專利名稱：蟲草銀杏白果黃酒、制備方法及用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物工程技術領域，特指利用三種酶水解銀杏白果，經過兩次菌種發(fā)酵獲得的發(fā)酵液經過過濾和勾兌生產蟲草銀杏白果黃酒的方法和用途。
背景技術：
銀杏白果的主要成分是蛋白質、淀粉和脂肪，另外含有黃酮、萜類化合物、銀杏酸、 氫化白果酸、氫化白果亞酸、銀杏醇、白果酚和多糖。我國中醫(yī)古書，一直將白果列為重要藥材，白果酸抑制多種桿菌及皮膚真菌，并對葡萄球菌、鏈球菌、白喉、炭瘟桿菌，枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、傷寒菌等都有不同程度的抑制作用。從鮮白果中提取出來的白果酚酸，有降壓作用，并且使血管的滲透性增加。近年來各地臨床試驗證明，經常食用白果，可治高血壓、止白帶、咳鍬發(fā)熱；心腦血管、呼吸系統(tǒng)、皮膚病、牙痛等疾病，還有清熱擾菌、溫肺益氣、 擴張血管、增加血流量、定痰喘、去皺紋、防衰老、潤音喉、健身美容、延年益壽等功效。但是白果中由于含有微量的白果酚、白果酸，易導致人體食欲不振、脫皮、觸痛，不等程度的肝損害、腎小球腎炎，白果酸有溶血作用引起驚厥和死亡。由于這些副作用阻礙了白果的大量的食用。因此采用一方面可以強化白果的藥用價值，同時具有降低白果毒性的技術開發(fā)利用白果資源具有重要社會學意義，同時也會帶來巨大的經濟價值。國內關于銀杏白果發(fā)酵酒有部分研究和報道，已經申請發(fā)明專利共十多項，這些專利基本上采用浸泡、勾兌或者發(fā)酵，如中國專利(CN 01113680. 4)介紹了一種以銀杏為主要原料加入48度至52度白酒中浸漬提取有效成份后得酒液，然后再加入銀杏提取物即銀杏酮、蜂蜜勾兌而成；專利(CN 03131562. 3)主要介紹以草莓和浸泡、蒸煮后的銀杏、紅棗、 葡萄為原料，經糖、米曲、活性酵母發(fā)酵24 36小時，攪拌勾兌50° 60°麥酒，封存5 15天后壓汁，經粗、細過濾，取汁與糖按50 1的比例調配，該酒具有軟化血管、降低血脂、 補血、活血、潤肺、健脾之功效和營養(yǎng)、醫(yī)用價值；專利(CN 96115885. 9)主要涉及采用銀杏葉80 110克、小米70 85克、糯米50 80克、高梁45 60克、糖化酶30 40克、 紅曲75 95克、白酒30 45克、水15 35克等原料經過發(fā)酵獲得銀杏酒，該酒可預防防治由動脈硬化引起的疾病、腦血管障礙后遺癥、腦受傷后遺癥等；專利(CN1376776)涉及銀杏葉低溫粉碎機內粉碎，白酒浸泡，脫苦以及白酒勾兌，該酒降低血清膽固醇、預防腦供血不足、腦功能性障礙提高人體耐缺氧能力、促進紅細胞的生成功能。目前，對白果發(fā)酵的方法主要銀杏葉或其提取物或者白果加入大米、酒曲或其他輔料直接發(fā)酵。用這些方法得到的酒由于含有銀杏葉或白果中果的活性成分，如黃酮和萜類因而具有一定的功效。例如胡廣東，宋瑞濱曾經報道米與銀杏葉或白果一同蒸煮，蒸煮冷卻后加入米曲糖化發(fā)酵，經過后續(xù)壓榨獲得銀杏果酒，發(fā)明專利(申請?zhí)朇N 201010145712. 4)涉及藥用真菌金耳轉化銀杏白果獲得的白果酒，該酒同時含有金耳和銀杏的活性成分具有預防糖尿病、高血脂、抗氧化和增加肌體免疫力具有特效。由上述研究可知，銀杏白果可以與米混合通過與酒曲發(fā)酵獲得含有銀杏活性成分的功能性白酒，但是無論銀杏葉還是其提取物或者白果都含有一定量的銀杏毒素，如氫氰酸、銀杏酚酸，使得銀杏白酒或果酒的使用量受到了一定的限制，限制了銀杏酒的銷售量。

發(fā)明內容
本發(fā)明提供的是一種蟲草銀杏白果黃酒的釀制技術，采用三種酶水解銀杏白果， 獲得銀杏白果水解液，該水解液中含有銀杏黃酮、萜類化合物、氨基酸和肽類、淀粉等活性化合物，其中氨基酸和肽類含量> 1%，淀粉含量> 2%，該水解液添加銀杏葉提取物后通過蟲草菌種轉化，加入米飯酒曲發(fā)酵獲得發(fā)酵液，該發(fā)酵液經過過濾、勾兌獲得蟲草銀杏白果黃酒。蟲草銀杏白果黃酒，其特征在于酒精度(質量/體積m/V) 8 16 %，總黃酮含量 1 5mg/L，銀杏內酯1 6 mg/L,總萜類化合物含量30 800mg/L，蛋白質60 200mg/ L，可溶性糖彡2. 0%，蟲草酸10 30mg/L，蟲草素0. 5 2mg/L，銀杏酚酸0 5ppm，氫氰酸
0 0. 1 μ g/L。本發(fā)明的目的在于提供一種蟲草銀杏白果黃酒的制備方法，按下述步驟進行
(1)精確稱取已經脫殼的銀杏白果，打漿加入1 5倍的水，煮沸糊化，加入0.2 5. 0% (質量/體積)市售液化酶(16萬單位/毫升)，80°C水浴10 50分鐘，冷卻到50 70°C 后，加入0. 1 4. 0% (質量/體積)糖化酶，50 70°C水浴10 50分鐘，待冷卻至40 600C以下后加入0. 2 3. 0% (質量/體積)蛋白酶40 60°C水解0. 5 9小時，制得銀杏白果水解液；
(2)銀杏白果水解液在100 120°C滅菌10 60分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉速60 180轉/分鐘，溫度22 33°C培養(yǎng)5 10天，制得蟲草液體搖瓶菌種；銀杏白果水解液經過100 120°C滅菌，以3 10% (體積比)接種量接入蟲草液體搖瓶菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉速60 250轉/分，通風量1 :0. 3 1 :1. 2v/v/m培養(yǎng)3 8天，制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏水解液經過100 120°C滅菌10 60分鐘，以3 10% (體積比)接種量接入蟲草銀杏一級液體菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉速60 250 轉/分，通風量1 :0. 3 1 1. 2v/v/m培養(yǎng)3 10天，制得蟲草銀杏白果發(fā)酵液；向蟲草銀杏白果發(fā)酵液加入白果重量的0. 2 5. 0倍大米和水煮成的米飯，其中以質量計大米水=
1:1 2，以及大米重的1 10%酒曲和大米重的0. 5 2%釀酒酵母，10 40°C發(fā)酵7 30天后，經過過濾，濾液加入食用酒精、蜂蜜和檸檬酸勾兌，滅菌得到蟲草銀杏白果酒。其中銀杏白果水解液制備過程中所使用的蛋白酶為風味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、高效水解蛋白酶或小麥蛋白水解專用酶等。用該工藝生產的蟲草銀杏白果黃酒，其特征在于色質米黃色至褐色，具有淡淡白果香味和蟲草發(fā)酵的特有香味，該酒濃縮后香味濃郁持久不退。本發(fā)明提供的蟲草銀杏白果黃酒，該酒含有銀杏活性成分(黃酮和萜類)和蟲草活性成分(如蟲草多糖、甘露醇和蟲草酸)，具有預防高血壓或抗氧化等功效。


圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
具體實施方式
本發(fā)明所述的蟲草銀杏白果酒中活性成分分別按下列方法檢測總黃酮含量的測定采用亞硝酸鈉一硝酸鋁法(鄧斌，蔣剛彪，陳六平分光光度法測定食品包裝紙用紫甘薯總黃酮的含量.包裝工程，2008，29(1) :27 29.)；萜類含量的測定采用王翔飛介紹的測定方法(王翔飛，潘旭東，劉雯霞，等黃花瓦松中總三萜成分的含量的測定.中國民族民間醫(yī)藥，2009，18(10): 11.)；銀杏內酯含量測定采用分光光度法(張渝陽，王鑫，趙麗娟，荀紹馨，田明，張新，王曉寧，鄧桂春分光光度法測定銀杏萜內酯的含量.遼寧化工，2006，35(10):618 620)；氫氰酸含量測定依據中華人民共和國國家標準GB/ T15665-1995 豆類、配糖氫氰酸含量的測定；銀杏酚酸采用熒光分析法測定(田亞平，尤文元，李或娜熒光分析法測定銀杏酚酸.分析化學研究簡報.2006年特刊，sl55-sl57)，蟲草酸測定采用比色法(董巍巍，呂效平，李祥，陳建偉，孫東東，左堅人工蟲草及野生蟲草的成分比較研究?，F代中藥研究與實踐2007，22 (2) :39 41);蟲草素含量測定采用高效液相色譜法(夏敏反相高效液相色譜法測定蛹蟲草中蟲草素的含量.淮陰工學院學報， 2004，13(3)22 24)。下面結合實施例對本發(fā)明做進一步闡述
本發(fā)明中實施例1 3中所使用的蟲草菌種為可以購買到的任意一種蟲草菌種。蟲草斜面菌種采用PDA培養(yǎng)基制備。IOOOmLPDA培養(yǎng)基含200g馬鈴薯提取液(去皮馬鈴薯切成碎片、IOOOmL蒸餾水煮沸30分鐘，八層紗布過濾，濾液定容至IOOOmL,濾液即為馬鈴薯提取液)加入蔗糖20g、瓊脂20g，煮沸待瓊脂完全溶化后分裝試管，塞上棉塞，121°C滅菌，制成斜面。無菌接種蟲草菌種，28°C培養(yǎng)7天，4°C冷藏待用。實施例1
精確稱取已經脫殼的白果200g，打漿加入200mL的水，煮沸糊化，溫度降至60°C，加入
0.4mL液化酶(無錫賽德生物工程有限公司，16萬單位/mL)60°C水解50分鐘，降溫到50°C， 加入0. 2mL糖化酶(無錫賽德生物工程有限公司，2萬單位/mL) 50°C水解50分鐘，降溫到 30°C，加入0. 4g木瓜蛋白酶(廣西南寧東恒華道生物科技有限公司，80萬單位/g)，水解9 小時，制得銀杏白果水解液；銀杏白果水解液分裝到250mL三角瓶，每瓶100mL，100°C滅菌 60分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉速60轉/分鐘，溫度22°C培養(yǎng)10天，制得蟲草液體搖瓶菌種；白果水解液經過100°C滅菌60分鐘，以10%接種量接入蟲草的液體搖瓶菌種，在溫度22°C，攪拌轉速60轉/分，通風量1 :0. 3v/v/m培養(yǎng)8天，制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏白果水解液經過100°C滅菌60分鐘，以3%接種量接入蟲草的一級液體菌種， 在溫度22°C，攪拌轉速60轉/分，通風量1 :0. 3v/v/m培養(yǎng)10天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液加入加入200g大米和200mL水煮成的米飯，以及大米重的1% (Ig)白酒酒曲 (購自洋河酒廠)和大米重的0. 5% (Ig)釀酒酵母(feccAarofflj^M cererisiae，安琪酵母股份有限公司)，10°C發(fā)酵30天后，離心，上清液加入食用酒精25mL，檸檬酸0. lg，蜂蜜10g， 調勻后獲得蟲草銀杏白果黃酒。該酒為米黃色。
實施例2
精確稱取已經脫殼的白果200g，打漿加入IOOOmL水，煮沸糊化，降溫至70°C加入加入
1.6mL液化酶(無錫賽德生物工程有限公司，16萬單位/mL)70°C水解30分鐘，降溫到60°C， 加入1. 6mL糖化酶(無錫賽德生物工程有限公司，2萬單位/mL) 60°C水解30分鐘，降溫到40°C，加入0. 4g木瓜蛋白酶(廣西南寧東恒華道生物科技有限公司，80萬單位/g)，水解6 小時，制得銀杏白果水解液；銀杏白果水解液分裝到250mL三角瓶，每瓶100mL，ll(TC滅菌 30分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉速120轉/分鐘，溫度28°C培養(yǎng)7天，制得蟲草液體搖瓶菌種；白果水解液經過110°c滅菌30分鐘，以7%接種量接入蟲草的液體搖瓶菌種，在溫度28°C，攪拌轉速160轉/分，通風量1 :0. 8v/v/m培養(yǎng)5天，制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏白果水解液經過110°C滅菌30分鐘，以7%接種量接入蟲草的一級液體菌種， 在溫度28°C，攪拌轉速160轉/分，通風量1 :0. 8v/v/m培養(yǎng)5天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液加入加入500g大米和500mL水煮成的米飯，以及大米重的7. 5g (2. 5%)黃酒酒曲(購自中南食品科學研究院)和2g (0. 4%)酵母，25°C發(fā)酵20天后，離心取清液加入食用酒精70mL.檸檬酸0.3g，蜂蜜20g，即為蟲草銀杏白果黃酒。該酒為淺褐色。
實施例3
精確稱取已經脫殼的白果200g，打漿，加入2000mL水，煮沸糊化，降溫至80°C，加入 IOOmL液化酶(無錫賽德生物工程有限公司，16萬單位/mL)80°C水解10分鐘，降溫到70°C， 加入IOOmL糖化酶(無錫賽德生物工程有限公司，2萬單位/mL) 70°C水解10分鐘，降溫到 500C，加入30g木瓜蛋白酶(廣西南寧東恒華道生物科技有限公司，80萬單位/g)，水解0. 5 小時，制得銀杏白果水解液；其中所述的搖瓶培養(yǎng)工藝是銀杏白果水解液分裝到250mL三角瓶，每瓶lOOmL，120°C滅菌10分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種，在轉速180轉/分鐘， 溫度33°C培養(yǎng)5天，制得蟲草液體搖瓶菌種；白果水解液經過120°C滅菌，以10%接種量接入蟲草的液體搖瓶菌種，在溫度33°C，攪拌轉速250轉/分，通風量1 :1. 2v/v/m培養(yǎng)3天， 制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏白果水解液經過120°C滅菌10分鐘，以10%接種量接入蟲草的一級液體菌種，在溫度33°C，攪拌轉速250轉/分，通風量1 1.2v/v/m培養(yǎng)3天，制得蟲草銀杏發(fā)酵液；蟲草銀杏發(fā)酵液加入IOOOg大米和IOOOmL水煮成的米飯，以及大米重的5%(50g)黃酒酒曲(購自浙江力克生物科技有限公司)和2% (20g)酵母，40°C發(fā)酵10天后，離心取清液加入食用酒精lOOmL，檸檬酸0. 05g，蜂蜜20g勾兌即為蟲草銀杏白果黃酒。 該酒為褐色。
實施例4
實施例1、實施例2和實施例3的測定結果顯示在表1
表1 實施例1 3成分分析表
權利要求
1.蟲草銀杏白果黃酒，其特征在于其中酒精度8 16%，總黃酮含量1 5mg/L，銀杏內酯1 6 mg/L,總萜類化合物含量30 800mg/L，蛋白質60 200mg/L，可溶性糖 (2. 0%，蟲草酸10 30mg/L，蟲草素0. 5 2mg/L，銀杏酚酸0 5ppm，氫氰酸0 0. 1 μ g/ L0
2.權利要求1所述的蟲草銀杏白果黃酒的制備方法，其特征在于按下述步驟進行(1)精確稱取已經脫殼的銀杏白果，打漿加入1 5倍的水，煮沸糊化，加入以質量與體積比為0. 2 5. 0%液化酶，80°C水浴10 50分鐘，冷卻到50 70°C后，加入以質量與體積比為0. 1 4. 0%糖化酶，50 70°C水浴10 50分鐘，待冷卻至40 60°C以下后加入以質量與體積比為0. 2 3. 0%蛋白酶40 60°C水解0. 5 9小時，制得銀杏白果水解液；(2)銀杏白果水解液在100 120°C滅菌10 60分鐘，冷卻后接入蟲草試管斜面菌種， 在轉速60 180轉/分鐘，溫度22 33°C培養(yǎng)5 10天，制得蟲草液體搖瓶菌種；銀杏白果水解液經過100 120°C滅菌，以體積比3 10%接種量接入蟲草液體搖瓶菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉速60 250轉/分，通風量1 :0. 3 1 1. 2v/v/m培養(yǎng)3 8天，制得蟲草銀杏一級液體菌種；銀杏水解液經過100 120°C滅菌10 60分鐘，以體積比3 10%接種量接入蟲草銀杏一級液體菌種，在溫度22 33°C，攪拌轉速60 250轉/分，通風量1 :0. 3 1 1. 2v/v/m培養(yǎng)3 10天，制得蟲草銀杏白果發(fā)酵液；向蟲草銀杏白果發(fā)酵液加入白果重量的0. 2 5. 0倍大米和水煮成的米飯，其中以質量計大米水=1 :1 2， 以及大米重的1 10%酒曲和大米重的0. 5 2%釀酒酵母，10 40°C發(fā)酵7 30天后， 經過過濾，濾液加入食用酒精、蜂蜜和檸檬酸勾兌，滅菌得到蟲草銀杏白果酒。
3.權利要求2所述的蟲草銀杏白果黃酒的制備方法，其特征在于其中銀杏白果水解液制備過程中所使用的蛋白酶為風味蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶、高效水解蛋白酶或小麥蛋白水解專用酶。
4.權利要求1所述的蟲草銀杏白果黃酒的用途，可用于預防高血壓或抗氧化。
全文摘要
本發(fā)明公開了蟲草銀杏白果黃酒，生物工程技術領域。其中酒精度酒精度8～16％，總黃酮含量1～5mg/L，銀杏內酯1～6mg/L，總萜類化合物含量30～800mg/L,蛋白質60～200mg/L，可溶性糖≤2.0%，蟲草酸10～30mg/L,蟲草素0.5～2mg/L，銀杏酚酸0～5ppm，氫氰酸0~0.1μg/L。采用雙酶法水解銀杏白果，獲得銀杏白果水解液，該水解液中含有銀杏黃酮、萜類化合物、氨基酸和肽類、淀粉等活性化合物，該水解液通過蟲草菌種轉化，加入米飯酒曲發(fā)酵獲得發(fā)酵液，該發(fā)酵液經過過濾、勾兌獲得蟲草銀杏白果酒。該酒含有銀杏和蟲草活性成分，具有預防高血壓和抗氧化等功效。
文檔編號A61K36/16GK102250724SQ20111019768
公開日2011年11月23日 申請日期2011年7月15日 優(yōu)先權日2011年7月15日
發(fā)明者任曉鋒, 侯莎莎, 唐懿駿, 張志才, 張若花, 楊芳 申請人:江蘇大學