專利名稱：具有抗腫瘤作用的短葶山麥冬提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種具有抗腫瘤作用的短葶山麥冬提取物及其制備方法，尤其是含有 甾體皂苷類和倍半萜葡萄糖苷類成分的短葶山麥冬提取物，以及該提取物的制備提純方 法。
背景技術(shù)：
短葶山麥冬(Liriope musacarli (Decne. )Bailey)屬于百合科山麥冬屬植物，其 塊根歷來一直作為麥冬藥材的替代品使用；《中國藥典(一部)》收載短葶山麥冬作為山麥 冬的藥材來源之一。短葶山麥冬皂苷C是從短葶山麥冬中提取的一種單體化合物，已有研究表明，其 具有良好的抗S180實體瘤和艾氏腹水癌的活性。短葶山麥冬皂苷C的提取方法是將短葶山麥冬藥材粗粉先用甲醇提取，再依次經(jīng) 乙醚、正丁醇萃取，正丁醇萃取物經(jīng)kphadex LH-20和硅膠柱層析后得到的單體化合物。技術(shù)人員發(fā)現(xiàn)，短葶山麥冬皂苷C的出率低，制備成本高，應(yīng)用到醫(yī)藥領(lǐng)域的市場 直接導(dǎo)致患者的治療成本大幅增加，因此降低應(yīng)用成本是藥品進(jìn)入市場流通的必然。但是 最可行的降低成本的有效路徑就是不提純單體，將其改為提取有效部位是業(yè)內(nèi)公知的并且 通用的技術(shù)手段。有效部位，主要指的是提取物相對于單體出率高，制備成本低，適合臨床 使用，并能有效降低治療成本，患者順應(yīng)性也很好。但是醫(yī)藥用途的有效部位并非簡單的有 效成分等的混合，而是必須針對特定的目的(治療效果)經(jīng)過特殊工藝手段去蕪存菁的、精 制后的混合物，這是需要大量的工作以及嫻熟的技藝才能勝任的。目前，醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)并研究的腫瘤是人體中正在發(fā)育的或成熟的正常細(xì)胞，在某些不 良因素的長期作用下，某部的細(xì)胞群，出現(xiàn)的過度增生或異常分化而生成的新生物，在局部 形成腫塊。但它與正常的組織和細(xì)胞不同，不按正常細(xì)胞的新陳代謝規(guī)律生長，而變得不受 約束和控制，導(dǎo)致了細(xì)胞呈現(xiàn)異常的形態(tài)、功能和代謝，以致可以破壞正常的組織器官的結(jié) 構(gòu)并影響其功能。惡性腫瘤細(xì)胞還能向周圍浸潤蔓延，甚至擴(kuò)散轉(zhuǎn)移到其他器官組織，繼續(xù) 成倍增生，造成對人體或生命極大的威脅。人體在生長的過程中雖常有腫塊形成，但腫塊不 一定都是腫瘤。因此，必須鑒別腫塊的性質(zhì)，才能做到正確診斷、正確治療。腫瘤在臨床上 有實體瘤和非實體瘤之分，實體瘤及有形瘤可通過臨床檢查如X線攝片、CT掃描、B超或觸 診捫及到的有形腫塊稱實體瘤。而X線、CT掃描、B超及觸診無法看到或捫及到的腫瘤如血 液病中的白血病就屬于非實體瘤。癌癥的分類血癌(白血病)、骨癌、淋巴癌(包括淋巴細(xì)胞瘤)、腸癌、肝癌、胃癌、 盆腔癌(包括子宮癌，宮頸癌)、肺癌(包括縱隔癌)、腦癌、神經(jīng)癌、乳腺癌、食道癌、腎癌。由此可見，簡單地用S180的實驗結(jié)果不能在臨床上定位于人體的任何準(zhǔn)確位置 的癌癥/腫瘤，況且單體對某種腫瘤的瘤株有效并不能證明有效部位同樣有效，本發(fā)明將 用詳實的數(shù)據(jù)證明這一論點，而醫(yī)學(xué)治療癌癥/腫瘤是嚴(yán)格按照腫瘤在人體的生長部位或 器官進(jìn)行醫(yī)治的，因此，現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)于短葶山麥冬皂苷C以及關(guān)于短葶山麥冬的文獻(xiàn)對癌癥治療的臨床研究僅僅起到引路的作用，而很難認(rèn)為其作為臨床依據(jù)或者起到教導(dǎo)的作用。因此，本領(lǐng)域急需發(fā)明一種可以分離出包括短葶山麥冬皂苷C單體在內(nèi)(但不一 定是主要的有效成分)的提取物及其制備方法，目的是可以得到具有確實成分的、治療效 果明確的短葶山麥冬提取物，使得到的提取物可以直接用于醫(yī)藥領(lǐng)域的治療目的明確的各 種制劑，明確規(guī)范該植物提取物的醫(yī)學(xué)用途，降低含有短葶山麥冬提取物的產(chǎn)品的副作用 以及降低其醫(yī)藥用途風(fēng)險。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明經(jīng)過大量的實驗，研制出一種具有抗腫瘤作用的短葶山麥冬提取物及其制 備方法，該方法簡單、高效，分離度高，使得提取物的活性更加有效、準(zhǔn)確和針對性強(qiáng)。本發(fā)明目的在于提供一種具有抗腫瘤作用的短葶山麥冬提取物，該提取物具有抗 腫瘤、抗癌方面的活性，該效果更正了現(xiàn)有技術(shù)中公認(rèn)的短葶山麥冬皂苷具有治療實體瘤 的醫(yī)學(xué)療效方面的偏差和誤區(qū)，顛覆了現(xiàn)有的部分理論，對短葶山麥冬的進(jìn)一步研究以及 短葶山麥冬提取物對腫瘤的治療具有可貴的指導(dǎo)意義。所述的具有抗腫瘤作用既包括抗腫 瘤作用也包括輔助抗腫瘤作用。本發(fā)明的目的在于提供上述短葶山麥冬提取物抗腫瘤，如肺癌、肝癌和宮頸癌等 惡性腫瘤方面的治療作用。本發(fā)明目的還在于提供一種具有抗腫瘤作用的短葶山麥冬提取物的制備方法，其 在現(xiàn)有的常規(guī)技術(shù)得到的短葶山麥冬粗提物，進(jìn)一步經(jīng)過精制，從而提純了活性成分，使其 有益的活性效果更加明確。本發(fā)明還提供了一種具有抗腫瘤作用的短葶山麥冬提取物，該提取物是按照以下 方法制得以短葶山麥冬根(塊根或須根)為原料，以乙醇提取，提取液用正丁醇萃取，得粗 提物；取粗提物加水溶解后，使其通過非極性大孔樹脂柱，先以水洗脫至洗脫液無色，再以 體積濃度51 95%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液至洗脫液無色，得所述的短葶山麥冬提取 物。以上述方法得到的短葶山麥冬提取物的重量為100%作為基準(zhǔn)進(jìn)行計算，其中，留體皂 苷類成分含量為2 30% wt，優(yōu)選5 15% wt，該留體皂苷類成分包括短葶山麥冬皂苷C。本發(fā)明的短葶山麥冬提取物中，標(biāo)識性成分為短葶山麥冬皂苷C，其為單體化 合物，中文名魯斯考皂甙元-l_0-[i3-D-吡喃葡萄糖苷(1 — 2)] [β-D-吡喃木糖基 (1 — 3)]-β -D-吡喃巖藻糖苷，簡稱Lm-3 ；該單體的色譜峰的保留時間為10 55分鐘。 經(jīng)過驗證，本發(fā)明所述的短葶山麥冬提取物中還含有短葶山麥冬皂苷A、短葶山麥冬皂苷B 等同樣屬于皂苷類的成分。經(jīng)過進(jìn)一步的驗證，驚奇的發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的短葶山麥冬提取物中還含有含量為2 20% wt，優(yōu)選為2 10%的倍半萜葡萄糖苷類成分，特別是除了 Liriopeoside A(山麥 冬糖苷A)外的4個倍半萜葡萄糖苷類成分是首次在短葶山麥冬中發(fā)現(xiàn)，他們分別是: Liriopeoside B (山麥冬糖苷 B)、liriopeoside C(山麥冬糖苷 C)、Liriopeoside D (山麥 冬糖苷D)、liriopeoside E(山麥冬糖苷E)，色譜峰的保留時間在5 30分鐘。本發(fā)明提取物中的倍半萜葡萄糖苷類成分多為新化合物，本領(lǐng)域內(nèi)尚沒有統(tǒng)一、 公認(rèn)的中文名稱，因此參照結(jié)構(gòu)相似且國際公認(rèn)的Liriopeoside A(在本文中將其中文名稱暫譯為山麥冬糖苷A或山麥冬屬糖苷A成分名稱來命名其他幾個倍半萜葡萄糖苷 類新成分，其名稱分別為iiriopeoside B(暫譯為山麥冬糖苷B或山麥冬屬糖苷B)、 Iiriopeoside C(山麥冬糖苷C或山麥冬屬糖苷C)、Liriopeoside D (山麥冬糖苷D或山 麥冬屬糖苷D)、liriopeoside E (山麥冬糖苷E或山麥冬屬糖苷E)。
短葶山麥冬皂苷 A β-sitosterol β-D-glucopyranoside ( β -谷甾醇 β-D-批 喃葡萄糖苷，簡稱 Lm-1)、短葶山麥冬皂苷 B :ruscogenin 1-0- β -D-glucopyranosyl (1 — 2) - β -D-fucopyranoside (羅斯考皂甙元O- β -D-吡喃葡萄糖苷(1 — 2) - β -D-吡喃巖藻 糖苷，簡稱 Lm-2)和短葶山麥冬皂苷 C :ruscogenin 1-0-[ β -D-glucopyranosyl (1 — 2)] [β -D-xylopyranosyl (1 — 3) ] - β -D-fucopyranoside (魯斯考皂甙元 1_0_ [ β -D-吡喃葡 萄糖苷(1 — 2) ] [ β -D-吡喃木糖基(1 — 3) ] - β -D-吡喃巖藻糖苷，簡稱Lm-3)結(jié)構(gòu)和分析 具體參見 Yu B Y，Hirai Y，Shoji J，et al. Comparative studies on the constituents of ophiopogonis tuber and itscongeners. VI. Studies on the constituents of the subterranean part of Liriope spicata var. prolifera andL. muscari. (1).Chem Pharm Bull. 1990 ；38 (7) :1931_1935。上述短葶山麥冬皂苷C的結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種具有抗腫瘤作用的短葶山麥冬提取物，該提取物以下述方法制得以短葶山麥 冬根為原料，用乙醇提取，得到的提取液用正丁醇萃取，得粗提物；該粗提物加水溶解后，使 其通過非極性大孔樹脂柱，先以水洗脫至洗脫液無色，再以體積濃度51 95%的乙醇溶液 洗脫至洗脫液無色，收集乙醇洗脫液，得所述的短葶山麥冬提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的短葶山麥冬提取物，其中，所述的短葶山麥冬提取物中含有2 30% wt的留體皂苷類成分和2 20% wt的倍半萜葡萄糖苷類成分，以該短葶山麥冬提取 物的重量100% wt為基準(zhǔn)計。
3.如權(quán)利要求2所述的短葶山麥冬提取物，其中，所述的留體皂苷類成分包括短葶山 麥冬皂苷C，該短葶山麥冬皂苷C的結(jié)構(gòu)式為
4.如權(quán)利要求2所述的短葶山麥冬提取物，該倍半萜葡萄糖苷類成分中含有以下成分，其結(jié)構(gòu)式為
5.如權(quán)利要求1所述的短葶山麥冬提取物，其中，所述的粗提物通過下述方法制得以 短葶山麥冬根為原料，以短葶山麥冬根重量至少4倍量的體積濃度51 95%的乙醇提取， 得到的提取液回收溶劑至無醇味，再加水分散，用正丁醇萃取，得粗提物；取該粗提物加水 溶解，過濾，濾液通過非極性大孔樹脂柱，先以水洗脫至洗脫液無色，再以乙醇的水溶液洗 脫，收集洗脫液至洗脫液無色，得所述短葶山麥冬提取物。
6.權(quán)利要求1所述的短葶山麥冬提取物的制備方法，包括短葶山麥冬根為原料，以乙 醇提取，得到的提取液用正丁醇萃取，得粗提物；該粗提物加水溶解后，使其通過非極性大 孔樹脂柱，以水洗脫至洗脫液無色，再以體積濃度51 95%的乙醇溶液洗脫，收集洗脫液至洗脫液無色，得所述短葶山麥冬提取物。
7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其中，在所述的以乙醇提取的步驟中，乙醇的用量為 所述短葶山麥冬根重量的4 20倍。
8.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其中，所述的收集洗脫液至洗脫液無色后，得到的短 葶山麥冬提取物中短葶山麥冬皂苷C的含量為2 30 %，倍半萜葡萄糖苷含量為2 20 %， 以所述的短葶山麥冬提取物的重量為100%計。
9.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其中，所述的粗提物通過下述方法制得以短葶山麥 冬根為原料，以相對于短葶山麥冬根的原料重量的至少4倍量的體積濃度51 95%的乙醇 提取，得到的提取液回收溶劑至無醇味，再用水分散，用正丁醇萃取，取正丁醇層萃取液，干 燥，得所述的粗提物。
10.如權(quán)利要求9所述的制備方法，其中，在所述提取液回收溶劑至無醇味，再用水分 散，用正丁醇萃取的步驟中，水的用量為短葶山麥冬根重量的0. 1 10倍，正丁醇的用量為 水的重量的0. 5 5倍。
11.權(quán)利要求1所述的短葶山麥冬提取物在制備治療腫瘤的藥物中的用途。
12.權(quán)利要求1所述的短葶山麥冬提取物在制備腫瘤治療輔助用藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種具有抗腫瘤作用的短葶山麥冬提取物，該提取物用以下方法制得以短葶山麥冬根為原料以乙醇提取，提取液用正丁醇萃取得粗提物；取粗提物加水溶解，使該粗提物溶液通過非極性大孔樹脂柱，先以水洗脫至洗脫液無色，再以乙醇的水溶液洗脫，收集洗脫液至洗脫液無色，得所述的短葶山麥冬提取物；本發(fā)明還提供了上述短葶山麥冬提取物的制備方法。
文檔編號A61K31/7048GK102085293SQ20111000785
公開日2011年6月8日 申請日期2011年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月14日
發(fā)明者丁銳, 杜樹山, 林瑞超, 王鋼力, 聶黎行, 謝文利 申請人:中國食品藥品檢定研究院