專利名稱：表皮生長(zhǎng)因子受體3(her3)的抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明大體上涉及與HER家族受體，例如HER3受體相互作用的抗體或其片段。特別地，其涉及下述抗體或其片段，其識(shí)別HER受體(例如HER3)的構(gòu)象表位，所述構(gòu)象表位包含來(lái)自結(jié)構(gòu)域2和4的殘基并且導(dǎo)致配體依賴性和配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制。本發(fā)明也涉及下述抗體及其片段，其與配體(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白)同時(shí)結(jié)合HER受體(例如HER3受體)，然而阻止配體誘導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化。
背景技術(shù)：
人表皮生長(zhǎng)因子受體3(ErbB3，又稱HER3)是受體蛋白酪氨酸激酶并屬于受體蛋白酪氨酸激酶的表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)亞家族，所述亞家族還包括EGFR(HER1，ErbBl)，HER2 (ErbB2, Neu)和 HER4 (ErbB4) (Plowman 等人，(1990) Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.87:4905-4909 ；Kraus 等人，(1989) Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.86:9193-9197 ；和 Kraus 等人，(1993) Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.90:2900-2904)。類似典型的表皮生長(zhǎng)因子受體，跨膜受體HER3由胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(ECD)、ECD中的二聚化結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶樣結(jié)構(gòu)域(TKD)和C-端的磷酸化結(jié)構(gòu)域組成。與其他HER家族成員不同，HER3的激酶結(jié)構(gòu)域顯示極低的內(nèi)在激酶活性。配體神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白I (NRG)或神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2結(jié)合HER3的胞外結(jié)構(gòu)域，并且通過(guò)促進(jìn)與其他二聚化搭檔例如HER2的二聚化來(lái)活化受體介導(dǎo)的信號(hào)傳遞途徑。異源二聚化導(dǎo)致HER3胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的活化和轉(zhuǎn)磷酸化，這不僅是信號(hào)多樣化的手段，而且也是信號(hào)放大的手段。此外，HER3異 源二聚化也可在缺乏活化配體時(shí)發(fā)生，這通常被稱為配體非依賴性HER3活化。例如，當(dāng)HER2由于基因擴(kuò)增(例如在乳腺癌、肺癌、卵巢癌或胃癌中)以高水平表達(dá)時(shí)，可形成自發(fā)的HER2/HER3 二聚體。在這種情況下，HER2/HER3被認(rèn)為是最活躍的ErbB信號(hào)傳遞二聚體，并因此是高度轉(zhuǎn)化的。已經(jīng)在若干癌癥類型中發(fā)現(xiàn)增加的HER3，例如乳腺癌、肺癌、胃腸癌和胰腺癌。有趣地是，已有研究顯示在HER2/HER3表達(dá)和從非侵入期至侵入期的進(jìn)展之間存在相關(guān)性(Alimandi 等人，(1995)Oncogene 10:1813-1821 ;DeFazio 等人，(2000)Cancer87:487-498 ;Naidu 等人，(1988) Br.J.Cancer78:1385-1390)。因此，需要干擾 HER3 介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活性劑。發(fā)明概述本發(fā)明是基于下述抗原結(jié)合蛋白(例如抗體或其片段)的發(fā)現(xiàn)，所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合包含HER3的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基的HER3受體的構(gòu)象表位。所述抗體或其片段與結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4的結(jié)合穩(wěn)定了處于失活或封閉構(gòu)象的HER3受體，從而抑制了 HER3活化。令人驚訝地是，抗體或其片段與此構(gòu)象表位的結(jié)合阻斷了配體依賴性(例如神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白)和配體非依賴性HER3信號(hào)傳遞途徑。此外，抗體介導(dǎo)的配體誘導(dǎo)的信號(hào)傳遞的抑制在不阻斷配體結(jié)合的情況下發(fā)生(即配體和抗體都可結(jié)合HER3)，這可能是由于HER3不能經(jīng)歷活化所需的構(gòu)象重排。因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及結(jié)合HER受體的失活狀態(tài)態(tài)的分離的抗體或其片段，其中所述抗體或其片段阻斷配體依賴性和配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER受體。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，且其中所述抗體或其片段阻斷配體依賴性和配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段結(jié)合HER受體的失活態(tài)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段結(jié)合HER受體的活性態(tài)并使其成為失活態(tài)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER受體。HER受體選自HERl、HER2、HER3和HER4。抗體選自單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體和合成抗體。另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，其中抗體的結(jié)合穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER受體，且其中HER配體可同時(shí)結(jié)合HER受體上的配體結(jié)合位點(diǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER配體與配體結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合未能誘導(dǎo)HER受體構(gòu)象改變至活性態(tài)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，HER配體與配體結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合未能活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER配體選自神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白I (NRG)、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4、乙胞素(beta cellulin)、肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子、表皮調(diào)節(jié)素(epiregulin)、表皮生長(zhǎng)因子,雙調(diào)蛋白和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，其中抗體的結(jié)合穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER受體，使得HER受體未能與共受體二聚化形成受體-受體復(fù)合物。受體-受體復(fù)合物形成的失敗阻止了配體依賴性和配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，其中抗體與HER受體的結(jié)合允許與共受體二聚化形成失活的受體-受體復(fù)合物。失活的受體-受體復(fù)合物的形成阻止了配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及結(jié)合HER3受體的失活構(gòu)象的分離的抗體或其片段，其中所述抗體阻斷配體依賴性和配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER3受體。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER3受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER3受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，且其中所述抗體或其片段阻斷配體依賴性和配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段結(jié)合HER3受體的失活態(tài)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER3受體。抗體選自單克隆抗體、多克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體和合成抗體。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER3受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER3受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，且其中抗體的結(jié)合穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER3受體，且其中HER3配體可同時(shí)結(jié)合HER3受體上的配體結(jié)合位點(diǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER3配體與配體結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合未能誘導(dǎo)HER3受體構(gòu)象改變至活性態(tài)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，HER3配體與配體結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合未能活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER3配體選自神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白l(NRG)，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2，乙胞素，肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子和表皮調(diào)節(jié)素。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER3受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER3受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，且其中所述抗體或其片段阻斷配體依賴性和配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段結(jié)合HER3受體的失活態(tài)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER3受體。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及結(jié)合HER3受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER3受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，其中結(jié)構(gòu)域2包含二聚化環(huán)，且其中抗體或片段阻斷配體依賴性和配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER3受體。在一個(gè)實(shí)施方案中，構(gòu)象表位包含(結(jié)構(gòu)域2 的)氨基酸殘基 265-277，315，(結(jié)構(gòu)域 4 的)571，582-584，596-597，600-602，609-615 或其子集。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體的VH或其片段結(jié)合以下HER3殘基中的至少一個(gè):Asn266，Lys267,Leu268,Thr269,Gln271,Glu273,Pro274,Asn275,Pro276,His277,Asn315,Asp571,Pro583, His584，Ala596，Lys597。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體的VL或其片段結(jié)合以下HER3殘基中的至少一個(gè):Tyr265, Lys267, Leu268, Phe270, Gly582, Pro583, Lys597, Ile600,Lys602, Glu609, Arg611, Pro612, Cys613, His614, Glu615。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別第一 HER受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含第一 HER受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，其中在缺乏HER受體配體時(shí)，抗體或其片段與第一 HER受體的結(jié)合減少細(xì)胞中第一 HER受體-第二HER受體蛋白復(fù)合物的配體依賴性形成，所述細(xì)胞表達(dá)第一 HER受體和第二 HER受體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的第一 HER受體,使得第一 HER受體未能與第二 HER受體二聚化形成第一 HER受體-第二 HER受體蛋白復(fù)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一 HER受體-第二 HER 受體蛋白復(fù)合物形成的失敗阻止信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一 HER選自HER1、HER2、HER3和HER4。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二 HER選自HER1、HER2、HER3 和 HER4。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER3受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER3的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，其中在缺乏HER3配體時(shí)，抗體或其片段與HER3受體的結(jié)合減少細(xì)胞中HER2-HER3蛋白復(fù)合物的配體依賴性形成，所述細(xì)胞表達(dá)HER2和HER3。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER3受體，使得HER3受體未能與HER2受體二聚化形成HER2-HER3蛋白復(fù)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER2-HER3蛋白復(fù)合物形成的失敗阻止信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER3受體，使得HER3受體仍然可與HER2 二聚化但形成失活的HER2-HER3蛋白復(fù)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，失活的HER2-HER3蛋白復(fù)合物的形成阻止信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別第一 HER受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含第一 HER受體的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，其中在存在HER配體時(shí)，抗體或其片段與第一 HER受體的結(jié)合減少細(xì)胞中第一 HER受體_第二 HER受體蛋白復(fù)合物的配體依賴性形成，所述細(xì)胞表達(dá)第一 HER受體和第二 HER受體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的第一 HER受體,使得在存在第一 HER配體時(shí)，HER受體未能與第二 HER受體二聚化形成第一 HER受體_第二 HER受體蛋白復(fù)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一 HER受體-第二 HER受體蛋白復(fù)合物形成的失敗阻止信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER配體選自神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白I (NRG)，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4，乙胞素，肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子，表皮調(diào)節(jié)素，表皮生長(zhǎng)因子，雙調(diào)蛋白和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α。在一個(gè)實(shí)施方案中，第一 HER選自HER1、HER2、HER3和HER4。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二 HER選自HERl、HER2、HER3和HER4。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER3受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER3的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，其中在存在HER3配體時(shí)，抗體或其片段與HER3受體的結(jié)合減少細(xì)胞中HER2-HER3蛋白復(fù)合物的配體依賴性形成，所述細(xì)胞表達(dá)HER2和HER3。配體選自神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白I(NRG)和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER3受體，使得在存在HER3配體時(shí)，HER3受體未能與HER2受體二聚化形成HER2-HER3蛋白復(fù)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER2-HER3蛋白復(fù)合物形成的失敗阻止信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的活化。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER3受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER3的結(jié)構(gòu)域2和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，且其中抗體或其片段抑制HER3的磷酸化，如通過(guò)HER3配體非依賴性磷酸化測(cè)定所評(píng)估。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER3配體非依賴性磷酸化測(cè)定使用HER2擴(kuò)增的細(xì)胞，其中所述HER2擴(kuò)增細(xì)胞是SK_Br_3細(xì)胞。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及識(shí)別HER3受體的構(gòu)象表位的分離的抗體或其片段，其中所述構(gòu)象表位包含HER3的結(jié)構(gòu)域2 和結(jié)構(gòu)域4中的氨基酸殘基，且其中抗體或其片段抑制HER3的磷酸化，如通過(guò)HER3配體依賴性磷酸化測(cè)定所評(píng)估。在一個(gè)實(shí)施方案中，HER3配體依賴性磷酸化測(cè)定使用用神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白(NRG)刺激的MCF7細(xì)胞。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，其具有至少IxlO7M-1, IO8IT1, IO9IT1, IO10M-1, IO11M-1, IO12IT1, IO13IT1 的解離常數(shù)(Kd)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段抑制HER3磷酸化，如通過(guò)在選自磷酸-HER3和磷酸-Akt的磷酸化測(cè)定中與人HER3的體外結(jié)合所測(cè)量。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及與表I中描述的抗體交叉競(jìng)爭(zhēng)的針對(duì)Her3受體的分離的抗體或其片段；相互作用(例如通過(guò)結(jié)合、位阻、穩(wěn)定/去穩(wěn)定、空間分布)的表位與表I中描述的抗體相同的抗體或其片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段是單克隆抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段是人或人源化抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段是嵌合抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段包含人重鏈恒定區(qū)和人輕鏈恒定區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段是單鏈抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段是Fab片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段是scFv。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段結(jié)合人HER3和食蟹猴HER3。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段是IgG同種型。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其片段包含框架，其中氨基酸已被替換進(jìn)入來(lái)自各自的人VH或VL種系序列的抗體框架。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3的分離的抗體或其片段，其包含表I中任意抗體的由Kabat或Chothia計(jì)算的1,2,3,4,5或6個(gè)CDR。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)Her3受體的分離的抗體或其片段，其包含選自SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:22，SEQ ID NO:28，SEQ ID NO -AO, SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:64，SEQ ID NO:76，SEQ ID NO:82，SEQ ID NO:94，SEQ IDNO:100, SEQID NO:112, SEQ ID NO:118, SEQ ID NO:130, SEQ ID NO:136, SEQ IDNO:148，SEQ ID NO:166, SEQ ID NO:184，SEQ ID NO:202，SEQ IDNO:220，SEQ ID NO:238，SEQ IDNO:256, SEQ ID NO:274，SEQ IDNO:292，SEQ ID NO:310，SEQ ID NO:328，SEQ ID NO:346和 SEQ IDNO:364 的重鏈 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO: 15的VH和含有SEQ ID NO: 14的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO: 33的VH和含有SEQ ID NO:32的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:51的VH和含有SEQ ID NO:50的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:69的VH和含有SEQ ID NO:68的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:87的VH和含有SEQ ID NO:86的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。 在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:105的VH和含有SEQ ID NO:104的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:123的VH和含有SEQ ID NO:122的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:141的VH和含有SEQ ID NO:140的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:159的VH和含有SEQ ID NO:158的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:177的VH和含有SEQ ID NO:176的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:195的VH和含有SEQ ID NO:194的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基
酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:213的VH和含有SEQ ID NO:212的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:231的VH和含有SEQ ID NO:230的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:249的VH和含有SEQ ID NO:248的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:267的VH和含有SEQ ID NO:266的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:285的VH和含有SEQ ID NO:284的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明 涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:303的VH和含有SEQ ID NO:302的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:321的VH和含有SEQ ID NO:320的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:339的VH和含有SEQ ID NO:338的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:357的VH和含有SEQ ID NO:356的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，所述抗體包含含有SEQ ID NO:375的VH和含有SEQ ID NO:374的VL，或與其具有97-99%同一性的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含具有SEQ IDNO:493的可變重鏈序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含具有SEQ IDNO:494的可變輕鏈序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含具有SEQ IDNO:493的可變重鏈序列和具有SEQ ID NO:494的可變輕鏈序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及針對(duì)HER3受體的分離的抗體或其片段，其具有包含⑶R1，⑶R2和⑶R3的變體重鏈可變區(qū)，其中變體在⑶R1，⑶R2或⑶R3之一中具有至少1_4
個(gè)氨基酸改變。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:2的 CDRl ；SEQ ID NO:3 的 CDR2 ；SEQ ID NO:4 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:5 的 CDRl ；SEQ ID NO:6 的 CDR2 ;和 SEQ IDNO:7 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:20 的 CDRl ；SEQ ID NO:21 的 CDR2 ；SEQ ID NO:22 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:23 的CDRl ；SEQ ID NO:24 的 CDR2 和 SEQ ID NO:25 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:38 的 CDRl ；SEQ ID NO:39 的 CDR2 ；SEQ ID NO:40 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:41 的CDRl ；SEQ ID NO:42 的 CDR2 和 SEQ ID NO:43 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:56 的 CDRl ；SEQ ID NO:57 的 CDR2 ；SEQ ID NO:58 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:59 的CDRl ；SEQ ID NO:60 的 CDR2 和 SEQ ID NO:61 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:74 的 CDRl ；SEQ ID NO:75 的 CDR2 ；SEQ ID NO:76 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:77 的CDRl ；SEQ ID NO:78 的 CDR2 和 SEQ ID NO:79 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:92 的 CDRl ；SEQ ID NO:93 的 CDR2 ；SEQ ID NO:94 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:95 的CDRl ；SEQ ID NO:96 的 CDR2 和 SEQ ID NO:97 的 CDR3。在另一個(gè)方面 ，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:110 的 CDR1;SEQ ID NO:111 的 CDR2 ;SEQ ID NO:112 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:113的 CDRl ；SEQ ID NO:114 的 CDR2 和 SEQ ID NO:115 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:128 的 CDRl ；SEQ ID NO:129 的 CDR2 ；SEQ ID NO:130 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:131的 CDRl ；SEQ ID NO:132 的 CDR2 和 SEQ ID NO:133 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:146 的 CDRl ；SEQ ID NO:147 的 CDR2 ；SEQ ID NO:148 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:149的 CDRl ；SEQ ID NO:150 的 CDR2 和 SEQ ID NO:151 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:164 的 CDRl ；SEQ ID NO:165 的 CDR2 ；SEQ ID NO:166 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:167的 CDRl ；SEQ ID NO:168 的 CDR2 和 SEQ ID NO:169 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:182 的 CDRl ；SEQ ID NO:183 的 CDR2 ；SEQ ID NO:184 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:185的 CDRl ；SEQ ID NO:186 的 CDR2 和 SEQ ID NO:187 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:200 的 CDRl ；SEQ ID NO:201 的 CDR2 ；SEQ ID NO:202 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:203的 CDRl ；SEQ ID NO:204 的 CDR2 和 SEQ ID NO:205 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:218 的 CDRl ；SEQ ID NO:219 的 CDR2 ；SEQ ID NO:220 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:221的 CDRl ；SEQ ID NO:222 的 CDR2 和 SEQ ID NO:223 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:236 的 CDRl ；SEQ ID NO:237 的 CDR2 ；SEQ ID NO:238 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:239的 CDRl ；SEQ ID NO:240 的 CDR2 和 SEQ ID NO:241 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:254 的 CDRl ；SEQ ID NO:255 的 CDR2 ；SEQ ID NO:256 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:257的 CDRl ；SEQ ID NO:258 的 CDR2 和 SEQ ID NO:259 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:272 的 CDRl ；SEQ ID NO:273 的 CDR2 ；SEQ ID NO:274 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:275的 CDRl ；SEQ ID NO:276 的 CDR2 和 SEQ ID NO:277 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:290 的 CDRl ；SEQ ID NO:291 的 CDR2 ；SEQ ID NO:292 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:293的 CDRl ；SEQ ID NO:294 的 CDR2 和 SEQ ID NO:295 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:308 的 CDRl ；SEQ ID NO:309 的 CDR2 ；SEQ ID NO:310 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:311的 CDRl ；SEQ ID NO:312 的 CDR2 和 SEQ ID NO:313 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉 及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:326 的 CDRl ；SEQ ID NO:327 的 CDR2 ；SEQ ID NO:328 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:329的 CDRl ；SEQ ID NO:330 的 CDR2 和 SEQ ID NO:331 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:344 的 CDRl ；SEQ ID NO:345 的 CDR2 ；SEQ ID NO:346 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:347的 CDRl ；SEQ ID NO:348 的 CDR2 和 SEQ ID NO:349 的 CDR3。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及分離的抗體或其片段，其包含重鏈可變區(qū)SEQ ID NO:362 的 CDRl ；SEQ ID NO:363 的 CDR2 ；SEQ ID NO:364 的 CDR3 ;輕鏈可變區(qū) SEQ ID NO:365的 CDRl ；SEQ ID NO:366 的 CDR2 和 SEQ ID NO:367 的 CDR3。在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合HER3的抗體的片段選自Fab，F(xiàn)(ab2)’，F(xiàn)(ab)2’，scFV,VHH, VH, VL, dAb。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含抗體或片段和可藥用的載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物還包含另外的治療劑，例如抗體、小分子、mTOR抑制劑或PI3激酶抑制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明的抗體或其片段和HERl抑制劑，所述抑制劑包括但不限于，馬妥珠單抗(Matuzumab) (EMD72000), Erbitux /西妥昔單抗(Cetuximab), Vectlbix / 帕尼單抗(Panitumumab), mAb806,尼妥珠單抗(Nimotuzumab)，Iressa / 吉非替尼(Gefitinib)，C1-1033 (PD183805)，拉帕替尼(Lapatinib) (GW-572016) , Tykerb / 二甲苯橫酸拉帕替尼(Lapatinib Ditosylate),Tarceva / 鹽酸埃羅替尼(Erlotinib HCl) (0S1-774)，PK1-166 和Tovok ,在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明的抗體或其片段和HER2抑制劑，所述抑制劑包括但不限于，帕妥珠單抗(Pertuzumab),曲妥珠單抗(Trastuzumab),來(lái)那替尼(neratinib)，拉帕替尼或二甲苯磺酸拉帕替尼/ 1> kerb.
在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明的抗體或其片段和HER3抑制劑，所述抑制劑包括但不限于，MM-121，MM-111，IB4C3, 2DID12 (U3 Pharma AG)，AMG888 (Amgen)，AV-203 (Aveo)，MEHD7945A (Genentech);抑制 HER3 的小分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明的抗體或其片段和HER4抑制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明的抗體或其片段和PI3激酶抑制劑，所述抑制劑包括但不限于，⑶C0941BEZ235，BMK120和BYL719。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明的抗體或其片段和mTOR抑制劑，所述抑制劑包括但不限于，坦羅莫司(Temsirolimus) / Torisel ，ridaforolimus/雷帕霉素(deforolimus)，AP23573, MK8669,依維莫司(everolimus)廣Affinitor 。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法，其包括選擇具有表達(dá)HER3的癌癥的受試者，對(duì)受試者施用有效量的包含選自前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或其片段的組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者是人。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法，其包括選擇具有表達(dá)HER3的癌癥的受試者，對(duì)受試者施用有效量的包含選自前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或其片段的組合物，其中所述癌癥選自乳腺癌，結(jié)腸直腸癌，肺癌，多發(fā)性骨髓瘤，卵巢癌，肝癌，胃癌，胰腺癌，前列腺癌，急性髓細(xì)胞白血病，慢性髓細(xì)胞白血病，骨肉瘤，鱗狀細(xì)胞癌，外周神經(jīng)鞘瘤，許旺氏細(xì)胞瘤，頭和頸癌，膀胱癌，食道癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，軟組織透明細(xì)胞肉瘤，惡性間皮瘤，多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤，腎癌，黑色素瘤。在一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥是乳腺癌。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法，其包括選擇具有表達(dá)HER3的癌癥的受試者，對(duì)所述受試者施用有效量的包含與HER3結(jié)合的表I中公開(kāi)的抗體或其片段的組合的組合物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及治療癌癥的方法，其包括選擇具有表達(dá)HER3的癌癥的受試者，對(duì)所述受試者施用有效量的包含與HER3結(jié)合的并抑制HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 的抗體或其片段的組合物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或其片段在制造用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥的藥物中的用途，所述癌癥選自乳腺癌，結(jié)腸直腸癌，肺癌，多發(fā)性骨髓瘤，卵巢癌，肝癌，胃癌，胰腺癌，前列腺癌，急性髓細(xì)胞白血病，慢性髓細(xì)胞白血病，骨肉瘤，鱗狀細(xì)胞癌，外周神經(jīng)鞘瘤，許旺氏細(xì)胞瘤，頭和頸癌，膀胱癌，食道癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，軟組織透明細(xì)胞肉瘤，惡性間皮瘤，多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤，腎癌和黑色素瘤。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:15的VH和SEQ ID NO:14的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:33的VH和SEQ ID NO:32的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:51的VH和SEQ ID NO:50的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:69的VH和SEQ ID NO:68的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:87的VH和SEQ ID NO:86的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:105的VH和SEQ ID NO:104的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:123的VH和SEQ ID NO:122的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:141的VH和SEQ ID NO:140的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:159的VH和SEQ ID NO:158的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:177的VH和SEQ ID NO:176的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:195的VH和SEQ ID NO:194的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:213的VH和SEQ ID NO:212的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:231的VH和SEQ ID NO:230的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:249的VH和SEQ ID NO:248的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:267的VH和SEQ ID NO:266的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:285的VH和SEQ ID NO:284的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:303的VH和SEQ ID NO:302的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:321的VH和SEQ ID NO:320的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:339的VH和SEQ ID NO:338的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:357的VH和SEQ ID NO:356的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:375的VH和SEQ ID NO:374的VL的抗體，其用于治療由HER3配體依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或配體非依賴性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑介導(dǎo)的癌癥。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉具有SEQ ID NO: 15的VH和SEQ ID NO: 14的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:33的VH和SEQ ID NO:32的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:51的VH和SEQ ID NO:50的VL的抗體，其用作藥物。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:69的VH和SEQ ID NO:68的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:87的VH和SEQ ID NO:86的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:105的VH和SEQ ID NO:104的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:123的VH和SEQ ID NO:122的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:141的VH和SEQ ID NO:140的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:159的VH和SEQ ID NO:158的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:177的VH和SEQ ID NO:176的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:195的VH和SEQ ID NO:194的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:213的VH和SEQ ID NO:212的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:231的VH和SEQ ID NO:230的VL的抗體，其用作藥物。 在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:249的VH和SEQ ID NO:248的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:267的VH和SEQ ID NO:266的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:285的VH和SEQ ID NO:284的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:303的VH和SEQ ID NO:302的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:321的VH和SEQ ID NO:320的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:339的VH和SEQ ID NO:338的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:357的VH和SEQ ID NO:356的VL的抗體，其用作藥物。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及具有SEQ ID NO:375的VH和SEQ ID NO:374的VL的抗體，其用作藥物。附圖簡(jiǎn)述

圖1:用人、小鼠、大鼠和食蟹猴HER3得到的代表性M0R10701SET曲線圖2:通過(guò)FACS滴定的SK-Br-3細(xì)胞結(jié)合測(cè)定
圖3:HER3結(jié)構(gòu)域結(jié)合ELISA圖4:氫氘交換表位作圖。A)在HDX-MS分析后回收的HER3E⑶肽用虛線指示。突出了潛在的N連接的糖基化位點(diǎn)。B)在通過(guò)MS鑒定的肽中觀察到的相對(duì)氘化程度。C)在公開(kāi)的HER3晶體結(jié)構(gòu)上繪制的受保護(hù)的殘基。圖5:A)HER3/M0R09823和HER3/M0R09825的X射線晶體結(jié)構(gòu)的表面表示。HER3 (淺灰色)處于封閉的構(gòu)象中，M0R09823或M0R09825(最深的灰色)結(jié)合結(jié)構(gòu)域2和4。B).HER3/M0R09823結(jié)構(gòu)中HER3的表面視圖，以與㈧相似的方向顯示。為了清楚略去了M0R09823。C)用條帶結(jié)構(gòu)圖示的HER3/M0R09823結(jié)構(gòu)，相對(duì)圖(A)，(B)和(D)旋轉(zhuǎn)90°觀察。D)由M0R09823Fab識(shí)別的失活的HER3構(gòu)象的條帶表示，放大顯示了結(jié)構(gòu)域2/結(jié)構(gòu)域4的界面，突出了在Fab Sil距離內(nèi)的HER3殘基。E)通過(guò)ELISA滴定的突變體HER3/M0R10703結(jié)合測(cè)定。圖6:配體誘導(dǎo)的⑷或配體非依賴性的(B)HER3磷酸化的抑制。圖7:在HER2擴(kuò)增的細(xì)胞系中的HER3依賴性的下游信號(hào)傳遞途經(jīng)的抑制。圖8:在A)BT-474細(xì)胞和B)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白刺激的MCF7細(xì)胞中HER3抑制對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。圖9:M0R09823和M0R09825對(duì)神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合MCF7細(xì)胞的影響。圖10:M0R09823結(jié)合對(duì)HER3/神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物形成的影響，如通過(guò)Biacore 所評(píng)估。無(wú)抗體(黑色條)，M0R09823 (白色條)，105.5 (灰色)和對(duì)照IgG (條紋條)。

圖11:M0R09823介導(dǎo)的體內(nèi)(A)配體非依賴性(BT-474)和(B)配體依賴性(BxPC3)HER3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制。圖12:M0R10701 和 M0R10703 對(duì) BT-474 腫瘤生長(zhǎng)的影響。圖13:M0R10701 和 M0R10703 對(duì) BxPC3 腫瘤生長(zhǎng)的影響。圖14:M0R10703體外藥物組合等效應(yīng)圖(A)M0R09823/曲妥珠單抗，(B)M0R09823/拉帕替尼，(C)M0R10703/BEZ235，(D)M0R10703/BKM120, (E)M0R10703/BYL719, (F)M0R10703/RADOOI, (G)M0R10703/西妥昔單抗，和(H)M0R10703/埃羅替尼。圖15:M0R10701或M0R10703與(A)曲妥珠單抗和(B)埃羅替尼在BT-474和L3.3中的體內(nèi)組合。發(fā)明詳述為了使本發(fā)明更易于理解，首先定義特定術(shù)語(yǔ)。在通篇詳述的說(shuō)明書(shū)中示出了另外的定義。本文中使用的短語(yǔ)“信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)”或“信號(hào)傳遞活性”指一般通過(guò)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，例如生長(zhǎng)因子與受體的結(jié)合起始的生化因果關(guān)系，導(dǎo)致信號(hào)從細(xì)胞一部分傳遞到細(xì)胞另一部分。對(duì)HER3而言，所述傳遞涉及在導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的系列反應(yīng)中的一種或多種蛋白質(zhì)上的一個(gè)或多個(gè)酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸殘基的特異性磷酸化。倒數(shù)第二個(gè)過(guò)程一般包括核事件，導(dǎo)致基因表達(dá)的改變?！癏ER受體”是屬于HER受體家族的受體蛋白酪氨酸激酶，包括EGFR，HER2，HER3和HER4受體以及以后有待鑒定的此家族的其他成員。HER受體將一般包含可結(jié)合HER配體的胞外結(jié)構(gòu)域；親脂性跨膜結(jié)構(gòu)域；保守的胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域；和含有若干可被磷酸化的酪氨酸殘基的羧基端信號(hào)傳遞結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，HER受體是天然序列的人HER受體。術(shù)語(yǔ)“HER1，” "ErbBI, ” “表皮生長(zhǎng)因子受體”和“EGFR”在本文中可互換使用，指例如在 Carpenter 等人 Ann.Rev.Biochem.56:881-914 (1987)中公開(kāi)的 EGFR，包括其天然存在的突變體形式(例如在Humphrey等人，(1990)PNAS(USA)87:4207-4211中的缺失突變體EGFR)。erbBl指編碼EGFR蛋白產(chǎn)物的基因。術(shù)語(yǔ)“HER2”和“EAB2”在本文中可互換使用，指例如在Semba等人，(1985)PNAS (USA)82:6497-6501 和 Yamamoto 等人(1986)Nature319:230-234 (Genebankaccession number X03363)中描述的人HER2蛋白。術(shù)語(yǔ)“erbB2”指編碼人ErbB2的基因，“neu”指編碼大鼠ρ185.的基因。本文中的術(shù)語(yǔ)“HER4”和“ErbB4”指例如在EP專利申請(qǐng)?zhí)?99，274 ；Plowman等人，(1993) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 90:1746-1750 ;和 Plowman 等人，(1993) Nature, 366:473-475中公開(kāi)的受體多肽，包括其同種型，例如在1999年4月22日公布的W099/19488中公開(kāi)的同種型。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“HER3”或“HER3受體”又稱“ErbB3”，指哺乳動(dòng)物HER3蛋白，“herf”或"erbB3"指哺乳動(dòng)物her3基因。優(yōu)選的HER3蛋白是存在于細(xì)胞的細(xì)胞膜中的人HER3蛋白。人her3基因在美國(guó)專利號(hào)5，480，968和Plowman等人，(1990)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA，87:4905-4909 中描述。在登記號(hào)NP—001973(人)中定義的人HER3，下文中以SEQ ID NO:1表示。所有的命名表示全長(zhǎng)的、未成熟的HER3(氨基酸1-1342)。未成熟的HER3在位置19和20之間被切割，得到成熟的HER3蛋白(20-1342位氨基酸)。mrandalqvl gllfslargs evgnsqavcp gtlnglsvtg daenqyqtly klyercevvm
gnleivltgh nadlsfIqwi revtgyvlva mnefstlplp nlrvvrgtqv ydgkfaifvmlnyntnssha lrqlrltqlt eilsggvyie kndklchmdt idwrdivrdr daeivvkdngrscppchevc kgrcwgpgse dcqtltktic apqcnghcfg pnpnqcchde caggcsgpqdtdcfacrhfn dsgacvprcp qplvynkltf qlepnphtky qyggvcvasc phnfvvdqtscvracppdkm evdknglkmc epcgglcpka cegtgsgsrf qtvdssnidg fvnctkilgnldflitglng dpwhkipald peklnvfrtv reitgylniq swpphmhnfs vfsnlttiggrslynrgfsl limknlnvts lgfrslkeis agriyisanr qlcyhhslnw tkvlrgpteerldikhnrpr rdcvaegkvc dplcssggcw gpgpgqclsc rnysrggvcv thcnflngeprefaheaecf schpecqpme gtatcngsgs dtcaqcahfr dgphcvsscp hgvlgakgpiykypdvqnec rpchenctqg ckgpelqdcl gqtlvligkt hltmaltvia glvvifmmlggtflywrgrr iqnkramrry lergesiepl dpsekankvl arifketelr klkvlgsgvfgtvhkgvwip egesikipvc ikviedksgr qsfqavtdhm laigsldhah ivrllglcpgsslqlvtqyl plgslldhvr qhrgalgpql llnwgvqiak gmyyleehgm vhrnlaarnvllkspsqvqv adfgvadllp pddkqllyse aktpikwmal esihfgkyth qsdvwsygvtvwelmtfgae pyaglrlaev pdllekgerl aqpqictidv ymvmvkcwmi denirptfkelaneftrmar dpprylvikr esgpgiapgp ephgltnkkl eevelepeld ldldleaeednlatttlgsa lslpvgtlnr prgsqsllsp ssgympmnqg nlgescqesa vsgssercprpvslhpmprg clasessegh vtgseaelqe kvsmcrsrsr srsprprgds ayhsqrhsll
tpvtplsppg leeedvngyv mpdthlkgtp ssregtlssv glssvlgtee ededeeyeymnrrrrhspph pprpssleel gyeymdvgsd lsaslgstqs cplhpvpimp tagttpdedyeymnrqrdgg gpggdyaamg acpaseqgye emrafqgpgh qaphvhyarl ktlrsleatdsafdnpdywh srlfpkanaq rt (SEQ ID NO:1)本文中使用的術(shù)語(yǔ)“HER配體”指結(jié)合并活化HER受體如HER1、HER2、HER3和HER4的多肽。HER配體的實(shí)例包括但不限于神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白I (NRG)，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白3，神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4，乙胞素，肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子，表皮調(diào)節(jié)素，表皮生長(zhǎng)因子，雙調(diào)蛋白和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α。術(shù)語(yǔ)包括天然存在多肽的生物活性片段和/或變體。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“HER3配體”指結(jié)合并活化HER3的多肽。HER3配體的實(shí)例包括但不限于神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白I(NRG)和神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2，乙胞素，肝素結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子和表皮調(diào)節(jié)素。術(shù)語(yǔ)包括天然存在多肽的生物活性片段和/或變體?！癏ER-HER蛋白復(fù)合物”是任意組合的含有HER共受體的非共價(jià)締合的寡聚物(例如，HER1-HER2, HER1-HER3, HER1-HER4, HER2-HER3, HER3-HER4,等等)。當(dāng)表達(dá)這兩種受體的細(xì)胞暴露于HER配體例如NRG，或當(dāng)HER受體有活性或被過(guò)表達(dá)時(shí)，可形成此復(fù)合物?！癏ER2-HER3蛋白復(fù)合物”是含有HER2受體和HER3受體的非共價(jià)締合的寡聚物。當(dāng)表達(dá)這兩種受體的細(xì)胞暴露于HER3配體例如NRG，或當(dāng)HER2受體有活性/被過(guò)表達(dá)時(shí)，可形成此復(fù)合物。本文中使用的短語(yǔ)“HER3活性”或“HER3活化”指寡聚化(例如包含HER3的復(fù)合物的增加)，HER3磷酸化，構(gòu)象重排(例如由配體誘導(dǎo)的)和HER3介導(dǎo)的下游信號(hào)傳遞的增加。在HER3的上下文中使用的術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定”或“穩(wěn)定的”指不阻斷配體結(jié)合HER3，直接維持(鎖定、束縛、保持、優(yōu)先結(jié)合、利于)HER3的失活態(tài)或失活構(gòu)象的抗體或其片段，使得配體結(jié)合不再能夠活化HER3?？墒褂脤?shí)施例中描述的測(cè)定(例如Biacore測(cè)定)測(cè)量配體與穩(wěn)定的HER3受體的結(jié)合。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“配體依賴性信號(hào)傳遞”指HER(例如HER3)通過(guò)配體的活化。通過(guò)使下游信號(hào)傳遞途徑(例如PI3K)活化的增加的寡聚化(例如異源二聚化)和/或HER3磷酸化證明HER3活化。當(dāng)使用實(shí)施例中描述的測(cè)定測(cè)量時(shí)，相對(duì)于未處理(對(duì)照)細(xì)胞，在暴露于抗原結(jié)合蛋白(例如抗體)的受刺激的細(xì)胞中，抗體或其片段可統(tǒng)計(jì)上顯著地減少磷酸化HER3的量。表達(dá)HER3的細(xì)胞可為天然存在的細(xì)胞系(例如MCF7)，或可為通過(guò)在宿主細(xì)胞中引入編碼HER3蛋白的核酸重組產(chǎn)生的細(xì)胞?？赏ㄟ^(guò)外源加入活化HER3配體或通過(guò)內(nèi)源表達(dá)活化配體進(jìn)行細(xì)胞刺激?！皽p少細(xì)胞中由神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白誘導(dǎo)的HER3活化”的抗體或其片段是這樣的抗體或其片段，當(dāng)使用實(shí)施例中描述的測(cè)定測(cè)量時(shí)，相對(duì)于未處理(對(duì)照)細(xì)胞，所述抗體或其片段統(tǒng)計(jì)上顯著地減少HER3酪氨酸磷酸化。這可基于在將HER3暴露于NRG和目的抗體之后的HER3磷酸化水平測(cè)定。表達(dá)HER3蛋白的細(xì)胞可為天然存在的細(xì)胞或細(xì)胞系(例如MCF7),或可為重組產(chǎn)生的細(xì)胞或細(xì)胞系。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“配體非依賴性信號(hào)傳遞”指不需要配體結(jié)合的細(xì)胞HER3活性(例如磷酸化)。例如， 配體非依賴性HER3活化可為HER2過(guò)表達(dá)或在HER3異源二聚體搭檔例如EGFR和HER2中的活化突變的結(jié)果。相對(duì)于未處理(對(duì)照)細(xì)胞，在暴露于抗原結(jié)合蛋白(例如抗體)的細(xì)胞中，抗體或其片段可統(tǒng)計(jì)上顯著地減少磷酸化HER3的量。表達(dá)HER3的細(xì)胞可為天然存在的細(xì)胞系(例如SK-Br-3)，或可為通過(guò)在宿主細(xì)胞中引入編碼HER3蛋白的核酸重組產(chǎn)生的細(xì)胞。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“阻斷”指中止或阻止相互作用或過(guò)程，例如，中止配體依賴性或配體非依賴性信號(hào)傳遞。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“識(shí)別”指找到并與其構(gòu)象表位相互作用(例如結(jié)合)的抗體或其片段。本文中使用的短語(yǔ)“同時(shí)結(jié)合”指可與HER抗體一起結(jié)合HER受體上的配體結(jié)合位點(diǎn)的HER配體。這表示配體和抗體都可一起結(jié)合HER受體。僅為了說(shuō)明的目的，HER3配體NRG可與HER3抗體一起結(jié)合HER3受體。測(cè)量配體和抗體同時(shí)結(jié)合的測(cè)定在實(shí)施例章節(jié)中描述(例如，Biacore)。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“未能(fails)”指沒(méi)有進(jìn)行特定事件的抗體或其片段。例如“未能活化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)”的抗體或其片段是不觸發(fā)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗體或其片段未能引起構(gòu)象改變”的抗體或其片段是不引起HER受體的結(jié)構(gòu)改變的抗體或其片段；穩(wěn)定處于失活態(tài)的HER受體使得HER受體“未能二聚化”的抗體或其片段是不形成蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物的抗體或其片段。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“抗體”指與HER3表位相互作用(例如，通過(guò)結(jié)合、位阻、穩(wěn)定/去穩(wěn)定、空間分布)且抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的整個(gè)抗體。天然存在的"抗體"是包含通過(guò)二硫鍵相互連接的至少2條重(H)鏈和2條輕(L)鏈的糖蛋白。每條重鏈由重鏈可變區(qū)(本文中簡(jiǎn)稱VH)和重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒 定區(qū)由三個(gè)結(jié)構(gòu)域CH1，CH2和CH3組成。每條輕鏈由輕鏈可變區(qū)(本文中簡(jiǎn)稱VL)和輕鏈恒定區(qū)組成。輕鏈恒定區(qū)由一個(gè)結(jié)構(gòu)域CL組成。VH和八區(qū)可進(jìn)一步細(xì)分為被稱作互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的高變區(qū)，其中散布更保守的被稱作框架區(qū)(FR)的區(qū)域。每個(gè)VH和VL由三個(gè)CDR和4個(gè)FR組成，從氨基端到羧基端以如下順序排列:FR1，CDR1，F(xiàn)R2，CDR2，F(xiàn)R3，CDR3，F(xiàn)R4。重鏈和輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)可介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子(包括免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一個(gè)組分(Clq))的結(jié)合。術(shù)語(yǔ)“抗體”包括例如，單克隆抗體、人抗體、人源化抗體、駱騎(camelised)抗體、嵌合抗體、單鏈Fv(scFv)、二硫化物連接的Fv(SdFv)、Fab片段、F(ab')片段和抗獨(dú)特型(抗_Id)抗體(包括例如，針對(duì)本發(fā)明抗體的抗-1d抗體)，和上述任意的表位結(jié)合片段?？贵w可為任意同種型(例如，IgG，IgE, IgM, IgD, IgA 和 IgY)，任意種類(例如，IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl 和 IgA2)或亞類。輕鏈和重鏈都被分為結(jié)構(gòu)和功能同源性區(qū)。術(shù)語(yǔ)“恒定”和“可變”是在功能上使用的。就此點(diǎn)而言，應(yīng)當(dāng)理解輕(VL)鏈和重(VH)鏈部分的可變結(jié)構(gòu)域都決定抗原識(shí)別和特異性。相反地，輕鏈(CL)和重鏈(CH1，CH2或CH3)的恒定結(jié)構(gòu)域賦予重要的生物學(xué)性能，例如分泌、經(jīng)胎盤(pán)的遷移、Fe受體結(jié)合、補(bǔ)體結(jié)合，等等。按照慣例，當(dāng)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域離抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)或氨基端變得越來(lái)越遠(yuǎn)時(shí)，其編號(hào)增大。N-端為可變區(qū)，C-端為恒定區(qū)；CH3和CL結(jié)構(gòu)域?qū)嶋H上分別包含重鏈和輕鏈的羧基端。本文中使用的短語(yǔ)“抗體片段”指保留與HER3表位特異性相互作用(例如，通過(guò)結(jié)合、位阻、穩(wěn)定/去穩(wěn)定、空間分布)且抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力的抗體的一個(gè)或多個(gè)部分。結(jié)合片段的實(shí)例包括但不限于Fab片段，由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的單價(jià)片段；F(ab)2片段，包含在鉸鏈區(qū)通過(guò)二硫鍵連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；由抗體單條臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；dAb片段(Ward等，(1989)Nature341:544-546)，其由VH結(jié)構(gòu)域組成；和分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。此外，盡管Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域VL和VH由單獨(dú)的基因編碼，但可使用重組方法，通過(guò)合成接頭將它們連接，所述合成接頭使得它們能夠制備成單條蛋白質(zhì)鏈，其中VL和VH區(qū)域配對(duì)形成單價(jià)分子(稱為單鏈Fv (scFv);參閱例如Bird等,(1988) Science242:423-426 JPHuston 等，(1988) Proc.Natl.Acad.Sc1.85:5879-5883)。此類單鏈抗體也旨在涵蓋于術(shù)語(yǔ)“抗體片段”之內(nèi)。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)獲得這些抗體片段，并篩選所述片段，以與完整抗體相同的方式使用所述片段?？贵w片段也可摻入到單結(jié)構(gòu)域抗體、巨型抗體(maxibodies)、微型抗體(minibodies)、胞內(nèi)抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、v-NAR和bis_scFv中(參閱例如Hollinger 和 Hudson, (2005), Nature Biotechnology, 23，9，1126-1136)?？贵w片段可移植到基于多肽如III型纖連蛋白(Fn3)的支架中(參閱美國(guó)專利號(hào)6，703，199，其描述了纖連蛋白多肽單抗體)?？贵w片段可摻入到包含一對(duì)串聯(lián)Fv區(qū)段(VH-CH1-VH-CH1)的單鏈分子中，所述串聯(lián)Fv區(qū)段與互補(bǔ)輕鏈多肽一起形成一對(duì)抗原結(jié)合區(qū)(Zapata等，(1995) Protein Eng.8:1057-1062 ;和美國(guó)專利號(hào) 5，641，870)。術(shù)語(yǔ)“表位”包括能夠特異性結(jié)合免疫球蛋白或與分子相互作用的蛋白質(zhì)決定簇。表位決定簇一般由分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)，如氨基酸或碳水化合物或糖側(cè)鏈組成，并可具有特異性的三維結(jié)構(gòu)特征，以及特異性電荷特征。表位可為“線性”或“構(gòu)象”表位。

術(shù)語(yǔ)“線性表位”指下述表位，其蛋白質(zhì)和相互作用分子(例如抗體)之間的所有相互作用點(diǎn)沿蛋白質(zhì)一級(jí)氨基酸序列線性存在(連續(xù)的)。一旦確定了抗原上的期望表位，有可能生產(chǎn)針對(duì)該表位的抗體，例如使用在本發(fā)明中描述的技術(shù)?？蛇x地，在發(fā)現(xiàn)過(guò)程中，抗體的生成和表征可闡明有關(guān)期望表位的信息。通過(guò)此信息，然后有可能競(jìng)爭(zhēng)地篩選結(jié)合相同表位的抗體。實(shí)現(xiàn)方法是進(jìn)行交叉競(jìng)爭(zhēng)研究，以尋找彼此競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的抗體，例如競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原的抗體。在國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朩02003/48731中描述了基于抗體的交叉競(jìng)爭(zhēng)的用于“裝箱(binning)”抗體的高通量方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，實(shí)際上抗體可特異性結(jié)合的任意物質(zhì)都可為表位。表位可包含抗體結(jié)合的殘基。術(shù)語(yǔ)“構(gòu)象表位”指下述表位,其中不連續(xù)的氨基酸在三維構(gòu)象中聚集在一起。在構(gòu)象表位中，相互作用點(diǎn)出現(xiàn)在蛋白質(zhì)上彼此分離的氨基酸殘基上。在一個(gè)實(shí)施方案中，表位是在本說(shuō)明書(shū)的實(shí)施例中描述的表位。在一個(gè)實(shí)施方案中，構(gòu)象表位由SEQ ID N0:1的
(i)HER3氨基酸殘基265-277和315 (結(jié)構(gòu)域2的)和(ii)HER3氨基酸殘基571，582-584，596-597，600-602，609-615 (結(jié)構(gòu)域4的)，或其子集定義。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，由創(chuàng)造分子形狀的殘基或側(cè)鏈所占據(jù)的空間有助于決定表位是什么。一般而言，針對(duì)特定靶抗原的特異性抗體將優(yōu)先識(shí)別蛋白質(zhì)和/或大分子復(fù)雜混合物中靶抗原上的表位?？墒褂萌我鈹?shù)目的本領(lǐng)域熟知的表位作圖技術(shù)鑒定包括表位的給定多肽的區(qū)域。見(jiàn)例如 Molecular Biology, Vol.66 (Glenn E.Morris,編，1996) Humana Press, Totowa, NewJersey的方法中的Epitope Mapping Protocols。例如,可通過(guò)例如在固相支持物上同時(shí)合成大量肽，所述肽對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)分子的部分，當(dāng)肽仍然連接在固相時(shí)使肽與抗體反應(yīng)來(lái)測(cè)定線性表位。這樣的技術(shù)是本領(lǐng)域公知的，在例如，美國(guó)專利號(hào)4，708，871 ;Geysen等人，(1984) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA8:3998-4002 ；Geysen 等人，(1985) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA82:78-182 ;Geysen等人，(1986)Mol.1mmunol.23:709-715 中描述。類似地，例如通過(guò)例如，氫/氘交換、X射線晶體學(xué)和二維核磁共振，通過(guò)測(cè)定氨基酸的空間構(gòu)象容易地鑒定構(gòu)象表位。見(jiàn)例如Epitope Mapping Protocols,同上。也可使用標(biāo)準(zhǔn)抗原性和親水性圖(例如使用例如從Oxford Molecular Group獲得的Omiga版本1.0軟件程序計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)抗原性和親水性圖)鑒定蛋白質(zhì)的抗原性區(qū)域。此計(jì)算機(jī)程序應(yīng)用Hopp/Woods法，Hopp等人，(1981)Proc.Natl.Acad.Sci USA78:3824-3828 用于測(cè)定抗原性譜，應(yīng)用 Kyte-Doolittle技術(shù)，Kyte 等人，(1982) J.Mo1.Biol.157:105-132 用于親水性圖。本文中使用的術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)位”指決定與表位結(jié)合的結(jié)合區(qū)的一般結(jié)構(gòu)。此結(jié)構(gòu)影響結(jié)合區(qū)是否可結(jié)合表位和以何種方式結(jié)合表位。互補(bǔ)位可指負(fù)責(zé)抗體或其片段結(jié)合抗原決定簇的抗體的抗原性位點(diǎn)?；パa(bǔ)位也指抗體的獨(dú)特位，和結(jié)合表位的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。在一個(gè)實(shí)施方案中，互補(bǔ)位是與包含SEQ ID N0:1的(i)HER3氨基酸殘基265-277和315(結(jié)構(gòu)域 2 的)和(ii)HER3 氨基酸殘基 571，582-584，596-597，600-602，609-615 (結(jié)構(gòu)域 4的)，或其子集的構(gòu)象表位結(jié)合的抗體區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，互補(bǔ)位是包含CDR序列的抗體區(qū)域。在一個(gè)實(shí)施方案中，互補(bǔ)位包含表I中所列的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，互補(bǔ)位包含與 HER3 殘基:Asn266, Lys267, Leu268, Thr269, Gln271, Glu273, Pro274, Asn275,Pro276，His277，Asn315，Asp571，Pro583，His584，Ala596，Lys597 結(jié)合的至少一個(gè)氨基酸殘基。在一個(gè)實(shí)施方案中，互補(bǔ)位包含與HER3殘基:Tyr265，Lys267，Leu268，Phe270，Gly582，Pro583, Lys597, Ile600, Lys602, Glu609, Arg611, Pro612, Cys613, His614, Glu615 結(jié)合的至少一個(gè)氨基酸殘基。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可用本申請(qǐng)陳述的方式測(cè)定任意抗體或其變體的互補(bǔ)位。

本文中使用的短語(yǔ)“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”指具有基本相同的氨基酸序列或來(lái)源于相同的遺傳來(lái)源的多肽，包括抗體、抗體片段、雙特異性抗體等。此術(shù)語(yǔ)也包括單分子組合物的抗體分子的制劑。單克隆抗體組合物展示對(duì)特定表位的單一結(jié)合特異性和親和力。本文中使用的短語(yǔ)“人抗體”包括具有如下可變區(qū)的抗體，其中框架和CDR區(qū)都來(lái)自人來(lái)源的序列。此外，如果抗體包含恒定區(qū)，恒定區(qū)也來(lái)自這樣的人序列，例如人種系序列，或人種系序列的突變形式，或含有例如來(lái)自Knappik等人，(2000)J Mol Biol296:57-86)中描述的人框架序列分析的共有框架序列的抗體。免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域例如CDR的結(jié)構(gòu)和位置可使用熟知的編號(hào)方案定義，例如，Kabat編號(hào)方案，Chothia編號(hào)方案，或Kabat 和 Chothia 的組合(見(jiàn)例如，Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Health and Human Services (1991), Kabat 等人編；Lazikani 等人，(1997) J.Mol.Bi0.273:927-948) ；Kabat 等人，(1991) Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第五版，NIH
發(fā)明者W·埃利斯, S·埃滕伯格, A·P·加納, N·豪布斯特, C·C·S·昆茨, E·A·賴辛格斯普拉格 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司