本發(fā)明屬于中藥的檢測方法，涉及一種方便、快速的穿心蓮藥材或其制劑的檢測方法。

背景技術(shù)：
目前，穿心蓮藥材質(zhì)量評價研究中最常用的方法是單一指標或主要指標成分的中藥質(zhì)量優(yōu)劣控制，穿心蓮藥材中成分的復(fù)雜性導(dǎo)致這種方法不能代表對藥材的質(zhì)量控制，也不能保證藥材的質(zhì)量(王紅，張學東.穿心蓮藥材及穿心蓮片的質(zhì)量標準探討[J].西北藥學雜志，2002，17(2)：63-64.)。而中藥指紋圖譜能夠比較全面地反映中藥所含物質(zhì)群的種類和數(shù)量，可以提供更多與中藥內(nèi)在質(zhì)量相關(guān)的信息，但應(yīng)該看到，指紋圖譜的模糊性和不可量化等因素同樣限制了質(zhì)量標準的科學性，尚存在許多關(guān)鍵問題(蔣珍藕，饒偉源.穿心蓮藥材的HPLC指紋圖譜研究[J].中國實驗方劑雜志學，2008，14(3)：6-7)。多指標定量控制的模式必需有大量的中藥化學對照品，由于這些化學對照品在分離純化上困難、或不穩(wěn)定、供應(yīng)價格高、市場機制不健全等因素，致使中藥化學對照品的供應(yīng)嚴重不足，因此，目前該模式很大程度上也僅限于科研用，難以應(yīng)用到實際的質(zhì)量監(jiān)督和評價上。一測多評的基本設(shè)計思想通過中藥有效成分間存在的內(nèi)在函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系，僅測定1個成分(對照品可以得到者)，來實現(xiàn)多個成分(對照品沒有或難以供應(yīng))的同步監(jiān)控。據(jù)文獻調(diào)研，一測多評模式在木通、人參、黃連、淫羊藿、大黃、黃芩等等多種藥材的多成分同步測定得到了良好的應(yīng)用。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
鑒于針對多指標質(zhì)量控制中對照品供應(yīng)不足問題，本發(fā)明的目的是通過采用“一測多評”的質(zhì)量評價模式，只需要穿心蓮內(nèi)酯這一種對照品實現(xiàn)同步測定穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元的含量。在缺乏新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元對照品的情況下，本發(fā)明的穿心蓮藥材或其制劑的檢測方法可以作為多指標含量測定方法用于中藥的質(zhì)量評價。除非另外說明，在本發(fā)明中，提取溶劑百分比以及色譜條件中各流動相百分比均為體積比。本發(fā)明提供穿心蓮藥材或其制劑的檢測方法，包括采用高效液相色譜法建立穿心蓮藥材或其制劑的色譜圖，以穿心蓮內(nèi)酯為內(nèi)標，運用新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元各自與所述穿心蓮內(nèi)酯的相對校正因子計算得出新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元中一種以上成分的含量。優(yōu)選地，在本發(fā)明穿心蓮藥材或其制劑的檢測方法中，所述新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯或新穿心蓮內(nèi)酯苷元的含量的計算公式如下：含量(mg/g)＝(CS/W)×(AU/AS)×V×D×FCS穿心蓮對照品的濃度(mg/mL)；W樣品取樣量(g)；AU樣品中其他內(nèi)酯類成分的峰面積；AS穿心蓮內(nèi)酯對照品的峰面積；V提取溶劑的體積(mL)；D稀釋倍數(shù)；F相對校正因子；其中相對校正因子F的計算公式如下：式中，AS為穿心蓮內(nèi)酯對照品的峰面積，WS為穿心蓮內(nèi)酯對照品的濃度或質(zhì)量，AK為某待測成分的峰面積；WK為某待測成分的濃度或質(zhì)量。優(yōu)選地，在本發(fā)明穿心蓮藥材或其制劑的檢測方法中，所述新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元的相對校正因子范圍分別為0.5-15、0.5-15、0.1-5、0.5-15。優(yōu)選地，所述新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元的相對校正因子分別為1.150±0.30、0.779±0.30、0.721±0.30、2.41±0.30。特別優(yōu)選地，所述新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元的相對校正因子分別為1.150±0.15、0.779±0.15、0.721±0.15、2.41±0.15。優(yōu)選地，在本發(fā)明穿心蓮藥材或其制劑的檢測方法中，樣品測定時，穿心蓮藥材或其制劑用甲醇或乙醇的水溶液浸泡0-1小時，超聲處理0-1小時，定容，過濾，取濾液，然后進行高效液相色譜分析。優(yōu)選地，所述甲醇或乙醇的水溶液為10-100％v/v甲醇或乙醇水溶液。優(yōu)選地，所述超聲處理為0-0.5小時。優(yōu)選地，所述高效液相色譜的色譜條件為：十八烷基鍵合硅膠為固定相；連續(xù)梯度洗脫，流動相A為乙腈；流動相B為水或稀酸水溶液；0min時，流動相A為10-40％，流動相B為90-60％；40-70min時，流動相A為20-60％，流動相B為80-40％；70min以后，流動相A為60-100％，流動相B為40-0％；流動相流速為0.5-2mL/min；檢測波長為190-400nm；柱溫為0-50℃。優(yōu)選地，所述高效液相色譜的色譜條件為：十八烷基鍵合硅膠為固定相；連續(xù)梯度洗脫，流動相A為乙腈；流動相B為水或稀酸水溶液；0min時，流動相A為20％，流動相B為80％；50-60min時，流動相A為40％，流動相B為60％；65-75min時，流動相A為65％，流動相B為35％；流動相流速為1mL/min；檢測波長為200-230nm；柱溫為0-30℃。優(yōu)選地，所述的流動相B的稀酸水溶液包括甲酸水溶液、磷酸水溶液和冰醋酸水溶液；優(yōu)選所述稀酸水溶液濃度為0.05-0.5％v/v；更為優(yōu)選所述磷酸水溶液濃度為0.2％v/v。特別優(yōu)選地，所述高效液相色譜的色譜條件為：十八烷基鍵合硅膠為固定相；連續(xù)梯度洗脫，流動相A為乙腈；流動相B為水；0min時，流動相A為20％，流動相B為80％；55min時，流動相A為40％，流動相B為60％；70min時，流動相A為65％，流動相B為35％；流動相流速為1mL/min；檢測波長為200-210nm或220-230nm；柱溫為10℃。更為優(yōu)選地，上述檢測波長為205nm或225nm。優(yōu)選地，在本發(fā)明穿心蓮藥材或其制劑的檢測方法中，所述制劑包括固體制劑、半固體制劑和液體制劑。優(yōu)選地，所述制劑選自片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、注射劑、軟膏劑。本發(fā)明采用穿心蓮內(nèi)酯一個對照品實現(xiàn)同步測定穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元的含量，重復(fù)性高，穩(wěn)定性好，操作簡單方便，且科學有據(jù)，能有效的控制穿心蓮藥材及其制劑的質(zhì)量。本發(fā)明穿心蓮藥材或其制劑的檢測方法，能為穿心蓮藥材和制劑的多成分質(zhì)量評價提供低成本的、可操作性強的質(zhì)量評價方法，能保證穿心蓮藥材和制劑的質(zhì)量可靠穩(wěn)定，降低檢測成本，提高檢測效率等。附圖的簡要說明以下，結(jié)合附圖來詳細說明本發(fā)明的實施方案，其中：圖1.穿心蓮對照品HPLC圖；圖2.穿心蓮藥材的HPLC圖(圖中1：穿心蓮內(nèi)酯、2：新穿心蓮內(nèi)酯、3：去氧穿心蓮內(nèi)酯、4：脫水穿心蓮內(nèi)酯、5：新穿心蓮內(nèi)酯苷元)；圖3.消炎利膽片的HPLC圖；圖4.穿心蓮膠囊的HPLC圖；圖5.穿心蓮?fù)璧腍PLC圖；圖6.穿心蓮注射液的HPLC圖。實施發(fā)明的最佳方式下面結(jié)合如下實施例對本發(fā)明做更進一步的詳細說明。儀器：高效液相色譜儀(DIONEXSUMMITP680高效液相色譜儀，美國戴安公司)，十八烷基鍵合硅膠柱(250mm×4.6mm，5μm)；中性氧化鋁柱(200～300目，5g，內(nèi)徑1.5cm)。樣品：穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品(購于中國藥品生物制品檢定所)；新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯對照品(購于南京替斯艾么中藥技術(shù)研究所，純度≥98％)；新穿心蓮內(nèi)酯苷元對照品(購于ChromaDex公司，純度≥98％)；穿心蓮藥材(廣州白云山和記黃埔中藥有限公司)；消炎利膽片(廣州白云山和記黃埔中藥有限公司)；穿心蓮膠囊(天津美倫醫(yī)藥集團有限公司)；穿心蓮?fù)鑴?廣西玉林制藥有限責任公司)；穿心蓮注射液(海南制藥廠有限公司)。除非另外說明，在下列實施例中，提取溶劑百分比以及色譜條件中各流動相百分比均為體積比。實施例1取穿心蓮藥材粉末(過四號篩)約0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶，精密加入40％甲醇50mL，稱定重量，浸泡1小時，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用40％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液過0.45μm濾膜，取濾液10μL進樣。取穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，置于容量瓶中，加甲醇制成每1mL含有0.1mg的對照品溶液，取對照品溶液過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液10μL進樣。高效液相色譜法的色譜條件是：采用十八烷基鍵合硅膠為固定相：用連續(xù)梯度洗脫，流動相A為乙腈；流動相B為水；連續(xù)梯度洗脫程序如下：0min時，流動相A為20％，流動相B為80％；55min時，流動相A為40％，流動相B為60％；70min時，流動相A為65％，流動相B為35％；流速為1mL/min；檢測波長為205nm；柱溫為10℃。分別得到穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元的峰面積。按以下公式計算藥材中穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯苷元的含量。公式：含量(mg/g)＝(CS/W)×(AU/AS)×50FCS穿心蓮對照品的濃度(mg/mL)；W樣品取樣量(g)；AU樣品中其他內(nèi)酯類成分的峰面積；AS穿心蓮內(nèi)酯對照品的峰面積；F相對校正因子(穿心蓮內(nèi)酯1、新穿心蓮內(nèi)酯1.150、去氧穿心蓮內(nèi)酯0.779、脫水穿心蓮內(nèi)酯0.721、新穿心蓮內(nèi)酯苷元2.41)。穿心蓮混合對照品和穿心蓮藥材的HPLC結(jié)果如圖1和2所示。取10批穿心蓮藥材樣品分別測定了10次，結(jié)果見表1，誤差均在10％以內(nèi)的范圍。表110批穿心蓮藥材含量測定結(jié)果比較實施例2取消炎利膽片10片，除去包衣，精密稱定，研細，取約0.4g，精密稱定，置10mL容量瓶中，精密加入70％甲醇至刻度，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用70％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液過0.45μm濾膜，取濾液10μL進樣。取穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，置于容量瓶中，加甲醇制成每1mL含有0.1mg的對照品溶液，取對照品溶液過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液10μL進樣。高效液相色譜法的色譜條件是：采用十八烷基鍵合硅膠為固定相：用連續(xù)梯度洗脫，流動相A為乙腈；流動相B為0.2％v/v磷酸溶液；連續(xù)梯度洗脫程序如下：0min時，流動相A為20％，流動相B為80％；55min時，流動相A為40％，流動相B為60％；70min時，流動相A為85％，流動相B為15％；流速為1mL/min；檢測波長為205nm；柱溫為室溫。分別得到穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的峰面積。按以下公式計算藥材中穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。公式：含量(mg/g)＝(CS/W)×(AU/AS)×10FCS穿心蓮對照品的濃度(mg/mL)；W樣品取樣量(g)；AU樣品中其他內(nèi)酯類成分的峰面積；AS穿心蓮內(nèi)酯對照品的峰面積；F相對校正因子(穿心蓮內(nèi)酯1、新穿心蓮內(nèi)酯1.150、去氧穿心蓮內(nèi)酯0.779、脫水穿心蓮內(nèi)酯0.721)。取10批消炎利膽片樣品分別測定了10次，結(jié)果見表2，誤差均在10％以內(nèi)的范圍。表210批消炎利膽片含量測定結(jié)果比較實施例3取穿心蓮膠囊裝量差異項下的內(nèi)容物，研細，取約0.5g，精密稱定，置25mL容量瓶中，精密加入40％甲醇至刻度，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用40％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液過0.45μm濾膜，取濾液10μL進樣。取穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，置于容量瓶中，加甲醇制成每1mL含有0.1mg的對照品溶液，取對照品溶液過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液10μL進樣。高效液相色譜法的色譜條件是：采用十八烷基鍵合硅膠為固定相：用連續(xù)梯度洗脫，流動相A為乙腈；流動相B為0.2％v/v磷酸溶液；連續(xù)梯度洗脫程序如下：0min時，流動相A為20％，流動相B為80％；55min時，流動相A為40％，流動相B為60％；70min時，流動相A為85％，流動相B為15％；流速為1mL/min；檢測波長為205nm；柱溫為室溫。分別得到穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的峰面積。按以下公式計算藥材中穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。公式：含量(mg/g)＝(CS/W)×(AU/AS)×25FCS穿心蓮對照品的濃度(mg/mL)；W樣品取樣量(g)；AU樣品中其他內(nèi)酯類成分的峰面積；AS穿心蓮內(nèi)酯對照品的峰面積；F相對校正因子(穿心蓮內(nèi)酯1、新穿心蓮內(nèi)酯1.150、去氧穿心蓮內(nèi)酯0.779、脫水穿心蓮內(nèi)酯0.721)。取10批穿心蓮膠囊樣品分別測定了10次，結(jié)果見表3，誤差均在10％以內(nèi)的范圍。表310批穿心蓮膠囊含量測定結(jié)果比較實施例4取穿心蓮?fù)鑴┻m量，粉碎，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60％乙醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用60％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取濾液過0.45μm濾膜，取濾液10μL進樣。取穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，置于容量瓶中，加甲醇制成每1mL含有0.1mg的對照品溶液，取對照品溶液過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液10μL進樣。高效液相色譜法的色譜條件是：采用十八烷基鍵合硅膠為固定相：用連續(xù)梯度洗脫，流動相A為乙腈；流動相B為水；連續(xù)梯度洗脫程序如下：0min時，流動相A為20％，流動相B為80％；55min時，流動相A為40％，流動相B為60％；70min時，流動相A為65％，流動相B為35％；流速為1mL/min；檢測波長為205nm；柱溫為10℃。分別得到穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的峰面積。按以下公式計算藥材中穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。公式：含量(mg/g)＝(CS/W)×(AU/AS)×25FCS穿心蓮對照品的濃度(mg/mL)；W樣品取樣量(g)；AU樣品中其他內(nèi)酯類成分的峰面積；AS穿心蓮內(nèi)酯對照品的峰面積；F相對校正因子(穿心蓮內(nèi)酯1、新穿心蓮內(nèi)酯1.150、去氧穿心蓮內(nèi)酯0.779、脫水穿心蓮內(nèi)酯0.721)。取10批穿心蓮?fù)鑴悠贩謩e測定了10次，結(jié)果見表4，誤差均在10％以內(nèi)的范圍。表410批穿心蓮?fù)鑴┖繙y定結(jié)果比較實施例5精密量取穿心蓮注射液2.00mL，置中性氧化鋁柱(200～300目，5g，內(nèi)徑1.5cm)上，用甲醇80mL洗脫，收集洗脫液于100mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL于50mL量瓶中，加甲醇至刻度(即稀釋倍數(shù)為10倍)，搖勻，濾過，取濾液過0.45μm濾膜，取濾液10μL進樣。取穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，置于容量瓶中，加甲醇制成每1mL含有0.1mg的對照品溶液，取對照品溶液過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液10μL進樣。高效液相色譜法的色譜條件是：采用十八烷基鍵合硅膠為固定相：用連續(xù)梯度洗脫，流動相A為乙腈；流動相B為0.2％v/v磷酸溶液；連續(xù)梯度洗脫程序如下：0min時，流動相A為20％，流動相B為80％；55min時，流動相A為40％，流動相B為60％；70min時，流動相A為65％，流動相B為35％；流速為1mL/min；檢測波長為205nm；柱溫為10℃。分別得到穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的峰面積。按以下公式計算藥材中穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。公式：含量(mg/g)＝(CS/W)×(AU/AS)×100×10×FCS穿心蓮對照品的濃度(mg/mL)；W樣品取樣量(g)；AU樣品中其他內(nèi)酯類成分的峰面積；AS穿心蓮內(nèi)酯對照品的峰面積；F相對校正因子(穿心蓮內(nèi)酯1、新穿心蓮內(nèi)酯1.150、去氧穿心蓮內(nèi)酯0.779、脫水穿心蓮內(nèi)酯0.721)。取10批穿心蓮注射液樣品分別測定了10次，結(jié)果見表5，誤差均在10％以內(nèi)的范圍。表510批穿心蓮注射液含量測定結(jié)果比較以上僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出的是，上述優(yōu)選實施方式不應(yīng)視為對本發(fā)明的限制，本發(fā)明的保護范圍應(yīng)當以權(quán)利要求所限定的范圍為準。