專利名稱：一株飼用枯草芽孢桿菌的高密度生產(chǎn)工藝及其制備的菌劑和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及枯草芽孢桿菌ACCC10619高密度發(fā)酵生產(chǎn)的工藝，以及制備得到的菌劑和該菌劑的應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
實(shí)踐證明，隨著抗生素飼料添加劑的使用，在抑制病原菌的同時(shí)，也抑制了動(dòng)物消化道內(nèi)的正常菌群，破壞了菌群的微生態(tài)平衡，使得致病菌大量增殖，引發(fā)二重感染或內(nèi)源性感染；其次，抗生素的頻繁大量使用，引起耐藥菌株的產(chǎn)生，增加動(dòng)物的易感性，造成免疫機(jī)能減退而引發(fā)胃腸道疾病及其由此造成的環(huán)境污染；此外，抗生素的殘留也極大的威脅著人類健康，其防病、治病的效果越來越不理想。隨著抗生素的廣泛使用，其導(dǎo)致的耐藥性和殘留問題日益凸現(xiàn)出來，引起了科學(xué)工作者和廣大消費(fèi)者的共同關(guān)注。因此，各國(guó)紛紛通過立法手段禁止或限制使用抗生素，研發(fā)出能替代抗生素的新型飼料添加劑成為發(fā)展的必然趨勢(shì)。微生物飼料添加劑因其安全性、無毒、無殘留及有利于生態(tài)環(huán)境的可持續(xù)發(fā)展成為抗生素替代品的首選，而芽孢桿菌是微生態(tài)制劑中應(yīng)用最廣泛的一種微生態(tài)制劑。已有研究表明，芽孢桿菌在不利環(huán)境條件下能夠以孢子形式存在，在飼料制粒、貯存及胃酸環(huán)境中仍能保持較高的活性，在改善畜禽生產(chǎn)性能、維持腸道菌群平衡、提高消化率等方面均有較好的效果?？莶菅挎邨U菌(B. subtilis)可產(chǎn)生多種抗菌素及多種酶類，是目前應(yīng)用較廣泛的芽孢桿菌。枯草芽孢桿菌可以調(diào)節(jié)動(dòng)物消化道的微生態(tài)平衡、促進(jìn)消化道酶的活性，以致減少有害菌群對(duì)機(jī)體的侵害、增強(qiáng)消化吸收。該制劑在國(guó)內(nèi)外均被允許用于飼料添加劑。芽孢桿菌在液體存放時(shí)，需要添加防腐劑，且保質(zhì)期短，易產(chǎn)生惡臭氣味，在飼料加工生產(chǎn)中添加不方便。采用液體發(fā)酵后直接吸附干燥，需要大量吸附劑及干燥設(shè)施，生產(chǎn)上比較麻煩。目前，關(guān)于枯草芽孢桿菌ACCC10619的高密度生產(chǎn)工藝尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株飼用枯草芽孢桿菌的高密度生產(chǎn)工藝，以及制備得到的菌劑和該菌劑的應(yīng)用方法。一株飼用枯草芽孢桿菌的高密度生產(chǎn)工藝，所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的保藏編號(hào)為ACCC10619 ；具體包括以下步驟1)將經(jīng)過斜面活化的菌株進(jìn)行種子搖瓶培養(yǎng)，然后進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)；所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件為接種量為培養(yǎng)基體積的1 5%，500ml搖瓶中培養(yǎng)基的裝量為50 200ml ；發(fā)酵溫度28 ;34°C，pH值6. 8 7. 5，搖床轉(zhuǎn)數(shù)180 250rpm，培養(yǎng)18 Mh ；所述發(fā)酵培養(yǎng)基由如下質(zhì)量組分組成葡萄糖0. 5 0. 8 %、淀粉0. 2 0. 4 %、豆餅粉1 2 %、2. 2 4.0%硫酸錳0. 1 0. 3%、磷酸氫二鉀0. 15 0. 45%、磷酸二氫鉀0. 1 0.2%、硫酸鎂0. 03 0. 06%、酵母粉0. 5 1. 5%、蛋白胨0. 4 0. 8%、氯化鐵0. 005 0. 015%, 碳酸鈣0. 05 0. 15%，補(bǔ)充水至100%，pH值6. 8 7. 5 ；2)發(fā)酵罐發(fā)酵條件為培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的40-70%，接種占培養(yǎng)基體積的1-5%的搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度^_35°C，，通氣量1 0.4 0.7(1立方的發(fā)酵液每分鐘通氣量為0. 4 0. 7立方)，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)180 250r/min，發(fā)酵時(shí)間18 Mh。所述的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)選為發(fā)酵溫度30°C，pH值7. 0，搖床轉(zhuǎn)數(shù)220rpm ；所述發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)選由如下質(zhì)量組分組成，葡萄糖0. 5%、淀粉0. 3%、豆餅粉1. 5%,3. 08%硫酸錳0.2%、磷酸氫二鉀0.3%、磷酸二氫鉀0.15%、硫酸鎂0.05%、酵母粉1. 0 %、蛋白胨 0.5%,氯化鐵0. 01 %、碳酸鈣0.1%，補(bǔ)充水至100 %，pH值7. 0 ；發(fā)酵罐發(fā)酵條件優(yōu)選為培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的50%，接種占培養(yǎng)基體積3%的搖瓶發(fā)酵液，接種時(shí)間18h，發(fā)酵溫度30°C，通氣量1 0.5，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)220r/min，發(fā)酵時(shí)間22h。所述的發(fā)酵罐發(fā)酵完成時(shí)，含菌數(shù)不低于U8X108CFU/ml。本發(fā)明所用的斜面活化培養(yǎng)基，種子搖瓶培養(yǎng)基，搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵罐培養(yǎng)基在使用之前均經(jīng)過高溫滅菌(12rC，30minS)。一種飼用枯草芽孢桿菌菌劑，是將上述的生產(chǎn)工藝中發(fā)酵罐發(fā)酵得到的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液離心，收集菌泥；將菌泥與麥麩混合吸附，吸附后干燥，粉碎制備而成。具體是將所述的發(fā)酵罐發(fā)酵得到的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液在離心機(jī)3000 5000rpm高速離心10 20min,收集菌泥；將菌泥與麥麩按1 10 100質(zhì)量比吸附，吸附后60 80°C干燥1 他，粉碎到不小于60目制備而成。優(yōu)選將所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液在離心機(jī)4000rpm高速離心15min，收集菌泥，將菌泥與麥麩按1 10質(zhì)量比吸附，吸附后60°C干燥lh，粉碎。上述的飼用枯草芽孢桿菌菌劑用于制備抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、副傷寒沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌的制劑。具體是將菌劑添加到飲水或飼料中。所述的菌劑在養(yǎng)殖動(dòng)物飼料中添加量滿足含菌數(shù)為IO8 101(lCFU/kg(優(yōu)選101(lCFU/kg)飼料。所述養(yǎng)殖動(dòng)物為豬或雞。本發(fā)明枯草芽孢桿菌ACCC10619斜面活化(培養(yǎng)基牛肉膏0.3 0.5%，氯化鈉0. 5 1. 0%，蛋白胨0. 5 1. 0%，補(bǔ)充水至100% ;pH 6. 8 7. 5，置于30 34°C生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 Mh)，接種一接種環(huán)到IOOml種子液中，進(jìn)行種子搖瓶培養(yǎng)，溫度30°C，搖床轉(zhuǎn)數(shù)220r/min,時(shí)間18 24h。種子搖瓶培養(yǎng)基為牛肉膏0. 3 0. 5 %，氯化鈉0. 5 1. 0 %，蛋白胨0. 5 1. 0 %， 水加至 100% ；pH 6. 8 7. 5優(yōu)選地，種子搖瓶培養(yǎng)基為牛肉膏0. 3 %，氯化鈉0. 5 %，蛋白胨1. 0 %，水加至 100% ；pH 7. 0。本發(fā)明枯草芽孢桿菌ACCC10619益生性的檢驗(yàn)方法如下采用牛津杯法對(duì)抑菌試驗(yàn)菌株的效果進(jìn)行檢測(cè)。在直徑9cm的滅菌平皿中，注入 15ml滅菌好的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，使其冷卻凝固，作為底層。分別在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基上，接種活化好的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌等G種指示菌)，于恒溫培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)Mh，采用平板活菌計(jì)數(shù)法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)后，將指示菌液進(jìn)行10倍梯度稀釋，自稀釋度為10_6 10_7的指示菌稀釋液中，分別取0. 2ml指示菌懸液加入培養(yǎng)基中，搖勻，另加入5ml放冷至50°C的培養(yǎng)基，在底層上均勻混合，作為菌層，置于37°C干燥冷卻30min，待其充分凝固。在無菌條件下，分別將滅菌后的不銹鋼牛津杯(外徑8mm，內(nèi)徑6mm)放置于培養(yǎng)基表面，每個(gè)培養(yǎng)基平板中等距放置3個(gè)牛津杯，用無菌移液管分別吸取等量上述試驗(yàn)培養(yǎng)好的試驗(yàn)菌菌液，加滿牛津杯，每個(gè)試驗(yàn)菌做3個(gè)重復(fù)，于37。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)Mh，用游標(biāo)卡尺準(zhǔn)確測(cè)量抑菌圈的直徑，計(jì)算其平均值。 抑菌圈的大小與抑菌活性的強(qiáng)弱呈正相關(guān)，根據(jù)形成抑菌圈的大小可以判斷試驗(yàn)菌抑菌活性的強(qiáng)弱，檢測(cè)不同指示菌對(duì)抑菌物質(zhì)的敏感性。有結(jié)果可知，枯草芽孢桿菌ACCC10619對(duì)大腸桿菌的抑菌圈直徑為15. 77mm，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為15. 37mm，對(duì)副傷寒沙門氏菌的抑菌圈直徑為12. 90mm，對(duì)雞白痢沙門氏菌的抑菌圈直徑為12.41mm。本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明選用的枯草芽孢桿菌ACCC10619(菌種購自中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心)具有顯著的益生性，可顯著抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、副傷寒沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌等致病菌的生長(zhǎng)繁殖。本發(fā)明選用的枯草芽孢桿菌ACCC10619具有較強(qiáng)的抗逆性，能耐受95°C水浴 IOmin后，成活率為90%以上。由于飼料加工制粒過程中，溫度較高，可達(dá)80 90°C，因此動(dòng)物需耐受這個(gè)范圍的高溫，才能保證微生態(tài)菌株的有效性，動(dòng)物吃到的是活菌。本發(fā)明選用的枯草芽孢桿菌ACCC10619經(jīng)過本發(fā)明特有的液體發(fā)酵后，菌密度明顯增加，再經(jīng)過離心、吸附、干燥粉碎后，以粉劑形式添加到飼料中，減少工作量，降低成本， 生產(chǎn)中使用方便，貨架期延長(zhǎng)。本發(fā)明制備的的枯草芽孢桿菌ACCC10619菌劑添加到飼料中，進(jìn)入動(dòng)物腸道后， 迅速活化、增殖，并同時(shí)在腸道微生物環(huán)境下形成優(yōu)勢(shì)菌群。本發(fā)明制備的的枯草芽孢桿菌ACCC10619菌劑添加到飼料中，動(dòng)物食用后具有顯著益生性和抗逆性，具有提高動(dòng)物生產(chǎn)性能，減少動(dòng)物的病害率，降低死淘率。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。實(shí)施例1 1、本發(fā)明枯草芽孢桿菌ACCC10619斜面活化(培養(yǎng)基牛肉膏0. 3 0. 5%，氯化鈉 0. 5 1. 0%，蛋白胨0. 5 1. 0%，補(bǔ)充水至100% ；pH 6. 8 7. 5，置于30 34°C生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 Mh)，接種一接種環(huán)到IOOml種子液中，進(jìn)行種子搖瓶培養(yǎng)；溫度30°C，搖床轉(zhuǎn)數(shù)220r/min,時(shí)間18 Mh。種子搖瓶培養(yǎng)基為牛肉膏0.3%，氯化鈉0.5%，蛋白胨1.0%，加水至100%，pH 7. 0。2、將經(jīng)過斜面活化的菌株進(jìn)行種子搖瓶培養(yǎng)，然后進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)；搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度30°C，pH值7.0，搖床轉(zhuǎn)數(shù)220rpm;培養(yǎng)18h。發(fā)酵培養(yǎng)基由如下組分組成，葡萄糖0. 5%、淀粉0. 3%、豆餅粉1. 5%、3. 08%硫酸錳0. 2%、磷酸氫二鉀0. 3%、 磷酸二氫鉀0. 15 %、硫酸鎂0. 05 %、酵母粉1. 0 %、蛋白胨0. 5 %、氯化鐵0. 01 %、碳酸鈣 0. 1%，補(bǔ)充水至 100%，pH 值 7.0 ；3、30L發(fā)酵罐發(fā)酵條件為裝液量為15L培養(yǎng)基，接種量3%搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度30°C，通氣量1 0.5，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)220r/min，放罐時(shí)間22h。放罐時(shí)，含菌數(shù)不低于150X 108CFU/ml。本實(shí)施例所用的斜面活化培養(yǎng)基，種子搖瓶培養(yǎng)基，搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵罐培養(yǎng)基在使用之前均經(jīng)過高溫滅菌，實(shí)施例2和3相同。4、將發(fā)酵罐發(fā)酵得到的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液在離心機(jī)4000rpm高速離心15min， 收集菌泥，將菌泥與麥麩按1 10質(zhì)量比吸附，吸附后60°C干燥lh，粉碎到不小于60目， 每克產(chǎn)品含菌數(shù)不低于1000億CFU。實(shí)施例2 1、本發(fā)明枯草芽孢桿菌ACCC10619斜面活化(培養(yǎng)基牛肉膏0. 3 0. 5%，氯化鈉 0. 5 1. 0%，蛋白胨0. 5 1. 0%，補(bǔ)充水至100% ；pH 6. 8 7. 5，置于30 34°C生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 Mh)，接種一接種環(huán)到IOOml種子液中，進(jìn)行種子搖瓶培養(yǎng)；溫度30°C，搖床轉(zhuǎn)數(shù)220r/min,時(shí)間18 Mh。種子搖瓶培養(yǎng)基為牛肉膏0. 5 %，氯化鈉0. 5 %，蛋白胨1. 0 %，加水至100 %，pH 7. 0。2、將經(jīng)過斜面活化的菌株進(jìn)行種子搖瓶培養(yǎng)，然后進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)；搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度^°C，pH值6.8，搖床轉(zhuǎn)數(shù)200印111;培養(yǎng)2011。發(fā)酵培養(yǎng)基由如下組分組成，葡萄糖0.6%、淀粉0.2%、豆餅粉1 %、2. 58 %硫酸錳0.15%、磷酸氫二鉀0.15%、 磷酸二氫鉀0. 1 %、硫酸鎂0. 03%、酵母粉1. 5%、蛋白胨0. 8%、氯化鐵0. 005%、碳酸鈣 0. 05%，補(bǔ)充水至 100%，pH 值 6.8 ；3、30L發(fā)酵罐發(fā)酵條件為裝液量為12L培養(yǎng)基，接種量1 %搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度34°C，通氣量1 0.6，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)250r/min，放罐時(shí)間18h。放罐時(shí)，含菌數(shù)不低于 128X 108CFU/mlo4、將發(fā)酵罐發(fā)酵得到的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液在離心機(jī)3500rpm高速離心20min， 收集菌泥，將菌泥與麥麩按1 10質(zhì)量比吸附，吸附后60°C干燥lh，粉碎到不小于60目， 每克產(chǎn)品含菌數(shù)不低于850億CFU。實(shí)施例3 1、本發(fā)明枯草芽孢桿菌ACCC10619斜面活化(培養(yǎng)基牛肉膏0. 3 0. 5%，氯化鈉 0. 5 1. 0%，蛋白胨0. 5 1. 0%，補(bǔ)充水至100% ；pH 6. 8 7. 5，置于30 34°C生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18 Mh)，接種一接種環(huán)到IOOml種子液中，進(jìn)行種子搖瓶培養(yǎng)；溫度30°C，搖床轉(zhuǎn)數(shù)220r/min,時(shí)間18 Mh。種子搖瓶培養(yǎng)基為牛肉膏0.3%，氯化鈉0.5%，蛋白胨1.0%，加水至100%，pH 7. 0。2、將經(jīng)過斜面活化的菌株進(jìn)行種子搖瓶培養(yǎng)，然后進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)；搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度34°C，pH值7.2，搖床轉(zhuǎn)數(shù)250印111;培養(yǎng)時(shí)間18h。發(fā)酵培養(yǎng)基由如下組分組成，葡萄糖0. 75%、淀粉0. 4%、豆餅粉2(%、3. 88%硫酸錳0. 3 %、磷酸氫二鉀 0. 45%、磷酸二氫鉀0. 2%、硫酸鎂0. 06%、酵母粉0. 5%、蛋白胨0. 4%、氯化鐵0. 015%、碳酸鈣0. 15%，補(bǔ)充水至100%，pH值7.2 ；3、30L發(fā)酵罐發(fā)酵條件為裝液量為21L培養(yǎng)基，接種量4%搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度^°C，通氣量1 0.4，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)180r/min，放罐時(shí)間Mh。放罐時(shí)，含菌數(shù)不低于 138X 108CFU/ml。
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4、將發(fā)酵罐發(fā)酵得到的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液在離心機(jī)4500rpm高速離心lOmin， 收集菌泥，將菌泥與麥麩按1 10質(zhì)量比吸附，吸附后60°C干燥lh，粉碎到不小于60目， 每克產(chǎn)品含菌數(shù)不低于920億CFU。實(shí)施例4、本發(fā)明產(chǎn)品的動(dòng)物試驗(yàn)使用效果。本實(shí)例在湖南新五豐湘鄉(xiāng)豬場(chǎng)進(jìn)行，選擇健康斷奶仔豬120頭08日齡到30日齡斷奶后仔豬)，按體重相近原則隨機(jī)分成4處理，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭仔豬，分為空白對(duì)照組、本發(fā)明高密度組和常規(guī)發(fā)酵組，及市場(chǎng)購買同類產(chǎn)品組，試驗(yàn)期45天，本發(fā)明高密度組本發(fā)明發(fā)酵的高密度枯草芽孢桿菌制劑，活菌數(shù)> IO11CFU/克， 按0. 02%量添加到飼料中；含菌數(shù)為IO8 101(lCFU/kg飼料。常規(guī)發(fā)酵組枯草芽孢桿菌發(fā)酵后，直接吸附，活菌數(shù)> IOltlCFU/克，按0. 量添加到飼料中；同類產(chǎn)品組市場(chǎng)購買的枯草芽孢桿菌，活菌數(shù)彡IOltlCFU/克，按0. 量添加到飼料中；試驗(yàn)結(jié)果如下表。
權(quán)利要求
1.一株飼用枯草芽孢桿菌的高密度生產(chǎn)工藝，所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的保藏編號(hào)為ACCC10619 ；其特征在于，包括以下步驟1)將經(jīng)過斜面活化的菌株進(jìn)行種子搖瓶培養(yǎng)，然后進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)；所述搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件為接種量為培養(yǎng)基體積的1 5%，500ml搖瓶中培養(yǎng)基的裝量為50 200ml ；發(fā)酵溫度28 34°C，pH值6. 8 7. 5，搖床轉(zhuǎn)數(shù)180 250rpm，培養(yǎng)18 Mh ；所述發(fā)酵培養(yǎng)基由如下質(zhì)量組分組成葡萄糖0. 5 0. 8%、淀粉0. 2 0. 4%、豆餅粉1 2%、2. 2 4. 0%硫酸錳0. 1 0.3%、磷酸氫二鉀0. 15 0. 45%、磷酸二氫鉀0. 1 0.2%、硫酸鎂 0. 03 0. 06%、酵母粉0. 5 1. 5%、蛋白胨0. 4 0. 8%、氯化鐵0. 005 0. 015%、碳酸鈣0. 05 0. 15%，補(bǔ)充水至100%，pH值6. 8 7. 5 ；2)發(fā)酵罐發(fā)酵條件為培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的40-70%，接種占培養(yǎng)基體積的 1-5%的搖瓶發(fā)酵液，發(fā)酵溫度^_35°C，通氣量1 04 0. 7，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)180 250r/min， 發(fā)酵時(shí)間18 24h。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述的搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度30°C，pH值7. 0，搖床轉(zhuǎn)數(shù)220rpm ；所述發(fā)酵培養(yǎng)基由如下質(zhì)量組分組成，葡萄糖0. 5%、 淀粉0. 3%、豆餅粉1. 5%、3. 08%硫酸錳0. 2%、磷酸氫二鉀0. 3%、磷酸二氫鉀0. 15%、硫酸鎂0. 05%、酵母粉1. 0%、蛋白胨0.5%、氯化鐵0.01%、碳酸鈣0. 1%，補(bǔ)充水至100%， PH值7. 0 ；發(fā)酵罐發(fā)酵條件為培養(yǎng)基裝液量占發(fā)酵罐體積的50%，接種占培養(yǎng)基體積3%的搖瓶發(fā)酵液，接種時(shí)間18h，發(fā)酵溫度30°C，通氣量1 0.5，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)220r/min，發(fā)酵時(shí)間 22h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于，所述的發(fā)酵罐發(fā)酵完成時(shí)，含菌數(shù)不低于 128X 108CFU/mlo
4.一種飼用枯草芽孢桿菌菌劑，其特征在于，是將權(quán)利要求1或2或3所述的生產(chǎn)工藝中發(fā)酵罐發(fā)酵得到的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液離心，收集菌泥；將菌泥與麥麩混合吸附，吸附后干燥，粉碎制備而成。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的飼用枯草芽孢桿菌菌劑，其特征在于，將所述的發(fā)酵罐發(fā)酵得到的枯草芽孢桿菌發(fā)酵液在離心機(jī)3000 5000rpm高速離心10 20min，收集菌泥；將菌泥與麥麩按1 10 100質(zhì)量比吸附，吸附后60 80°C干燥1 乩，粉碎到不小于60 目，制備而成。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的菌劑，其特征在于，將所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液在離心機(jī) 4000rpm高速離心15min，收集菌泥，將菌泥與麥麩按1 10質(zhì)量比吸附，吸附后60°C干燥 Ih，粉碎。
7.權(quán)利要求4所述的飼用枯草芽孢桿菌菌劑的應(yīng)用方法，其特征在于，用于制備抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、副傷寒沙門氏菌、雞白痢沙門氏菌的制劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用方法，其特征在于，將所述菌劑添加到飲水或飼料中。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用方法，其特征在于，所述的菌劑在養(yǎng)殖動(dòng)物飼料中添加量滿足含菌數(shù)IO8 101QCFU/kg飼料。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用方法，其特征在于，所述養(yǎng)殖動(dòng)物為豬或雞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一株飼用枯草芽孢桿菌的高密度生產(chǎn)工藝及其制備的菌劑和應(yīng)用，所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的保藏編號(hào)為ACCC10619，其在液體深層發(fā)酵培養(yǎng)，經(jīng)濃縮，再吸附、干燥，生產(chǎn)一種高濃度的枯草芽孢桿菌粉劑。生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，工藝控制便利，生產(chǎn)成本低；以粉劑形式添加到飼料中，貯存、運(yùn)輸使用方便；貨架期延長(zhǎng)，且活性穩(wěn)定，無污染，用于豬、雞飼料，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能。
文檔編號(hào)A61K35/74GK102433283SQ20111042776
公開日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2011年12月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月19日
發(fā)明者劉惠知, 吳勝蓮, 周小玲, 周映華, 曾艷, 汪彬, 繆東, 胡新旭, 高書鋒 申請(qǐng)人:湖南省微生物研究所