專利名稱：Xanthanodien抗癌癥的治療用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及過度增生細(xì)胞分裂有關(guān)的疾病治療。特別地，本發(fā)明涉及的化合物和組合物用于治療與過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)的疾病，特別是癌癥，尤其是卵巢癌。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包括新的抗癌劑的藥物組合物，涉及與過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)的疾病的治療或預(yù)防方法和涉及抑制細(xì)胞增殖的方法。
背景技術(shù)：
盡管密集的研究和開發(fā)抗癌的藥物，癌癥依然還是在取人命。每一年在世界各地有超過I千萬人被診斷患有癌癥，且據(jù)估計(jì)到2030年，這個(gè)數(shù)字可能會(huì)增加多達(dá)2千個(gè)的新病例。最近特別是婦女的肺癌和乳癌的發(fā)病率一直在上升而卵巢癌在婦科惡性腫瘤當(dāng)中仍是最主要的死亡原因。盡管手術(shù)后以鉬類衍生物和/或紫杉醇的化學(xué)治療，卵巢癌還是婦女癌癥死亡的第五大原因，在許多國家仍是婦科惡性腫瘤最主要的死亡原因。在惡性上皮性腫瘤(>90 %的所有卵巢癌)，血衆(zhòng)乳頭狀變異體(serous papillary variants)形成最大的次組。由于其的預(yù)后大多不佳，所以一個(gè)新的卵巢癌的治療策略是迫切需要的。在此背景下，仍然 需要新的癌癥治療方法。摘要本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)從覓菊(Calomeria amaranthoides)分離化合物具有非常有效的抗癌性質(zhì)，可用于治療癌癥，特別是卵巢癌。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)化合物艾里莫芬烷-1(10)-11(13)_二烯_12，8β內(nèi)酯(eremophila-1 (10) -1I (13) -dien-12, 8 β -olide (EPD))選擇性地殺死癌細(xì)胞同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞毫發(fā)無損。這是一個(gè)巨大的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)榭?癌癥治療的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)治療藥物，如順氯氨鉬和多西紫杉醇(docetaxol)都徹底殺滅癌細(xì)胞和正常細(xì)胞。在第一態(tài)樣中，本發(fā)明提供xanthanodien,或其藥學(xué)上可接受的鹽,用作藥物。在第二態(tài)樣中，本發(fā)明提供xanthanodien，或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于在癌癥的治療中，特別是卵巢癌。在第春態(tài)樣中,本發(fā)明提供一藥物組合物，其包含Xanthanodien,或其藥學(xué)上可接受的鹽，和藥學(xué)上可接受的載體。在該態(tài)樣的較佳實(shí)施例中,所述的xanthanodien,或所述的其藥學(xué)上可接受的鹽，是以大于0.001 %至小于20%的濃度所存在。在該態(tài)樣的較佳實(shí)施例中，所述的載體是選自下列構(gòu)成群組；水性、非水性和納米顆粒的懸浮液，溶液，霜?jiǎng)?，軟膏劑，凝膠劑，糖漿劑，栓劑和微小液滴噴霧。在該態(tài)樣的另一較佳實(shí)施例中，所述的載體包括選自下列構(gòu)成群組的佐劑；補(bǔ)助齊U，穩(wěn)定劑，乳化劑，分散劑，防腐劑，緩沖劑，電解質(zhì)，組織滲透劑和組織軟化劑。在該態(tài)樣的尚另一較佳實(shí)施例中，所述的組合物進(jìn)一步包括至少一種化學(xué)治療劑或其他抗癌劑。
在第四態(tài)樣中，本發(fā)明提供了一種用于治療或預(yù)防與過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)之疾病的方法，其包含對(duì)需要治療上有效劑量之本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的受試者投藥。在該態(tài)樣的一較佳實(shí)施例中，所述的與過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)之疾病是癌癥，特別是卵巢癌。在該態(tài)樣的另一較佳實(shí)施例中，所述的治療上有效劑量為每24小時(shí)是約
0.0OOlmg至約IOOOmg/每千克所述受試者的體重在第五態(tài)樣中，本發(fā)明提供一種Xanthanodien，或其藥學(xué)上可接受的鹽于制備一藥物的用途，該藥物是用于治療或預(yù)防一與過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)之疾病。在該態(tài)樣的一較佳實(shí)施例中，所述的過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)之疾病是癌癥，特別是卵巢癌。在第六態(tài)樣中，本發(fā)明提供了一種用于抑制細(xì)胞增生的方法，所述方法包括:讓細(xì)胞接觸一細(xì)胞毒性的量的xanthanodien或其藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明態(tài)樣中的細(xì)胞是較佳為癌細(xì)胞或任何其它表現(xiàn)出過度增生的細(xì)胞，特別是卵巢癌的細(xì)胞。在該態(tài)樣的一較佳實(shí)施例中，所述的細(xì)胞毒性的量為0.01 100 μ g/mL的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的態(tài)樣中受試者是較佳為人類，最較佳是女性。


圖1所不的是EPD,—個(gè)α -亞甲基倍半職內(nèi)酯(a-methylene sesquiterpenelactone)。圖2 所不的是 EPA,—個(gè) α-亞甲基羧酸(a-methylene carboxyl ic acid)。圖3所示的是卵巢癌細(xì)胞細(xì)胞系(NIH:0VCAR_3)的細(xì)胞存活率，以ETO的濃度為
1、5和10μ g/mL,經(jīng)過24，48和72小時(shí)的時(shí)間。圖4所示的是卵巢癌細(xì)胞(SK0V-3)的體外細(xì)胞存活率，以EPD的濃度為1、5和10μ g/mL，經(jīng)過24，48和72小時(shí)的時(shí)間。圖5所示的是正常皮膚成纖維細(xì)胞的細(xì)胞存活率，以EPD的濃度為1、5和10 μ g/mL，經(jīng)過24，48和72小時(shí)的時(shí)間處理。圖6所示的是用倒置顯微鏡上(100 X )的相機(jī)所拍攝的卵巢癌細(xì)胞JC的照片，且接續(xù)著顯示控制組(A)與以I (B)、5 (C)和10 (D) μ g/mL的EH)處理48小時(shí)后的照片。圖7所示的是用倒置顯微鏡上(100 X )的相機(jī)所拍攝的黑色素瘤細(xì)胞MM-AN的照片。控制組(A)與以I (B)、5 (C)和10 (D) μ g/mL的EH)處理48小時(shí)后的照片。圖8所示的是人類成纖維細(xì)胞的照片，且接續(xù)著顯示控制組(A)與以I (B)、5 (C)和10 (D) μ g/mL的Ero處理48小時(shí)后的照片。圖9所示的照片如實(shí)施例2中描述的，受到0VCAR-3細(xì)胞接種的裸鼠，腹水在形成中。 圖10所示的照片是了受到0VCAR-3細(xì)胞接種的兩只裸鼠，這兩只裸鼠都有腹水的形成，但其中只有一只有用如實(shí)施例2中所描述的Ero來治療(下方的動(dòng)物)。該被治療的裸鼠腹水消失，在此表明Ero是有效的治療方法。
圖11顯示健康的控制組的裸鼠。

發(fā)明內(nèi)容
定義:在本說明文件的上下文中的術(shù)語“xanthanodien”包括參照化學(xué)成分艾里莫芬烷-1 (10)-11(13) - 二烯-12，8 β 內(nèi)酯(EPD)或(3a a，4a α，5 a，9a a ) -3a, 4，4a, 5，6，7，9，9a-八氫-4a，5_ 二甲基_3_亞甲基萘酚[2，3_b]呋喃-2 (3H) -2-酮，及其藥學(xué)上可接受的鹽類。EPD(C15H2tlO2)在標(biāo)準(zhǔn)條件下成無色漿狀。EH)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式由下:
0 艾里莫芬;K-1(10)-11(13)-二烯-12,8|J內(nèi)酯 Iη U(xanthanodien)
C15H20°2無色漿狀 在文獻(xiàn)內(nèi)第1420頁的結(jié)構(gòu)V'
N Tanaka.T Yaza^va.K Aoyama and I Murakami (1976).Chemische Lfntersudiiiiigen der lnhattsstoffe yon Xantfrdm) canadense MiEL Ctiem- Pharm.Bui!.24<6).1419-142 L質(zhì)子核磁共振顯示下列光譜:1H-匪R(CDCl3): δ 0.92 (s, H-14), 0.93 (d, J4，15=6.8Hz, H-15), 1.50 (m, H_3)，1.60 (m, H-4)，1.70 (m, H_6)，2.03 (m, H_2)，2.30 (m, H_9)，2.58 (dd, J9,9’ =12.6Hz, J8,9’ =7
7Hz, H-9’)，2.92 (m, H_7)，4.53 (dt, J7’8=9.6Hz, J8’9=7.4Hz, H_8)，5.48 (br t, J1；2=3.4Hz, H-l)，5.59 (d, J13,13’ =2.2Hz, H-13，)，6.23 (d, J13,13’ =2.2Hz, H-13) ; 13C-匪R (CDCl3):δ 16.08，20.59，25.03，26.72，34.69，34.91，36.63，37.01，38.73，79.00，121.82，124.57，138.32，139.36，170.65。正離子 ESI_MS[M+Na]+255 (100)，[M+H]+233 (65)。EPD 這個(gè)詞包括相關(guān)的EI3D化學(xué)衍生物。EI3D化學(xué)衍生物擁有實(shí)質(zhì)上如本文所描述EPD的抗癌活性。在本說明文件的上下文中的術(shù)語“EPA”包括有關(guān)化學(xué)物艾里莫芬燒-1(10), 11(13))- 二烯-12-酸(eremophila-1(10)，11(13)-dien-12-oicacid)。
EPA(C15H22O2)在標(biāo)準(zhǔn)條件下成無色漿狀。EPA的化學(xué)結(jié)構(gòu)式由下:
艾里莫芬烷-12-酸類結(jié)構(gòu)
[ I COOHICOOH
I1I1 HW
(up
C15H22O2無色漿狀EPA的質(zhì)子核磁共振顯示下列光譜:
1H-匪 R (CDCl3): δ 0.85 (d, J4，15=6.4Hz, H-15), 0.91 (s, H-14), 1.45 (m, H_6)，1.50(m, H-4), 1.55 (m, H_3)，1.60 (m, H_8)，1.85 (m, H-9), 2.01 (m, H-2), 2.40 (m, H_9，), 2.55(m, H-7), 5.38 (br t, J1；2=3.4Hz,H-l),5.66 (br s, H-13，)，6.29 (br s, H-13) ; 13C-NMR(CDCl3):δ 16.08，20.59，25.03，26.72，34.69，34.91，36.63，37.01，38.73，79.00，121.82，124.57，I
38.32，139.36，170.65。負(fù)離子 ES1-MS [Μ-ΗΓ233 (100)。在此說明書的內(nèi)容下，一”與過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)的情況”意指為任何臨床的病況，該等病況是特征在于或其他干涉到細(xì)胞分裂速度比正常參考值還快的臨床的病況。過度細(xì)胞增生相關(guān)的病況包括，但不限于:骨髓增生性癥候群，如朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥(Langerhans cell histiocytosis),肥大細(xì)胞增多癥,混合骨髓增生性和骨髓增生不良病況，皮膚增生的病況如牛皮癬，非大皰性先天性魚鱗病樣紅皮病。過度增生的細(xì)胞分裂病況亦包括癌癥，無論是良性或惡性，包括造血的惡性癌癥。特別地，在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，該術(shù)語是指卵巢癌。在本說明書的內(nèi)容中，“治療”或“治療中”是指以無論用任何方式來改善病況、疾病或其癥狀，預(yù)防病況 、疾病或其癥狀的建立，或其他預(yù)防或阻止或逆轉(zhuǎn)病況、疾病或其他不欲求的癥狀的任何和所有用途。在本說明書的上下文中的術(shù)語“治療有效的劑量”在其意涵內(nèi)包括足以提供所需的治療效果但非毒性量的xanthanodien。確切的劑量會(huì)因受試者而有所不同,是取決于受試者的年齡，普遍健康狀況，欲被治療的異常的嚴(yán)重程度和投藥的模式。因此“治療有效的劑量”是不可能確切指定的。但本領(lǐng)域的熟悉此技藝者可以由例行試驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)來測(cè)定“治療有效的劑量”。在本說明文件的上下文中的術(shù)語“細(xì)胞毒性的劑量”的定義是指一旦xanthanodien與指定細(xì)胞結(jié)交時(shí)對(duì)該等指定細(xì)胞有毒性的xanthanodien劑量。一般來說，毒性是藉由在統(tǒng)計(jì)上有顯著的細(xì)胞失活率來代表的。術(shù)語“化學(xué)治療劑”是指在治療癌癥或其他特征在于過度增生細(xì)胞上有用的化學(xué)化合物。在本說明文件的上下文中的術(shù)語“其藥學(xué)上可接受的鹽”包括但不限于由下列形成者:乙酸，抗壞血酸，天冬氨酸，苯甲酸，苯磺酸，檸檬酸，肉桂酸，乙磺酸，反丁烯二酸，谷氨酸，戊二酸，葡萄糖酸，氫氯酸，氫溴酸，乳酸，順丁烯二酸，羥基丁二酸，甲磺酸，萘甲酸，羥基萘甲酸，萘磺酸，萘二磺酸，萘基丙烯酸，油酸，乙二酸，草乙酸，磷酸，丙酮酸，對(duì)甲苯磺酸，酒石酸，叁氟乙酸，叁苯基乙酸，丙三甲酸，水楊酸，硫酸，磺胺酸，對(duì)磺胺酸和琥珀酸。術(shù)語“過度增生”及“過度增生中”代表的是在一細(xì)胞類型的異常生長(zhǎng)，其可以是癌癥的或良性。一般來說，過度增生細(xì)胞擁有的細(xì)胞分裂速率至少大于同一類型正常細(xì)胞的細(xì)胞分裂速率的百分之十。較佳實(shí)施例C.amaranthoides的抗癌活性曾由本發(fā)明的發(fā)明人于專利公開案號(hào)第W02006/067603號(hào)發(fā)表過。C.amaranthoides化學(xué)組合物的有氧部分也先前已由Zdero etal., 1991Phytochemistry, Vol.30, N0.8，pp2643_2650 檢查過。他們所發(fā)表的成分完全沒在本研究的C.amaranthoides提取物中被發(fā)現(xiàn)。如本文所述，本發(fā)明人藉由1H-NMR和13C-NMR和質(zhì)譜儀從C.amaranthoides的提取物里發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)非常相似的具有艾里莫芬烷內(nèi)酯(eremophilanolide)類型的化學(xué)結(jié)構(gòu)的倍半職烯(sesquiterpenes)與。和已發(fā)表過的部分1H-NMR光譜做一后續(xù)比較，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)化合物是艾里莫芬烷-1(10)-11(13)—二烯12，8β-內(nèi)酯(EPD)和艾里莫芬燒-1 (10)，11 (13) - 二烯-12-酸(EPA)。EF1D 首次被發(fā)現(xiàn)是在其中且從 Xanthium canadenseMill 的根分離出的，(Tanaka et al.，1976Chem.Pharm.Bull.24 (6): 1419-1421)。EPA 首次是從旋復(fù)花物種分離出來的(Bohlmann et al.1977.Phytochemistryl6:1302-1303)。令人驚訝的是,在觀察C.amaranthoides的提取物時(shí),在該等化合物中只有一個(gè)擁有細(xì)胞毒性的效果。盡管EPA并沒有顯示細(xì)胞毒性的效果，但EH)被發(fā)現(xiàn)有非常強(qiáng)大的抗癌特性。在使用體外試驗(yàn)情況中C.amaranthoides粗提取物的細(xì)胞毒性效果系在濃度為例如10 μ g/mL下被清楚顯示出。類似地，經(jīng)分離的具有生物活性的化合物EH)在體外試驗(yàn)條件中低于10μ g/mL的濃度下，例如為5μ g/mL，顯示出能完全殺死卵巢癌細(xì)胞。此外，在低至I μ g/mL的低濃度系已可觀察到可以大量殺死癌細(xì)胞。有趣的是，且類似于粗植物提取物，EH)選擇性地殺死癌細(xì)胞。這是一個(gè)巨大的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)橛砂l(fā)明者所操作的平行實(shí)驗(yàn)中，用于抗/癌癥治療的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)治療藥物，如順氯氨鉬和多西紫杉醇都徹底 殺滅癌細(xì)胞和正常細(xì)胞。在一個(gè)態(tài)樣中，本發(fā)明關(guān)于一種用于抑制細(xì)胞增殖的方法，所述方法包括細(xì)胞與xanthanodien的接觸。本領(lǐng)域之熟悉此技藝者也將理解其前藥亦可被投藥。在說明書的上下文中的術(shù)語“前藥”是指一藥理學(xué)上不具活性的化合物，且該化合物在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化為才活性化合物。Xanthanodien可從所選植物萃取出，該等植物例如,Calomeria amaranthiodes又名:Humea elegans。擇一地,根據(jù)文獻(xiàn)記載的方法xanthanodien可從已知的起始原料制備而成。例如參見 Zoretic et al., J.0rg.Chem.(1982), 47, 1327, Tada et al.J.Chem.Soc.Perkin Trans.1(1993)，239 和 W02006/067603。亦具有重大重要性的是，存在于C.amaranthoides提取物中所發(fā)現(xiàn)的作為活性抗癌物質(zhì)的化合物于使用水蒸氣蒸餾程序是可以驚奇地容易從植物(部分)提取。水蒸氣蒸餾是一種進(jìn)程，其中讓兩個(gè)幾乎不混溶液體的混合物被加熱的同時(shí)進(jìn)行搖動(dòng)使兩者的液體的表面曝露到蒸氣相，各組成物，獨(dú)立地施加作為溫度函數(shù)的其自身的蒸氣壓力，猶如其他組成物不存在。因此，整個(gè)系統(tǒng)的蒸汽壓力增加。當(dāng)兩種不互溶的液體的分壓的總和剛剛超過大氣壓(在海平面約101千帕)，沸騰開始。以這種方式可以在一溫度下純化許多不溶于水的有機(jī)化合物，該溫度是非常低于分解發(fā)生的溫度。在本案中，Ero是已顯示出可以容易地在非常低于正常沸點(diǎn)的溫度下蒸餾。這種技術(shù)是比例如用于純化的色層分離技術(shù)或傳統(tǒng)的蒸餾方法還有利。因此,在另一個(gè)態(tài)樣，本發(fā)明提供了一種方法可以凈化從C.amaranthoides植物部分取出的抗癌化合物EPD。所述方法包括使所述植物部分來水蒸汽蒸餾。純化來自C.amaranthoides的EDP可以由下列的方法來達(dá)成。當(dāng)C.amaranthoides的植物達(dá)到一定的成熟度時(shí)，且其理想地在當(dāng)時(shí)是該植物含有最Ero最高且具有所欲求的性質(zhì)時(shí)，典型的c.amaranthoides收成開始。當(dāng)大多數(shù)的植物達(dá)到這一階段時(shí)植物會(huì)被切割或修剪。典型地，收獲C.amaranthoides是使用諸如集草成行機(jī)的機(jī)器來切割或收獲。小地塊可以用手來切割。C.amaranthoides的植物在土地平面被切割。擇一地,葉片可以自菁干上移除且分別被收成。收成的c.amaranthoides材料是被偏好允許在空氣中干燥一段時(shí)間到達(dá)供蒸餾所需要的水分含量。通常準(zhǔn)備切割下的東西和供切碎的葉子，切割下的東西和葉子是被干燥要到一水分含量，該水分含量是收割植物的新鮮重量的約40%。當(dāng)切割下的東西或葉子被干燥到所需的水分含量時(shí)會(huì)被切碎或切割成所需要的長(zhǎng)度，通常為約0.1-2英寸，且切碎的植物會(huì)被收集在一容器中，蒸汽可經(jīng)由該容器被導(dǎo)入。蒸汽蒸餾是導(dǎo)蒸汽(較佳是加壓)經(jīng)過被切碎的植物部分而完成。當(dāng)蒸汽過濾經(jīng)過被切碎的植物材料時(shí)，Ero和蒸汽會(huì)從c.amaranthoides的植物材料中被蒸發(fā)和萃取然后會(huì)跟著蒸汽到冷凝和分離設(shè)備里。因此，較佳地，在通過被切碎的植物部分后，蒸汽被收集且接著按安排路徑至冷凝和分離設(shè)備。冷凝設(shè)備可以是冷凝器，其中蒸汽和Ero被冷凝然后純凈的Ero從冷凝器被收集到例如使用分離器的分離容器。純化后，純凈的Ero可以被結(jié)晶，以達(dá)到更高的純度。本發(fā)明進(jìn)一步關(guān)于一種治療或預(yù)防在有需要本發(fā)明的受試者中過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)疾病的方法，該方法包含將如上所界定之治療有效量的xanthanodien投藥至受試者。過度增生細(xì)胞分裂有關(guān)的疾病可能是癌癥。癌癥可以選自于下列構(gòu)成群組:胃腸道腫瘤、肝及膽道癌、胰腺癌、前列腺癌、睪丸癌、血癌、肺癌、皮膚癌(例如黑色素瘤)、乳腺癌、非黑色素瘤皮膚癌(例如基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌)、卵巢癌、子宮癌、子宮頸癌、頭部和頸部的癌癥、膀胱癌、肉瘤及骨肉瘤、卡波濟(jì)氏肉瘤(Kaposi sarcoma),與艾滋病相關(guān)的卡波濟(jì)氏肉瘤和腎細(xì)胞癌。在一個(gè)實(shí)施例中，該癌癥是卵巢癌。 Xanthanodien是一個(gè)對(duì)治療或預(yù)防過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)疾病有用的治療劑，該等疾病是諸如癌癥。Xanthanodien可以適當(dāng)以藥物組合物的形式投藥給受試者(例如人類)。藥物組合物包括那些適合于口服，非腸道(包括皮下，皮內(nèi)，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)和關(guān)節(jié)內(nèi))，吸入(包括使用的計(jì)量劑量的加壓氣溶膠，噴霧器或吹藥劑)，直腸和局部(包括皮膚，頰，舌下和眼內(nèi))的投藥。組合物可方便地以單位劑量的形式所呈現(xiàn)，并可以以任何在本領(lǐng)域公知的藥學(xué)方法來制備。所有的方法包括以下步驟:將如本文中定義的xanthanodien與載體結(jié)合，該載體構(gòu)成一或多種輔助成分。在一般情況下，該組合物是將xanthanodien和一液體載體或微細(xì)分離的固體載體或兩者均勻且緊密地結(jié)合，且接著，若需要，將產(chǎn)物塑造成所欲求的組合物所制備而成。一般來說，在本發(fā)明的藥物或其他組合物中存在的xanthanodien的有效劑量預(yù)期是在約0.0OOlmg至約IOOOmg每24小時(shí)每千克體重的范圍內(nèi)；約0.0Olmg至約750mg每千克體重每24小時(shí)；約0.0lmg至約500mg每千克體重每24小時(shí)；大約為0.1mg約500mg每千克體重每24小時(shí)；大約為0.1mg至約250mg每千克體重每24小時(shí)，或約1.0mg至約250mg每24小時(shí)每千克體重。更典型地，一個(gè)有效的劑量范圍是在約1.0mg至約200mg每千克體重每24小時(shí)；約1.0mg至約IOOmg每千克體重每24小時(shí)；約1.0mg至約50mg每千克體重每24小時(shí)；約1.0mg至約25mg每千克體重每24小時(shí)；約5.0mg至約50mg每千克體重每24小時(shí)；約5.0mg至約20mg每千克體重每24小時(shí),或約5.0mg至約15mg每千克體重每24小時(shí)。
擇一地，一個(gè)有效的劑量范圍可以是最多至約500mg/m2。一般而言，有效劑量是預(yù)期在范圍為約25至約500mg/m2,約25至約350mg/m2,約25至約300mg/m2,約25至約250mg/m2，約 50 至約 250mg/m2,或約 75 至約 150mg/m2。適合于頰(舌下)投藥的組合物包括呈一經(jīng)調(diào)味堿(flavoured base)的xanthanodien的錠劑(lozenges),通常是鹿糖和阿拉伯膠(acacia)或黃蓍膠(tragacanth)；以及包含呈一惰性堿(inert base)的xanthanodien的軟錠劑(pastilles),如明膠和甘油或鹿糖和阿拉伯膠(acacia)。適合于口服投藥的包含xanthanodien的組合物可如分離單位所呈現(xiàn),該等分離單位是諸如明膠或HPMC膠囊,扁囊劑或片劑，各含有預(yù)定量的xanthanodien作為的粉末，顆粒劑，作為的在水性液體或者非水的液體中的溶液或懸浮液，或作為水包油型液體的乳化液或油包水型液體乳液。Xanthanodien也可以糊狀存在。當(dāng)包含xanthanodien的組合物被配制成膠囊時(shí)，xanthanodien可以與一或多種藥學(xué)上可接受的載體如淀粉，乳糖，微晶纖維素，二氧化硅和/或諸如環(huán)糊精的環(huán)狀寡糖來配制而成。額外的成分可包括潤滑劑例如硬脂酸鎂和/或硬脂酸鈣。合適的環(huán)糊精可包括α-環(huán)糊精、環(huán)糊精、Y-環(huán)糊精、2-羥乙基-β-環(huán)糊精、2-羥丙基-環(huán)糊精、3-羥丙基-β-環(huán)糊精、和叁甲基-β-環(huán)糊精。環(huán)糊精可為羥丙基環(huán)糊精。合適的環(huán)糊精衍
生物包括如美國專利N0.5，134，127中描述的Captisol —個(gè)環(huán)糊精的磺丁基醚衍生物和其類似物。片劑可選擇性地和一 種或多種輔助成分通過壓制或模制來制備。經(jīng)壓制的片劑可藉由在一適合的機(jī)器中將呈一諸如粉末或顆粒狀的無流動(dòng)形式的xanthanodien，選擇性地和粘合劑、潤滑劑(例如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣)、惰性稀釋劑或表面活性/分散劑壓制而制備。經(jīng)模壓的片劑可以將經(jīng)由一惰性液體稀釋劑所濕潤的粉末狀xanthanodien的混合物在合適的機(jī)器模制而成。片劑可選擇性地被薄膜包復(fù)，例如，用腸溶衣，并且可以配制以提供緩慢釋放或控制釋放的xanthanodien。非腸道投藥的組合物包括水性和非水性的無菌注射溶液，該等注射溶液可以含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和溶質(zhì)，且該等注射溶液使得配方與計(jì)劃的接受者血液等滲，且該等注射溶液可包括懸浮劑和增稠劑。非腸道組合物可包含環(huán)狀寡糖如羥丙基-環(huán)糊精。該等組合物可存在于單位劑量或多劑量的容器，例如密封的安瓿和小瓶中，且可以存儲(chǔ)在冷凍干燥(凍干)條件，這條件在使用前僅需要立即加入無菌液體載體，例如生理鹽水或注射用水。適合經(jīng)皮投藥的組合物可以分離的貼片存在，該等貼片適于長(zhǎng)時(shí)間與接受者的表皮保持緊密接觸。這種貼片適合地包括作為一選擇性的緩沖水溶液的xanthanodien,關(guān)于此化合物，該溶液是例如濃度在0.1M至0.2M。適合經(jīng)皮投藥的組合物也可通過離子導(dǎo)入法被傳遞，且典型地采取活性化合物的選擇性經(jīng)緩沖的水溶液的形態(tài)。合適的組合物可含有檸檬酸鹽或雙[三(羥甲基)氨基甲燒](Bis/Tris)緩沖液(pH值為6)或乙醇/水，并含有自0.1M至0.2M的xanthanodien。用于局部傳遞至肺部的藉由吸入的噴霧組合物可以，例如，被配制成自加壓包傳遞的水溶液或懸浮液或氣溶膠，懸浮液或溶液，例如一計(jì)量劑量吸入器，與一個(gè)合適的液化推進(jìn)劑使用。合適的推進(jìn)劑包括碳氟物或含氫氯氟碳物或其混合物，特別是氟代烷烴，例如二氯二氟甲烷、叁氯氟甲烷、二氯四氟乙烷，特別是1，I, 1,2-四氟乙烷、1，1,2, 2，3，3，3-七氟-正-丙烷或其混合物。二氧化碳或其它合適的氣體，也可以使用作為推進(jìn)劑。氣溶膠組合物可沒有賦形劑或可選擇性包括額外的在本技術(shù)領(lǐng)域公知的組合物賦形劑，諸如表面活性劑，例如油酸或卵磷脂和助溶劑例如乙醇。加壓(pressurised)的組合物一般是被保存在一以閥(例如一個(gè)計(jì)量閥)密封的罐子里(例如鋁罐)且該罐子被裝設(shè)入一具有嘴型片件的致動(dòng)器內(nèi)。經(jīng)由吸入投藥的藥物欲求地具有一經(jīng)控制的顆粒尺寸。吸入到支氣管系統(tǒng)的最佳顆粒大小通常為1-10微米，較佳為是2-5微米。當(dāng)被吸入至到達(dá)小氣管時(shí)，具有20微米以上顆粒通常過大。當(dāng)賦形劑是乳糖時(shí)，其典型地以研磨乳糖存在，其中不超過85%所述的乳糖顆粒有60-90微米的MMD和不小于15 %有低于15微米的MMD。用于直腸投藥的組合物可以呈現(xiàn)為具有載體之栓劑，例如可可脂或聚乙二醇，或作為灌腸劑，其中載體是等滲液體如鹽水。組合物的額外組份可包括環(huán)狀寡糖例如環(huán)糊精，如上所述，羥丙基-β -環(huán)糊精，一或多個(gè)表面活性劑，以調(diào)節(jié)pH的緩沖鹽或酸或堿，等滲性調(diào)節(jié)劑和/或抗氧化劑。

適合于皮膚局部給藥的組合物較佳地采取軟膏、乳膏、洗劑、糊劑、凝膠、噴霧劑、氣霧劑或油的形態(tài)?？梢允褂玫妮d體包括凡士林(Vaseline)、羊毛脂、聚乙二醇、醇、和兩或多個(gè)其等的組合物。Xanthanodien是一般以自0.1 %至20% w/w,或自0.5%至5% w/w的濃度存在。此類的組合物包括美容皮膚乳膏。組合物亦可以脂質(zhì)體的形式被投藥或送遞到目標(biāo)細(xì)胞中。脂質(zhì)體通常是衍生自磷脂或其它脂類物質(zhì)和經(jīng)由分散在水性介質(zhì)中的單-或多片層的水合液體的結(jié)晶所形成。脂質(zhì)體的特定范例是可被使用于投藥或遞送化合物的配方(I )，該等范例包括合成膽固醇、1，2_ 二硬脂?；?Sn-甘油-3-磷酰膽堿、3-N-[(-甲氧基聚(乙二醇)2000)胺甲酰基]_1，2-雙肉 蓮環(huán)氧丙燒胺(PEG-CDMA^P 1，2_ 二-對(duì)-十八稀-3-(N, N- 二甲基)異丙胺(D0DMA)。組合物也可以微粒的形式投藥。從聚丙交酸(PLA)、聚丙交酯-共-乙交酯(PLGA)，和 -己內(nèi)酯二聚物所形成的可生物降解的微粒已被廣泛使用作為藥物載體以增加血漿半衰期且因此延長(zhǎng)效用(R.Kumar, Μ., 2000, J Pharm Pharmaceut Sc1.3 (2) 234-258)。組合物可并入一控制釋放基質(zhì)，該基質(zhì)是以蔗糖乙酸酯異丁酸酯(SAIB)和有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑的混合物所組成的。聚合物添加物可以被添加入到作為釋放改質(zhì)劑(releasemodifier)的載體以進(jìn)一步的增加粘度和減慢釋放速度。Xanthanodien可以被添加到SAIB遞送載體以形成SAIB溶液或懸浮液組合物。當(dāng)配方被皮下注射時(shí)，溶劑從基質(zhì)中擴(kuò)散開以使得SAIB藥物或SAIB藥物聚合物的混合物被配制如一原位形成儲(chǔ)存點(diǎn)。在癌癥的治療中，可以通過組合治療方案得到治療優(yōu)勢(shì)。因此，本發(fā)明的治療方法可被使用與其他療法結(jié)合，該等療法如放射性治療，化學(xué)治療，手術(shù)，或其他形式的醫(yī)療介入。合適的化學(xué)治療劑或其他抗癌劑的不受限范例包括:紫杉醇、氟尿嘧啶、順氯氨鉬、奧沙利鉬(oxaliplatin)、α-干擾素、長(zhǎng)春新堿(vincristine)、長(zhǎng)春堿(vinblastine)、血管抑制素(angioinhibins)、阿霉素、博萊霉素(bleomycin)、絲裂霉素C (mitomycin C)、苯妥帝爾(phenoxodiol)、普卡霉素(methramycin)、TNP-470、戍聚糖多硫酸酯、他莫昔芬(tamoxifen)、LM-609、CM-101 和 SU-101。
Xanthanodien和化學(xué)治療劑或其他抗癌劑的共同投藥可為同時(shí)的或連續(xù)的。當(dāng)xanthanodien和化學(xué)治療劑或其他抗癌劑是以相同單元?jiǎng)┝繒r(shí),或當(dāng)xanthanodien與化學(xué)治療或其他抗癌劑可以獨(dú)立或分離的單元?jiǎng)┝看嬖谟谕瑫r(shí)或相似時(shí)間被投藥時(shí)，同時(shí)投藥可被影響。連續(xù)投藥可以是以任何所需要的順序。在本說明書中提到的所有公開物在此是藉由參考而被并入。在本說明書中針對(duì)所有先前公開物(或從其衍生出的信息)或針對(duì)任何已知事物的參考文獻(xiàn)，并非且不應(yīng)該被視為對(duì)于該等先前公開物(或從其衍生出的信息)或是形成此技藝中試圖與本說明書相關(guān)的一般常識(shí)部分的已知事物有承認(rèn)或允許或任何型式的建議。本發(fā)明現(xiàn)在將透過參考下列的特定實(shí)施例被更詳細(xì)地描述和解說，這不應(yīng)被解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例實(shí)施例1.從Calomeria amaranthoides分離的化合物和細(xì)胞生存力測(cè)試材料和實(shí)驗(yàn)方法棺物材料C.amaranthoides的葉子是收集于藍(lán)山(Blue Mountains)(澳大利亞新南威爾士州，NSW,澳大利亞),并請(qǐng)Mount Tomah植物園(澳大利亞新南威爾士州，NSW,澳大利亞)確認(rèn)過。葉子是被免除于陽光的風(fēng)干保護(hù)。細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)所用的細(xì)胞是卵巢細(xì)胞系:JC(van Haaften-Day et al.1983.CancerResearch43:3725- 3731)，0VCAR-3 和 SK0V-3，美國典型培養(yǎng)物保藏中心(The AmericanType Culture Collection (ATCC)),黑素瘤細(xì)胞系(MM-An, Byers et al.1991.Am JPathl39,No2:423-435)和原代培養(yǎng)的正常人二倍體成纖維細(xì)胞(Brookes et al.2002TheEMBO Journal Vol.21，N0.12:2936-2945)。A_C.amaranthoides葉片分離的化合物在體外的細(xì)朐毒件試駘在體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)使用的是無突光的Alamar Blue (BioSource, Invitrogen,英國)如 Pag6 等人所描述的(Page B, Page M and Noel C.1993.1nternational Journal of0ncology3:473-476)。卵巢癌的細(xì)胞(IxlO4或5xl04)被接種于24孔板上(Costar，美國)，并種植于有補(bǔ)充6mM的L-谷氨酰胺、10%胎兒小牛血清(FCS) (Gibco, Invitrogen,英國)和青霉素(100units/mL)和鏈霉素(100 μ g/mL)的RPM1-1640培養(yǎng)液中。而黑色素瘤細(xì)胞和正常成纖維細(xì)胞是生長(zhǎng)在亦添加有L-谷氨酰胺和FCS的Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)液(DMEM)中。這些培養(yǎng)物是被維持在37°C，5 % 二氧化碳的潮濕大氣中。以指數(shù)級(jí)成長(zhǎng)的培養(yǎng)物(三份法)是以化合物處理，溶解在二甲亞砜(DMSO)且被添加至最終濃度為1、5、和10 μ g/mL。10% Alamar Blue被加入至每一孔的2毫升培養(yǎng)液里，且24、48和72小時(shí)后在24孔板的100 μ L的上清液被吸移到96孔板上(Costar，美國)。用 96 孔平板讀儀(96-well plate reader) (Molecular Devices Ltd,,英國)測(cè)量細(xì)胞的生存力。1H-NMR 和 iaC-NMR 的分析
1H-NMR和13C-NMR光譜學(xué)是被運(yùn)用在具有明確的細(xì)胞毒性影響的植物餾分。1H-NMR, -C-NMR 和關(guān)連件磁振頻譜(COSY)是俥用 Varian Gemin1-300MHz 儀器(Palo Alto，CA，美國)而被操作。光譜是以百萬分之一(ppm)來測(cè)量，并以四甲基硅烷為基準(zhǔn)(TMS=OppmX負(fù)離子模式下(ESI)的電噴霧電離質(zhì)譜分析是使用裝備Xcalibur數(shù)據(jù)采集和處理軟件的Thermo TSQ7000液相色譜質(zhì)譜儀(LC-MS/MS) (SAN J0SE，CA，美國)。短柱真空色譜法(Short-ColumnVacuum Chromatography, SCVC)是米用填充有TLC級(jí)娃膠H6 (Merck, Darmstadt, Germany)的管柱且施用一具有增加極性的階梯式梯度的溶劑來進(jìn)行。物質(zhì)是藉由在經(jīng)硅膠涂復(fù)之TLC板(H60F254，Merck)上操作的TLC、藉由分子量(ES1-MS)和藉由1H-NMR光譜學(xué)所偵測(cè)。結(jié)果藉由管柱層析之提取物分餾經(jīng)干燥的植物材料(約350克)被切割成小塊在室溫下浸泡在氯仿中。24-48小時(shí)后，葉子的粗提取物在減壓下被蒸發(fā)，且殘馀物被再溶解在30mL中，被施加入以硅膠做為充填物(Lichroprep Si60,粒徑15-25 μ m)Merck)的管柱(21cm x5cm內(nèi)徑)。洗脫是以逐步溶劑的梯度來進(jìn)行，該梯度是以己烷、氯仿、二惡烷、乙酸乙酯、2_ 丁酮、丙酮、2-丙醇和甲醇所組成的組合物(表I )。在己烷:氯仿:二惡烷:乙酸乙酯'2-丙醇的餾分洗脫中，80:10:2:6: l(v/v,600mL)是被選用于高分辨率分懼(high resolution fractionation)。表I
權(quán)利要求
1.Xanthanodien,或其藥學(xué)上可接受的鹽,用作藥物。
2.Xanthanodien，或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于在癌癥的治療中，特別是卵巢癌。
3.一種藥物組合物,其包含Xanthanodien,或其藥學(xué)上可接受的鹽,和藥學(xué)上可接受的載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的醫(yī)藥組合物,其中所述的xanthanodien,或所述的其藥學(xué)上可接受的鹽 ，是以在大于0.001 %至小于20%的濃度所存在。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的醫(yī)藥組合物，其中所述的載體是選自下列構(gòu)成群組；水性、非水性和納米顆粒的懸浮液，溶液，霜?jiǎng)?，軟膏劑，凝膠劑，糖漿劑，栓劑和微小液滴噴霧。
6.根據(jù)權(quán)利要求3至5項(xiàng)中任一項(xiàng)所述的醫(yī)藥組合物，其中所述的載體包括自下列構(gòu)成群組的佐劑；補(bǔ)助劑，穩(wěn)定劑，乳化劑，分散劑，防腐劑，緩沖劑，電解質(zhì)，組織滲透劑和組織軟化劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求3-5中的任一項(xiàng)所述的醫(yī)藥組合物，其中所述的組合物進(jìn)一步包含至少一化學(xué)治療劑或其他抗癌劑。
8.一種用于治療或預(yù)防與過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)之疾病的方法，其包含對(duì)需要治療上有效量之根據(jù)權(quán)利要求3至7項(xiàng)中任一項(xiàng)所界定的醫(yī)藥組合物的對(duì)象投藥。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中該與過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)之疾病是癌癥，特別是卵巢癌。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其中所述的治療上有效量為每24小時(shí)是約0.0OOlmg至約IOOOmg/每千克所述對(duì)象的體重。
11.一種Xanthanodien,或其藥學(xué)上可接受的鹽于制備一藥物的用途,該藥物是用于治療或預(yù)防一與過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)之疾病。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其中所述的過度增生細(xì)胞分裂相關(guān)之疾病是癌癥，特別是卵巢癌。
13.—種抑制細(xì)胞增生的方法，所述方法包括:讓該等細(xì)胞接觸一細(xì)胞毒性劑量的xanthanodien或其藥學(xué)上可接受的鹽。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述的細(xì)胞毒性劑量在0.01 100 μ g/mL的范圍內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療或預(yù)防過度細(xì)胞增殖相關(guān)疾病的方法。此方法提共給需要有效劑量的xanthanodien組合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和一種藥學(xué)上可接受載體聯(lián)用給受試者使用。本發(fā)明提供了一種治療或預(yù)防過度細(xì)胞增殖相關(guān)疾病的的方法給需要本發(fā)明的藥物組合物有效劑量的受試者使用。
文檔編號(hào)A61K31/366GK103221044SQ201180042751
公開日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月7日
發(fā)明者卡羅琳·范哈夫登 申請(qǐng)人:卡羅琳·范哈夫登