專利名稱：用苯達(dá)莫司汀和抗cd20抗體的組合治療癌癥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及苯達(dá)莫司汀(bendamustine)與抗⑶20抗體的組合在治療癌癥中的用途。
背景技術(shù)：
惰性非霍奇金淋巴瘤Qndolent Non-Hodgkin' s Lymphomas, IL)是緩慢生長形式的淋巴瘤。其涵蓋工作方案(Working Formulation)中被稱為低度和某些中度惡性類別的NHL。如果患者未能在非常早期和低度疾病時被治愈，治療目的在于緩解。FL在美國和歐洲是第二常見的淋巴瘤，占所有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的11%到35% [WHO 2001]。濾泡性淋巴瘤(FL)屬于惰性淋巴瘤組，是成熟(周邊)B細(xì)胞腫瘤的亞組[WHO 2001]。它被定義為生發(fā)中心B細(xì)胞(中心細(xì)胞和中心母細(xì)胞)淋巴瘤，其具有至少部分的濾泡模式。雖然用基于利妥昔單抗(rituximab)的療法可以很好地治療惰性淋巴瘤，但那些對利妥昔單抗變得耐受的淋巴瘤則選擇有限。苯達(dá)莫司汀是一種合成氮芥化合物，表現(xiàn)出對耐利妥昔單抗的惰性淋巴瘤的治療活性并且在耐其他烷基化劑(alkylators)的受試對象中顯示出活性。但是，在耐受這些早期療法的受試對象中尤其需要替代的療法。近來有許多關(guān)于新一代抗⑶20抗體的報道。其中一種這類新抗體是ofatumumab。 Ofatumumab是新一代人單克隆抗體，其靶向B細(xì)胞表面CD20分子的獨(dú)特膜近側(cè)小的環(huán)形表位(特異結(jié)合位點(diǎn))。這一靶向?qū)е鲁錾卣T導(dǎo)出腫瘤細(xì)胞經(jīng)CDC(補(bǔ)體依賴型細(xì)胞毒)活性被裂解，特別是在具有低CD20密度的細(xì)胞中，正如CLL的情況中，與使用利妥昔單抗觀察到的腫瘤細(xì)胞裂解能力相比，具有類似的ADCC(抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒) 活性。在W02004/035607中被描述為2F2抗體的Ofatumumab正在用于治療非霍奇金淋巴瘤(NHL)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床開發(fā)階段(RA)。還可參見 Teeling et al. , Blood, 104, pp 1793 (2004)；禾口 Teeling et al. , J. Immunology, 177, pp 362-371(2007)。發(fā)明概述在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療任何表達(dá)CD20的癌癥(腫瘤)的方法，所述癌癥包括人患者中的前體B和T細(xì)胞腫瘤、成熟B細(xì)胞腫瘤、霍奇金淋巴瘤以及免疫缺陷相關(guān)的淋巴增生性失調(diào)，方法包括將抗⑶20抗體與苯達(dá)莫司汀組合給予患者的步驟。在一個實(shí)施方案中，給藥是同時進(jìn)行的。在另一個實(shí)施方案中，給藥是順序進(jìn)行的，其中首先給予苯達(dá)莫司汀。再一個實(shí)施方案中首先給予抗CD20抗體。還有一個實(shí)施方案中，給予抗CD20 抗體和苯達(dá)莫司汀是交錯進(jìn)行的。在一個實(shí)施方案中，發(fā)明涉及治療人患者中耐利妥昔單抗的惰性非霍奇金淋巴瘤 (包括FL (濾泡性淋巴瘤))的方法，方法包括將抗CD20抗體與苯達(dá)莫司汀組合給予患者的步驟。在一個實(shí)施方案中，給藥是同時進(jìn)行的。在另一個實(shí)施方案中，給藥是順序進(jìn)行的， 其中首先給予苯達(dá)莫司汀。再一個實(shí)施方案中首先給予抗CD20抗體。還有一個實(shí)施方案中，給予抗CD20抗體和苯達(dá)莫司汀是交錯進(jìn)行的。在一個實(shí)施方案中，發(fā)明涉及包含苯達(dá)莫司汀和抗⑶20抗體的藥物組合物，其中組合適合單獨(dú)、順序和/或同時給藥。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體是分離的人抗⑶20抗體，該抗體結(jié)合⑶20上的一個表位，它不包含或者需要位點(diǎn)172上的氨基酸殘基脯氨酸，但是包含或者需要位點(diǎn)163 上的氨基酸殘基天冬氨酸和位點(diǎn)166的天冬氨酸?？梢栽赪02004/035607中找到這類抗體的實(shí)例。在另一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體是ofatumuamb。在一個實(shí)施方案中，發(fā)明涉及抗CD20抗體，特別是ofatumumab在制備治療癌癥 (特別是耐利妥昔單抗的惰性非霍奇金淋巴瘤)的藥物中的用途，其中所述藥物是用于在和苯達(dá)莫司汀的聯(lián)合治療中給予。在一個實(shí)施方案中，發(fā)明涉及用于與苯達(dá)莫司汀組合治療癌癥(特別是耐利妥昔單抗的惰性非霍奇金淋巴瘤)的抗⑶20抗體(特別是ofatumuamb)。附圖簡述

圖1描述了 ofatumumab/苯達(dá)莫司汀給藥的一個非限制性實(shí)例。圖2描述了⑶20在JVM-3細(xì)胞上的中等水平表達(dá)譜。第一個峰Mab對照；第二個峰BD Bioscience抗CD20抗體克隆2H7 ；第三個峰瑞圖宣(rituxan)；第四個峰 ofatumumab。圖3描述了亞適量的ofatumumab/苯達(dá)莫司汀組合的優(yōu)勢(ofatumumab :2mg/kg& 苯達(dá)莫司汀50mg/kg ；η = 6/組)圖4描述了 JVM3 (CLL)模型中的ofatumumab和苯達(dá)莫司汀(TREANDA)組合(皮下，24天；η = 6/組)發(fā)明詳述濾泡性淋巴瘤治療策略致力于建立最大程度的疾病控制和延長壽命。已經(jīng)超越早期階段和組織學(xué)低度惡性的晚期疾病仍是不可治愈的。在實(shí)現(xiàn)有效治療而沒有毒性之間存在著平衡。因此，仍需要副作用有限的有效療法用于治療多數(shù)FL受試對象，特別是那些對烷化劑、嘌呤類似物和利妥昔單抗變得耐受的受試對象。Ofatumumab在利妥昔單抗抗性受試對象中顯示了活性[Hagenbeek，et al. Blood 2008 ；111 5486-5495]，而苯達(dá)莫司汀在烷化劑和嘌呤類似物抗性受試對象中表現(xiàn)出活性[Sch0ffskiet al. ,Ann Oncol. 2000 ； 11 :729-734 ；Solal-Celigny et al., Blood. 2004；104 :1258-1265 ；Heider et al., Anticancer Drugs. 2001 ；12 :725-729 ；Bremer K.，J Cancer Res Clin Oncol 2002 ；128 603-609 ；Friedberg et al.，J Clin Oncol. 2008 ；26 :204-210]。ofatumumab 和苯達(dá)莫司汀的聯(lián)用給對其他治療模式已經(jīng)耐受的受試對象提供了效力與低毒性的結(jié)合。本發(fā)明涉及治療人患者中利妥昔單抗耐受的惰性非霍奇金淋巴瘤，包括FL(濾泡性淋巴瘤)的方法，所述方法包括將抗CD20抗體與苯達(dá)莫司汀組合給予患者的步驟。在一個實(shí)施方案中，給藥是同時進(jìn)行的。在另一個實(shí)施方案中，給藥是順序進(jìn)行的，其中首先給予苯達(dá)莫司汀。再一個實(shí)施方案中首先給予抗CD20抗體。還有一個實(shí)施方案中，給予抗⑶20抗體和苯達(dá)莫司汀是交錯進(jìn)行的。本發(fā)明還涉及治療人患者中表達(dá)CD20的腫瘤類型的方法，所述方法包括將抗 ⑶20抗體與苯達(dá)莫司汀組合給予患者的步驟。在一個實(shí)施方案中，給藥是同時進(jìn)行的。在另一個實(shí)施方案中，給藥是順序進(jìn)行的，其中首先給予苯達(dá)莫司汀。再一個實(shí)施方案中首先給予抗CD20抗體。還有一個實(shí)施方案中，給予抗CD20抗體和苯達(dá)莫司汀是交錯進(jìn)行的。表達(dá)CD20的腫瘤類型的實(shí)例包括選自前體B或T細(xì)胞腫瘤、成熟B細(xì)胞腫瘤、霍奇金淋巴瘤或者免疫缺陷相關(guān)的淋巴增生性失調(diào)的腫瘤。實(shí)施例1中示范了苯達(dá)莫司汀和ofatumuamb的非限制性用藥方式。本發(fā)明還涉及癌癥的治療方法，所述方法包括將ofatumuamb和苯達(dá)莫司汀給予人患者的步驟，所述癌癥選自NHLOion-Hodgkin’ s lymphoma，非霍奇金淋巴瘤)、B細(xì)胞淋巴母細(xì)胞白血病/淋巴瘤(B cell lymphoblastic leukemi a/1 ymphoma)、成熟B 細(xì)胞月中瘤(mature B cell neoplasms)、B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病(B cell chronic lymhocytic leukemia, CLL)、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(small lymphocytic lymphoma, SLL)、B細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病(B cell prolymphocytic leukemia)、淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤(lymphoplasmacytic lymphoma)、套細(xì)胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma, MCL)、濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma, FL)(包括低度、中度和高度惡性FL)、皮膚濾泡中心淋
(cutaneous follicle center lymphoma)、邊緣區(qū) B 細(xì)Ifii林EL瘤(marginal zone B cell lymphoma :MALT型、節(jié)結(jié)型和脾型)、毛細(xì)胞白血病(hairy cell leukemia)、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma)、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt ‘ s lymphoma)、漿細(xì)胞瘤(plasmacytoma)、漿細(xì)胞骨髓瘤(plasma cell myeloma)、移植后淋巴 ±曾殖個生疾病(post-transplant lymphoproliferative disorder)、沃登斯通巨球蛋白血癥 (Waldenstrom' s macroglobulinemia)、間變性大細(xì)胞淋巴瘤(anaplastic large-cell lymphoma, ALCL)、T-細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤和黑素瘤。在一個實(shí)施方案中，給藥是同時進(jìn)行的。在另一個實(shí)施方案中，給藥是順序進(jìn)行的，其中首先給予苯達(dá)莫司汀。再一個實(shí)施方案中首先給予抗CD20抗體。還有一個實(shí)施方案中，給予抗CD20抗體和苯達(dá)莫司汀是交錯進(jìn)行的。利妥昔單抗(R)耐受性惰性淋巴瘤(Rituximab refractory indolent lymphoma) 定義如下。所述淋巴瘤對作為單藥治療給予的或者與任何化療組合給予的利妥昔單抗耐受，或者對利妥昔單抗加化療之后作為維持治療給予的利妥昔單抗耐受。淋巴瘤是耐受的， 如果1.對作為單藥療法或者與任何化療組合的利妥昔單抗沒有至少部分反應(yīng)(PR)； 或者2.使用利妥昔單抗(作為單藥治療給予的或者與任何化療組合給予的，或者在 R-化療之后的利妥昔單抗維持治療期間)的同時疾病仍在發(fā)展；或者3.在最后一劑利妥昔單抗(作為單藥治療給予的或者與任何化療組合給予的，或者在R-化療之后利妥昔單抗維持治療方案)后6個月之內(nèi)，疾病又有進(jìn)展。在發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗CD20抗體是單克隆抗體。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體具有Fc介導(dǎo)的效應(yīng)子功能。在一個實(shí)施方案中，抗CD20抗體具有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒(ADCC)效應(yīng)子功能。在一個實(shí)施方案中，抗CD20抗體具有補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒(CDC)效應(yīng)子功能。在發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗CD20抗體是嵌合的、人源化的或者人單克隆抗體。在一個實(shí)施方案中，抗CD20的單克隆抗體(抗CD20抗體)是選自下述的全長抗體全長IgGl抗體、全長IgG2抗體、全長IgG3抗體、全長IgG4抗體、全長IgM抗體、全長 IgAl抗體、全長IgA2抗體、全長分泌型IgA抗體、全長IgD抗體和全長IgE抗體，其中所述抗體在真核細(xì)胞中被糖基化。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體是全長抗體，比如全長IgGl抗體。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體是抗體片段，比如scFv或UniBodyTM (W0 2007/059782中公開的單價抗體)。在發(fā)明的一個實(shí)施方案中，針對⑶20的抗體(抗⑶20 抗體)是結(jié)合結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白融合蛋白，其包含⑴結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽，處于SEQ ID NO 1 的重鏈可變區(qū)形式或者SEQ ID NO :2對輕鏈可變區(qū)形式，該多肽與免疫球蛋白鉸鏈區(qū)多肽融合，(ii)與鉸鏈區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH2恒定區(qū)，以及(iii)與CH2恒定區(qū)融合的免疫球蛋白重鏈CH3恒定區(qū)。在一個實(shí)施方案中，抗CD20抗體與突變體P172S CD20(位點(diǎn)172的脯氨酸被突變?yōu)榻z氨酸)結(jié)合的親和力至少與和人CD20結(jié)合的親和力相同。在發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體與⑶20上的表位結(jié)合，所述表位(i)不包含或者不需要位點(diǎn)172的氨基酸殘基脯氨酸；(ii)不包含或者不需要位點(diǎn)170的丙氨酸或者位點(diǎn)172的脯氨酸；(iii)不包含或者不需要位點(diǎn)163的氨基酸殘基天冬氨酸和位點(diǎn)166的天冬氨酸；(iv)不包含或者不需要位點(diǎn)172的氨基酸殘基脯氨酸，但是包含或者需要位點(diǎn) 163的氨基酸殘基天冬氨酸和位點(diǎn)166的天冬氨酸；或
(ν)不包含或者不需要位點(diǎn)170的氨基酸殘基丙氨酸或位點(diǎn)172的脯氨酸，但是包含或者需要位點(diǎn)163的天冬氨酸和位點(diǎn)166的天冬氨酸這些氨基酸殘基。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體結(jié)合位于人⑶20的第一個小胞外環(huán)中的表位。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體結(jié)合⑶20上的不連續(xù)表位。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體結(jié)合⑶20上的不連續(xù)表位，其中所述表位包含第一個小胞外環(huán)的一部分和第二個胞外環(huán)的一部分。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體結(jié)合⑶20上的不連續(xù)表位，其中所述表位含有第一個小胞外環(huán)的AGIYAP殘基和第二個胞外環(huán)的MESLNFIRAHTPYI殘基。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體具有選自下述的一或多個特征(i)能夠在有補(bǔ)體的情況下，誘導(dǎo)表達(dá)CD20的細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒(CDC)；(ii)能夠在有補(bǔ)體的情況下，誘導(dǎo)表達(dá)⑶20和高水平⑶55和/或⑶59的細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒(CDC)；(iii)能夠誘導(dǎo)表達(dá)⑶20的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡；(iv)能夠在有效應(yīng)細(xì)胞的情況下，誘導(dǎo)表達(dá)CD20的細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞毒 (ADCC)；(ν)能夠誘導(dǎo)表達(dá)⑶20的細(xì)胞的同型粘附；
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(vi)能夠在結(jié)合CD20后遷移到脂膜筏(lipid rafts)；(vii)能夠消除表達(dá)⑶20的細(xì)胞；(viii)能夠消除表達(dá)低水平⑶20的細(xì)胞(低⑶20細(xì)胞)；以及(ix)能夠在人組織中有效地原位消除B細(xì)胞。在發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗CD20抗體包含選自SEQ ID NOs :5、9或11的VH CDR3序列。在一個實(shí)施方案中，抗CD20抗體包含SEQ ID NO 3的VH CDRl、SEQ ID NO 4的 VH CDR2、SEQ ID NO 5 的 VH CDR3、SEQ ID NO 6 的 VL CDRl、SEQ ID NO 7 的 VL CDR2 和 SEQ ID NO 8 的 VL CDR3 序列。在發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體包含SEQ ID N0:10的VH⑶Rl-⑶R3跨越序列。在發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗CD20抗體含有人重鏈和人輕鏈可變區(qū)，所述可變區(qū)包含分別如SEQ ID NO :1和SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列；或者包含分別與SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列有至少95%同一性，更優(yōu)選至少98%，或者至少99%
同一性的氨基酸序列。在發(fā)明的一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體選自WO 2004/035607中公開的抗 CD20 抗體之一，比如 ofatumumab (2F2)、11B8 或 7D8 ；WO 2005/103081 中公開的抗體之一，比如 2C6;W0 2004/103404 中公開的抗體之一，AME-133(由 Applied Molecular Evolution開發(fā)的人源化和優(yōu)化抗CD20單克隆抗體)；US2003/0118592中公開的抗體之一，TRU-015(CytoxB20G,由 Trubion Pharmaceuticals Inc 開發(fā)的來源于抗 CD20 抗體上的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域的小分子immunopharmaceutical融合蛋白)；WO 2003/68821中公開的抗體之一 IMMU-106 (人源化抗⑶20單克隆抗體)；WO 2004/56312中公開的抗體之一，ocrelizumab(2H7. vl6, PR0—70769，R-1594)、 Bexxar (tositumomab)禾口 Rituxan / MabThera (利妥昔單抗)。名詞“CD20”和“CD20抗原”在文中可互換使用，包括由細(xì)胞天然表達(dá)的或者轉(zhuǎn)染了 CD20基因的細(xì)胞上表達(dá)的人CD20的任何變體、同種型和物種同源物。本領(lǐng)域認(rèn)可的⑶20的同義詞包括B-淋巴細(xì)胞表面抗原Bi、Leu-16和 Bp!35。人 CD20 的 UniProtKB/Swiss-Prot 登記號為 P11836。用于本文，名詞“免疫球蛋白”是指一類結(jié)構(gòu)相關(guān)的糖蛋白，其由兩對多肽鏈構(gòu)成， 即一對低分子量輕(L)鏈和一對重(H)鏈，這四條鏈通過二硫鍵相連。免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)已研究清楚。參見例如 Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W. , ed. ,2nd ed. Raven Press, N. Y. (1989))。簡單來說，每個重鏈通常由重鏈可變區(qū)(文中縮寫為VH)和重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)CH—般由三個結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，CH1、CH2和CH3。每個輕鏈通常由輕鏈可變區(qū)(文中縮寫為VL)和輕鏈恒定區(qū)構(gòu)成。輕鏈恒定區(qū)一般由一個結(jié)構(gòu)域CL構(gòu)成。VH和VL區(qū)可以進(jìn)一步分成高度可變的區(qū)域(或者結(jié)構(gòu)明確的環(huán)的序列和/或形式高度可變的區(qū)域)，又稱為補(bǔ)體決定區(qū)(CDRs)，散布于被稱為框架區(qū)(FR)的更保守區(qū)域中。每個VH和VL通常由三個⑶Rs和四個FRs構(gòu)成，從氨基端到羧基端以如下順序排列FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4(還可參見 Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196， 901-917(1987))。通常，這個區(qū)域的氨基酸殘基的編號按照Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, NationalInstitutes of Health, Bethesda, MD. (1991)中描述的方法進(jìn)行(文中諸如 “Kabat 中或者根據(jù)Kabat的可變結(jié)構(gòu)域殘基編號”的短語是指用于重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的該編號系統(tǒng))。采用這種編號系統(tǒng)，肽的實(shí)際線性氨基酸序列可能含有減少的或者增加了的氨基酸，對應(yīng)著縮短了的或者含有插入的可變結(jié)構(gòu)域FR或CDR。例如，重鏈可變結(jié)構(gòu)域可能包含在VH⑶R2殘基52后面的單個氨基酸插入(例如，根據(jù)Kabat，殘基52a)，和重鏈 FR殘基82后面的插入殘基(例如，根據(jù)Kabat，殘基82a、82b和82c等)。特定抗體的殘基 Kabat編號可以通過將抗體序列的同源區(qū)域與“標(biāo)準(zhǔn)”的Kabat編號序列進(jìn)行比對來確定。用于本文，名詞“抗體”是指這樣的免疫球蛋白分子，免疫球蛋白分子片段或者它們中之一的衍生物，其具有在典型的生理?xiàng)l件下與抗原特異結(jié)合相當(dāng)一段時間的能力，比如結(jié)合至少大約30分鐘、至少大約45分鐘、至少大約一小時、至少大約兩小時、至少大約四小時、至少大約8小時、至少大約12小時、大約M小時或更長、大約3、4、5、6、7或更多天等， 或者其他有關(guān)的功能限定的時期(比如足夠誘發(fā)、促進(jìn)、加強(qiáng)和/或調(diào)整與抗體結(jié)合抗原關(guān)聯(lián)的生理反應(yīng)的時間，和/或足夠抗體召集Fc介導(dǎo)的效應(yīng)子活性的時間)。免疫球蛋白分子重鏈和輕鏈可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)可能介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞(比如效應(yīng)細(xì)胞)和補(bǔ)體系統(tǒng)的成分(比如補(bǔ)體活化經(jīng)典途徑中的第一個成分Clq)?？笴D20抗體可以是單、雙或多特異性的。的確，本發(fā)明提供的雙特異性抗體、二體等可以在部分⑶20之外，結(jié)合任何合適的靶分子。正如上文指出的，除非另有說明或者上下文清楚地與之抵觸，用于本文的名詞“抗體”包括通過任何已知技術(shù)提供的保留了與抗原特異結(jié)合能力的抗體片段，所述技術(shù)是比如酶解、肽合成和重組技術(shù)。已證實(shí)抗體的抗原結(jié)合功能可能由全長(完整)抗體的片段來實(shí)現(xiàn)。涵蓋在名詞“抗體”中的抗原結(jié)合片段的例子包括，但不限于(i)Fab片段，由VL、 VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的單價片段；(ii)F(ab)2和F(ab' ) 2片段、包含由鉸鏈區(qū)二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；(iii)基本由VH和CHl結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的Fd片段；(iv) 基本由抗體單個臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的Fv片段；(v) dAb片段(Ward et al.，Nature ；341巧44-546(1989))，其基本由VH結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，又稱為結(jié)構(gòu)域抗體(Holt et al. (November 2003) Trends Biotechnol. 21(11) :484-90) ； (vi) camelid 抗體或納米抗體(Revets et al. (January 2005)Expert Opin Biol Ther. 5(1) :111-24) ； (vii)分離的互補(bǔ)決定區(qū) (CDR)，比如 VH CDR3，(viii)UniBody , WO 2007/059782 中公開的單價抗體；(ix)單鏈抗體或單鏈 Fv(scFv)，參見例如 Bird et al.，Science 242，423-似6 (1988)和 Huston et al.，PNAS USA 85,5879-5883(1988)) ； (χ) 二體(scFv 二聚體)，可以是單特異性或雙特異性的(關(guān)于二體的描述參見例如PNAS USA 90(14) ,6444-6448(1993)、EP 404097或WO 93/11161)、三體或四體。雖然這些片段通常包含在抗體的定義中，它們?nèi)坎⑶颐總€單獨(dú)地是本發(fā)明的獨(dú)特特性，表現(xiàn)出不同的生物屬性和用途。這些和其他對于本發(fā)明有用的抗體片段在文中有進(jìn)一步討論。應(yīng)當(dāng)明白，名詞抗體通常包括單克隆抗體和多克隆抗體?？贵w可以是人的、人源化的、嵌合的、小鼠的等。所生產(chǎn)的抗體可以具備任何同種型。用于本文，名詞“人抗體”意圖包括含有來自人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可以包括不是人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如，通過在體外或體內(nèi)體細(xì)胞突變，隨機(jī)或定點(diǎn)突變引入的突變)。但是，用于本文的名詞 “人抗體”不包括這樣的抗體，這些抗體中來源于另一個哺乳動物物種(比如小鼠)種系的 CDR序列被移植到了人框架序列上。用于本文，人抗體如果是利用人免疫球蛋白序列從某系統(tǒng)中獲得的，例如通過給攜帶人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠免疫接種或者通過篩選人免疫球蛋白文庫，并且其中選中的人抗體與種系免疫球蛋白基因編碼的氨基酸序列有至少95%、比如至少95%、例如至少96 %、比如至少97 %、例如至少98 %，或者比如至少99 %的氨基酸序列同一性，則抗體是“來源于”特定種系序列。一般來說，來源于特定人種系序列的人抗體會表現(xiàn)出不超過10 個氨基酸的不同，比如與種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基酸序列有不超過5個，例如不超過4、3、2、或1個氨基酸不同。對于VH抗體序列，VH⑶R3結(jié)構(gòu)域不包括在這種比較中。名詞“嵌合抗體”是指這樣的抗體，所述抗體含有一或多個區(qū)域來自一個抗體，還有一或多個區(qū)域來自一或多個其他抗體。名詞“嵌合抗體”包括單價、二價或多價抗體。單價嵌合抗體是由嵌合H鏈與嵌合L鏈通過二硫鍵關(guān)聯(lián)起來形成的二聚體(HL) )。二價嵌合抗體是由兩個HL 二聚體通過至少一個二硫鍵橋關(guān)聯(lián)起來的四聚體(H2U)。多價嵌合抗體的制備還可以通過例如采用組裝到具有2+結(jié)合位點(diǎn)的分子(例如來自IgM H鏈或μ 鏈)中的CH區(qū)。一般來說，嵌合抗體是指這樣的抗體，所述抗體中重鏈和/或輕鏈的一部分與來源于特定物種的或者屬于特定抗體類型或亞型的抗體中的相應(yīng)序列是相同或者同源的，而鏈的其他部分與來源于其他物種的或者屬于另一個抗體類型或亞型的抗體中的相應(yīng)序列是相同或者同源的，嵌合抗體還包括所述抗體的片段，只要它們表現(xiàn)出所需的生物活性(參見例如 US 4，816，567 和 Morrison et al. ,PNAS USA 81,6851-6855 (1984)) 嵌合抗體是通過本領(lǐng)域已知的重組過程產(chǎn)生的(參見例如Cabilly et al. , PNAS USA 81， 3273-3277(1984)、Morrison et al.，PNAS USA 81，6851-6855(1984)、Boulianne et al.， Nature 312，643-646 (1984)、EP125023、Neuberger et al. , Nature 314，268-270 (1985)、 EP171496、EP173494、WO 86/01533、EP184187、Sahagan et al. , J. Immunol. 137, 1066-1074(1986)、W0 87/02671、Liu et al. ,PNAS USA 84，3439-3443 (1987)、Sun et al.， PNAS USA 84,214-218(1987)、Better et al.，Science 240，1041-1043 (1988)禾口 Harlow et al. ,Antibodies :A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, N. Y.，(1988))。名詞“人源化抗體”是指含有最少來源于非人抗體的序列的人抗體。一般來說，人源化抗體是這樣的人免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體高變區(qū)的殘基被來自非人物種(供體抗體，比如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類)具有所需特異性、親和力和容量的高可變區(qū)殘基所替代。此外，人源化抗體可能包含受體抗體或者供體抗體中沒有的殘基。進(jìn)行這些改動是為了進(jìn)一步優(yōu)化抗體的性能。通常，人源化抗體包含至少一個，一般是兩個可變結(jié)構(gòu)域的基本全部，其中與非人免疫球蛋白對應(yīng)的全部或基本全部高變環(huán)以及全部或基本全部FR 區(qū)都是人免疫球蛋白序列。人源化抗體任選還包含人免疫球蛋白恒定區(qū)的至少一部分。更多細(xì)節(jié)參見 Jones et al. , Nature 321，522-525 (1986)、Riechmann et al. , Nature 332， 323-329 (1988)和 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2，593-596 (1992)。名詞“患者”指人患者。
用于本文，名詞“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”是指單分子組合物的抗體分子制品。單克隆抗體組合物表現(xiàn)出對特定表位的單一結(jié)合特異性和親和力。相應(yīng)地，名詞“人單克隆抗體”是指表現(xiàn)出單一結(jié)合特異性的含有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體?？梢杂砂瑥霓D(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體非人動物(比如轉(zhuǎn)基因小鼠)獲得的B細(xì)胞的雜交瘤來產(chǎn)生人單克隆抗體，所述含有包含人重鏈轉(zhuǎn)基因和輕鏈轉(zhuǎn)基因的基因組的B細(xì)胞與永生細(xì)胞融合。用于本文，名詞“重組人抗體”包括所有通過重組手段制備、表達(dá)、形成或分離的人抗體，比如(a)抗體，所述抗體分離自人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體動物(比如小鼠)或由此制備的雜交瘤(文中其他地方有進(jìn)一步描述)，(b)抗體，所述抗體分離自被轉(zhuǎn)化用于表達(dá)抗體的宿主細(xì)胞，比如分離自轉(zhuǎn)染瘤，(C)抗體，所述抗體分離自重組、組合人抗體文庫，和(d)抗體，所述抗體通過任何其他涉及將人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA 序列上的手段制備、表達(dá)、形成或分離。這些重組人抗體含有來源于人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)。但是在某些實(shí)施方案中，這些重組人抗體可能接受體外突變(或者，在使用人Ig序列的轉(zhuǎn)基因動物時，接受體內(nèi)體細(xì)胞突變)，因此重組抗體的VH和VL區(qū)氨基酸序列，雖然是來源于并且與人種系VH和VL序列有關(guān)，但可能并不天然存在于人體內(nèi)抗體種系庫。名詞“轉(zhuǎn)基因的非人動物”是指這樣的非人動物，所述動物的基因組包含一或多個人重鏈和/或輕鏈轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體(整合或者沒有整合到動物的天然基因組DNA中)并且能夠充分地表達(dá)人抗體。例如，轉(zhuǎn)基因小鼠可以含有人輕鏈轉(zhuǎn)基因和人重鏈轉(zhuǎn)基因或者人重鏈轉(zhuǎn)染色體，這樣小鼠在被免疫接種CD20抗原和/或表達(dá)CD20的細(xì)胞時會產(chǎn)生人抗 CD20抗體。人重鏈轉(zhuǎn)基因可以整合到小鼠的染色體DNA中，象轉(zhuǎn)基因小鼠的情況中，例如 HuMAb-Mouse ,比如HCo7或HCol2小鼠；或者人重鏈轉(zhuǎn)基因可以維持在染色體外，象 WO 02/43478中描述的轉(zhuǎn)染色體.KM-Mouse 的情況。這類轉(zhuǎn)基因和轉(zhuǎn)染色體小鼠(文中統(tǒng)稱為“轉(zhuǎn)基因小鼠”)能夠通過V-D-J重組和同種型轉(zhuǎn)換對給定抗原產(chǎn)生多種同種型的人單克隆抗體(比如IgG、IgA、IgM、IgD和/或IgE)。轉(zhuǎn)基因非人動物還可以用于通過引入編碼特定抗體的基因來產(chǎn)生抗特定抗原的該抗體，例如通過將所述基因與在動物乳汁中表達(dá)的基因可操縱地連接。對于氨基酸(多肽)序列而言，名詞“同一性”或“同源性”表明在有合適的插入和缺失的情況下，最佳對位排列和比較時兩個氨基酸序列之間的一致程度。兩個序列之間的同一性百分比是所述序列共用的相同位點(diǎn)數(shù)目的函數(shù)(即％同一性=相同位點(diǎn)數(shù)/位點(diǎn)總數(shù)乘以100)，并考慮到兩序列最佳比對所需要引入的空位數(shù)量、每個空位的長度。序列的比較以及確定兩個序列之間同一性百分比可以如下所述利用數(shù)學(xué)算法來實(shí)現(xiàn)。兩個多肽序列之間的同一性百分比可以利用GCG軟件包中的GAP程序，使用 NWSgapdna. CMP矩陣和40、50、60、70或80的空位權(quán)重以及1、2、3、4、5或6的長度權(quán)重來確定。兩個氨基酸序列之間的同一性百分比還可以利用已被合并到ALIGN程序版本)中的 E.Meyers 和 W. Miller (Comput. Appl. Biosci.，4 :11-17(1988))的算法，使用 PAMl 20 殘基權(quán)重表、空位長度罰分12和空位罰分4來確定。此外，兩個氨基酸序列之間的同一性百分比可以利用已合并到GCG軟件包中GAP程序里的Needleman和1Wunsch (J. Mol. Biol. 48 444-453 (1970))的算法，使用 Blossum 62 矩陣或 PAM250 矩陣，16、14、12、10、8、6 或 4 的空位權(quán)重和1、2、3、4、5或6的長度權(quán)重來確定。舉例來說，多肽序列可能與多肽參照序列(例如SEQ ID NO 1)相同，即100% 同一性；或者可能與參照序列相比，包含最多某整數(shù)個氨基酸改變，這樣％同一性則低于 100%，比如至少50、60、70、75、80、85、90、95、98或99%同一性。這類改變選自至少一個氨基酸缺失、取代(包括保守和非保守性取代)或者插入，其中所述改變可以發(fā)生在參照多肽序列的氨基或者羧基端，或者末端位點(diǎn)之間的任何地方，是各自分散在參照序列中的氨基酸之間或者以一或多個連續(xù)群分散在參照序列中。對于給定％同一性的氨基酸改變數(shù)目是通過將多肽參照序列(例如SEQ ID NO 1)所編碼的多肽序列中的氨基酸總數(shù)乘以分別的百分比同一性(除以100)的百分?jǐn)?shù)，然后從文中描述的多肽參照序列(例如SEQ ID NO 1)中的所述氨基酸總數(shù)中減去該乘積，或者na ^xa-(xa-y),其中na是氨基酸改變的數(shù)目 是SEQ ID NO :1所編碼的多肽序列中氨基酸的總數(shù)；y 對 50%是 0. 50，對 60%是 0. 60，對 70%是 0. 70，對 75%是 0. 75，對 80%是 0. 80，對 85%是0. 85，對90%是0. 90，對95%是0. 95，對98%是0. 98，對99%是0. 99，或者對 100% 是1. 00 ； ·代表乘號，其中\(zhòng)和y的任何非整數(shù)乘積在從\中減去之前，下舍入最近的整數(shù)。本發(fā)明還提供了包含苯達(dá)莫司汀的藥物組合物(制劑)。這種組合物包含治療有效量的苯達(dá)莫司汀，還可能包含藥物可接受載體、稀釋劑或賦形劑。所述藥物載體可以是無菌液體，比如水和油，包括石油、動物、蔬菜或合成來源的油，比如花生油、豆油、礦物油、芝麻油等。當(dāng)藥物組合物是靜脈內(nèi)給予時，可以使用水作為載體。鹽溶液以及右旋糖和甘油水溶液也可以作為例如注射液的液體載體。合適的藥物賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、 明膠、麥芽、大米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，組合物還可以含有少量的潤濕劑或乳化劑，或者PH 緩沖劑。這些組合物可以采取溶液、懸浮液、乳液、片劑、丸劑、膠囊、粉劑、緩釋制劑等的形式。組合物可以用傳統(tǒng)的粘合劑和載體(比如甘油三酯)配制成錠劑。口服制劑可以包含標(biāo)準(zhǔn)載體，比如藥物級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。合適的藥物載體的例子在E. W. Martin的Remiicton, sPhaemaceutical Sciences中有描述。這類組合物含有通常是純化形式的治療有效量的化合物，以及適當(dāng)量的載體來提供適合患者給藥的形式。制劑應(yīng)當(dāng)適合給藥模式。在發(fā)明的一個實(shí)施方案中，組合物按照常規(guī)過程配制成適合靜脈內(nèi)給予人的藥物組合物。一般來說，靜脈內(nèi)給藥的組合物是溶于無菌等滲緩沖液的溶液。合適的情況中，組合物還可以包含穩(wěn)定劑和局部麻醉劑，比如利諾卡因來減輕注射部位的疼痛。通常，組分是分開或者混在一起以單位劑量形式提供的，例如以標(biāo)明活性劑含量的諸如安瓿或藥包的密封容器中的凍干粉或者無水濃縮物提供。組合物要通過輸液給予的情況中，可以用含有無菌藥物級水或鹽水的輸液瓶來配藥。組合物要通過注射給予的情況中，可以提供無菌注射用水或鹽水的安瓿，這樣組分可以在給藥前進(jìn)行混合。相應(yīng)地，苯達(dá)莫司汀可以用于制備藥劑。本發(fā)明的藥物組合物可以配制成用于腸胃外給藥的溶液或者凍干粉。粉末可以在使用前，通過加入合適的稀釋劑或其他藥物可接受載體來重配。液體制劑可以是緩沖的等滲水溶液。合適稀釋劑的例子是常規(guī)的等滲鹽溶液、標(biāo)準(zhǔn)5%葡萄糖水溶液、或者緩沖的鈉或醋酸銨溶液。這樣的制劑尤其適合腸胃外給藥， 但也可以用于口服或包含在計(jì)量的吸入器或霧化器中用于吸入?？赡芟Ｍ蜻@些藥物組合物中加入賦形劑，比如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉或檸檬酸鈉。替代地，可以將苯達(dá)莫司汀膠囊化、成片劑或者制備到乳液或糖漿中用于口服?？梢蕴砑铀幬锟山邮艿墓虘B(tài)或液態(tài)載體來增強(qiáng)或穩(wěn)定組合物，或者協(xié)助組合物的制備。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、二水硫酸鈣、白土、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石、果膠、阿拉伯膠、瓊脂或明膠。液態(tài)載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水和水。載體還可以包含緩釋物質(zhì)，比如單獨(dú)或者與蠟混合的單硬脂酸甘油或二硬脂酸甘油。固態(tài)載體的量可以變化，但在每劑量單位大約20mg到大約Ig之間。藥物制品按照常規(guī)的藥學(xué)技術(shù)制備，對片劑形式包括碾磨、混合、 ?；蛪嚎s；或者對硬的明膠膠囊形式包括碾磨、混合和填充。使用液態(tài)載體時，制品可以采取糖漿、酏劑、乳液，或者水性或非水性懸浮液的形式。這種液態(tài)制劑可以直接經(jīng)口給藥 (口服)或者注入軟明膠膠囊。苯達(dá)莫司汀可以制備為藥物組合物，所述組合物含有處于藥物可接受載體中的有效量作為活性成分的化合物。本發(fā)明的組合物中，可以采用緩沖到生理PH、適合注射用的含有苯達(dá)莫司汀的水性懸浮液或溶液。用于腸胃外給藥的組合物通常包含苯達(dá)莫司汀溶液或者其溶于諸如水性載體的藥物可接受載體的混合液。可以應(yīng)用的水性載體有許多種，例如 0.4%鹽水、0.3%甘氨酸等。這些溶液是無菌的，一般不含微粒物質(zhì)。這些溶液可以通過常規(guī)的公知滅菌技術(shù)(例如過濾)來滅菌。根據(jù)向生理?xiàng)l件靠攏的需要，組合物可以含有藥物可接受輔助物質(zhì)，比如PH調(diào)節(jié)和緩沖劑等。本發(fā)明這種藥物制劑中的苯達(dá)莫司汀濃度可以非常不同，即從重量比低于大約0.5%，通常在或者至少大約1%，到高達(dá)15或20%，并且根據(jù)選定的給藥模式，主要在液體體積、粘度等的基礎(chǔ)上來選擇。因此，用于肌內(nèi)注射的苯達(dá)莫司汀藥物組合物可以制備成含有ImL緩沖無菌水和大約Ing到大約IOOmg之間的苯達(dá)莫司汀，例如大約50ng到大約30mg，或者大約5mg到大約25mg。類似地，用于靜脈內(nèi)輸液的苯達(dá)莫司汀藥物組合物可以配制成含有大約250mL無菌林格氏液，以及大約Img到大約30mg，或者大約5mg到大約25mg的苯達(dá)莫司汀。制備腸胃外給藥的組合物的實(shí)際方法是已知的或者對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，并且在例如 Remington' s Pharmaceutical Science(15th ed. , Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania) 中有更詳細(xì)描述。當(dāng)苯達(dá)莫司汀被制備成藥物制品時，可以處于單位劑量的形式。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定出適當(dāng)?shù)闹委熡行┝俊Ｈ绻线m，這種劑量可以由醫(yī)師在反應(yīng)期選擇恰當(dāng)?shù)臅r間間隔來反復(fù)給予。此外，任選采用體外檢測法來幫助鑒定最佳劑量范圍。制劑時采用的確切劑量還取決于給藥途徑，以及疾病或紊亂的嚴(yán)重程度，應(yīng)當(dāng)根據(jù)執(zhí)業(yè)醫(yī)生的判斷和每個患者的情況來決定?？梢愿鶕?jù)從體外或動物模型測試系統(tǒng)得到的劑量-反應(yīng)曲線來推出有效劑量。對于苯達(dá)莫司汀，給予患者的劑量通常是0. lmg-100mg/kg患者體重。給予患者的劑量可以在0. Img和20mg/kg患者體重，或者替代地，Img到10mg/kg患者體重。發(fā)明還提供了包含一或多個容器的藥物包或試劑盒，所述容器裝有苯達(dá)莫司汀藥物組合物的一或多種成分。任選與這種容器關(guān)聯(lián)著由規(guī)范藥物或生物制品的制造、使用或
13銷售的政府機(jī)構(gòu)發(fā)布的簡介，該簡介反應(yīng)了所述機(jī)構(gòu)對用于人類給藥的制造、使用或銷售的批準(zhǔn)。在發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，試劑盒可以與滿足治療特定病征所需要的劑量的適
當(dāng)數(shù)量容器一起提供。在另一個實(shí)施方案中，可以在介質(zhì)，特別是脂質(zhì)體中遞送苯達(dá)莫司汀(參見 Langerj Science 249 1527—1533 (1990) ；Treat, st al.，in Liposomes ιν 皿 ΤΗΕΕΑΡΥ 0F Infectious Disease and Cancee, Lopez-Berestein and Fidler (eds. ), Liss, New York, pp. 353-365 (1989)； Lopez-Berestein, ibid. , pp. 317-327 ；總體同前.)。再一個實(shí)施方案中，苯達(dá)莫司汀可以在控釋系統(tǒng)中遞送。在一個實(shí)施方案中， 可以使用泵(參見 Langer，supra ；Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14 :201 (1987)； Buchwald, et al. , Surgery 88 :507(1980) ；Saudek, et al. , N. Engl. J. Med. 321 574(1989))。在另一個實(shí)施方案中，可以使用聚合物材料(參見 Medical applications of Controlled Release' Langer and Wise (eds. ) , CRCPres.，Boca Raton, Fla. (1974) ；Conteolled Deug Bioavailability，DkugPkoduct Design and Performance，Smolen and Ball (eds. ) , Wiley, New York(1984)； Ranger, et al. , J. , Macromo 1. Sci. Rev. Macromo 1. Chem. 23 :61 (1983)；還可參見 Levy, et al. ， Science 228 :190(1985) ；During, et al. ， Ann. Neurol. 25 :351 (1989) ；Howard, et al. , J. Neurosurg. 71 :105 (1989))。再一個實(shí)施方案中，可以將控釋系統(tǒng)放置在治療目標(biāo)， 即腦的附近，因此只需要系統(tǒng)劑量的一部分(參見例如Goodson，in MEDICAL Applications of Controlled Release'同前，vol. 2, pp. 115—138 (1984))。Langer (Science 249 :1527—1533 (1990)) 的綜述中討論了其他控釋系統(tǒng)。苯達(dá)莫司汀可以通過任何合適的體內(nèi)途徑進(jìn)行給藥，并且可以按照需要反復(fù)給予，例如頻率在每日一到三次地給藥1天到大約三周，到每周一次或者兩周一次。替代地， 可以改變苯達(dá)莫司汀減少電荷密度，從而得到口腔生物利用率。治療的劑量和持續(xù)時間與發(fā)明所述分子在人循環(huán)系統(tǒng)中停留時間有關(guān)，可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)患者要治療的狀況和整體健康情況來調(diào)節(jié)。各種遞送系統(tǒng)是已知的，可以用于苯達(dá)莫司汀的給藥，例如包裹在脂質(zhì)體中、微顆粒、微膠囊、能夠表達(dá)化合物的重組細(xì)胞、受體介導(dǎo)的胞吞(參見例如mi，et al.，J.Biol. Chem. 262 :4429-4432 (1987))、將核酸構(gòu)建為逆轉(zhuǎn)錄病毒或其他載體的一部分等。導(dǎo)入的方法包括，但不限于皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、硬膜和經(jīng)口途徑。苯達(dá)莫司汀可以通過任何方便的途徑給予，例如通過輸液或大劑量注射、通過經(jīng)表皮或粘膜層(例如口腔粘膜、直腸和小腸粘膜等)吸收，也可以與其他生物活性劑一起給予。給藥可以是系統(tǒng)或局部的。此外，可能希望將本發(fā)明的藥物化合物或組合物通過任何合適的途徑引入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，所述途徑包括心室內(nèi)和椎管內(nèi)注射；心室內(nèi)注射可以用心室內(nèi)導(dǎo)管來協(xié)助，例如接在貯器，比如Ommaya貯器上的導(dǎo)管。也可以采用肺部給藥，例如借助吸入器或霧化器，以及與霧化劑一起成劑?？耿?0抗體具有本領(lǐng)域普通技術(shù)的醫(yī)師或獸醫(yī)可以很容易地確定包含抗CD20抗體的藥物組合物的有效量并處方。例如，醫(yī)師或獸醫(yī)開始可以給予比達(dá)到希望治療效果所需要的劑量低的藥物組合物中應(yīng)用的發(fā)明所述化合物，然后逐漸增加劑量直到達(dá)到希望的效果。通常， 發(fā)明所述組合物的合適每日劑量是足夠產(chǎn)生治療效果的最低劑量的化合物用量。優(yōu)選，給藥是經(jīng)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹腔內(nèi)或者皮下。如果需要，治療組合物的有效每日劑量可以作為兩個、三個、四個、五個、六個或更多個亞劑量，任選以單位劑量形式在一天內(nèi)以合適的間隔分別給予。雖然可能將抗CD20抗體單獨(dú)給藥，優(yōu)選將化合物以藥物制劑(組合物)給予。在一個實(shí)施方案中，根據(jù)發(fā)明的人單克隆抗體可以通過輸液以每周10到2000mg/ m2的劑量給予，通常是10到500mg/m2，比如200到400mg/m2，比如375mg/m2。這種給藥可以重復(fù)例如1到8次，比如3到5次。給藥可以通過持續(xù)輸液在2到M小時，比如2到12小時內(nèi)進(jìn)行。在另一個實(shí)施方案中，抗體通過緩慢連續(xù)的輸液在長時間內(nèi)，比如超過M小時給予，以便減少毒副作用。在再一個實(shí)施方案中，抗體以每周250mg到2000mg的劑量給藥，比如例如300mg、 500mg、700mg、1 OOOmg、1500mg或2000mg給予最多8次，比如4到6次。給藥可以通過連續(xù)輸液在2到M小時，比如2到12小時的時期內(nèi)進(jìn)行。這樣的方案可以根據(jù)需要在例如6 個月或12個月后重復(fù)一或多次?？梢酝ㄟ^利用靶向抗CD20抗體的抗獨(dú)特型抗體，測量給藥后生物樣品中循環(huán)抗CD20抗體的量，從而確定劑量或?qū)λM(jìn)行調(diào)節(jié)。還有一個實(shí)施方案中，抗體通過維持療法給藥，比如例如每周一次進(jìn)行6個月或更長的時期。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含治療有效量抗CD20抗體的藥物組合物。所述藥物組合物可以按照比如 Remington :The Science and Practice of Pharmacy (19th Edition，Gennaro，Ed.，Mack Publishing Co.，Easton，PA，1995)中描述的常規(guī)技術(shù)，與藥物可接受載體或稀釋劑以及其他任何已知助劑和賦形劑一起成劑。藥物組合物可以包含稀釋劑、填充劑、鹽、緩沖液、去污劑(例如，非離子型去污劑，比如Tween-80)、穩(wěn)定劑(例如糖或不含蛋白質(zhì)的氨基酸)、防腐劑、組織固定劑、增溶劑和/或適合包括在藥物組合物中的其他物質(zhì)。藥物組合物中活性成分的實(shí)際劑量水平可以變化從而達(dá)到活性成分的量足以在特定患者、組合物和給藥模式中實(shí)現(xiàn)希望的治療反應(yīng)，而對患者沒有毒性。選中的劑量水平取決于多種藥代動力學(xué)因素，包括應(yīng)用的特定組合物的活性；給藥途徑；給藥時間；使用的特定化合物的外排速度；治療時長；與所用特定組合物聯(lián)用的其他藥物/化合物和/或物質(zhì)；接受治療的患者的年齡、性別、體重、狀況、整體健康情況和以前的病史，以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已知的其他因素。本發(fā)明的抗⑶20抗體可以經(jīng)任何合適途徑給予，比如口、鼻、吸入、支氣管內(nèi)、肺泡內(nèi)、局部(包括頰、透皮和舌下)、直腸、陰道和/或腸胃外途徑。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物是經(jīng)腸胃外給藥的。用于本文，短語“腸胃夕卜給藥(parenteral administration 禾口 administered parenterally)”意味著非腸內(nèi)和局部給藥的給藥模式，通常通過注射，包括表皮、靜脈內(nèi)、 肌內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、腱內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、椎管內(nèi)、顱內(nèi)、胸內(nèi)、硬膜和胸骨內(nèi)注射和輸液。在一個實(shí)施方案中，抗CD20抗體藥物組合物通過靜脈內(nèi)或皮下注射或輸液進(jìn)行給藥。例如，藥物組合物可以在2-8小時，比如4小時期間給藥，從而減少副作用。在一個實(shí)施方案中，抗⑶抗體藥物組合物通過吸入進(jìn)行給藥。抗⑶20抗體的Fab 片段可能適合這種給藥途徑，參見 Crowe et al. (February 15,1994)Proc Natl Acad SciUSA,91(4) 1386-1390。在一個實(shí)施方案中，抗⑶20抗體藥物組合物是以晶體形式通過皮下注射進(jìn)行給藥的，參見 Yang et al.，PNAS USA 100 (12), 6934-6939 (2003)。藥物可接受載體包括任何和全部合適的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌和抗真菌劑、等滲劑、抗氧化劑和吸收延緩劑等等與本發(fā)明的化合物生理相容的物質(zhì)?？梢詰?yīng)用在本發(fā)明的藥物組合物中的水和非水載體的合適例子包括水、鹽水、磷酸鹽緩沖液、乙醇、右旋糖、多醇(比如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、和它們的合適混合液、 蔬菜油(比如橄欖油、玉米油、花生油、棉籽油和芝麻油)、羧甲基纖維素膠質(zhì)溶液、黃蓍膠和可注射用的有機(jī)酯(比如油酸乙酯)和/或各種緩沖液。其他載體也是藥學(xué)領(lǐng)域公知的。藥物可接受載體包括無菌水溶液或懸液以及用于即時制備無菌注射液或懸液的無菌粉末。用于藥物活性物質(zhì)的這類介質(zhì)和試劑是本領(lǐng)域已知的。除非任何常規(guī)介質(zhì)或試劑與活性化合物不相容，都可以考慮將它們用在本發(fā)明的藥物組合物中。適當(dāng)?shù)牧鲃有钥梢越柚T如卵磷脂的包衣材料；在懸浮液的情況中通過保持需要的顆粒大??；以及利用表面活性劑來維持。含有抗⑶20抗體的藥物組合物還可以包含藥物可接受抗氧化劑，例如(1)水溶性抗氧化劑，比如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；( 油溶性抗氧化劑，比如抗壞血酸棕櫚酸鹽、叔丁基羥基茴香醚(BHA)、二叔丁基對甲酚(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α -生育酚等；和(3)金屬螯合劑，比如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。含有抗⑶20抗體的藥物組合物還可以在組合物中包含等滲劑，比如糖；諸如甘露醇、山梨醇、甘油的多醇或者氯化鈉。藥物可接受稀釋劑包括鹽水和水緩沖液。含有抗⑶20抗體的藥物組合物還可以含有適合選中給藥途徑的一或多種助劑， 比如能夠延長藥物組合物的保存期或效率的防腐劑、潤濕劑、乳化劑、分散劑、防腐劑或緩沖劑。本發(fā)明的抗CD20抗體可以例如與乳糖、蔗糖、粉末(例如淀粉)、烷酸酯纖維素、硬脂酸、滑石、硬脂酸鎂、氧化鎂、鈉和鈣的磷酸和硫酸鹽、阿拉伯膠、明膠、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合。助劑的其他例子有QS21、GM-CSF, SRL-172、二鹽酸組胺、 胸腺卡汀(thymocartin)、Tio-TEPA,單磷酰-脂質(zhì)A/微生物組合物、明礬、不完全弗氏佐劑、Montanide ISA、Ribi佐劑系統(tǒng)、TiterMax佐劑、Syntex佐劑制劑、免疫刺激復(fù)合體 (ISCOMs)、Gerbu佐劑、CpG寡脫氧核苷酸、脂多糖和聚肌苷酸胞苷酸。微生物的預(yù)防可以通過滅菌過程和加入各種抗細(xì)菌和抗真菌劑來保證，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。此外，通過加入能夠延緩吸收的試劑，比如單硬脂酸鋁和明膠可以使得可注射藥物形式的吸收延長。含有抗⑶20抗體的藥物組合物可以處于多種適合的形式。這些形式包括，例如液態(tài)、半液態(tài)和固態(tài)劑量形式，比如液體溶液(例如，可用于注射和輸液的溶液)、分散液或懸浮液、乳液、微乳液、膠、霜劑、顆粒劑、粉末、片劑、丸劑、粉末、脂質(zhì)體、樹狀大分子和其他納米顆粒(參見例如 Baek et al. ,Methods Enzymol. 362, 240-9 (2003),Nigavekar et al.， Pharm Res. H (3)，476-83 (2004))、微粒和栓劑。最佳形式取決于選中的給藥模式和組合物的性質(zhì)。劑型可以包括例如粉末、糊劑、膏齊IJ、凝膠劑、蠟、油、脂、含脂(陽離子或陰離子型)媒介、DNA偶聯(lián)體、無水吸收膏劑、水包油和油包水乳劑、碳蠟乳劑(各種分子量的聚乙二醇)、含有碳蠟的半固態(tài)膠和半固態(tài)混合物。任何以上劑型都適合本發(fā)明所述的治療和療法，只要藥物組合物中的抗CD20抗體不被成劑過程失活并且劑型與給藥途徑生理相容和耐受。與藥物化學(xué)家已知的賦形劑和載體相關(guān)的其他信息還可參見 Powell et al. , “ Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA J Pharm Sci Technol. 52, 238-311 (1998)和本文中的引用?？笴D20抗體可以與能夠保護(hù)它不被快速釋放的載體一起制備比如控釋劑型，包括植入物、透皮貼劑和微囊化的遞送系統(tǒng)。這類載體可以包括明膠、單硬脂酸甘油、二硬脂酸甘油、生物可降解/生物相容的聚合物(比如乙烯醋酸乙烯共聚物、聚酣、聚乙醇酸、膠原蛋白、多正酯類和聚乳酸單獨(dú)或與蠟一起)，或其他本領(lǐng)域已知的物質(zhì)。制備這類制劑的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。參見例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed. , Marcel Dekker, Inc. , New York,1978。為了按照發(fā)明，將含有抗CD20抗體的藥物組合物通過某種給藥途徑進(jìn)行給藥，可能有必要將抗CD20抗體包被上防止它被失活的物質(zhì)，或者與所述物質(zhì)共同給予。例如，可以將抗⑶20抗體放在合適的載體中給予受試者，例如，脂質(zhì)體或稀釋劑。脂質(zhì)體包括水包油包水 CGF 乳液和常規(guī)的脂質(zhì)體(Strejan et al.，J. Neuroimmunol. 7, 27 (1984))。根據(jù)給藥途徑，可以將抗CD20抗體包被在某物質(zhì)中保護(hù)抗體免于酸和其他會使化合物失活的天然條件的作用。例如，可以將抗CD20抗體放在合適的載體，例如脂質(zhì)體中給予受試者。脂質(zhì)體包括水包油包水CGF乳液和常規(guī)的脂質(zhì)體(Strejan et al., J. Neuroimmunol. 7,27(1984))。用于腸胃外給藥的藥物可接受載體包括無菌水溶液或懸浮液和用于即時制備無菌注射液或懸液的無菌粉末。用于藥物活性物質(zhì)的這類介質(zhì)和試劑是本領(lǐng)域已知的。除非任何常規(guī)介質(zhì)或試劑與活性化合物不相容，都可以考慮將它們用在本發(fā)明的藥物組合物中。額外的活性化合物也可以并入組合物中。用于注射的藥物組合物一般必須是無菌的，并且在制造和保存條件下保持穩(wěn)定。 組合物可以配制成溶液、微乳劑、脂質(zhì)體或其他適合高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。載體可以是水或非水溶劑或者含有諸如水、乙醇、多元醇(比如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合適混合物的分散介質(zhì)、諸如橄欖油的蔬菜油、和注射可用的有機(jī)酯，比如油酸乙酯。適當(dāng)?shù)牧鲃有钥梢越柚T如卵磷脂的包衣材料；在懸浮液的情況中通過保持需要的顆粒大?。灰约袄帽砻婊钚詣﹣砭S持。許多情況中，組合物中優(yōu)選包含等滲劑，例如糖、多元醇(比如甘油、甘露醇、山梨醇)或氯化鈉。通過在組合物中加入能夠延緩吸收的試劑，例如單硬脂酸鹽和明膠可以使得注射用組合物的吸收得以延長。無菌注射用溶液的制備可以通過將所需量的活性化合物與如上列舉的一種成分或者成分的組合并入合適的溶劑中，然后按照需要進(jìn)行微過濾滅菌。通常，分散液是通過將活性化合物并入含有基本分散介質(zhì)和所需其他成分(例如以上列舉的)的無菌媒介中制備的。在用于制備無菌注射液的無菌粉末的情況中，制備方法的例子是真空干燥和冷凍干燥(凍干)，所述方法從先前的無菌過濾溶液得出活性成分加上任何其他需要的成分的粉末。無菌注射用溶液的制備可以通過將所需量的活性化合物與如上列舉的一或多種成分并入合適的溶劑中，然后按照需要進(jìn)行微過濾滅菌而制得。通常，分散液是通過將活性化合物并入含有基本分散介質(zhì)和所需其他成分(例如以上列舉的)的無菌媒介中制備的。 在用于制備無菌注射液的無菌粉末的情況中，制備方法的例子是真空干燥和冷凍干燥(凍干)，所述方法從先前的無菌過濾溶液得出活性成分加上任何其他需要的成分的粉末。本發(fā)明還可以在不脫離發(fā)明的精神或關(guān)鍵屬性的情況下，體現(xiàn)為其他具體形式， 相應(yīng)地，表明發(fā)明范圍的應(yīng)當(dāng)是所附權(quán)利要求，而非以上說明書或下文的實(shí)施例。用于本文，名詞“載體”是指稀釋劑、助劑、賦形劑或治療劑與之一起給藥的媒介?！胺蛛x的”意味著“被人力”從其天然狀態(tài)改變，S卩如果它是天然存在的，它已經(jīng)被改變或脫離原來的環(huán)境，或者是這兩種情況同時發(fā)生。例如，活生物體中天然存在的多核苷酸或多肽不是“分離的”，但正如該名詞在本文的使用，相同的多核苷酸或多肽與天然狀態(tài)下和它共存的至少一種細(xì)胞物質(zhì)分開了就是“分離的”。而且，通過轉(zhuǎn)化、基因操縱或任何其他重組方法引入生物體的多核苷酸或多肽是“分離的”，即使它仍存在于所述可能是有活力或者沒有活力的生物體中。用于本文，名詞“藥物”包括本發(fā)明的獸醫(yī)學(xué)應(yīng)用。名詞“治療有效量”是指能夠減輕指定狀況的治療劑用量。用于本文，名詞“藥物可接受”意味著被聯(lián)邦或州政府的管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)，或者列在美國藥典或其他公認(rèn)的藥典中可以用于動物，特別是人中。為了避免疑問，在一個實(shí)施方案中，苯達(dá)莫司汀與抗CD20抗體的給藥是交錯給藥，其中交替給予苯達(dá)莫司汀和抗CD20抗體。為了避免疑問，在交錯給藥中，可以首先給予苯達(dá)莫司汀或者抗⑶20抗體。
權(quán)利要求
1.治療或預(yù)防患者中癌癥的方法，所述方法包括給予患者苯達(dá)莫司汀和抗CD20抗體的步驟。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥是淋巴瘤。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥是表達(dá)CD20的腫瘤類型，選自前體B或T細(xì)胞腫瘤、成熟B細(xì)胞腫瘤、霍奇金淋巴瘤或者免疫缺陷相關(guān)的淋巴增生性失調(diào)。
4.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥是利妥昔單抗耐受的惰性非霍奇金淋巴瘤。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述惰性非霍奇金淋巴瘤是濾泡性淋巴瘤.
6.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述癌癥選自NHL(非霍奇金淋巴瘤)、B細(xì)胞淋巴母細(xì)胞白血病/淋巴瘤、成熟B細(xì)胞腫瘤、B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(SLL)、B細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞白血病、淋巴漿細(xì)胞淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)、包括低度、中度和高度惡性FL的濾泡性淋巴瘤(FL)、皮膚濾泡中心淋巴瘤、邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤 (MALT型、節(jié)結(jié)型和脾型)、毛細(xì)胞白血病、彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、漿細(xì)胞瘤、漿細(xì)胞骨髓瘤、移植后淋巴增殖性疾病、沃登斯通巨球蛋白血癥、間變性大細(xì)胞淋巴瘤 (ALCL)、T-細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤和黑素瘤。
7.權(quán)利要求3-6所述的方法，其中苯達(dá)莫司汀和抗CD20的給予是同時進(jìn)行的。
8.權(quán)利要求1所述的方法，其中苯達(dá)莫司汀和抗CD20抗體的給予是順序進(jìn)行的，其中首先給予苯達(dá)莫司汀。
9.權(quán)利要求1所述的方法，其中苯達(dá)莫司汀和抗CD20抗體的給予是順序進(jìn)行的，其中首先給予所述抗體。
10.權(quán)利要求1所述的方法，其中苯達(dá)莫司汀和抗CD20抗體的給予是交錯進(jìn)行的。
11.權(quán)利要求3-6所述的方法，其中所述抗⑶20抗體是ofatumumab。
12.權(quán)利要求11所述的方法，其中ofatumumab經(jīng)i.v.給藥，第1輪中，第1天:300mg, 第8天1000mg ；之后在第2到第6輪中，第1天IOOOmg ；苯達(dá)莫司汀在第1到第6輪，每觀天的第1和第2天給予90mg/m2 (每輪是每觀天)。
13.權(quán)利要求12所述的方法，其中結(jié)束6輪后，進(jìn)一步每2個月給予ofatumumab lOOOmg，給 2 年。
14.權(quán)利要求12所述的方法，其中結(jié)束6輪后，進(jìn)一步每2個月給予ofatumumab 2000mgo
15.權(quán)利要求12所述的方法，其中結(jié)束6輪后，進(jìn)一步每2個月給予ofatumumab 500mgo
16.權(quán)利要求12所述的方法，其中結(jié)束6輪后，進(jìn)一步每個月或者每3個月給予 ofatumumab 500mg、IOOOmg 或 2000mgo
17.權(quán)利要求12所述的方法，其中結(jié)束6輪后，進(jìn)一步每2個月給予ofatumumab 300-2000mg，給兩年。
18.權(quán)利要求3-6所述的方法，其中ofatumuamb和苯達(dá)莫司汀是i.v.給藥。
19.包含苯達(dá)莫司汀和抗CD20抗體的藥物組合物，其中該組合適合分別、順序和/或同時給藥。
20.權(quán)利要求19所述的藥物組合物，其中所述抗⑶20抗體是ofatumumab。
21.抗CD20抗體在制備治療癌癥的藥物中的用途，其中所述藥物用于與苯達(dá)莫司汀在組合療法中一起給藥。
22.權(quán)利要求21所述的用途，其中所述用途包括權(quán)利要求2到18中任一項(xiàng)或多項(xiàng)的特性。
23.抗⑶20抗體用于與苯達(dá)莫司汀組合治療癌癥。
24.抗CD20抗體的根據(jù)權(quán)利要求23的用途，其中所述用途包含權(quán)利要求2到18中任一項(xiàng)或多項(xiàng)的特性。
全文摘要
本發(fā)明基本涉及苯達(dá)莫司汀與抗CD20抗體組合治療癌癥的用途。所述組合可以各別地、順序地和/或同時地施用。還公開了藥物組合物和藥物。
文檔編號A61K39/395GK102355907SQ201080012323
公開日2012年2月15日 申請日期2010年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月16日
發(fā)明者C.T.托馬斯, G.錢 申請人:葛蘭素史密斯克萊有限責(zé)任公司