專利名稱：碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及碳納米管復(fù)合材料的制備方法，特別是涉及碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的制備方法。
背景技術(shù)：
藻藍蛋白(Phycocyanin，以下簡稱PC)是一種普遍存在于藍藻、紅藻、隱藻和少數(shù)甲藻中的捕光色素蛋白，在螺旋藻中的含量高達79T20%。PC作為無毒副作用的天然色素蛋白，可取代合成染料應(yīng)用于食品、化妝品以及醫(yī)藥中。有研究表明，PC具有抗腫瘤活性，可提高免疫機能。特別是PC經(jīng)可見光區(qū)激光照射后，可對人類癌細胞產(chǎn)生光動力殺傷效應(yīng)， 即有光動力治療(Wiotodynamic therapy, PDT)的潛力。碳納米管(carbon nanotube,以下簡稱CNT)是由碳原子形成的石墨烯片層卷曲而成的無縫中空碳管，分為單壁碳納米管(single-wall carbon nanotube，以下簡稱 SWCNT)和多壁碳納米管(multi-wall carbon nanotube，以下簡稱MWCNT)。CNT在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用是一個新興和前沿的領(lǐng)域，也是納米生物技術(shù)的一個研究熱點。因為CNT獨特的性質(zhì)，人們開始挖掘它的各種應(yīng)用價值，包括在腫瘤治療中的應(yīng)用。CNT的一個特點是可以跨越細胞膜和生物體內(nèi)的多種屏障，到達多種器官并進入到細胞的內(nèi)部。CNT的另外一個特點就是經(jīng)近紅外光照射后，能釋放大量的振動能。所釋放的這些能量可以使組織產(chǎn)生局部熱量，從而使CNT具有可能應(yīng)用于癌癥治療的潛力，即光熱治療(Photothermal therapy, PTT)。然而，原始狀態(tài)的CNT進入生物體之后，不能溶解于生理體液中，反而容易聚集在細胞、器官和組織中，可能會引起不良反應(yīng)，因此CNT在中性溶液中的溶解與分散一直是人們所關(guān)心的重要問題。最近的研究表明，通過共價或者非共價改性解決CNT的水溶性問題， 不僅生物相容性得到提高，而且CNT可以經(jīng)腎臟途徑代謝，通過尿液排除體外。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述相關(guān)技術(shù)的不足和缺陷，同時拓展CNT在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用，本發(fā)明的目的是提供碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的制備方法。本發(fā)明中所采用的殼聚糖(Chitosan，以下簡稱CS)是甲殼質(zhì)經(jīng)脫乙酰反應(yīng)后的產(chǎn)品，其結(jié)構(gòu)單元上有一個高反應(yīng)的氨基，可以方便的引入其他功能性基團。CS作為一種常見的天然高分子，在生物材料的研究中得到了廣泛的應(yīng)用，其良好的生物相容性已經(jīng)得到認可。通過CS對CNT非共價改性，一方面，有望改善CNT的生物相容性，另外一方面可方便的引入其他功能性分子，為擴大CNT在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。本發(fā)明多提供的碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒是由羧基化碳納米管、水溶性殼聚糖和藻藍蛋白復(fù)合而成，其制備步驟如下
(1)將羧基化多壁碳納米管0分散在磷酸緩沖液中，經(jīng)超聲振蕩30分鐘 90分鐘后， 再加入水溶性殼聚糖，超聲振蕩并充分攪拌均勻后，得混合溶液；然后靜置分層，將分層后的上層液離心分離，得到的上層液即為殼聚糖修飾的水溶性多壁碳納米管溶液；所述羧基化多壁碳納米管和水溶性殼聚糖的質(zhì)量比為1:1 1:10 ；
(2)向步驟(1)得到的水溶性多壁碳納米管溶液中加入相當(dāng)于羧基化多壁碳納米管質(zhì)量1 5倍的碳二亞胺鹽酸鹽和相當(dāng)于羧基化多壁碳納米管質(zhì)量1 6倍的N-羥基琥珀酰亞胺，避光下充分攪拌，繼續(xù)保持避光條件，再加入藻藍蛋白粉末，于10°C 25°C恒溫振蕩8小時 15小時；將振蕩后溶液過濾，所得濾餅即為碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒；所述藻藍蛋白粉末與羧基化多壁碳納米管的質(zhì)量比為1:1 1:10。為進一步實現(xiàn)本發(fā)明目的，步驟(1)所述的羧基化多壁碳納米管純度為909Γ99%， 直徑為10 nm 20nm，長度為0. 5 μ m 2 μ m，羧化率lwt% 10 wt% (重量百分率)。為進一步實現(xiàn)本發(fā)明目的，步驟(1)所述水溶性殼聚糖的羧化度為0. 1% 1%，分子量為500 10000。為進一步實現(xiàn)本發(fā)明目的，步驟(1)所述藻藍蛋白的純度為4. 0 6. 0(A620/ A280,在波長620 nm與沘0 nm的吸光度之比)。為進一步實現(xiàn)本發(fā)明目的，步驟(1)所述的磷酸緩沖液為磷酸鈉緩沖液或2mM 5mM (毫摩爾)磷酸鉀緩沖液。為進一步實現(xiàn)本發(fā)明目的，步驟(2)得到的振蕩后混合溶液采用分子量為IOkD IOOkD (千道爾頓)的超濾管超濾。以上操作步驟如無特別說明，均按本領(lǐng)域常規(guī)操作。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點
(1)本發(fā)明所制備的納米粒復(fù)合材料將具有藻藍蛋白的光動力治療潛力；
(2)本發(fā)明所制備的納米粒復(fù)合材料將具有碳納米管的光熱治療潛力；
(3)本發(fā)明引入水溶性殼聚糖進行修飾，增加了該納米例復(fù)合材料的生物相容性；
(4)本發(fā)明的制備方法工藝簡單，易于大量制備，且制備出的碳納米粒復(fù)合材料穩(wěn)定性好。


圖1 (a)為實施例1所制備的中間樣品MWCNT-CS的kta電位分布曲線圖1 (b)為實施例1所制備的產(chǎn)品碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒MWCNT-CS-PC 的仏切電位分布曲線圖2 (a)為實施例1所制備的中間樣品MWCNT-CS的粒度分布曲線圖； 圖2 (b)為實施例1所制備的產(chǎn)品MWCNT-CS-PC的粒度分布曲線圖； 圖3 (a)為MWCNT表面形貌的FESEM圖3 (b)為實施例1所制備的中間樣品MWCNT-CS表面形貌的FESEM圖； 圖3 (c)為實施例1所制備的產(chǎn)品MWCNT-CS-PC表面形貌的FESEM圖； 圖4為實施例1所制備的中間樣品MWCNT-CS和產(chǎn)品MWCNT-CS-PC的紫外可見全波長掃描譜圖5為多壁碳納米管MWCNT以及實施例1所制備的中間樣品MWCNT-CS和產(chǎn)品 MWCNT-CS-PC的紅外譜圖6為MWCNT以及實施例1所制備的中間樣品MWCNT-CS和產(chǎn)品MWCNT-CS-PC的拉曼譜圖7(a)為MWCNT的TGA曲線圖7(b)為殼聚糖CS的TGA曲線圖7(c)為藻藍蛋白C-PC的TGA曲線圖 7(d)為 MWCNT-CS-PC 的 TGA 曲線圖。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明作進一步的詳細描述，但具體實施方式
不應(yīng)理解為是對本發(fā)明保護范圍的限定。實施例1
生物醫(yī)學(xué)材料碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的制備方法，步驟如下
(1)稱取40mg直徑為IOnm的羧基化碳納米管粉末(羧化率為lwt%)，加入150ml5mM PBS溶液中，超聲分散60分鐘，然后加入170mg水溶性殼聚糖CS，繼續(xù)超聲振蕩60分鐘， 超聲后對混合溶液磁力攪拌1小時。靜置分層6小時后，取上層液體在lOOOOr/min的轉(zhuǎn)速下高速離心，離心后的上層液即為中間樣品殼聚糖修飾的水溶性多壁碳納米管均一溶液 (MWCNT-CS)0采用30kD的超濾管超濾去除MWCNT-CS中富余的CS，將所得濾餅冷凍干燥，作為表征分析的樣品；
(2)在攪拌條件下，向制得的水溶性多壁碳納米管溶液中加入70mg碳二亞胺鹽酸鹽 (EDC-HCl)和160mg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，避光繼續(xù)攪拌30分鐘，在避光條件下加入35 mg高純度PC粉末，于20°C恒溫振蕩15h。振蕩后溶液采用SOkD的超濾管超濾去除多余的PC、EDC-HCl和NHS。所得濾餅即為碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒樣品 (MWCNT-CS-PC)。將樣品冷凍干燥用于表征分析。對步驟(1)和(2)所得的樣品進行穩(wěn)定性實驗，分別將制備得到的MWCNT-CS和 MWCNT-CS-PC以及MWCNT分散到水中，靜置一周后，MWCNT發(fā)生了明顯的聚沉現(xiàn)象，而經(jīng)CS 非共價修飾的MWCNT-CS和MWCNT-CS-PC在水中表現(xiàn)出很好的分散性，即使放置幾個月也不會發(fā)生明顯的聚沉現(xiàn)象，表現(xiàn)出良好的水溶性和穩(wěn)定性。采用激光粒度儀分別對步驟(1)和(2)所得的樣品進行kta電位值及平均粒徑進行檢測。通常情況下，Zeta電位絕對值越高，體系分散穩(wěn)定性越好。從圖1 (a)和圖1 (b) 可以看出，MWCNT-CS-PC在水溶液中的kta電位分布峰為62. 2mV, MWCNT-CS的kta電位分布峰為49. 6mV,說明MWCNT-CS-PC在水溶液中具有較好的穩(wěn)定性。據(jù)文獻報道，碳納米管在水溶液中的kta點位分布峰非常低，為1. 945mV。 這也解釋了 MWCNT極易發(fā)生團聚沉降，而MWCNT-CS和MWCNT-CS-PC分散性很好的原因。從激光粒度儀檢測得到的MWCNT-CS 和MWCNT-CS-PC的粒度分布見圖2 (a)和圖2 (b)。MWCNT-CS和MWCNT-CS-PC水溶液中超過90%顆粒的尺寸小于200nm，其平均粒徑分別為185. 6nm和233nm。這樣尺寸范圍內(nèi)的 MWCNT，有利于其在生物體系中的研究。分別對步驟(1)和(2)所得的樣品進行場發(fā)射掃描電鏡分析，采用farming electron microscope, SEM，JEOL JSM-7401F，將樣品的稀溶液點到導(dǎo)電硅片上，待溶劑揮發(fā)后觀察。從圖3 (a)至圖3 (c)中可以看出，MWCNT、MWCNT-CS、MWCNT-CS-PC都呈管狀結(jié)構(gòu)，但是MWCNT表面沒有任何覆蓋物，比較光滑，而MWCNT-CS和MWCNT-CS-PC則由于CS的
5包覆和PC的連接而顯得相對粗糙。另外，由于聚合物鏈間的相互作用，使得形成的納米粒復(fù)合物有一定程度的纏結(jié)。在管徑方面，MWCNT<MWCNT-CS<MWCNT-CS-PC，這與激光粒度儀所得的粒度分布結(jié)果一致。這表明MWCNT表面存在CS和PC。此外，由于CS覆蓋層的靜電排斥作用，使被包裹的MWCNT的團聚減少。步驟(1)和(2)所得的樣品進行紫外可見光吸收光譜(UV-vis)分析，采用日本日立公司的UV2300型紫外可見光譜儀，將樣品分散在0. 5mM PBS溶液中，將超聲振蕩下形成的均勻分散液倒入到比色池中進行全波長掃描分析。由于PC在620nm處具有最大特征吸收峰，可據(jù)此推斷PC與MWCNT是否成功結(jié)合。從MWCNT-CS譜圖(圖4)可以看出，在620nm 處無吸收峰，而MWCNT-CS-PC在此處有特征吸收峰，由此可知，藻藍蛋白與碳納米管成功結(jié)合。此外，MWCNT-CS和MWCNT-CS-PC的吸收譜圖(圖4)除了 620nm處的區(qū)別外，大致相同， 可知MWCNT的光學(xué)性質(zhì)沒有受到明顯的影響。雖然MWCNT被修飾后其光學(xué)特性稍有變化， 但是在808nm處依然有足夠高的吸光強度，可作為熱電偶聯(lián)劑，在808nm的近紅外激光輻照下產(chǎn)生足夠的熱量來殺傷癌細胞。步驟(1)和(2)所得的樣品進行紅外光譜(FIlR)分析，采用美國Thermo Nicolet 公司的NexUS670型傅立葉變換紅外光譜掃描儀，粉末樣品經(jīng)充分干燥后與溴化鉀一起研磨壓制成片，然后將所制的片在紅外燈下烘烤30分鐘后放入儀器的樣品室進行掃描測試。 如圖5所示。MWCNT在1712 cn^dAeicnr1處出現(xiàn)吸收峰，分別對應(yīng)于羧基和羥基，表明所購買的羧化碳納米管表面有羧酸(-C00H)和羧酸根(-C00-)基團。這些活性基團都是親水性基團，有助于MWCNT分散在水溶液中，同時這些功能基團將為CS非共價修飾MWNT提供一個靜電反應(yīng)的微環(huán)境。CS是甲殼質(zhì)經(jīng)脫乙酰反應(yīng)后的產(chǎn)品，其結(jié)構(gòu)單元上有一個高反應(yīng)活性的氨基，可以方便的引入其他功能性基團。在MWCNT-CS的紅外譜圖中，可見CS的特征吸收峰。位于 1650cm"1的峰是C=O振動吸收峰；位于1080CHT1的峰是橋環(huán)C-O-C振動吸收峰，1520cm"1的峰是N-H變性振動峰；位于ll^cnT1的峰是糖苷鍵的特征振動峰。位于3460cm-1的峰是O-H 伸縮振動峰，此處峰強度明顯高于MWCNT ；將MWCNT-CS和MWCNT的紅外譜圖進行對比，發(fā)現(xiàn) MWCNT-CS中MWCNT的吸收峰有部分消失殆盡，這主要因為MWCNT的紅外吸收相對較弱，被吸收較強的CS吸收所覆蓋。這表明CS成功的纏繞在MWCNT表面。藻藍蛋白C-PC在533 cm"1 U654 cm"\3441cm_1附近有較大的紅外吸收峰， MWCNT-CS-PC納米粒的紅外譜圖顯示，在533 cm"1,1654 cm"\3441cm^附近亦有較明顯的吸收峰，可以看出該制備的納米粒復(fù)合物中具有MWCNT、CS和PC各自對應(yīng)的特征紅外譜峰。 實驗結(jié)果表明最終制備得到了載有藻藍蛋白的多壁碳納米管，即MWCNT-CS-PC。步驟(1)和(2)所得的樣品進行拉曼光譜分析，采用hvia Raman Microscope，激光波長為512 nm。從圖6中可以看到麗CNT有兩個顯著的峰1570CHT1和1340CHT1，前者是 G峰，是石墨晶體sp2結(jié)構(gòu)的特征峰，反映高對稱性和高定向性的石墨結(jié)構(gòu)；后者為D峰，是石墨晶體顆粒減小而出現(xiàn)的無序態(tài)或缺陷態(tài)特征峰。非共價修飾的碳納米管MWCNT-CS和 MWCNT-CS-PC，其拉曼光譜在1570CHT1附近也有強烈的共振拉曼光譜峰，即為G峰，是石墨碳的特征峰?？芍瑥?fù)合物中，MWCNT的特性依然存在。同時G峰與D峰強度的比值也反映了碳納米管管狀結(jié)構(gòu)的損壞程度。從圖6中可以得出羧化碳納米管MWCNT中IG/ID=6. 45，進一步非共價修飾后的碳納米管納米粒復(fù)合物MWCNT-CS中IG/ID=2. 18,MWCNT-CS-PC中IG/ID=L 47。IG/ID越小，說明碳納米管管壁上C的sp3雜化結(jié)構(gòu)增加，缺陷較多，反應(yīng)位點多。 與MWCNT相比，復(fù)合物MWNT-CS和MWNT-CS-PC的拉曼光譜發(fā)生紅移，分別由Ι ΜΟαιΓ1紅移至1334 cnT1和1347CHT1。在1570CHT1附近，所制備的納米粒復(fù)合物和碳納米管的峰位置沒有明顯的改變，但峰強度和峰面積與碳納米管相應(yīng)峰的強度和峰面積之間有區(qū)別，這同樣說明了碳納米管和殼聚糖及藻藍蛋白之間具有某種相互作用。步驟(1)和(2)所得的樣品進行熱失重分析(TGA)，采用德國Nicolet instrument公司的TASC 414/4型熱重分析儀，氮氣流速為20ml/min，升溫速度為10°C / min。從圖7 (a)至圖7 (d)中可以看到，原始MWCNT熱性能比較穩(wěn)定，在100°C到550°C 范圍內(nèi)顯示較少的質(zhì)量損失，僅為1%左右。在550°C到800°C高溫范圍內(nèi)才能觀察到可見的質(zhì)量降低趨勢。對于純殼聚糖，熱降解分兩步進行，在100°C之前，有一個小的失重過程， 失重約為14%，這是物料含的結(jié)晶水和結(jié)合水產(chǎn)生的。殼聚糖在190°C到300°C之間發(fā)生強烈降解。對于藻藍蛋白，熱失重主要發(fā)生在250°C到375°C之間。對于復(fù)合物MWCNT-CS-PC， 從100°C -150°C熱穩(wěn)定性較好，從150°C到400°C出現(xiàn)了一個明顯的失重臺階，納米粒復(fù)合物的質(zhì)量迅速下降，質(zhì)量損失將近45%，高于400°C部分的熱重曲線的形狀非常類似于原始 MWCNT在該溫度階段的曲線走向，這意味著在400°C左右就已經(jīng)基本完成了納米粒復(fù)合物的分解。從圖7 (d)中可以估算出所制備的納米粒復(fù)合物MWCNT-CS-PC中MWCNT的含量約為 55%。實施例2
生物醫(yī)學(xué)材料碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的制備方法，步驟如下
(1)稱取20mg直徑為20nm的羧基化碳納米管粉末(羧化率為5wt%)，加入120ml5mM PBS溶液中，超聲分散60分鐘，然后加入130mg水溶性殼聚糖CS，繼續(xù)超聲振蕩40分鐘，超聲后對混合溶液磁力攪拌70分鐘。靜置分層8小時后，取上層液體在lOOOOr/min的轉(zhuǎn)速下高速離心，離心后的上層液即為殼聚糖修飾的中間樣品水溶性多壁碳納米管(MWCNT-CS) 均一溶液。采用20kD的超濾管超濾去除MWCNT-CS中富余的CS，將所得濾餅冷凍干燥，作為表征分析的樣品；
(2)在攪拌條件下，向制得的水溶性多壁碳納米管溶液中加入70mg碳二亞胺鹽酸鹽 (EDC-HCl)和120mg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，避光繼續(xù)攪拌30分鐘，在避光條件下加入 15 mg高純度PC粉末，于15°C恒溫振蕩12小時。振蕩后的溶液采用30kD的超濾管超濾去除多余的PC、EDC-HCl和NHS。所得濾餅即為碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的樣品 (MWCNT-CS-PC)。將樣品冷凍干燥用于表征分析。檢測方法與結(jié)果基本同實施例1。實施例3
生物醫(yī)學(xué)材料碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的制備方法，步驟如下
(1)稱取30mg直徑為20nm的羧基化碳納米管粉末(羧化率為10wt%)，加入150ml5mM PBS溶液中，超聲分散40分鐘，然后加入IOOmg水溶性殼聚糖，繼續(xù)超聲振蕩45分鐘，超聲后對混合溶液磁力攪拌0. 5小時。靜置10小時后，取上層液體在lOOOOr/min的轉(zhuǎn)速下高速離心，離心后的上層液即為殼聚糖修飾的中間樣品水溶性多壁碳納米管(MWCNT-CS)均一溶液。采用30kD的超濾管超濾去除MWCNT-CS中富余的殼聚糖，將所得濾餅冷凍干燥，作為表征分析的樣品；
(2)在攪拌條件下，向制得的水溶性多壁碳納米管溶液中加入50mg碳二亞胺鹽酸鹽(EDC-HCl)和130mg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，避光繼續(xù)攪拌50分鐘，在避光條件下加入 25 mg高純度PC粉末，于25°C恒溫振蕩15小時。振蕩后的溶液采用SOkD的超濾管超濾去除多余的PC、EDC-HCl和NHS。所得濾餅即為碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的樣品 (MWCNT-CS-PC)。將樣品冷凍干燥用于表征分析。檢測方法與結(jié)果基本同實施例1。
實施例4
生物醫(yī)學(xué)材料碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的制備方法，步驟如下
(1)稱取50mg直徑為IOnm的羧基化碳納米管粉末(羧化率為8wt%)，加入150ml5mM PBS溶液中，超聲分散50分鐘，然后加入170mg水溶性殼聚糖，繼續(xù)超聲振蕩80分鐘，超聲后對混合溶液磁力攪拌1. 2小時。靜置分層13小時后，取上層液體在lOOOOr/min的轉(zhuǎn)速下高速離心，離心后的上層液即為殼聚糖修飾的中間樣品水溶性多壁碳納米管(MWCNT-CS) 均一溶液。采用30kD的超濾管超濾去除MWCNT-CS中富余的殼聚糖，將所得濾餅冷凍干燥， 作為表征分析的樣品；
(2)在攪拌條件下，向制得的水溶性多壁碳納米管溶液中加入SOmg碳二亞胺鹽酸鹽 (EDC-HCl)和170mg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，避光繼續(xù)攪拌40分鐘，在避光條件下加入 40 mg高純度PC粉末，于18°C恒溫振蕩11小時。振蕩后的溶液采用IOOkD的超濾管超濾去除多余的PC、EDC-HC1和NHS，所得濾餅即為碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的樣品 (MWCNT-CS-PC)。將樣品冷凍干燥用于表征分析。檢測方法與結(jié)果基本同實施例1。
權(quán)利要求
1.碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的制備方法，其特征在于由羧基化多壁碳納米管、水溶性殼聚糖和藻藍蛋白復(fù)合而成，具體包括如下步驟(1)將羧基化多壁碳納米管分散在磷酸緩沖液中，經(jīng)超聲振蕩30分鐘 90分鐘后，再加入水溶性殼聚糖，超聲振蕩并攪拌均勻得混合溶液；然后靜置分層，將分層后的上層液離心分離，得到的上層液即為殼聚糖修飾的水溶性多壁碳納米管溶液；所述羧基化多壁碳納米管和水溶性殼聚糖的質(zhì)量比為1:1 1:10 ；(2)向步驟(1)得到的水溶性多壁碳納米管溶液中加入相當(dāng)于羧基化多壁碳納米管質(zhì)量1 5倍的碳二亞胺鹽酸鹽和相當(dāng)于羧基化多壁碳納米管質(zhì)量1 6倍的N-羥基琥珀酰亞胺，避光充分攪拌后，保持避光條件，再加入藻藍蛋白粉末，于10°C 25°C恒溫振蕩8 小時 15小時；將振蕩后溶液過濾，所得濾餅即為碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白復(fù)合物；所述藻藍蛋白粉末與羧基化多壁碳納米管的質(zhì)量比為1:1 1:10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)的多壁碳納米管純度為 90% 99%，直徑為10 nm 20nm，長度為0. 5 μ m 2 μ m，羧化率lwt% 10 wt%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)的殼聚糖為水溶性殼聚糖，羧化度為0. 1% 1%，分子量為500 10000。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)的藻藍蛋白純度為 4. 0 6. O0
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述步驟(1)的磷酸緩沖液為磷酸鈉緩沖液或2mM 5mM磷酸鉀緩沖液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述步驟(2)得到的振蕩后混合液采用IOkD IOOkD的超濾管超濾。
全文摘要
本發(fā)明提供碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒的制備方法，該納米粒材料使用羧化碳納米管，通過水溶性殼聚糖非共價修飾碳納米管，制備得到水溶性的多壁碳納米管-殼聚糖(MWCNT-CS)復(fù)合物，并在此基礎(chǔ)上將復(fù)合物再與高純度的螺旋藻藻藍蛋白偶合，得到生物醫(yī)學(xué)材料碳納米管-殼聚糖-藻藍蛋白納米粒(MWCNT-CS-PC)。本方法制備工藝簡單，獲得的生物醫(yī)學(xué)材料水溶性和生物相容性好，在可見光和近紅外光區(qū)都具有良好的吸收特性，有望應(yīng)用于癌細胞的光動力和光熱治療。
文檔編號A61K41/00GK102274510SQ20111019797
公開日2011年12月14日 申請日期2011年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月15日
發(fā)明者廖曉霞, 張學(xué)武 申請人:華南理工大學(xué)