專利名稱：一組鼠特異性抗生育作用的多肽的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一組鼠特異性抗生育的多肽，特別是涉及包含鼠特異性附睪蛋白和精子蛋白的免疫抗生育多肽。
背景技術：
目前據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計，全世界有老鼠170億只以上，我國有老鼠40億只以上，對農(nóng)業(yè)、林業(yè)、畜牧業(yè)及人類的健康造成了嚴重的危害。根據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)報告，全世界由于鼠害造成糧食損失最高可達到收獲量的15% -20%，相當于25個貧窮國家國民收入總值，夠I. 5億人全年的ロ糧。在我國毎年近千萬畝森林和十億畝草場被破壞成為沙漠或荒洲，損失超過30億人民幣。此外，老鼠能傳播多種人畜共患傳染性疾病，攜帯得200余種病原體中能使人致病的就有57種。因此，研究低毒無害、不污染生態(tài)環(huán)境的特 異滅鼠技術和藥品是具有非常重要的意義。目前滅鼠以化學滅鼠為主，但是化學滅鼠存在對人畜的毒副作用和鼠類抗藥性等諸多問題，而且由于鼠類繁殖能力極強，往往殺滅快，鼠類數(shù)量恢復也快。近年來，澳大利亞科學家成功的構建了表達小鼠卵細胞透明帶ZP3蛋白的鼠痘病毒，成功地抑制了鼠類的生育繁殖能力。但是，由于鼠的ZP3蛋白與人的ZP3蛋白高度同源，即靶標不具備特異性，從而引發(fā)了公眾對這種鼠痘病毒在野外長期使用的安全性的擔憂，限制了它的推廣使用。因此，研究鼠特異性的抗生育靶標具有非常重要的意義。作為鼠特異性的抗生育靶標，首要條件是靶標蛋白必須是功能重要的生殖相關蛋白；其次是必須具有鼠特異性；最后是免疫抗生育靶標能夠與抗體直接相互作用，最好是膜蛋白或分泌蛋白。此外，疫苗促使機體產(chǎn)生高滴度抗體的前提是疫苗具有強免疫原性?，F(xiàn)代保護性免疫理論認為，有效的保護性免疫源于ー組表位的合理組合和搭配。蛋白質抗原并非通過其完整分子發(fā)揮功能，而是通過其表位體現(xiàn)其特異性。就某一蛋白質抗原而言，就含有與免疫識別密切相關的表位結構，產(chǎn)生免疫應答反應。由于許多天然抗原引發(fā)的免疫反應存在交叉反應，不能很好的滿足臨床實際需要，因此，為了提高蛋白質抗原的特異性，就必須在表位水平上做出選擇，保留和改善特異性多肽片段，以得到更理想的疫苗靶標分子。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于公開ー組包含鼠特異性附睪蛋白和精子蛋白的免疫抗生育多肽。本發(fā)明的目的是通過這樣的技術方案實現(xiàn)ー組具有抗生育的多肽，包括SEQ ID :1_6中的任意多個等量混合的所示的氨基酸序列。ー種抗生育的藥物制劑，包含上述SEQ ID 1-6中任意所述的多個等量混合的所示的氨基酸序列作為活性成分。ー種滅鼠制劑，包含上述SEQ ID 1-6中任一所述的多個等量混合的所示的氨基酸序列作為活性成分。
ー種具有抗生育作用的藥物組合物，包含所述的多肽和藥學上可接受的載體和賦形劑。一種來源于鼠的特異性精子蛋白Sp38免疫抗生育多肽，其氨基酸序列為SEQID :1 和 SEQ ID 2oー種來源于鼠的特異性附睪蛋白ΗΕ6免疫抗生育多肽，其氨基酸序列為SEQ ID 3 和 SEQ ID 4o
一種來源于鼠的特異性精子蛋白Slc26a8免疫抗生育多肽，其氨基酸序列為SEQID 5和 SEQ ID 6oー種具有抗生育的多肽，其氨基酸序列為SEQ ID 1-6中6個多肽以等量混合制成。ー種抗生育的蛋白，由所述多肽分別與匙孔血藍蛋白(KLH)偶聯(lián)組成。上述SEQ ID 1-6中所述的多肽作為活性成分時，単位制劑中多肽總含量為100 μ g，単位制劑指注射劑的“毎支”，SEQ ID 1-6中所述的多條多肽混合時按等量進行混
ム
ロ ο本發(fā)明的6條多肽片段具有很好的免疫原性，能夠刺激機體產(chǎn)生特異性抗體，誘導抗生育作用。從抗原多肽免疫小鼠與對照組(KLH對照組)免疫小鼠的生育對比發(fā)現(xiàn)，6條多肽抗原混合組免疫可使雄性和雌性小鼠的產(chǎn)仔率明顯下降，產(chǎn)仔數(shù)分別下降62. 8%和50%。HE6多肽組或混合組免疫雄性小鼠能夠顯著降低精子的運動能力和活力。本發(fā)明所示的具有高效抗生育效果的多肽為鼠特異免疫抗生育疫苗的研究奠定了基礎。本發(fā)明抗原在抗原特性上與天然抗原不同，但引起的免疫反應特異性和免疫效果與天然抗原無異，有針對性的篩選交叉反應性小或沒有交叉反應性的優(yōu)勢表位進行研究，結果表明申請人篩選的6種鼠特異性抗生育多肽具有很好的免疫抗生育效果具有很樂觀的應用前景。六種鼠特異性附睪蛋白和精子蛋白的免疫抗生育多肽，具有顯著的抗原性，免疫抗生育效果明顯，而且無毒副作用。下述實驗例和實施例進ー步說明但不限于本發(fā)明。申請人:通過比較基因組學及生物信息學技術結合充分的文獻調(diào)研發(fā)現(xiàn)，附睪HE6受體蛋白、精子Sp38和Slc26a8蛋白，它們均為膜蛋白，敲除后雄性小鼠均呈不育表型，均可作為免疫抗生育的潛在靶標，同時這三個蛋白由于分布的部位不同，分別參與精液的重吸收、精卵結合和精子運動發(fā)育等不同的過程，所以它們還可能具有協(xié)同作用。由于本合成多肽分子量太小，在動物體內(nèi)不能誘導產(chǎn)生免疫反應，因此將多肽與載體蛋白交聯(lián)后才能進行免疫，能顯著增加抗原的免疫原性。選擇匙孔血藍蛋白(Keyholelimpet hemocyanin,KLH)進行交聯(lián),是由于它是ー種自身就能引發(fā)免疫反應的大分子載體蛋白，免疫原性優(yōu)于BSA等其它的載體蛋白。因此，本發(fā)明均使用KLH與多肽片段進行偶聯(lián)。實驗例I抗生育多肽序列的篩選為了篩選到既具有鼠特異型，又具有良好抗原性的多肽片段，本發(fā)明使用了 Invitrogen 公司的在線多妝分析工具(http: //peptideselect. invitrogen. com/peptide)和DNAStar分析軟件中Protean分析工具，對人/鼠附睪蛋白HE6、精子蛋白Sp38與Slc26a8的蛋白序列進行分析。根據(jù)選取特異性好、抗原性、親水性強、避免位于螺旋區(qū)結構多肽的原則，最終選取Sp38蛋白的4-19位和40-54位氨基酸序列、Slc26a8蛋白的2-20位和36-51位氨基酸序列及HE6蛋白的3_14位和35-50位氨基酸序列進行研究，DNAStar分析軟件中Protean分析工具分析多肽序列的結果見圖I,選取多肽的序列結果見表I。表I本發(fā)明抗生育多肽中的氨基酸序列信息
權利要求
1.一種抗生育的多肽，其特征在于包括SEQ ID :1-6中的任意多個的氨基酸序列按照等量混合。
2.如權利要求I所述的抗生育多肽，其特征在于SEQID :1和SEQ ID :2以等量混合制成。
3.如權利要求I所述的抗生育多肽，其特征在于SEQID :3和SEQ ID :4以等量混合制成。
4.如權利要求I所述的抗生育多肽，其特征在于SEQID :5和SEQ ID :6以等量混合制成。
5.如權利要求I所述的抗生育多肽，其特征在于SEQID :1-6以等量混合制成。
6.—種抗生育的蛋白，其特征在于由SEQ ID 1-6多個等量混合的多肽與匙孔血藍蛋白(KLH)偶聯(lián)組成。
7.如權利要求6所述的抗生育蛋白，其特征在于SEQID :1和SEQ ID 2以等量混合制成。
8.如權利要求6所述的抗生育蛋白，其特征在于SEQID 3和SEQ ID 4以等量混合制成。
9.如權利要求6所述的抗生育蛋白，其特征在于SEQID :5和SEQ ID :6以等量混合制成。
10.如權利要求6所述的抗生育蛋白，其特征在于SEQID 1-6以等量混合制成。
11.如權利要求1-5所述的抗生育多肽，其特征在于所述多肽和藥學上可接受的載體和賦形劑組成的藥物組合物。
12.如權利要求6-10所述的抗生育蛋白，其特征在于所述蛋白和藥學上可接受的載體和賦形劑組成的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了6種免疫抗生育多肽片段均具有很好的免疫原性，能夠刺激機體產(chǎn)生特異性抗體，誘導抗生育作用。從抗原多肽免疫小鼠與對照組(KLH對照組)免疫小鼠的生育對比發(fā)現(xiàn)，6條多肽抗原混合組免疫可使雄性和雌性小鼠的產(chǎn)仔率明顯下降，產(chǎn)仔數(shù)分別下降62.8％和50％。HE6多肽組或混合組免疫雄性小鼠能夠顯著降低精子的運動能力和活力。本發(fā)明所示的具有高效抗生育效果的多肽為鼠特異免疫抗生育疫苗的研究奠定了基礎。可以用于各種抗生育制劑的應用。
文檔編號A61K38/10GK102827285SQ20111016245
公開日2012年12月19日 申請日期2011年6月16日 優(yōu)先權日2011年6月16日
發(fā)明者王玉民, 汪莉, 田利源, 侯小強, 李秀麗 申請人:軍事醫(yī)學科學院生物工程研究所