專利名稱：用于提高對ErbB 拮抗劑癌癥治療的有效應(yīng)答可能性的基因檢測試驗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對癌癥的治療，所述癌癥的特征在于腫瘤抗原(如ErbB受體，特別是HER2)的過度表達。更具體地，本發(fā)明涉及用ErbB拮抗劑，如抗-ErbB抗體，對癌癥易感者或癌癥患者進行更有效地治療，所述患者的腫瘤細胞經(jīng)過基因擴增試驗確定為過度表達ErbB0本發(fā)明還提供了用于此類治療的藥物包。
背景技術(shù)：
對遺傳和發(fā)育的技術(shù)和流行病學的進一步認識，使得有可能將遺傳異常與某些惡性疾病以及個體發(fā)生特定惡性疾病的危險性的評價聯(lián)系起來。然而，絕大多數(shù)現(xiàn)有用于評估組織中與個體發(fā)生惡性疾病相關(guān)或有這種傾向性的方法有著眾所周知的缺點。例如，需要使組織解集的方法，如Southern, Northern,或Western印跡分析,都由于惡性細胞與來自相同組織的正常或非-惡性細胞混合在一起，而精確性降低。此外，組織結(jié)構(gòu)的破壞導(dǎo)致無法將惡性細胞與遺傳異常的存在從形態(tài)學特異性的角度來進行聯(lián)系。這種情況在已知為異質(zhì)性的組織類型中尤其是個問題，如人的乳腺癌中，在任一個區(qū)域都可能存在大量非-惡性細胞。her2/neu基因編碼一種蛋白產(chǎn)物，常被稱為pl85HER2。天然pl85HER2蛋白是一種膜受體-樣的分子，它與表皮生長因子受體(EGFR)具有同源性。對人的乳腺癌中HER2的擴增和過度表達，在某些研究中與較短的無疾病間隔期和較短的總存活率有關(guān)(van deVijer 等 New Eng. J. Med. 317:1239(1988);Walker 等 Br. J. Cancer 60:426(1989);Tandon等 J.Clin. Invest.7:1120(1989);Wright 等 Cancer Res. 49:2087 (1989);McCann等 Cancer Res51:3296 (1991) ;Paterson 等 Cancer Res.5 1:556 (1991) ;andffinstanleyetal. Br. J. Cancer 63:447 (1991))而在其它研究中卻不是這樣(Zhou 等0ncogene4:105 (1989);Heintz 等 Arch Path Lab Med 114:160 (1990);Kury 等 Eur.J. Cancer 26:946(1990);Clark 等 Cancer Res. 51:944(1991);and Ravdin 等 J. Clin.Oncol. 12:467-74(1994))。在早期對103例乳腺癌患者的評估中，那些有三處以上腫瘤細胞陽性腋下淋巴結(jié)(結(jié)陽性)的患者，比有不到三處陽性淋巴結(jié)的患者，更傾向于過度表達HER2蛋白(Slamon等Science 235:177 (1987))。在隨后對86例結(jié)-陽性乳腺癌患者的評估中，基因擴增、早期復(fù)發(fā)、以及存活期短之間有顯著相關(guān)性。HER2的過度表達可以用Southern和Northern印跡確定，它與通過Western印跡和免疫組化(IHC)評測的HER2癌蛋白的表達相關(guān)(Slamon等 Science 235:177 (1987) ; Slamon 等 Science 244:707(1989))。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，攜帶 5 個以上拷貝的her2基因的患者比未發(fā)生基因擴增的患者，中期存活率縮短近5倍。這種相關(guān)性甚至在多變量分析中糾正了結(jié)的狀態(tài)和其它預(yù)后因素之后仍然存在。在另外187例結(jié)-陽性患者中也進行了這些研究，結(jié)果表明，基因擴增、mRNA的量增加(通過Northern印跡檢測)、以及蛋白的表達增加(通過免疫組化方法檢測)也與存活期的縮短有關(guān)(Slamon等 Science 244:707 (1989));(也參見美國專利 4，968，603)。Nelson 等用 FISH 和免疫組化方法測定了乳腺癌中的過度表達，從而比較了 her2/neu基因的擴增(Nelson等ModernPathology 9 (I)21A (1996))。組織切片的免疫組化染色是一種可靠的評估異質(zhì)性組織中蛋白變化的方法。免疫組化(IHC)技術(shù)利用抗體來原位探測并觀察細胞的抗原，主要通過顯色反應(yīng)或熒光方法來進行。該項技術(shù)因避免了組織解集的意外后果并允許從形態(tài)學角度評估單個細胞而具有優(yōu)勢。此外，在冰凍過程中，靶蛋白不會被改變。但是，在臨床試驗分析(CTA)中，對甲醛固定且石蠟包埋的組織樣品進行IHC，相對于冰凍的 IHC樣品僅有 50%-80% 的敏感性(Press, Cancer Research 54:2771(1994))。因此，IHC可以導(dǎo)致假陰性結(jié)果，使有些能從治療中受益的患者被排除在治療之外。原位熒光雜交(FISH)是最近開發(fā)的一種直接評估完整細胞中基因的存在的方法。FISH是一種很有吸引力的評估石蠟包埋組織中惡性狀態(tài)的存在的方法，因為它具有細胞特異性，而且克服了交聯(lián)的問題以及其它由福爾馬林固定所導(dǎo)致的蛋白改變的影響。FISH曾經(jīng)與經(jīng)典染色方法聯(lián)合用于尋找遺傳異常與細胞形態(tài)學的聯(lián)系(參見，例如，Anastasi等，Blood 77:2456-2462(1991);Anastasi 等，Blood 79:1796-1801(1992);Anastasi等，Blood 81:1580-1585(1993) ;van Lom 等，Blood 82:884-888 (1992);Wolman等，Diagnostic Molecular Pathology I (3):192-199(1992);Zitzelberger, Journal ofPathology 172:325-335(1994))。到目前為止，未發(fā)現(xiàn)her2基因擴增與抗-HER2抗體治療后果有關(guān)，僅與疾病預(yù)后有關(guān)。標準的分析是對福爾馬林固定且石蠟包埋的樣品進行IHC。當這些樣品的評分為3+或2+時，將患者鑒定為很可能從抗-HER2抗體(如Herceptin )治療中受益的患者。3+和2+的評分與her2基因擴增有關(guān)，可以通過例如FISH來檢驗。但是，仍然需要更有效的鑒定ErbB拮抗劑成功治療,如Herceptin 成功治療的候選者。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明有利地提供了一種增加ErbB拮抗劑癌癥治療有效性的可能性的方法。該方法包括給予下述受試者癌癥治療劑量的ErbB拮抗劑,該受試者組織樣品的腫瘤細胞中的erbB基因被擴增。優(yōu)選ErbB是HER2。在一個具體的實施方案中，所述方法還包括給予癌癥治療劑量的化療藥物，特別是紫杉醇(taxol)。在如本文舉例描述的一個具體優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供了一種增加抗-HER2抗體治療癌癥之有效性的可能性的方法。該方法包括給予下述受試者癌癥治療劑量的抗-HER2抗體，所述受試者組織樣品的腫瘤細胞中，her2基因已經(jīng)擴增。本發(fā)明證實，基因擴增比通過免疫組化進行的蛋白檢測更有效地指示基于抗體的腫瘤治療，這一意外的臨床結(jié)果導(dǎo)致總體上擴展了腫瘤抗原。因此，任何基于抗腫瘤特異性抗原的抗體治療可以提高那些編碼該腫瘤抗原的基因已得到基因擴增的患者被成功治療的可能性。
本發(fā)明特別有利在于，它允許不根據(jù)免疫組化標準而選擇需要進行治療的患者。因此，在一個具體實施方案中，受試者的經(jīng)甲醛固定的組織樣品經(jīng)免疫組化得出的抗原水平評分值為0或I+。本發(fā)明還提供了一種藥物包，它包含用于治療癌癥的ErbB拮抗劑，向發(fā)現(xiàn)其組織樣品的腫瘤細胞中erbB基因已擴增的患者給予ErbB拮抗劑的說明。優(yōu)選所述ErbB拮抗劑是抗-ErbB抗體，如抗-HER2抗體。另一方面，上述說明還指示對癌癥治療劑量的化療藥物，如紫杉醇的給藥?？梢詾樘禺愋葬槍δ[瘤特異性抗原的任何基于抗體的治療提供這種藥物包，包括使用說明。本發(fā)明還涉及I. 一種增加ErbB拮抗劑癌癥治療有效性的可能性的方法，該方法包括給予受試者癌癥治療劑量的ErbB拮抗劑，所述受試者是已發(fā)現(xiàn)其組織樣品的腫瘤細胞中erbB基因被擴增的那些受試者。2.項I的方法，其中所述ErbB是HER2蛋白。3.項2的方法，其中所述癌癥是乳腺癌。4.項3的方法，其中所述受試者，經(jīng)過其被甲醛固定的組織樣品的免疫組化分析，被評分為0或I+。5.項I的方法，其中所述ErbB拮抗劑是抗-ErbB抗體。6.項5的方法，其中所述ErbB是HER2，所述抗體是重組人單克隆抗體(rhuMAb)4D5。7.項I的方法，其中所述erbB基因的擴增通過檢測與該基因雜交的熒光標記型核酸探針的熒光來進行檢測。8.項7的方法，其中所述erbB基因是her2基因。9.項I的方法，其還包括給予癌癥治療劑量的化療藥物。10.項9的方法，其中所述ErbB是HER2，所述化療藥物是紫杉醇。11.項I的方法，其中所述有效性的可能性增加了約30%。12. 一種增加抗-HER2抗體有效治療癌癥的可能性的方法，該方法包括給予受試者癌癥治療劑量的抗-HER2抗體，所述受試者是已發(fā)現(xiàn)其組織樣品的腫瘤細胞中her2基因被擴增的那些受試者。13.項12的方法，其中所述受試者，經(jīng)過其被甲醛固定的組織樣品的免疫組化分析，被評分為0或I+。14.項12的方法，其還包括給予癌癥治療劑量的紫杉醇。15 —種藥物包，包括(a) 一容器,含有用于治療癌癥的ErbB拮抗劑；和(b)向那些在其組織樣品的腫瘤細胞中erbB基因已擴增的患者給予ErbB拮抗劑的說明。16.項15的藥物包，其中所述ErbB拮抗劑是一種抗體。
17.項16的藥物包，其中所述抗體是抗-HER2抗體。18.項17的藥物包,其中所述抗-HER2抗體是rhuMAb 4D5 (Herceptin )19.項15的藥物包，其中所述說明還包括與ErbB拮抗劑聯(lián)合而給予化療藥物的給藥指導(dǎo)。20.項19的藥物包，其中所述化療藥物是紫杉醇。21. 一種鑒定下述患者的方法，所述患者經(jīng)處置能優(yōu)先應(yīng)答用于治療癌癥的ErbB拮抗劑，所述方法包括檢測該患者組織樣品的腫瘤細胞中erbB基因的擴增。22.項21的方法，其中所述受試者，經(jīng)過其被甲醛固定的組織樣品的免疫組化分析，被評分為0或I+。23.項21的方法,其中所述erbB是her2。發(fā)明詳述本發(fā)明優(yōu)點在于，能通過給予治療藥物，即抗腫瘤抗原的治療性抗體或ErbB受體拮抗劑，而有效治療對上述給藥有較大可能發(fā)生應(yīng)答的患者，所述患者是被發(fā)現(xiàn)編碼上述腫瘤抗原或ErbB受體蛋白的基因被擴增的那些。本發(fā)明有一部分是基于下述意外發(fā)現(xiàn)通過例如原位熒光雜交(FISH)檢測出的her2基因擴增，盡管與通過免疫組化(IHC)檢測出的HER2表達相關(guān)，但能更精確地選擇接受治療的患者，因為意外發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ISH狀態(tài)與針對治療的應(yīng)答更相關(guān)。該結(jié)果從某種意義上說很意外，因為FISH與臨床試驗分析(CTA) IHC分析的相關(guān)程度與另一種IHC分析(HercepTest)相同。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)，預(yù)計FISH與針對治療的應(yīng)答性有類似的相關(guān)性。該結(jié)果令人意外的另一個原因是，預(yù)計對蛋白的直接測定(通過免疫分析)比針對表達的間接測定(如基因擴增)能更精確地評估靶向該蛋白的癌癥治療。對不同組和亞組的患者進行的評估證實，基因擴增分析能夠選出那些很可能對治療有反應(yīng)的患者。IHC可用于對腫瘤細胞上HER2的表達進行評分0(無表達)至3+(很高水平的表達)。臨床選擇標準排除了評分為0和1+的患者，而選擇了評分為2+和3+的患者。數(shù)據(jù)顯示，評分為2+/3+的患者有14%可以應(yīng)答Herceptin ，F(xiàn)ISH+(擴增的her2
基因)患者有20%可以應(yīng)答Herceptin 。評分為3+的亞組有17%的應(yīng)答率，這與FISH+患者的應(yīng)答率非常接近。但是，評分為2+的亞組的應(yīng)答率不到FISH+患者的一半。因此，基因擴增清楚地在2+亞組中區(qū)分出了主要亞群，從而能更有效地治療FISH+的那些，并很快鑒定出適合并急需其它治療形式的患者。
基因擴增分析還能鑒定出，原本不必被排除，但由于IHC分析中，尤其是在福爾馬林固定且石蠟包埋的樣品上進行檢驗時(這種樣品處理方式可破壞HER2蛋白上的抗體表位，但對基因擴增分析的影響要小得多)的異常而被排除的患者。如實施例中所述，有一組評分為0和1+的患者為FISH+。這些患者傾向于應(yīng)答抗-HER2抗體治療，例如，用
Herceptin' 進行的治療，但根據(jù)IHC標準，它們將被排除在接受該治療的范圍之外。因此，本發(fā)明優(yōu)勢在于，能將那些很有可能受益于治療、但根據(jù)常規(guī)的IHC標準判斷將被排除在治療之外的患者包括在治療范圍內(nèi)。同時，本發(fā)明還能將那些由于抗-腫瘤抗原治療(即，ErbB拮抗劑或腫瘤-特異性治療性抗體)不太可能成功而應(yīng)該迅速尋求其它治療模式的患者排除。簡言之，本發(fā)明在根據(jù)靶蛋白的表達水平選擇患者方面是IHC分析的有效輔助手段。它還能單獨，即在無IHC的情況下，對患者進行初步篩查和選擇。本發(fā)明顯著改進了對接受癌癥治療劑量的抗腫瘤抗原治療性抗體治療、ErbB受體拮抗劑治療、及其它靶向過度表達之腫瘤抗原(或腫瘤特異性抗原)的治療的患者進行的篩查和選擇，從而提高這些患 者從這樣的治療中獲益的可能性。本發(fā)明另一方面涉及一種制品或制品包(package),它包含一個容器并可選擇在該容器上包含一種標簽和一種包裹插頁，在該容器內(nèi)含有一種組合物，該組合物包含ErbB拮抗劑，例如抗-ErbB抗體(或其它抗-腫瘤-特異性抗原的抗體)，所述標簽說明上述組合物可以用于治療以過度表達ErbB受體的情況，所述包裹插頁含有對已經(jīng)發(fā)現(xiàn)帶有擴增的erbB基因的患者給藥所述拮抗劑的使用說明。定義本文中“ErbB受體”是受體蛋白酪氨酸激酶，屬于ErbB受體家族，包括EGFR、HER2、ErbB3和ErbB4受體，以及TEGFR (美國專利5，708，156)和在將來被鑒定的此家族其它成員。ErbB受體通常包括可結(jié)合ErbB配體的細胞外結(jié)構(gòu)域；親脂性跨膜結(jié)構(gòu)域；保守的細胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域；和含數(shù)個可被磷酸化的酪氨酸殘基的羧基末端信號結(jié)構(gòu)域。ErbB受體可以是天然序列ErbB受體或其氨基酸序列變體。優(yōu)選ErbB受體是天然序列人ErbB受體。ErbB受體是腫瘤_特異性抗原或腫瘤抗原的一種。術(shù)語“腫瘤抗原”在本文中指，腫瘤細胞中表達水平高于正常細胞中表達水平的蛋白。一般用于進行比較的正常細胞是與腫瘤、或與產(chǎn)生該腫瘤的原始組織細胞具有相同組織類型(特別是表型)的細胞?！澳[瘤特異性抗原”是指在腫瘤細胞上優(yōu)勢表達或僅在腫瘤細胞上表達的抗原。腫瘤-特異性抗原的實例除了 ErbB受體外，還包括MARTl/MelanA，gp-100，和酪氨酸酶(在黑素瘤中)；MAGE_1和MAGE-3(在膀胱癌、頭頸部癌、非小細胞癌中)；HPV EG和E7蛋白(在宮頸癌中)；粘蛋白/MUC-I (在乳腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌和前列腺癌)；前列腺特異性抗原/PSA(在前列腺癌中);和癌胚抗原/CEA(在結(jié)腸癌、乳腺癌和胃腸道癌癥中)?！皵U增”是指在一套染色體中erbB或其它編碼腫瘤抗原的基因有一或多個額外的基因拷貝。基因擴增可導(dǎo)致蛋白(如ErbB受體蛋白)的過度表達。來自組織樣品的細胞中的基因擴增可通過多種技術(shù)測定，所述技術(shù)尤其是原位熒光雜交(FISH)，但還包括但不限于定量PCR,定量Southern雜交等等?！敖M織樣品”是指從受試者或患者組織中獲取的相似細胞的集合，優(yōu)選包括帶有染色體物質(zhì)的有核細胞。4種主要的人體組織是(I)上皮組織；(2)結(jié)締組織，包括血管、骨骼和軟骨；(3)肌肉組織；和(4)神經(jīng)組織。組織樣品的來源可以是實體組織，例如新鮮的、經(jīng)冷凍處理和/或防腐處理的器官或組織樣品或活檢樣品或吸出物；血液或任何血液成分；體液如腦脊液、羊水、腹膜內(nèi)體液、或間質(zhì)液；來自受試者妊娠或發(fā)育的任何階段的細胞。組織樣品還可以是原代細胞或培養(yǎng)細胞或細胞系。組織樣品可以包含天然狀態(tài)下并未與該組織混合的化合物，如防腐劑、抗凝劑、緩沖液、固定劑、營養(yǎng)物、抗生素等等。在本發(fā)明一個實施方案中，組織樣品是“非-血液學組織”(即，不是血液或骨髓組織)。本文中組織樣品的“切片”是指組織樣品的單個部分或片，例如，從組織樣品中切出的組織或細胞薄片。應(yīng)理解，可以根據(jù)本發(fā)明取組織樣品的多個切片并對其進行分析，只要理解到本發(fā)明包含以下方法，所述方法對組織樣品的相同切片既可以進行形態(tài)又可以進行分子水平的分析，或者既可以進行蛋白質(zhì)又可以進行核酸的分析。“相關(guān)”是指，第一種分析的性能和/或結(jié)果與第二種分析的性能和/或 結(jié)果，以任何方式發(fā)生聯(lián)系。例如，可以用第一種分析的結(jié)果來進行第二種分析，和/或用第一種分析的結(jié)果確定是否需要進行第二種分析，和/或?qū)⒌谝环N分析的結(jié)果與第二種分析的結(jié)果進行比較。在IHC與FISH的關(guān)系中，可以用IHC結(jié)果確定是否需要進行FISH，和/或?qū)⒌鞍妆磉_水平與基因擴增進行比較，從而進一步鑒定腫瘤活檢標本(如，比較HER2蛋白的表達與her2基因的擴增)。本發(fā)明的一個優(yōu)點是能鑒定出下列患者，IHC顯示他們的抗原水平很低，但根據(jù)FISH判定他們很可能受益于治療?！昂怂帷卑ńM織樣品中出現(xiàn)的任何DNA或RNA，例如，染色體來源的，線粒體來源的，病毒來源的和/或細菌來源的。術(shù)語“核酸”包括雙鏈核酸分子的其中一條鏈或全部兩條鏈，還包括完整核酸分子的任何片段或部分。“基因”是指能編碼或轉(zhuǎn)錄為RNA (rRNA，tRNA,或mRNA，后者能翻譯為蛋白質(zhì))或調(diào)節(jié)其它基因的表達的任何核酸序列或其部分。基因可以由負責編碼功能性蛋白的所有核酸組成，或僅僅由負責編碼或表達蛋白質(zhì)的核酸部分組成。核酸序列可以在外顯子、內(nèi)含子、起始或終止區(qū)域、啟動子序列、其它調(diào)節(jié)序列或與該基因鄰接的特有區(qū)域包含遺傳異常?！癊rbB配體”是指能結(jié)合和/或活化ErbB受體的多肽。本文中有特別興趣的ErbB配體是天然序列人類ErbB配體，如表皮生長因子(EGF) (Savage等，J. Bio.Chem. 247:7612-7621 (1972));轉(zhuǎn)化生長因子 a (TGF-a )(Marquardt 等，Science223:1079-1082(1984));雙調(diào)節(jié)素，也稱作許旺氏細胞(schwanoma)或角質(zhì)細胞自分泌生長因子(Shoyab 等 Science 243:1074-1076(1989) ; Kimura 等 Nature 348:257-260(1990);和 Cook 等 Mol. Cell. Biol. 11:2547-2557(1991)) ； ^ 細胞調(diào)節(jié)素(Shing 等，Science259:1604-1607(1993);Sasada 等 Biochem. Biophys. Res. Commun. 190:1173(1993));肝素-結(jié)合型表皮生長因子(HB-EGF) (Higashiyama 等，Science 251:936-939(1991));表皮調(diào)節(jié)素(Toyoda 等，J. Biol. Chem. 270:7495-7500(1995);和 Komurasaki 等Oncogene 15:2841-2848 (1997))，遺傳調(diào)節(jié)蛋白(下述)；神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白_2 (NRG-2)(Carraway 等，Nature 387:512-516(1997));神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-3(NRG-3)(Zhang等,Proc. Natl. Acad. Sci. 94:9562-9567 (1997));或 cripto (CR-I) (Kannan 等 J. Biol.Chem. 272 (6) : 3330-3335 (1997))。結(jié)合 EGFR 的 ErbB 配體包括 EGF、TGF- a、雙調(diào)節(jié)素、^細胞調(diào)節(jié)素、HB-EGF和表皮調(diào)節(jié)素。結(jié)合HER3的ErbB配體包括遺傳調(diào)節(jié)蛋白。能夠結(jié)合HER4的ErbB配體包括P細胞調(diào)節(jié)素、表皮調(diào)節(jié)素、HB-EGF, NRG-2、NRG-3和遺傳調(diào)節(jié)蛋白。本文中“遺傳調(diào)節(jié)蛋白(Heregulin) ”，是指如美國專利5，641, 869或Marchionni等，Nature, 362:312-318(1993)公開的那樣，含有由遺傳調(diào)節(jié)蛋白基因產(chǎn)物編碼的氨基酸序列的多肽及所述多肽的生物活性變體。遺傳調(diào)節(jié)蛋白的實例包括遺傳調(diào)節(jié)蛋白-a、遺傳調(diào)節(jié)蛋白I、遺傳調(diào)節(jié)蛋白-￠2和遺傳調(diào)節(jié)蛋白3 (Holmes 等，Science, 256:1205-1210 (1992);和美國專利 5，641，869) ;neu分化因子(NDF) (Peles等Cell 69:205-216(1992));乙酰膽堿受體-誘導(dǎo)活性(ARIA) (Falls 等 Cell 72:801-815(1993));神經(jīng)膠質(zhì)生長因子(GGF) (Marchionni等，Nature, 362:312-318(1993));感覺和運動神經(jīng)元衍生因子(SMDF)(Ho等J. Biol. Chem. 270:14523-14532(1995)) ; Y-遺傳調(diào)節(jié)蛋白(Schaefer 等 Oncogene 15:1385-1394(1997))。天然序列HRG多肽的生物活性片段/氨基酸序列變體的實例，是EGF-樣結(jié)構(gòu)域片段(如HRG P 177-244)。本文中“ErbB異-寡聚體”是指非共價結(jié)合的寡聚體，包括至少2個不同的ErbB受體。這種復(fù)合物可以在表達2個或更多個ErbB受體的細胞暴露于ErbB配體時形成，它們可通過免疫沉淀來分離，通過SDS-PAGE來分析，如Sliwkowski等J. Biol.Chem.，269 (20) : 14661-14665 (1994)所述。此類 ErbB 異-寡聚體的實例包括 EGFR-HER2、HER2-HER3和HER3-HER4復(fù)合物。而且，ErbB異-寡聚體可包含2個或更多個與不同ErbB受體(如HER3、HER4或EGFR)結(jié)合的HER2受體。其它蛋白，如細胞因子受體亞單位(如gpl30),可包括在異-寡聚體中。術(shù)語“ErbBl”、“表皮生長因子受體”和“EGFR”在本文中可互換應(yīng)用，是指如Carpenter 等(Ann. Rev. Biochem. 56 :881-914 (1987))公開的天然序列 EGFR,包括其變體(例如 Humphrey 等(PNAS(USA) 87 :4207-4211 (1990))所述缺失突變型 EGFR)。ErbBl 是指編碼EGFR蛋白產(chǎn)物的基因。與EGFR結(jié)合的抗體實例包括Mab 579 (ATCC CRL HB8506)、MAb455 (ATCC CRL HB 8507)、Mab 225 (ATCC CRL 8508)、Mab 528 (ATCC CRL 8509)(見美國專利4943533)及其變體，例如嵌合型225 (C225)和重塑型人225 (H225)(見W096/40210)。術(shù)語“ErbB2”和“HER2”可互換應(yīng)用，是指天然序列人類HER2蛋白，例如在Semba等(PNAS(USA)82:6497-6501 (1985))和 Yamamoto 等(自然 319 :230-234(1986))中所述(Genebank登記號X03363)，及其變體。術(shù)語erbB2是指編碼人類HER2的基因，neu是指編碼大鼠pl85neu的基因。優(yōu)選HER2天然序列人類HER2。能結(jié)合HER2的抗體的實例包括 MAbs 4D5(ATCC CRL 10463)，2C4(ATCC HB-12697)，7F3(ATCC HB-12216),和 7C2(ATCC耶12215)(參見，美國專利5，772，997 ；W0 98/77797 ;美國專利5，840，525，它們引入本文作參考)。人源化抗-HER2 抗體包括 huMAb4D5-l, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, h
uMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7,和 huMAb4D5_8 (Herceptin ),如引入本文作參考的
美國專利5，821，337中表3所述；人源化520C9 (W0 93/21319)。人類抗-HER2抗體參見美國專利 5，772，997 和 WO 97/00271?！癊rbB3” 和 “HER3” 是指如美國專利 5183884 和 5480968 以及 Kraus 等(PNAS(USA) 86 :9193-9197(1989))公開的受體多肽，包括其變體。與HER3結(jié)合的抗體的實例見美國專利5968511，例如888抗體的(1 HB 12070)或其人源化變體。術(shù)語“ErbB4”和“HER4”是指在下述文獻中公開的受體多肽,如歐洲專利申請599274 ；Plowman等,Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 90:1746-1750 (1993);和 Plowman 等，Nature，366 :473-475 (1993)，包括其變體，如W099/19488中所述的HER4同種型?！癊rbB拮抗劑”是能結(jié)合ErbB受體并阻斷ErbB受體的配體活化的任何分子。這類拮抗劑包括，但不限于修飾的配體、配體肽(即，配體片段)，可溶性ErbB受體，優(yōu)選抗ErbB抗體。“治療”是指治療和預(yù)防措施。那些需要治療的對象是已經(jīng)患有疾病以及有待預(yù)防疾病的個體。需要治療的“哺乳動物”是指哺乳類任何動物，包括人、家禽、農(nóng)用動物，和動物園、運動項目用的動物或?qū)櫸?，如犬、馬、貓、牛等。優(yōu)選哺乳動物是人。
“疾病”是將受益于ErbB拮抗劑(如抗ErbB2抗體)治療的任何病癥，更主要是指通過給予針對過度表達的抗原的抗體可以進行治療的任何癌癥。這包括慢性和急性疾病，或者那些使哺乳動物易患所述疾病的病理狀況?？筛鶕?jù)本文治療的疾病的非限定實例包括良性和惡性腫瘤；白血病和淋巴樣惡性腫瘤；神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、星形交質(zhì)細胞、下丘腦和其它腺體、巨噬細胞、上皮細胞、間質(zhì)和囊胚腔的疾??；炎性、血管原性和免疫性疾病。術(shù)語“治療有效量”是指具有抗增生效果的量。優(yōu)選地，治療有效量激發(fā)抗體介導(dǎo)的細胞毒作用，活化補體，具有細胞凋亡(apoptotic)活性，或者能夠誘導(dǎo)細胞死亡，并且優(yōu)選使良性或惡性腫瘤細胞(尤其癌細胞)死亡。根據(jù)所治病癥的情況，可用常規(guī)方法測定治療效力。對于癌癥治療來說，可通過例如評估疾病進展時間(TTP)，存活期，腫瘤大小，或測定應(yīng)答率(RR)來測定其效力(見下述實施例)。術(shù)語“癌癥”和“癌性的”是指或描述哺乳動物中以細胞生長失控為典型特點的病理狀態(tài)。癌癥的實例包括但不限定于癌(carcinoma)，淋巴瘤，胚細胞瘤，肉瘤，黑素瘤和白血病。更具體而言，這些癌包括鱗狀細胞癌，小細胞肺癌，非小細胞肺癌，肺腺癌，肺鱗癌，腹膜癌，肝細胞癌(hepatocellular cancer)，胃腸癌，胰腺癌，成膠質(zhì)細胞瘤，宮頸癌，卵巢癌，肝癌(liver cancer),膀胱癌,肝細胞瘤(hepatoma),乳腺癌，結(jié)腸癌，結(jié)直腸癌,子宮內(nèi)膜癌或子宮癌，唾液腺癌，腎癌，前列腺癌，外陰癌，甲狀腺癌，肝癌(hepatic crcinoma)，以及各種頭、頸部癌?！氨磉_ErbB的癌”是指包括表面帶有ErbB蛋白的細胞，使得抗-ErbB抗體能與此
癌結(jié)合的癌。本文所用術(shù)語“細胞毒制劑”是指抑制或阻止細胞功能和/或引起細胞破壞的物質(zhì)。該術(shù)語意在包括放射性同位素(例如I131、I125、Y9°和Re186)，化療劑，毒素如細菌、真菌、植物或動物來源的酶活性毒素，或其片段?！盎焺笔窃诎┌Y治療中使用的化學化合物。化療劑實例包括烷化劑，如噻替哌(thiotepa)和環(huán)磷酰胺(CYTOXAN );燒基磺酸酯如白消安(busulfan),英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan);氮丙唳(aziridine)如苯并多巴(benzodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替哌(meturedopa)和尿燒亞胺(uredopa)；氮丙唳(ethylenimine)和 methylamelamine 包括六甲蜜胺(altretamine),三亞胺嗪(triethylenemelamine),三亞乙基磷酰胺，三亞乙基硫代磷酰胺和三輕甲基蜜胺(trimethyIoIomeIamine);氮芥(nitrogen mustards)如苯丁酸氮芥(chlorambucil),萘氮芥(chlornaphazine),膽憐酸胺(cholophosphamide),雌氮芥(estramustine),異環(huán)磷酰胺(ifosfamide),氮芥(mechlorethamine),鹽酸氧氮芥，左旋苯丙氨酸氮芥(melphalan)，新氮芥(novembichin)，月旦甾醇苯乙酸氮芥(phenesterine)，松龍苯芥(prednimustine),曲磷胺(trofosfamide),尿卩密唳氮芥；亞硝基脲(nitrosureas)如亞硝基脲氮芥(carmustine),氯脲菌素(chlorozotocin),福莫司汀(fotemustine),洛莫司汀(Iomustine),尼莫司汀(nimustine),雷莫司汀(ranimustine);抗生素如阿克拉霉素，放線菌素，authramycin,重氮絲氨酸,博來霉素，放線菌素C (cactinomycin),加利車霉素(calicheamicin), carabicin,嗜癌素(carzinophilin),色霉素(chromomycin),放線菌素D,柔紅菌素(daunorubicin) ,6-重氮-5-氧-L-正亮氨酸,阿霉素(doxorubicin),表阿霉素(epirubicin),絲裂霉素，霉酹酸，諾加霉素(nogalamycin),橄欖霉素(olivomycin),培洛霉素(peplomycin), potfiromycin,嘌呤霉素，鏈黑菌素，鏈脲霉素(streptozocin),殺結(jié)核菌素，烏苯美司(ubenimex),凈司他丁 (zinostatin),佐柔比星(zorubicin);抗代謝藥如氨甲蝶呤和5-氟尿B密唳(5-FU);葉酸類似物如二甲葉酸(denopterin),氨甲蝶呤，蝶羅呤，三甲曲沙(trimetrexate);嘌呤類似物氟達拉濱(f Iudarabine), 6_巰基嘌呤，硫咪嘌呤，硫鳥嘌呤；卩密唳類似物如安西他濱(ancitabine),阿扎胞苷(azacitidine),6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur),阿糖胞苷,雙脫氧尿苷,去氟氧尿苷(doxifluridine),依 諾他濱(enocitabine),氟尿苷,5-FU ;雄激素類如二甲睪酮(calusterone),丙酸甲雄燒酮(dromostanolone propionate)，環(huán)硫雄酉享(epitiostanol)，美雄氨(mepitiostane)，睪內(nèi)酯(testolactone);抗腎上腺類如氨魯米特(aminoglutethimide),米托坦(mitotane),曲洛司坦(trilostane);葉酸補充劑如frolinic acid ;醋葡內(nèi)酯；醒磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside);氨基乙酸丙酸(aminolevulinic acid);安口丫P定；bestrabucil ;比生群(bisantrene);依達曲沙(edatraxate) ；defofamine ;秋水仙胺(demecolcine);地口丫酉昆(diaziquone) ；elfornithine ;依利醋,安(elliptinium acetate)；依托格魯(etoglucid);硝酸鎵；輕基脲；香燕多糖(Ientinan);氯尼達明(Ionidamine)；米托胍腙(mitoguazone);米托蒽酉昆(mitoxantrone);莫哌達醇(mopidamol);硝呋旦(nitracrine);噴司他丁 (pentostatin) ;phenamet ;批柔比星(pirarubicin);鬼曰樹酸(podophyllinic acid) ;2_ 乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine) ； PSK ;雷佐生(razoxane);西索菲蘭(sizofiran);鍺螺胺(spirogermanium);細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2，2’，2"-三氯三乙胺(trichlorotriethylamine);烏拉坦(urethan);長春堿酰胺；達卡巴嗪(dacarbazine);甘露醇氮芥；二溴甘露醇(mitobronitol) ;二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol);哌泊溴燒(pipobroman) ；gacytosine ;阿拉伯糖苷(“Ara_C”)；環(huán)磷酸胺；三胺硫憐(thiotepa) ;taxoid,如紫杉醇(TAXOL ，Bristol-Myers SquibbOncology, Princeton, NJ)和紫杉職(Taxotere, Rhone-Poillenc Rorer, Antony,France);苯丁酸氮芥；吉西他濱(gemcitabine) ;6_硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；氨甲蝶呤；鉬類似物如順鉬和卡鉬；長春花堿；鉬；依托泊式(etoposide) (VP-16);異環(huán)磷酰胺；絲裂霉素C ;米托蒽醌；長春新堿；長春瑞賓(vinorelbine);新霉酰胺(navelbine) ；novantrone ；替尼泊式(teniposide);柔紅霉素；洋紅霉素(carminocycin);氨基蝶呤；xeloda ;伊拜膦酸鹽(ibandronate) ； CPT-11 ;拓撲異構(gòu)酶抑制劑RFS2000 ; 二氟甲基鳥氨酸(DMFO)；維甲酸；esperamicins ；capecitabine ；以及上述任何物質(zhì)的可藥用鹽，酸或衍生物。此定義還包括能調(diào)節(jié)或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素制劑，如抗雌激素制劑包括他莫昔芬(tamoxifen),雷洛昔芬(raloxifene),芳香酶抑制劑4(5)-咪唑,4-輕基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene), keoxifene, LY117018, onapristone ;和抗雄激素制劑如氟他氨(fIutamide),尼魯米特(nilutamide);和上述任何物質(zhì)的可藥用鹽、酸或衍生物。本文中“生長抑制劑”是指在體內(nèi)或體外抑制細胞生長，尤其抑制過度表達ErbB的癌癥細胞生長的化合物或組合物。因此，生長抑制劑可以是顯著降低S期中ErbB過表達細胞百分比的藥物。生長抑制劑的實例包括阻斷細胞周期(在除S期以外的某個階段)進展的藥物，例如誘導(dǎo)Gl停滯和M期停滯的藥物。經(jīng)典的M期阻斷劑包括長春花類(長春新堿和長春花堿)，TAXOL 和topo II抑制劑如阿霉素、表阿霉素、柔紅霉素、依托泊式(etoposide)和博來霉素等。那些使Gl期停滯的藥物還連帶(spillover)使S其月停滯，例如DNA燒化劑象他莫昔芬(tamoxifen)、強的松(prednisone)、達卡巴嗪(dacarbazine)、氮芥(mechlorethamine)、順鉬、氨甲蝶呤、5_氟尿卩密唳和阿糖胞 昔等° 詳見 The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds. , Chapter1，entitled “Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs，，Murakami等(WB Saunders:Philadelphia, 1995),尤其見13頁。4D5抗體(和其功能等效物)也可用于此目的。ErbB受體酪氨酸激酶ErbB受體酪氨酸激酶是細胞生長、分化和存活的重要介質(zhì)。該受體家族包括至少四個不同的成員，包括表皮生長因子受體(EGFR*ErbBl)、HER2(ErbB2*pl85neu)、HER3(ErbB3)和 HER4(ErbB4 或 tyro2)。EGFR,由erbBl基因編碼，被推斷為與導(dǎo)致人類惡性腫瘤有關(guān)。具體而言，已經(jīng)觀察到EGFR在乳腺癌、膀胱癌、肺癌、頭頸部癌和胃癌以及神經(jīng)膠質(zhì)瘤的表達增加。EGFR受體表達增加常常與同一腫瘤細胞EGFR配體一轉(zhuǎn)化生長因子a (TGF-a)產(chǎn)生增加有關(guān)，導(dǎo)致受:體由自分泌刺激通路活化。Baselga 和 Mendelsohn Pharmac. Ther. 64:127-154(1994)。在治療此類惡性腫瘤中，已經(jīng)評價了抗EGFR或其配體TGF-a和EGF的單克隆抗體，作為治療劑的價值。參見例如，Baselga和Mendelsohn.，出處同上；Masui等Cancer Research44:1002-1007(1984);及 Wu 等 J. Clin. Invest. 95:1897-1905(1995)。ErbB家族的第二個成員，pl85neu,最初被認定為化學處理過的大鼠的成神經(jīng)細胞瘤的轉(zhuǎn)化基因產(chǎn)物。neu原癌基因的活化形式，源自所編碼蛋白跨膜區(qū)的點突變(纈氨酸變?yōu)楣劝彼?。觀察到乳腺癌和卵巢癌中人neu同系物擴增，并且與預(yù)后差相關(guān)(Slamon等，Science, 235:177-182(1987) ; Slamon 等，Science, 244:707-712(1989);和美國專利4，968，603)。迄今，尚未有關(guān)于人腫瘤的類似于neu原癌基因的點突變的報道。已觀察到HER2過度表達(經(jīng)常但不是一律歸咎于基因擴增)與其他癌癥有關(guān)，其中包括胃癌、子宮內(nèi)膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、甲狀腺癌、胰腺癌和膀胱癌?？勾笫髉l85neu和人HER2蛋白產(chǎn)物的抗體已有描述。Drebin及其同事已經(jīng)生產(chǎn)了抗大鼠neu基因產(chǎn)物一 P185neu的抗體。參見例如，Drebin等，Cell41:695-706(1985) ; Myers 等，Meth. Enzym. 198:277-290(1991);和 TO94/22478。Drebin 等Oncogene 2:273-277(1988)報道，與pl85neu兩個不同區(qū)反應(yīng)的抗體混合物對植入裸鼠的neu-轉(zhuǎn)化的NIH-3T3細胞產(chǎn)生協(xié)同抗-腫瘤效應(yīng)。也參見1998年10月20日發(fā)布的美國專利 5，824，311。Hudziak 等，Mol. Cell. BioL 9(3) :1165-1172(1989)描述一系列抗 HER2 抗體的產(chǎn)生，其特征是使用人乳腺腫瘤細胞系SKBR3。SKBR3細胞暴露于抗體后72小時，對單層細胞進行結(jié)晶紫染色測定相對細胞增生。利用該分析測定，得到的結(jié)果是稱作4D5的抗體抑制細胞增生的最大抑制為56%。在此分析測定中，一系列抗體中的其他抗體較小程度減少細胞增生。進一步發(fā)現(xiàn)，抗體4D5使HER2-過度表達性乳腺腫瘤細胞系對TNF-a的細胞毒性作用敏感。也參見，1997年10月14日發(fā)布的美國專利5，677，171。在Hudziak等中討論的抗-HER2抗體,在下述文獻中做了進一步描述Fendly等CancerResearch 50 :1550-1558(1990) ;Kotts 等 In Vitro 26 (3) 59A(1990) ;Sarup 等 GrowthRegulation 1:72-82(1991) ；Shepard 等 J. Clin. Immunol. 11 (3) :117-127(1991) ；Kumar等 Mol. Cell. Biol. 11 (2) :979-986(1991) ；Lewis 等 Cancer Immunol. Immunother.37 255-263(1993) ;Pietras 等 Oncogene 9 1829-1838(1994) ;Vitetta 等 Cancer Research54 :5301-5309(1994) ；Sliwkowski 等 J. Biol. Chem.269(20) :14661-14665(1994)；Scott 等 J. Biol. Chem. 266 :14300-5 (1991) ；D ' souza 等 Proc. Natl. Acad. Sci. 91 : 7202-7206(1994) ；Lewis 等 Cancer Research 56:1457-1465(1996)；及 Schaefer 等Oncogene 15:1385-1394(1997)。重組人源化IgGl版本的小鼠抗-HER2抗體4D5 (rhuMAb HER2或HERCEPTIN ;購自 Genentech, Inc. , South San Francisco),對在前已經(jīng)接受過抗癌治療的患J1ER2-過度表達性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的患者具有臨床療效(Baselga等，J. Clin.Oncol. 14 :737-744(1996))。 HERCEPTIN 于 1998 年 9 月 25 日得到食品藥品管理局的上市許可，用于治療患有過度表達HER2蛋白的腫瘤的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者?，F(xiàn)有治療方案是應(yīng)用IHC來確定HER2蛋白的過度表達。其他具有不同特性的抗-HER2抗體，描述在下列文獻中Tagliabue等Int.J.Cancer 47 :933-937 (1991) ；McKenzie 等 Oncogene 4 :543-548 (1989) ；Maier等 Cancer Res. 51 :5361-5369(1991) ；Bacus 等 Molecular Carcinogenesis 3:350-362(1990) ；Stancovski 等 PNAS (USA)88 :8691-8695 (1991) ；Bacus 等 CancerResearch 52:2580-2589(1992) ；Xu 等 Int. J. Cancer53 :401-408(1993) ；W094/00136 ；Kasprzyk 等 Cancer Research 52:2771-2776(1992) ；Hancock 等 Cancer Res.51 4575-4580(1991) ；Shawver 等 Cancer Res. 54 :1367-1373(1994) ；Arteaga 等 CancerRes. 54 :3758-3765(1994) ；Harwerth 等 J. Biol. Chem. 267 :15160-15167(1992);美國專利5，783， 186 ;Klapper 等 Oncogene 14:2099-2109(1997) ；W0 98/77797。同源篩選導(dǎo)致發(fā)現(xiàn)了另外2個ErbB受體家族成員；HER3 (美國專利5，183，884和 5，480，968，以及 Kraus 等 PNAS (USA) 86 :9193-9197 (1989))和 HER4 (歐洲專利申請 599, 274;Plowman 等,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:1746-1750 (1993);和 Plo碰an等，Nature, 366:473-475 (1993))。這兩種受體均顯示至少在某些乳腺癌細胞系中表達增加。通常發(fā)現(xiàn)ErbB受體在細胞中呈各種結(jié)合形式，而異源二聚化被認為增加對各種 ErbB 配體的細胞應(yīng)答的多樣性(Earp 等 Breast Cancer Research and Treatment35:115-132(1995))。EGFR被6種不同的配體結(jié)合表皮生長因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長因子a (TGF-a)、雙調(diào)節(jié)素(amphiregulin)、肝素結(jié)合性表皮生長因子(HB-EGF)、^細胞調(diào)節(jié)素(betacellulin)和表皮調(diào)節(jié)素(epiregulin) (Groenen 等 Growth factors11:235-257(1994))。由單基因選擇性(alternative)剪接產(chǎn)生的遺傳調(diào)節(jié)蛋白(heregulin)蛋白家族是HER3和HER4的配體。遺傳調(diào)節(jié)蛋白家族包括a、0和Y遺傳調(diào)節(jié)蛋白(Holmes 等，Science, 256:1205-1210(1992);美國專利 5，641，869;和 Schaefer等 Oncogene 15:1385-1394 (1997)); neu 分化因子(NDFs),神經(jīng)膠質(zhì)生長因子(GGFs);乙酰膽堿受體誘導(dǎo)活性(ARIA);及感覺和運動神經(jīng)元衍生因子(SMDF)。評述見Groenen等Growth factors 11:235-257 (1994);Lemke, G. Molec. & Cell. Neurosci. 7:247-262(1996)和Lee等Pharm. Rev. 47:51-85(1995)。近日，鑒定了另外兩種ErbB配體神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-2(NRG-2)和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-3，據(jù)報道，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白-2結(jié)合HER3或HER4 (Chang等Nature 387 509-512 (1997);和 Carraway 等 Nature 387:512-516 (1997))，而神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋 白-3 結(jié)合 HER4 (Zhang 等 PNAS (USA) 94 (18) : 9562-7 (1997))。HB-EGF, ^ 細胞調(diào)節(jié)素和表皮調(diào)節(jié)素也與J1ER4結(jié)合。盡管EGF和TGF- a不結(jié)合HER2，但是，EGF刺激EGFR和HER2形成異二聚體，后者激活EGFR并導(dǎo)致異二聚體中HER2的磷酸根轉(zhuǎn)移。二聚作用和/或磷酸根轉(zhuǎn)移似乎激活HER2酪氨酸激酶。見Earp等，出處同上。同樣地，當HER3與HER2共表達時，形成一活性信號復(fù)合物，抗J1ER2的抗體能夠干擾此復(fù)合物(Sliwkowski等，J. Biol. Chem.，269(20) : 14661-14665(1994))。此外，在與HER2共表達時，HER3與遺傳調(diào)節(jié)蛋白(HRG)的親和力升高到更高親和力水平。有關(guān)HER2-HER3蛋白復(fù)合物,也參見，Levi等，Journal of Neuroscience15:1329-1340(1995);Morrissey 等,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:1431-1435(1995);和Lewis 等，Cancer Res. , 56: 1457-1465(1996)。HER4,象 HER3—樣，與 HER2 形成一活性信號復(fù)合物(Carraway and Cantley, Cell 78:5-8(1994))。檢測基因擴增本發(fā)明涉及用任何技術(shù)檢測基因擴增(參見，Boxer, J. Clin.Pathol. 53:19-21 (2000))。這些技術(shù)包括利用放射性同位素或熒光標記的探針進行的原位雜交(Stoler, Clin. Lab. Med. 12:215-36(1990);聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR);定量 Southern 印跡，以及其它用于定量單個基因的技術(shù)。優(yōu)選被選為基因擴增進行評估的探針或引物具有高特異性，以避免檢測密切相關(guān)的同源基因。本文中所用“標記” 一詞，是指直接或間接與諸如核酸探針或抗體等試劑偶聯(lián)或融合以便有利于檢測該與之偶聯(lián)或融合的試劑的化合物或組合物。標記可以是其本身可被測得(例如放射性同位素標記或熒光標記)，或者如果是酶標記時，可以是可測得的催化底物化合物或組合物發(fā)生的化學變化。與抗體發(fā)生免疫學特異性結(jié)合的半抗原或表位也可以作為標記。術(shù)語“熒光標記的核酸探針”是指以下探針，它包含(1)具有能與靶核酸序列雜交的序列的核酸；和(2)熒光標記。優(yōu)選地，所述雜交為特異性雜交，即它能在高度嚴格條件下發(fā)生。樣品的制備來自受試者的任何組織樣品都可以使用?？梢允褂玫慕M織樣品的實例包括，但不限于，乳腺、前列腺、卵巢、結(jié)腸、肺、子宮內(nèi)膜、胃、唾液腺或胰腺。組織樣品可通過多種方法獲得，包括但不限于外科切出、吸出、活檢。組織可以是新鮮的或冰凍的。在一個實施方案中，組織樣品是固定并包埋在石蠟等中。組織樣品可用常規(guī)方法固定(S卩，進行防腐處理)(參見例如，Manual ofHistological Staining Method of the Armed Forces Institute of Pathology, 3rdEdition Lee G. Luna, HT(ASCP)Editor,The Blakston Division McGraw-Hill BookCompany:New York; (1960) ;The Armed Forces Institute of Pathology AdvancedLaboratory Methods in Histology and Pathology (1994)Ulreka V. Mikel, Editor, ArmedForces Institute of Pathology, American Registry of Pathology, Washington, D. C.)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，對固定劑的選擇取決于對組織是進行組織學染色還是進行其它分析。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，固定所用時間的長短取決于組織樣 品的大小和所用的固定齊U。例如，中性緩沖的福爾馬林，Boilin’ S或多聚甲醛可以用于固定組織樣品。通常，先將組織樣品固定，再通過一組遞增系列的乙醇來脫水，浸潤，用石蠟或其它切片基質(zhì)包埋，使組織樣品得以切片?；蛘?，可以對組織進行切片并將所得切片固定。例如，可通過常規(guī)方法在石蠟中包埋并處理組織樣品。可以使用的石蠟的實例包括，但不限于，Paraplast, Broloid和Tissuemay。一旦將組織樣品包埋后,可以用切片機等對組織進行切片。例如，切片厚度可以是3 — 5i!m不等。一旦切好，可以用數(shù)種標準方法將切片貼在載玻片上。載玻片粘合劑的實例包括，但不限于，硅烷，明膠，聚-L-賴氨酸等。例如，石蠟包埋的切片可以粘附在帶正電或包被了聚-L-賴氨酸的載玻片上。如果用石蠟作為包埋的材料，通常將組織切片脫蠟，然后在水中重新水合。組織切片可以通過多種常規(guī)方法脫蠟。例如，可以用二甲苯和逐漸遞減系列的乙醇?；蛘?，可以使用市售非-有機脫蠟劑如Hemo_De7 (CMS, Houston, Texas)。原位熒光雜交(FISH)原位熒光雜交通常在固定于載玻片上的細胞或組織切片上進行。原位雜交可以用多種常規(guī)方法實現(xiàn)(參見，例如，Leitch等，In Situ Hybridization:A PracticalGuide, Oxford BIOS Scientific Publishers, Micropscopy Handbooks v.27 (1994))。在一種原位雜交方法中，使用熒光染料(如異硫氰酸熒光素(FITC)，在氬離子激光器激發(fā)下發(fā)出綠色熒光)對與細胞中靶核苷酸序列互補的核酸序列探針進行標記。含有該靶核苷酸序列的每一細胞將與標記的探針結(jié)合，通過將細胞暴露于具有適合激發(fā)所用特定熒光染料的波長的光源之下，產(chǎn)生熒光信號。“靶核苷酸序列”是過度表達的腫瘤抗原，如ErbB的特異性序列。FISH分析可以與其它分析聯(lián)合使用，所述其它分析包括，但不限于，形態(tài)學染色(針對一系列切片或相同切片；參見WO 00/20641，特別引入本文作為參考)?？梢岳貌煌碾s交嚴格度。雜交條件越嚴格，探針與靶形成并維持穩(wěn)定雙鏈體所需的互補程度越高。嚴格度可以通過提高溫度、降低濃度或提高甲酰胺濃度來增強。添加葡聚糖或提高取濃度也可以增加標記探針的有效濃度，從而提高雜交率并增加極限信號強度。雜交后，洗滌載玻片所用溶液通常含有類似于雜交溶液中成分的試劑，洗滌時間從數(shù)分鐘至數(shù)小時不等，這取決于所需嚴格度。較長時間或較嚴格的洗滌通常降低非特異性本底，但有降低總體敏感性的危險。FISH分析中使用的探針可以是RNA或DNA寡核苷酸或多核苷酸，而且它不僅可以包含天然核苷酸，還可以包含它們的類似物如地高辛配基dCTP，生物素dcTP 7-氮鳥苷，疊氮胸苷，肌苷，或尿苷。其它有效探針包括肽探針及其類似物，分支基因DNA，peptidometics,肽核酸(PNA),和 / 或抗體。探針應(yīng)與靶核酸序列有足夠的互補性，使靶核酸序列與該探針能夠穩(wěn)定而特異性地結(jié)合。穩(wěn)定雜交所需的同源性程度因雜交基質(zhì)和/或洗滌基質(zhì)的嚴格度不同而不同。本發(fā)明優(yōu)選應(yīng)用完全同源的探針，但本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，本發(fā)明也可以使用表現(xiàn)出較小但足夠的同源性的探針(參見，例如，Sambrook, J.，等，Molecular Cloning ALaboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, (1989))。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到，對探針的選擇取決于靶基因的特性。擴增的實例包括，但不限于，乳腺癌和卵巢癌中的her2/neu，神經(jīng)母細胞瘤中的n_myc，小細胞肺癌中的c-myco例如,評估her2/neu擴增,可以使用下述探針,它跨越了含有her2/neu基因的17號染色體長臂上一段140kb的區(qū)域(17q 11. 2-17ql2)。針對17號染色體著絲粒區(qū)域中-衛(wèi)星序列(D1721)的探針可以用于評估17號染色體作為herf/neu擴增的發(fā)源地或起因的 aneusomy。例如,可以從Vysis, Inc.獲得這些探針的混合物,其中每種探針直接用容易區(qū)別的熒光染料標記，如 SPECTRUM 0RANGE7 和 SPECTRUM GREEN7。也可以通過如下多種方式制備并選擇探針，它們包括，但不限于，頸原位雜交而作圖，體細胞雜合體分組(panel)，對分選的染色體進行斑點印跡；染色體連鎖分析；或者從來自人類細胞系或帶有人類染色體之體細胞雜合體的分選的染色體庫克隆并分離，對體細胞雜合體進行放射處理，對染色體區(qū)域進行顯微解剖，或者用特異于唯一染色體座位的PCR引物從酵母人工染色體(YAC)中鑒定出，或者利用其它合適的方式如鄰接的YAC克隆。探針可以是克隆在質(zhì)粒、噬菌體、粘粒、YAC、細菌人工染色體(BAC)、病毒載體或任何其它合適的載體上的基因組DNA，cDNA，或RNA。也可以通過常規(guī)方法克隆或化學合成探針?？寺『?，通常將分離的探針核酸片段插入載體，如A噬菌體、PBR322、M13、或者含有SP6或17啟動子的載體中，并作為文庫克隆在細菌宿主中(參見，例如，Sambrook,同上)。優(yōu)選將探針用熒光團標記。熒光團的實例包括，但不限于，稀土金屬螯合物(銪螯合物)，Texas Red,羅丹明，突光素,丹磺酰,麗絲胺,傘形酮,藻紅蛋白(phycocrytherin),藻藍蛋白，或市售熒光團如SPECTRUM 0RANGE7和SPECTRUM GREEN7，和/或上述一或多種的衍生物。試驗中使用的多種探針可以用一種以上不同的熒光色或色素色標記。這些色彩差異為鑒定特異性探針的雜交位置提供了一種方式。此外，空間上未被分隔的探針可以用一種不同的彩色光或色素來鑒別，或者用一組濾光器來鑒別，所述彩色光或色素來自另外兩種色彩(如紅光+綠光=黃光)，色素(如藍+黃=綠)，所述一組濾光器一次僅允許一種色彩通過。探針可以通過常規(guī)方法用熒光團進行直接或間接標記。可以添加其它探針和色彩，使這一通用方法更精細化，并擴展至包括更多的遺傳異常或作為內(nèi)部對照。例如，her2/neu基因位于第17號染色體上，可以使用特異于17號染色體的衛(wèi)星序列(D17Z1)的探針(Vysis，Inc.)作為內(nèi)部對照，以便在非-惡性細胞的區(qū)域中提供雙鏈體，和/或確定在her2/neu擴增區(qū)域中是否存在第17號染色體的同體異數(shù)。為了進行FISH，載玻片經(jīng)加工后，可以通過熒光顯微鏡的標準技術(shù)進行分析(參見，例如，Ploem and Tanke, Introduction to Fluorescence Microscopy, OxfordUniversity Press:New York(1987))。簡言之,用配備有相應(yīng)激發(fā)濾光器、雙色和吸收濾光器(barrier filters)的顯微鏡觀察每一載玻片。根據(jù)所用熒光染料的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜來選擇濾光器。根據(jù)所用的熒光標記、信號強度以及所選的濾光器而選擇曝光一定時間，對載玻片拍照。為了進行FISH分析，對在形態(tài)學分析中確定的目標細胞的物理位置進行記錄(recall)，并目測證實其為適于FISH定量的區(qū)域。為了將IHC與FISH聯(lián)系起來，可以使用計算機控制的驅(qū)動平臺，它存儲組合坐標(co-ordinates)的位置。這可以用于通過兩種不同的分析技術(shù)來評估相同區(qū)域。例如，可以用配備了計算機的冷色CCD照相機來捕捉形態(tài)學染色區(qū)域的彩色圖像并儲存。同樣的切片然后經(jīng)歷FISH過程，記錄存儲的位置，對指定區(qū)域評分以判定是否存在熒光核信號。還考慮了一種類似的IHC過程，其后為FISH。通常，對組織樣品中成百的細胞進行掃描，確定特異性靶核酸序列的量，它們表現(xiàn)為相對于細胞數(shù)的熒光斑點計數(shù)。細胞只斑點數(shù)相對于正常值(norm)的偏差(如，探測正常細胞中的herf/neu基因?qū)⒌玫絻蓚€拷貝，異常情況則比兩個還多)指示，從腫瘤抗原特異性抗體治療，如ErbB拮抗劑治療受益的可能性較高。如下文所述，her2基因擴增能更有 效地指示抗-HER2抗體治療有效的可能性。藥物制劑根據(jù)本發(fā)明使用的拮抗劑(抗體)的藥用制劑通過將具有所需純度的抗體與任選的藥用載體、賦形劑或穩(wěn)定劑(雷氏藥學(Remington，sPharmaceutical Sciences)第16版，0sol，A.編(1980))混合而制備，然后以凍干劑或含水溶液的形式保存?？捎玫妮d體、賦形劑、穩(wěn)定劑在所用劑量及濃度下對受者無毒性，包括緩沖劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其它有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和蛋氨酸；防腐劑(例如十八烷基二甲基芐基氯化銨；氯化己燒雙胺；氯化節(jié)燒銨(benzalkonium chloride),苯索氯銨；酹、丁醇或苯甲醇；燒基對羥基苯甲酸酯，如甲基或丙基對羥基苯甲酸酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；間甲酚)；低分子量多肽(少于約10個殘基)；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白，明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖，二糖及其它碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合劑，如EDTA ;糖類，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反離子，如鈉；金屬復(fù)合物(例如鋅-蛋白復(fù)合物)；和/或非離子表面活性劑如吐溫 ，PLUR0NICS 或聚乙二醇(PEG)。W097/04801敘述了優(yōu)選的凍干型抗ErbB2抗體劑型，在此引入本文作為參考。所述制劑還可根據(jù)所治療的具體情況而包含一種以上活性化合物，優(yōu)選具有互補活性但相互無負面影響的那些。例如，可能需要在一種制劑中進一步提供與EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4或血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)結(jié)合的抗體，或者結(jié)合ErbB上不同表位的抗體?；蛘?或另外)，所述組合物可進一步包括細胞毒制劑、化療劑、細胞因子、生長抑制劑和/或心臟保護劑。這些分子以對所需目的有效的總量在組合中適當?shù)卮嬖??；钚猿煞忠部扇菁{在通過凝聚技術(shù)或界面聚合作用制備的微膠囊中，如分別在膠體性質(zhì)的藥物運送系統(tǒng)(如脂質(zhì)體，白蛋白微珠，微乳劑，納米顆粒及納米膠囊)或大乳劑(macroemulsions)的羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(異丁烯酸甲酯)微膠囊。這些技術(shù)見雷氏藥學，第16版Osol，A.編(1980)。用于體內(nèi)給藥的制劑優(yōu)選是無菌的，用于人體則必須是無菌的。這可以通過除菌濾膜過濾而輕易實現(xiàn)。也可制備控釋制劑。控釋制劑的適當實例包括含有所述抗體的固態(tài)疏水聚合物的半通透性基質(zhì)，所述基質(zhì)為具有一定形狀的制品，如膜或微膠囊。控釋制劑實例包括聚酯、水凝膠(如聚(2-羥基乙基-異丁烯酸酯)或聚(乙烯醇)，聚交酯(美國專利3，773，919)，L-谷氨酸與Y乙基-L-谷氨酸酯的共聚物，不可降解的乙烯乙酸乙酯，可降解的乳酸-羥基乙酸共聚物如LUPRON DEPOT (由乳酸-羥基乙酸共聚物和亮氨酰脯氨酸(leuprolide)乙酸酯組成的可注射的微球體)，以及聚D-(-)-3-羥丁酸。盡管聚合物如乙烯-乙酸乙酯和乳酸-羥基乙酸能持續(xù)釋放分子100天以上，但是某些水凝膠釋放蛋白的時間卻較短。當膠囊化的抗體長時間停留在體內(nèi)時，它們會由于暴露在37°C潮濕環(huán)境下而變性或凝聚，從而導(dǎo)致生物活性損失，且免疫原性可能會改變?？梢愿鶕?jù)有關(guān)機理來設(shè)計穩(wěn)定化的合理策略。例如，如果發(fā)現(xiàn)凝聚的機理是通過硫代二硫鍵互換而形成了分子間S-S鍵，則可通過修飾巰基殘基、從酸性溶液中凍干、控制濕度、采用合適的添加劑和開發(fā)特殊的聚合物基質(zhì)組合物來達到穩(wěn)定化。用抗ErbB拮抗劑進行的治療 根據(jù)本發(fā)明，抗ErbB抗體或其它拮抗劑可用于治療，那些被發(fā)現(xiàn)有擴增的erbB基因的患者中，以ErbB受體過度表達和/或活化為特征的各種病癥。病癥的實例包括良性或惡性腫瘤(如腎(renal)癌、肝癌、腎(kidney)癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepatic carcinoma);肉瘤；惡性膠質(zhì)瘤和各種類型的頭頸部癌癥)；白血病和淋巴的惡性疾??；其它疾病,如神經(jīng)細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞、星形膠質(zhì)細胞、下丘腦、腺體、巨噬細胞、上皮、基質(zhì)和囊胚腔的病癥，炎癥性、血管生成性和免疫性的病癥?？筛鶕?jù)已知的方法將本發(fā)明的抗體、化療及和任何其它活性制劑施用于病人，所述方法例如，經(jīng)快速灌注或一定期間的持續(xù)輸注方式的靜脈給藥，經(jīng)肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜腔內(nèi)、鞘內(nèi)、口服、局部或吸入途徑給藥。優(yōu)選靜脈或皮下施用抗體。在一個實施方案中，本發(fā)明的治療涉及將抗ErbB抗體與化療劑(如taxoid)聯(lián)合給藥。本發(fā)明涉及不同化療劑的混合物的給藥。聯(lián)合給藥包括共同給藥(使用分離的制劑或單一藥物制劑)和以任何次序聯(lián)貫給藥，其中優(yōu)選有一段時間為兩種(或所有)活性制劑同時發(fā)揮它們的生物活性。這些化療劑的制劑和劑量方案，可根據(jù)生產(chǎn)商的說明書來使用，或者根據(jù)專業(yè)醫(yī)師的實踐經(jīng)驗來確定。這類化療的制劑和給藥分案亦參見Chemotherapy Service Ed. , M. C. Perry, Williams 和 Wilkins, Baltimore, MD(1992)?；焺┛稍诮o予抗體之前、之后或同時給予?？贵w可以與抗雌激素化合物(如他莫昔芬)或抗黃體酮(如onapristone)按照這些分子的已知劑量聯(lián)合用藥(見EP 616812)。除了上述治療方案外，患者可以接受癌癥細胞的手術(shù)切除(腫瘤切除術(shù))和/或放射治療。進行疾病的預(yù)防或治療時，拮抗劑(如抗體)的適當劑量取決于所治疾病的類型(如上所述)，疾病的嚴重程度和進程，抗體給藥的目的是預(yù)防還是治療，先前的治療，患者的臨床病史和對抗體的應(yīng)答，以及主治醫(yī)生的判斷?？贵w適宜一次性地或在一系列治療中施用于患者。根據(jù)受治疾病的類型和嚴重程度，施用于患者的抗體的起始候選劑量是約I U g/kg 15mg/kg(如0. l-20mg/kg),無論是例如通過一次或分多次給藥,還是通過連續(xù)輸注給藥都是如此。依據(jù)上述因素，典型的每日劑量為約lug/kg 100mg/kg或更多。關(guān)于重復(fù)給藥數(shù)天或更長時間，應(yīng)視具體情況而將治療持續(xù)至出現(xiàn)對疾病癥狀的所需抑制為止。但也可以應(yīng)用其它劑量方案。治療的進展很容易通過常規(guī)技術(shù)和試驗來監(jiān)測。藥物包；制品本發(fā)明的相關(guān)方面提供了含用于治療上述疾病的物質(zhì)的制品。所述制品包括一個容器，任選帶有標簽和包裝插頁。適當?shù)娜萜靼ǎ?，瓶子，小瓶，注射器等。容器可由各種材料如玻璃或塑料制成。該容器可內(nèi)含一種能有效治療所述疾病的組合物，并優(yōu)選具有無菌存取口(例如該容器可以是靜脈溶液袋或帶有能通過皮下注射針穿刺的塞子的小瓶)。組合物中至少一種活性試劑是抗腫瘤抗原的治療性抗體或ErbB拮抗劑，例如抗-ErbB抗體。位于或附著于該容器上的標簽說明所述組合物可用于治療指定的疾病。而且，所述制品還包括第二個容器，它含有可藥用緩沖液，如磷酸鹽緩沖液，Ringer’ s溶液和葡萄糖溶液。所述第二種緩沖液可以用于重建凍干形式或干粉形式的活性試劑，或者用于稀釋活性試劑的濃縮制品。它還可以包括其它有商業(yè)需要或有利于用戶的物質(zhì)，包括其它緩沖劑、稀釋劑、濾膜、針和注射器。 此外，所述制品包含包裝插頁或插頁，可以指導(dǎo)如何在經(jīng)FISH檢驗有erbB基因擴增的患者中使用。這樣的患者可以是，經(jīng)IHC檢驗被排除在ErbB拮抗劑治療范圍以外的受試者，例如，用抗-HER2抗體評分為0或1+的患者。本發(fā)明的更詳細情況參照以下非限制性實施例舉例說明。實施例I:臨床試驗(Trial)分析(CTA)與原位熒光雜交(FISH)在Herceptin 關(guān)鍵性試驗(Pivotal Trial)中的一致性通過免疫組化(IHC)的測定，HER2的過度表達能達到2+或3+水平，這是被納入
關(guān)鍵性Herceptin' 轉(zhuǎn)移性乳腺癌試驗中的必要條件。臨床測試分析(CTA)包括用單克
隆抗體4D5(在用蛋白酶對福爾馬林固定的樣品進行消化后)或CB 11 (在對福爾馬林固定的樣品加熱處理后)進行的兩種IHC分析。如果受試者在任一項分析中的評分為2+或3+，則為合格。如果進行了上述兩項試驗，則最終評分要高于這兩個結(jié)果。CTA與另一種IHC, Herc印Test (HT)，的一致性是79 %。這是FDA批準HT用于輔助挑選接受Herceptin治療的患者的基礎(chǔ)。本實施例描述了一項類似的利用臨床材料進行的一致性研究，這些材料是送交篩選以備進行Herceptin 關(guān)鍵性試驗的，該項研究比較了 CTA與通過PathVysion FISH分析測定的her2/neu基因的擴增。在這些關(guān)鍵性試驗中，篩選了 5998例受試者的HER2表達；1915例(32% )為CTA陽性，4083例(68% )為陰性。隨機取623份標本(陽性陰性為I: I)進行該項分析，317例為CTA+，306例為CTA-。標本并非從組織塊新鮮切除的。它們是載玻片上4-6 ii的切片，已經(jīng)保存了 2 — 4年。用PathVysion的包裝插頁中明示的方案分析每一切片herf/neu的擴增。將擴增限定為大于或等于2的信號比。結(jié)果見表I。表1-FISH/CTA —致性
權(quán)利要求
1.一種增加ErbB拮抗劑癌癥治療有效性的可能性的方法，該方法包括給予受試者癌癥治療劑量的ErbB拮抗劑，所述受試者是已發(fā)現(xiàn)其組織樣品的腫瘤細胞中erbB基因被擴增的那些受試者。
2.權(quán)利要求I的方法，其中所述ErbB是HER2蛋白。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述癌癥是乳腺癌。
4.ー種增加抗-HER2抗體有效治療癌癥的可能性的方法，該方法包括給予受試者癌癥治療劑量的杭-HER2抗體，所述受試者是已發(fā)現(xiàn)其組織樣品的腫瘤細胞中her2基因被擴增的那些受試者。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述受試者，經(jīng)過其被甲醛固定的組織樣品的免疫組化分析，被評分為O或I+。
6.權(quán)利要求4的方法，其還包括給予癌癥治療劑量的紫杉醇。
7.一種藥物包，包括 (a)—容器,含有用于治療癌癥的ErbB拮抗劑；和 (b)向那些在其組織樣品的腫瘤細胞中erbB基因已擴增的患者給予ErbB拮抗劑的說明。
8.權(quán)利要求7的藥物包，其中所述ErbB拮抗劑是ー種抗體。
9.ー種鑒定下述患者的方法，所述患者經(jīng)處置能優(yōu)先應(yīng)答用于治療癌癥的ErbB拮抗齊U，所述方法包括檢測該患者組織樣品的腫瘤細胞中erbB基因的擴增。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述受試者，經(jīng)過其被甲醛固定的組織樣品的免疫組化分析，被評分為O或I+。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于提高對ErbB拮抗劑癌癥治療的有效應(yīng)答可能性的基因檢測試驗。本發(fā)明提供了一種用ErbB拮抗劑更有效治療患者的方法，所述患者通過用基因擴增分析被確定為易患或已患過度表達ErbB的腫瘤。這樣的方法包括對受試者給予癌癥治療劑量的ErbB拮抗劑，優(yōu)選還給予化療制劑，所述受試者經(jīng)諸如熒光原位雜交等發(fā)現(xiàn)，其腫瘤細胞的ErbB有擴增。所述ErbB拮抗劑包括抗HER2抗體。本發(fā)明還提供了能為所述治療提供成分的藥物包。
文檔編號A61K38/00GK102698265SQ20121014172
公開日2012年10月3日 申請日期2001年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月19日
發(fā)明者羅伯特.D.馬斯 申請人:杰南技術(shù)公司