專利名稱：一種治療肺纖維化的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，特別涉及一種治療肺纖維化的藥物組合物。
背景技術(shù)：
長期研究組織器官纖維化的著名權(quán)威學(xué)者胡卓偉指出“國際醫(yī)學(xué)界最新研究表明，人體內(nèi)所有器官組織都有纖維化的可能，許多慢性疾病直接導(dǎo)致臟器組織的纖維化，纖維化才是慢性病久治不愈的根本原因，其累及人體幾乎所有器官和系統(tǒng)，是許多疾病致殘、 致死的主要原因，嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命，只有根除引起慢性疾病的根源——纖維化，才能徹底瓦解慢性頑疾對(duì)人類的危害?！狈卫w維化(pulmonary fibrosis, PF)是器官纖維化中最具代表性、最典型也是最常發(fā)的一種纖維化疾病，其病因極為復(fù)雜，除了“非典”可引起此病以外，其他很多肺系疾病都可以導(dǎo)致肺纖維化，有學(xué)者認(rèn)為至少有150種以上的病因與之相關(guān)。在治療上，目前對(duì)肺纖維化的治療僅限于非特異性抗炎、免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素等“笨方法”，其共同特點(diǎn)是缺少特異性治療，而且大量使用抗生素和激素是導(dǎo)致組織器官纖維化的重要原因，最新的研究結(jié)果正在逐步揭示長期使用激素和抗生素治療肺纖維化比原發(fā)性疾病本身引起的纖維化改變要嚴(yán)重得多，化學(xué)制劑的毒副作用大的問題未得到解決。隨著本病發(fā)病率、死亡率的不斷上升，近年來防治肺纖維化的研究已成為世界肺科學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)，故尋求包括中醫(yī)藥在內(nèi)的其他療法介入此病的治療也已成為了醫(yī)藥學(xué)界特別是中醫(yī)藥研究人員的當(dāng)務(wù)器。目前，已有中醫(yī)中藥防治肺纖維化的文獻(xiàn)報(bào)道，中醫(yī)歷史文獻(xiàn)歷代也有許多治療 “肺痿”、“肺脹”的治驗(yàn)。先已報(bào)道的治療肺纖維化的組方，各有特色，且均顯示了一定療效。 周亞濱等應(yīng)用肺纖康(人參、麥冬、桃仁、赤芍、牛膝、桔梗、當(dāng)歸、生地黃、半夏、甘草、枳殼、 紅花等)治平陽霉素所致的肺間質(zhì)纖維化小鼠，并檢測小鼠的免疫功能。結(jié)果顯示，肺纖康可明顯抑制模型動(dòng)物B細(xì)胞功能亢進(jìn)(中藥治療組空斑形成細(xì)胞和溶血素的含量較未治療組明顯降低)；對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能也有抑制作用，表明肺纖康對(duì)纖維化的發(fā)病及發(fā)展有明顯的預(yù)防和治療效果。馬君等應(yīng)用補(bǔ)氣通肺湯(黨參、黃芪、沙參、麥冬、丹參、當(dāng)歸、川彎、黃苳、桑白皮、赤芍、蘇梗、白果、炙麻黃、甘草等)治療博來霉素A5復(fù)制的大鼠肺間質(zhì)纖維化模型。實(shí)驗(yàn)表明，在疾病早期，補(bǔ)氣通肺湯能夠降低肺組織和血清中丙二酮的含量，作用優(yōu)于激素；在病變后期補(bǔ)氣通肺湯能明顯提高谷胱甘肽過氧化物酶活性和機(jī)體對(duì)脂質(zhì)過氧化的應(yīng)激能力，能極大促進(jìn)機(jī)體抗氧化能力，從而減輕脂質(zhì)過氧化自由基對(duì)生物膜的損傷，保護(hù)肺組織，減輕炎癥反應(yīng)，從而在肺損傷及纖維化過程中發(fā)揮防治作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種治療肺纖維化的新中藥配方，該配方治療肺纖維化療效較好， 副作用小，安全性好。本發(fā)明提供了一種治療肺纖維化的藥物組合物，它包括以下重量配比的原料藥人參5-15份、丹參5-15份、當(dāng)歸1-11份、黃精5-15份、紫蘇子5_15份、白芥子1_11份、枳實(shí)1-11份、矮地茶5-15份。優(yōu)選地，所述的藥物的重量配比為人參7-13份、丹參7-13份、當(dāng)歸3_9份、黃精 7-13份、紫蘇子7-13份、白芥子3-9份、枳實(shí)3_9份、矮地茶7_13份。進(jìn)一步的，所述的藥物的重量配比為人參9-11份、丹參9-11份、當(dāng)歸5-7份、黃精9-11份、紫蘇子9-11份、白芥子5-7份、枳實(shí)5-7份、矮地茶9_11份。進(jìn)一步的，所述的藥物的重量配比為人參10份、丹參10份、當(dāng)歸6份、黃精10份、 紫蘇子10份、白芥子6份、枳實(shí)6份、矮地茶10份。優(yōu)選地，所述藥物的劑型為顆粒劑、片劑、硬膠囊、口服液、軟膠囊、滴丸或糖漿。本發(fā)明還提供了一種制備上述藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、稱取原料藥；b、原料藥直接打粉，或?qū)⒃纤幖铀逯蠡蛴袡C(jī)溶劑提取，提取液濃縮，再加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。本發(fā)明最后提供了上述藥物組合物在制備治療肺纖維化疾病藥物中的用途。本發(fā)明所用的各種原料藥材均為符合國家或地方標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的中藥材。本發(fā)明提供的化纖I號(hào)藥物組合物有抑制人胚肺二倍體纖維母細(xì)胞2BS細(xì)胞株的增殖的功效，可用于制備治療肺纖維化疾病的藥物，且臨床療效顯著，副作用小，安全性好， 為臨床治療肺纖維化疾病提供了一種新的選擇。
具體實(shí)施例方式顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1本發(fā)明藥物組合物的制備取人參15克、丹參15克、當(dāng)歸11克、黃精15克、紫蘇子15克、白芥子11克、枳實(shí) 11克、矮地茶15克經(jīng)常規(guī)提取和純化方法處理后，再制成所需劑型的藥物，如顆粒劑、片劑、硬膠囊、口服液、軟膠囊、滴丸或糖漿。實(shí)施例2本發(fā)明藥物組合物的制備取人參15克、丹參15克、當(dāng)歸11克、黃精15克、紫蘇子15克、白芥子11克、枳實(shí) 11克、矮地茶15克經(jīng)常規(guī)提取和純化方法處理后，再制成所需劑型的藥物，如顆粒劑、片劑、硬膠囊、口服液、軟膠囊、滴丸或糖漿。實(shí)施例3本發(fā)明藥物組合物的制備取人參7克、丹參7克、當(dāng)歸3克、黃精7克、紫蘇子7克、白芥子3克、枳實(shí)3克、 矮地茶7克經(jīng)常規(guī)提取和純化方法處理后，再制成所需劑型的藥物，如顆粒劑、片劑、硬膠囊、口服液、軟膠囊、滴丸或糖漿。實(shí)施例4本發(fā)明藥物組合物的制備取人參13克、丹參13克、當(dāng)歸9克、黃精13克、紫蘇子13克、白芥子9克、枳實(shí)9克、矮地茶13克經(jīng)常規(guī)提取和純化方法處理后，再制成所需劑型的藥物，如顆粒劑、片劑、 硬膠囊、口服液、軟膠囊、滴丸或糖漿。實(shí)施例5本發(fā)明藥物組合物的制備取人參9克、丹參9克、當(dāng)歸5克、黃精9克、紫蘇子9克、白芥子5克、枳實(shí)5克、 矮地茶9克經(jīng)常規(guī)提取和純化方法處理后，再制成所需劑型的藥物，如顆粒劑、片劑、硬膠囊、口服液、軟膠囊、滴丸或糖漿。實(shí)施例6本發(fā)明藥物組合物的制備取人參11克、丹參11克、當(dāng)歸7克、黃精11克、紫蘇子11克、白芥子7克、枳實(shí)7 克、矮地茶11克經(jīng)常規(guī)提取和純化方法處理后，再制成所需劑型的藥物，如顆粒劑、片劑、 硬膠囊、口服液、軟膠囊、滴丸或糖漿。實(shí)施例7本發(fā)明藥物組合物的制備取人參10克、丹參10克、當(dāng)歸6克、黃精10克、紫蘇子10克、白芥子6克、枳實(shí)6 克、矮地茶10克經(jīng)常規(guī)提取和純化方法處理后，再制成所需劑型的藥物，如顆粒劑、片劑、 硬膠囊、口服液、軟膠囊、滴丸或糖漿。以下通過具體藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果1、實(shí)驗(yàn)與方法1. 1 材料1. 1. 1 細(xì)胞株人胚肺二倍體纖維母細(xì)胞2BS細(xì)胞株，由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心提供，常規(guī)培養(yǎng)傳代。1.1.2 動(dòng)物SD大鼠M只，雌雄各半，體重250 300g，成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，常規(guī)飼養(yǎng)。制備實(shí)驗(yàn)血清用。1.1.3 藥物(1)化纖I號(hào)配方如實(shí)施例7，用蒸餾水配成溶液，其中高劑量濃度相當(dāng)于原生藥 0. 6g/ml,中劑量濃度相當(dāng)于原生藥0. 3g/ml，低劑量濃度相當(dāng)于原生藥0. 15g/ml。(2)強(qiáng)的松片成都藥業(yè)有限責(zé)任公司。用蒸餾水配成實(shí)驗(yàn)用藥濃度，置4°C冰箱1. 1. 4主要試劑與儀器RPMI-1640培養(yǎng)基干粉Hyclone公司；胰蛋白酶Gibcobrl公司；小牛血清 (Fetal calf serum, FCS) =Hyclone公司；二氧化碳培養(yǎng)箱日本三洋公司；六孔培養(yǎng)板 NUNC公司；超凈工作臺(tái)蘇州凈化設(shè)備廠；碘化丙啶=Sigma公司。1. 2實(shí)驗(yàn)方法1. 2. 1實(shí)驗(yàn)血清的制備本實(shí)驗(yàn)需制備五組實(shí)驗(yàn)血清不含藥物血清(無藥血清組)、陽性對(duì)照藥物含藥血清(陽性血清組)和化纖I號(hào)高、中、低劑量含藥血清(高劑血清組、中劑血清組和低劑血清組)。制備每種血清均選用正常成年大鼠6只，雌雄各半。無藥血清組大鼠每日灌胃生理鹽水5ml/只，化纖I號(hào)高、中、低劑血清組和陽性血清組大鼠每日灌胃已配好不同濃度的化纖I號(hào)和強(qiáng)的松片溶液5ml/只，以上各組均灌胃1次/天，連續(xù)3天。于最后1次灌胃后lh(灌胃前1 禁食不禁水)股動(dòng)脈采血，離心，合并同組動(dòng)物血清，用微孔濾膜過濾除菌，于56°C、30min水浴滅活，并用完全培養(yǎng)液配成10 %的實(shí)驗(yàn)血清培養(yǎng)液，4°C保存，兩周內(nèi)使用。1. 2. 2細(xì)胞培養(yǎng)條件2BS細(xì)胞接種于含10 %小牛血清、100u/ml青霉素和100 μ g/ml鏈霉素的 RPMI-1640完全培養(yǎng)液中，在37°C、含5% C02培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，并用0. 25%胰蛋白酶消化傳代。1. 2. 3實(shí)驗(yàn)血清添加方法將傳代的2BS細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板，每孔5 X IO5個(gè)細(xì)胞，共分6組，每組均設(shè)6 個(gè)平行孔；培養(yǎng)24h至細(xì)胞生長旺盛后，去培養(yǎng)液，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、無藥血清組、陽性血清組、高劑血清組、中劑血清組和低劑血清組，分別添加入正常培養(yǎng)液、無藥血清培養(yǎng)液、 陽性對(duì)照藥物含藥血清培養(yǎng)液及化纖I號(hào)高、中、低劑量含藥血清培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)4 后結(jié)束。1.2.4指標(biāo)檢測1. 2. 4. IMTT法檢測細(xì)胞增殖(1)取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，用RPMI-1640完全培養(yǎng)液調(diào)整至1 X 105/ml，接種于96孔培養(yǎng)板(100 μ 1/孔)；(2)培養(yǎng)24h后，去培養(yǎng)液，分別加入正常培養(yǎng)液、無藥血清培養(yǎng)液、陽性對(duì)照藥物含藥血清培養(yǎng)液及化纖I號(hào)高、中、低劑量含藥血清培養(yǎng)液，每種條件下重復(fù)8孔；(3)作用48h后，每孔加MTT 20 μ 1 (5mg/ml)，放培養(yǎng)箱育4h ；(4)吸去上清，加入15%十二烷基磺酸鈉(SDS) 150 μ 1/孔，放培養(yǎng)箱育12h ；(5)用酶標(biāo)儀測定每孔光密度值(OD值)，實(shí)驗(yàn)波長570nm、參考波長630nm，按以下公式計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。細(xì)胞增殖抑制率(％ ) = (1-實(shí)驗(yàn)組OD均值/對(duì)照組OD均值)X 100%1. 2. 4. 2流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞凋亡率測定及細(xì)胞周期分析(1)離心收集細(xì)胞IO6個(gè)，用PBS洗1次后，75%乙醇固定并制成單細(xì)胞懸液，-20°C 保存?zhèn)溆茫?2)上機(jī)前，細(xì)胞用PBS洗3次，50 μ g/ml碘化丙啶一步法4°C條件下避光染色 30min ；(3)上流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測定及細(xì)胞周期分析1. 3統(tǒng)計(jì)方法將各組數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析后，采用t檢驗(yàn)，細(xì)胞周期分析和凋亡率的比較采用X2 檢驗(yàn)。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2. 1對(duì)2BS細(xì)胞增殖的影響，見表1 表1不同實(shí)驗(yàn)血清對(duì)2BS細(xì)胞增殖的影響(^S)
權(quán)利要求
1.一種治療肺纖維化的藥物組合物，其特征在于它包括以下重量配比的原料藥人參5-15份、丹參5-15份、當(dāng)歸1-11份、黃精5-15份、紫蘇子5_15份、白芥子1_11份、枳實(shí) 1-11份、矮地茶5-15份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肺纖維化的藥物組合物，其特征在于所述的藥物的重量配比為人參7-13份、丹參7-13份、當(dāng)歸3-9份、黃精7_13份、紫蘇子7_13份、白芥子 3-9份、枳實(shí)3-9份、矮地茶7-13份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療肺纖維化的藥物組合物，其特征在于所述的藥物的重量配比為人參9-11份、丹參9-11份、當(dāng)歸5-7份、黃精9-11份、紫蘇子9_11份、白芥子 5-7份、枳實(shí)5-7、矮地茶9-11份。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療肺纖維化的藥物組合物，其特征在于所述的藥物的重量配比為人參10份、丹參10份、當(dāng)歸6份、精10份、紫蘇子10份、白芥子6份、枳實(shí)6份、 矮地茶10份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療肺纖維化的藥物組合物，其特征在于所述藥物的劑型為顆粒劑、片劑、硬膠囊、口服液、軟膠囊、滴丸或糖漿。
6.一種制備權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的藥物組合物的方法，其特征在于它包括如下步驟a、稱取原料藥；b、原料藥直接打粉，或?qū)⒃纤幖铀逯蠡蛴袡C(jī)溶劑提取，提取液濃縮，再加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的制劑。
7.權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備治療肺纖維化疾病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療肺纖維化的藥物組合物，它包括以下重量配比的原料藥人參5-15份、丹參5-15份、當(dāng)歸1-11份、黃精5-15份、紫蘇5-15份、白芥子1-11份、枳實(shí)1-11份、矮地茶5-15份。還提供了前述組合物的制備方法及其在制備治療肺纖維化疾病的藥物中的用途。本發(fā)明提供的化纖I號(hào)藥物組合物有抑制人胚肺二倍體纖維母細(xì)胞2BS細(xì)胞株增殖的功效，可用于制備治療肺纖維化疾病的藥物，且臨床療效顯著，副作用小，安全性好，為臨床治療肺纖維化疾病提供了一種新的選擇。
文檔編號(hào)A61K36/8969GK102225154SQ20111016262
公開日2011年10月26日 申請(qǐng)日期2011年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月16日
發(fā)明者李戎, 閆智勇 申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué)