專利名稱：一種具有抗癌活性異紫堇二酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抗癌活性的化合物異紫堇二酮(Isocorydione)的制備方法，屬天然產(chǎn)物提取分離技術(shù)領(lǐng)域。具體地講，本發(fā)明涉及從罌粟科禿瘡花屬植物中提取分離異紫堇二酮(Isocorydione)的制備方法。
背景技術(shù)：
阿普菲類化合物為一大類重要的生物堿類天然產(chǎn)物化學成分，具有廣泛的藥理活性。異紫堇二酮(Isocorydione)由Ihsheng Chen于1995年首次從臺灣產(chǎn)蓮葉桐科蓮葉桐屬植物蓮葉桐(Hernandia sonora)的莖桿中提取分離，該化合物為對醌類氧化阿普菲類生物堿，命名為 Sonodione (Ihsheng Chen, Jijung Chen, Ianlih Tsai,Yaling Chang, Cheming Teng. New P-quinonoid aporphine alkaloids andantiplateletaggregation constituents of Hernandia sonora. Planta Med. ,1995,61,537-539.),1996年Ihsheng Chen的研究小組在樟科蓮桂屬植物腰果楠(Dehaasiatriandra Merr)的葉中發(fā)現(xiàn)相同的化合物，命名為 Isocorydione (Shoeisheng Lee, Chienkuang Chen,Ihsheng Chen, Chunghsiung Chen. Chemical constituents fromDehaasia triandraI.three new alkaloids, isocorydione, norisocorydione, anddehatriphine from theleaves. J. Nat. Prod. , 1996, 59, 55-58.)。同時實驗研究證明 Sonodione 對癌細胞具有一定的抗癌活性，(Jihjung Chen, Tsutomuish I kawa, Changyih Duh, Lanlih Tsai, IhshengChen. New dimeric aporphine alkaloids andcytotoxic constituents of Hernandianymyphaeifolia. Planta Med.，1996，62，528—533.)。2008 年，國內(nèi)周俊院士所在課題組從云南白族藥I!粟科紫金龍屬植物紫金龍(Dactylicapnos scandens)中分離得到Isocorydione (吳穎瑞,趙友興,劉玉清,周俊.紫金龍的生物堿成分研究.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2008，20，622-626)。罌粟科禿瘡花屬植物有三種，寬果禿瘡花、苣葉禿瘡花和禿瘡花,三種禿瘡花我國均產(chǎn)，前兩種分布于我國西南部至熱帶以外的喜馬拉雅地區(qū)，禿瘡花分布于我國黃土高原地區(qū)，具有典型的西北地域特色。秀瘡花(Dicranostigmaleptopodum),又名紅茂草、禿子花、勒馬回(陜西)，二年生或多年生草本，產(chǎn)云南西北部、四川西部、西藏南部、青海東部、甘肅南部至東南部、陜西秦嶺北坡、山西南部、河北西南部和河南西北部。生于海拔400-2900米的草坡和路旁，田埂、墻頭、屋頂也常見。根及全草藥用，全草有清熱解毒、消腫止痛、殺蟲等功效；治風火牙痛、咽喉炎、扁桃體炎、淋巴結(jié)核、禿瘡、瘡癤疥癬、癰疽。天然產(chǎn)物化學成分研究表明禿瘡花中主要含有阿撲菲類異喹啉生物堿(暢行若，王宏新，周光治.禿瘡花化學成分及組織形態(tài)研究.藥物分析雜志，1982，2，273-277.)，該類生物堿大都具有鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜及腎上腺能受體樣作用，部分化合物具有抗癌活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種異紫堇二酮(Isocorydione)的提取分離制備方法，、尤其指從禿瘡花屬植物中提取分離制備。我們在對罌粟科禿瘡花屬植物禿瘡花的化學成分研究中，從該植物中發(fā)現(xiàn)大量的異紫堇堿和含量極低的化合物Isocorydione,同時在體外細胞毒活性研究中發(fā)現(xiàn)該化合物具有較好的抗癌活性。同過以上背景可看到同一化合物具有兩個英文名稱Sonodione和Isocorydione,我們在本發(fā)明中統(tǒng)一采用Isocorydione,翻譯為異紫堇二酮。一種具有抗癌活性異紫堇二酮的制備方法，其特征在于該方法有原料采集加工、提取、分離純化三個步驟A、原料采集加工采集禿瘡花屬植物，干燥，粉碎；B、浸膏提取步驟采用70_95V%乙醇、5乂％的質(zhì)子酸水對原料冷浸或回流熱提得 總浸膏；C、分離純化步驟總浸膏用硅膠拌樣，以石油醚/丙酮/甲醇體系為流動相按極性從小到大，梯度洗脫，進行普通硅膠柱色譜(CC)分離；以石油醚丙酮三乙胺的體積比為10 4 I作為展開體系，薄層色譜(TLC)檢測顯紫紅色斑點，合并含異紫堇二酮(Isocorydione)相同組分，得含異紫堇二酮(Isocorydione)部位；異紫堇二酮(Isocorydione)部位，以石油醚、丙酮以及乙酸體系為流動相按極性從小到大，梯度洗脫，進行普通硅膠柱色譜(CC)分離，收集石油醚丙酮乙酸體系極性范圍的體積比為16 : 2 : I到8 : 2 : I的部分溶液，薄層色譜(TLC)檢測，合并相同部分，重結(jié)晶得異紫堇二酮(Isocorydione)。本發(fā)明的禿瘡花屬植物為禿瘡花、寬果禿瘡花或苣葉禿瘡花。本發(fā)明通過體外藥理活性實驗表明異紫堇二酮(Isocorydione)具有較強的抗癌活性。本發(fā)明的優(yōu)點在于I、本發(fā)明提出從秀瘡花屬植物中提取分離異紫堇二酮(Isocorydione),擴大了該化合物分離提取制備的原料來源，有利于該化合物的藥物開發(fā)，同時也有利于罌粟科植物天然產(chǎn)物化學的開發(fā)與應用研究；2、按本發(fā)明提供的制備方法,提取分離制備異紫堇二酮(Isocorydione),工藝簡單，方法可靠，生產(chǎn)成本較低。本發(fā)明制備的目標化合物異紫堇二酮(Isocorydione),其特征在于該化合物為氧化阿撲菲類生物堿化合物，具有C2tlH19NO5的分子式，化學結(jié)構(gòu)式如式I，其化學結(jié)構(gòu)經(jīng)過UV、IR、NMR, HRESI-MS 數(shù)據(jù)與參考文獻(Planta Med.，1995，61，537-539.)的對比及單晶 X 衍射實驗確定。具有以下理化常數(shù)，譜學數(shù)據(jù)以及晶體參數(shù)黑紫色結(jié)晶(乙醇)，mp 205-209°C ；UV (MeOH)max (Log) 225 (3. 55) ,281 (2. 78) ,328(3. 01) ,565(3. 49) nm ；IR(KBr)max2922,1640，1603,1564,1511,1087,1031,816cm-1 ；HRESI-MS m/z 354. 1335[M+H] + (計算值 C20H20NO5為 354. 1336) ; 1H-NMR(400MHz，CDCl3) 6. 94 (1H, s’ H-3), 3. 16 (2H, t, J = 6. 4Hz, H_4)，3. 50 (2H, t, J = 6. 4Hz, H_5)，6. 96 (1H，s’ H-7), 5. 91 (1H, s’ H-9), 3. 19 (3H, s, N-CH3),3. 98 (3H, s，I-OCH3)，3. 88 (3H，s，2_0CH3)，3. 95 (3H，s, IO-OCH3) ； 13C-NMR (100MHz,CDCl3) 144. 0 (C-I) , 119. 4 (C-Ib) , 152. 2 (C_2) , 112. 9 (C-3) , 128. 3 (C_3a)，116. 3 (C-3b) 29. 3 (C_4)，50. 3 (C_5)，150. 3 (C_6a)，98. 3 (C_7)，136. 5 (C_7a)，186. 5 (C_8)，105. 2 (C-9)，163. 9 (C-IO)，178. 4(C_11)，118. I (C-Ila)，126. 9 (C-llb) ,60. 7 (I-OCH3)，56. 5 (2-0CH3)，56. 4 (II-OCH3), 40. 2 (N-CH3)。異紫堇二酮(isocorydione)的晶體數(shù)據(jù)分子式=C20H19NO5，分子量=Mr = 353. 36，晶系Monoclinic，空間群P2(l)/c,晶胞參數(shù)a =7. 412(2) A, b = 17. 678(5) A，c = 13. 253(3) A，= 90°， = 107.956(13)。
= 90°，
V= 1652.0(7) A3，晶胞內(nèi)分子數(shù)Z = 4，晶體密度DX = I. 421Mg m_3，衍射光源MoKaradiaion,入射角=0. 71073 A,衍射點Cell parameters from 1898reflections,掃描角度=2. 45-21. 92°，ii = 0. 102臟-1，溫度T = 294K,晶胞體積0. 25X0. 20X0. 19mm，R (reflections) = 0. 0468 (1966), wR2 (reflections) = 0.0958(2891)。
權(quán)利要求
1.一種具有抗癌活性異紫堇二酮的制備方法，其特征在于該方法有原料采集加工、提取、分離純化三個步驟 A、原料采集加工采集禿瘡花屬植物，干燥，粉碎； B、浸膏提取步驟采用70-95V%乙醇、5V%的質(zhì)子酸水對原料冷浸或回流熱提得總浸膏； C、分離純化步驟總浸膏用硅膠拌樣，以石油醚/丙酮/甲醇體系為流動相按極性從小到大，梯度洗脫，進行普通硅膠柱色譜分離；以石油醚丙酮三乙胺的體積比為10 4 I作為展開體系，薄層色譜檢測顯紫紅色斑點，合并含異紫堇二酮相同組分，得含異紫堇二酮部位；異紫堇二酮部位，以石油醚、丙酮以及乙酸體系為流動相按極性從小到大，梯度洗脫，進行普通硅膠柱色譜分離，收集石油醚丙酮乙酸體系極性范圍的體積比為16 : 2 : I到8 : 2 : I的部分溶液，溥層色譜檢測，合并相同部分，重結(jié)晶得異紫堇二 酮。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于禿瘡花屬植物為禿瘡花、寬果禿瘡花或苣葉禿瘡花。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種具有抗癌活性化合物異紫堇二酮的提取分離制備方法，尤其指從禿瘡花屬植物中提取分離，屬于天然產(chǎn)物分離提取制備技術(shù)領(lǐng)域，由原料采集加工、提取、分離純化三個步驟完成。體外藥理研究證明異紫堇二酮具有較好的抗癌活性，可以作為藥物原料或藥物開發(fā)。本發(fā)明擴大了異紫堇二酮分離提取制備的原料來源，有利于該化合物的藥物開發(fā)，同時也有利于罌粟科植物天然產(chǎn)物化學的開發(fā)與應用研究。
文檔編號A61P35/00GK102731398SQ201110085389
公開日2012年10月17日 申請日期2011年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月2日
發(fā)明者柳軍璽, 邸多隆, 魏小寧 申請人:中國科學院蘭州化學物理研究所