稱取IOOmg雙虎清肝顆粒內(nèi)容物，溶于5ml無水乙醇中，O. 2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°c存儲，同時O. 2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。I. 3實驗試劑DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419);NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No. 11810-033 Lot.No. 1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號2009/10);Penicillin G Sodium Salt (AMRESCO 公司批號2010242) ；Streptomycin Sulfate(AMRESCO公司批號2010382);無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號080310182)；MTT (Biosharp 批號0793) ;PBS (實驗室自配)；I. 4實驗器材萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號3111);超凈臺(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實驗設(shè)備公司型號DHG9123A);冰箱(西門子公司型號KG18V21TI);液氮罐(CBS型號2001);低速離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠型號ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE2實驗方法 I) BGC-823 細(xì)胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm 培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml O. 25%胰蛋白酶-O. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，IOOOrpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個/ml。2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50%_70%，加入雙虎清肝顆粒溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 O. 5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示細(xì)胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復(fù)3次。3統(tǒng)計處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗，數(shù)據(jù)以mean + S. D.表不。4實驗結(jié)果MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時，對BGC-823細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0. 01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。表I雙虎清肝顆粒對BGC-823細(xì)胞增殖抑制影響研究(X土 SD)
權(quán)利要求
1.一種中成藥在制備抑制BGC-823細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中成藥在制備抑制BGC-823細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，該中成藥為雙虎清肝顆粒，雙虎清肝顆粒主要成分烏靈菌粉，內(nèi)含腺苷、多糖、甾醇類及谷氨酸、Y-氨基丁酸、賴氨酸等19種氨基酸，還含有維生素(VitE、B1、B6、K1等)和微量元素(Zn、Fe、Ca等)等多種成份，補腎健腦，養(yǎng)心安神，適用于神經(jīng)衰弱的心腎不交證，癥見失眠，健忘，神疲乏力，腰膝酸軟，脈細(xì)或沉無力等，口服，一次3粒，一日3次，或遵醫(yī)囑，每粒裝0.33克，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制BGC-823細(xì)胞增殖。
文檔編號A61K36/8888GK102885949SQ201210355718
公開日2013年1月23日 申請日期2012年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月24日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:南京正亮醫(yī)藥科技有限公司