專利名稱：作為補(bǔ)體抑制劑的經(jīng)修飾的omci的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可用于治療補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病和病癥的新穎組合物，且特別涉及經(jīng)修飾的源自蜱的特異性補(bǔ)體抑制劑及其在治療補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病和病癥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
補(bǔ)體系統(tǒng)是重要的固有免疫防御系統(tǒng)。其參與保護(hù)身體不受外界因子侵害，并參與炎癥進(jìn)程。已知有超過30種血清和細(xì)胞表面蛋白參與補(bǔ)體系統(tǒng)的功能和調(diào)控。補(bǔ)體的激活有三種途徑經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑。經(jīng)典途徑由IgM或 IgG復(fù)合物或者碳水化合物激活。旁路途徑由非自身表面和細(xì)菌內(nèi)毒素激活。凝集素途徑由與病原體表面上的甘露糖結(jié)合的甘露聚糖結(jié)合凝集素(MBL)激活。補(bǔ)體的三種途徑包括并行的級聯(lián)反應(yīng)，其中相似形式的C3-轉(zhuǎn)化酶和C5-轉(zhuǎn)化酶分別裂解并活化成分C3和C5， 從而產(chǎn)生C3a和C3b以及C5a和C5b。這些具活性的補(bǔ)體片段負(fù)責(zé)介導(dǎo)多種免疫效應(yīng)。C3a和Cfe觸發(fā)肥大細(xì)胞的脫顆粒，并提高血管滲透性和平滑肌收縮。Cfe還充當(dāng)趨化蛋白并募集免疫細(xì)胞。Ob發(fā)揮調(diào)理作用并提高對病原體的吞噬。(恥負(fù)責(zé)啟動攻膜復(fù)合物(MAC)的形成。在健康的個體中，這三種補(bǔ)體途徑的激活在生理條件下受到精細(xì)調(diào)控。鑒于補(bǔ)體在免疫系統(tǒng)中的重要作用以及不適當(dāng)?shù)难a(bǔ)體激活的后果，存在多種機(jī)制共同作用來調(diào)控補(bǔ)體途徑的激活。補(bǔ)體途徑的主要調(diào)控因子是補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白。這些蛋白在血漿中的表達(dá)濃度高于補(bǔ)體成分本身。一些補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)于身體自身細(xì)胞的表面，從而防止這些細(xì)胞不適當(dāng)?shù)爻蔀檠a(bǔ)體的靶標(biāo)。此外，很多具活性的補(bǔ)體成分，例如C3a和C5a，其半衰期很短，并因此在其活化后在血漿中僅具有短期的活性。調(diào)控補(bǔ)體激活的調(diào)節(jié)機(jī)制的失效可以對身體自身的組織造成傷害。已顯示補(bǔ)體調(diào)節(jié)機(jī)制的失效與多種病理上的病癥和疾病有關(guān)。已知與補(bǔ)體途徑缺乏調(diào)節(jié)有關(guān)的病癥包括老年性黃斑變性(AMD)、阿爾茨海默病、變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎、同種異體移植、包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在內(nèi)的各種關(guān)節(jié)炎、哮喘、成人型呼吸窘迫綜合征、灼傷、癌、克羅恩氏病、皮膚肌炎、腎小球性腎炎、溶血性貧血、血液透析、遺傳性血管性水腫、特發(fā)性膜性腎病、宮內(nèi)生長受限(IUGR)、缺血再灌注損傷、運(yùn)動神經(jīng)元疾病、多系統(tǒng)器官衰竭、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、心肌梗塞、腎炎、類天皰瘡、心肺轉(zhuǎn)流術(shù)后、干癬、敗血性休克、自然流產(chǎn)、中風(fēng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、葡萄膜炎、血管滲漏綜合征和異種移植。由于對補(bǔ)體途徑的精細(xì)調(diào)控的重要性，對于用于預(yù)防或治療已知與補(bǔ)體調(diào)控失效有關(guān)的病癥和疾病的補(bǔ)體抑制劑的開發(fā)已有很多關(guān)注。研究已致力于開發(fā)特定補(bǔ)體成分的抗體、RNA適體和靶向補(bǔ)體受體的分子。類二十烷酸(eicosanoid)是一族已氧化的具生物活性的脂類中介因子，其源自 20碳脂肪酸花生四烯酸(AA)并誘發(fā)對各種細(xì)胞類型和器官的多種效應(yīng)。白細(xì)胞三烯(LK) 是具有多種效果的類二十烷酸亞族，所述效果包括調(diào)節(jié)毛細(xì)血管和微靜脈的血管緊張度和滲透性、使肌肉收縮或松弛(半胱氨酰LK)、控制惡性細(xì)胞的生長和/或擴(kuò)散(^Awartz等，2005 ；Aya, 2006)和活化白細(xì)胞，特別是在自身免疫和炎癥病癥(LK，HETE)中(Samuelsson， 1983 ；Kim 等，2006)。白細(xì)胞三烯B4(LTB4)是已描述的最有效的具趨化性和化學(xué)激動性的類二十烷酸， 并促使嗜中性粒細(xì)胞通過上調(diào)整聯(lián)蛋白而黏附至血管內(nèi)皮(Hoover等，1984)。其還是嗜中性粒細(xì)胞的完全促分泌素，誘使嗜中性粒細(xì)胞聚集并提高微血管的滲透性。LTB4募集并活化自然殺傷細(xì)胞、單核細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞。其增加超氧自由基的形成(Harrison和 Murphy, 1995)，并調(diào)節(jié)基因表達(dá)，所述基因表達(dá)包括可以擴(kuò)大和延長組織炎癥的大量促炎細(xì)胞因子和中介因子的產(chǎn)生(Ford-Hutchinson，1990 ;Showell等，1995)。LTB4還在誘導(dǎo)和管理適應(yīng)性免疫應(yīng)答中起作用。例如，調(diào)節(jié)向引流淋巴結(jié)遷移的樹突狀細(xì)胞(Klaas等， 2005 ；Del Prete 等，2007)、Th2 細(xì)胞因子 IL-13 從肺 T 細(xì)胞的產(chǎn)生(Miyahara 等，2006)、 抗原特異性效應(yīng)CD8+T細(xì)胞的募集(Taube等，2006)和人類B淋巴細(xì)胞的活化及增殖 (Yamaoka 等，1989)。W02004/106369 描述了一種源自軟蜱(毛白鈍緣蜱(Ornithodoros moubata)) 的補(bǔ)體(C)抑制劑OmCI，其通過與補(bǔ)體成分C5直接結(jié)合來同時抑制經(jīng)典和旁路補(bǔ)體途徑 (Nurm等，200 。OmCI源自食血性節(jié)肢動物的唾液腺。已證明其具有治療潛力Ofepburn 等，2007)。最近已據(jù)顯示，OmCI可結(jié)合類二十烷酸，特別是LK，尤其是LTB4。

發(fā)明內(nèi)容
已據(jù)顯示能夠修飾OmCI來降低或消除其白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性。特別的是，本發(fā)明人已示出，在特定殘基處修飾OmCI多肽可降低或消除LK/E結(jié)合活性。因此，本發(fā)明涉及缺乏LK/E結(jié)合活性的經(jīng)修飾的OmCI多肽，且涉及編碼這種經(jīng)修飾的OmCI多肽的多核苷酸。特別的是，本發(fā)明涉及因?qū)mCI結(jié)合口袋內(nèi)特定殘基的修飾而缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽，且涉及編碼所述多肽的多核苷酸。本發(fā)明還涉及結(jié)合補(bǔ)體成分但不結(jié)合LK/E的OmCI多肽。這種經(jīng)修飾的OmCI多肽、或編碼這種經(jīng)修飾的OmCI 多肽的多核苷酸充當(dāng)補(bǔ)體抑制劑，并且可以用于預(yù)防或治療補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病和病癥且不干擾LK/E的作用。因此，本發(fā)明的一個方面提供缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，所述OmCI多肽含有(a)氨基酸序列SEQ ID NO :3，其已經(jīng)過修飾而消除了 LK/E結(jié)合活性；(b)與氨基酸序列SEQ ID NO 3的一致性至少為60%的變體氨基酸序列，其已經(jīng)過修飾而消除了 LK/E結(jié)合活性；(c) SEQ ID NO 2的變體氨基酸序列，所述變體氨基酸序列與SEQ ID NO 2的氨基酸殘基19至168間的氨基酸序列的一致性至少為60%，且其已經(jīng)過修飾而消除了 LK/E結(jié)合活性；或(d)缺乏LK/E結(jié)合活性的氨基酸序列(a)、(b)或(c)的片段。本發(fā)明還提供編碼本發(fā)明的OmCI多肽的多核苷酸。本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的多核苷酸的載體。本發(fā)明還提供包含本發(fā)明的多核苷酸或載體的宿主細(xì)胞。本發(fā)明還提供藥物組合物，所述藥物組合物包含藥物可接受的載劑和以下物質(zhì)缺乏白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性的OmCI多肽；編碼缺乏白細(xì)胞三烯/ 羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸；或包含編碼缺乏白細(xì)胞三烯/ 羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸的載體。本發(fā)明還提供用于治療補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病或病癥的組合物，所述組合物包含缺乏白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性的OmCI多肽；編碼缺乏白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸；或包含編碼缺乏白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸的載體。本發(fā)明還提供治療或預(yù)防有此需要的受試者的由補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病或病癥的方法， 所述方法包括向受試者施用治療有效量的缺乏白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性的OmCI多肽或編碼缺乏白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸。


圖1 結(jié)合有棕櫚油酸(圖中央)的經(jīng)細(xì)菌表達(dá)的OmCI (bOmCI)的晶體結(jié)構(gòu)局部。圖2 酶免疫測定(EIA)，顯示了 41. 2yg bOmCI與12 (S)-HETE的結(jié)合，即在將 12500pg/ml的12 (S)-HETE單獨(dú)預(yù)溫育或與PBS、OmCI, RaHBP2預(yù)溫育20分鐘后溶液中 12(S)-HETE(pg/ml)。圖3 :b0mCI和LTB4的吸收光譜。(A)添加OmCI前溶液中的LTB4 (上部線)，和添加并隨后通過超濾除去bOmCI:LTB4復(fù)合物后對同一溶液的重新測量(下部線)；(B)通過超濾濃縮至200 μ 1后的bOmCI LTB4復(fù)合物(上部線)和僅bOmCI (下部線)。圖4 :結(jié)合有LTB4(圖中央)的bOmCI的晶體結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)。在C_5和C-12的羧基和羥基處，示出了 LTB4的氧原子。這些基團(tuán)與結(jié)合腔中的氨基酸之間形成氫鍵(虛線)(參見實(shí)施例3的文字)。圖5 對在細(xì)菌中表達(dá)的重組OmCI中存在的脂肪酸的氣相色譜分析。通過質(zhì)譜測定和與參照標(biāo)準(zhǔn)的比較，確認(rèn)了棕櫚油酸和反油酸的存在。圖6 結(jié)合口袋被大氨基酸色氨酸封閉了的突變0mCI(y0mCI-F36W和y0mCI-G59W) 在一定的蛋白濃度范圍內(nèi)顯示出明顯低于野生型yOmCI的與LTB4的結(jié)合。圖7 經(jīng)典途徑的溶血測定，其對RaHBP2(陰性對照蜱脂質(zhì)運(yùn)載蛋白，其不抑制補(bǔ)體)、野生型重組OmCI、以及不與LTB4結(jié)合的突變的y0mCI-F36W及y0mCI_G59W進(jìn)行了比較。圖8 結(jié)合口袋被大氨基酸色氨酸(W)封閉了的突變的y0mCI-F36W和y0mCI_G59W 以與野生型OMCI等同的效力抑制補(bǔ)體激活的經(jīng)典途徑。圖9 帶放射性標(biāo)記的LTB4與僅OMCI的結(jié)合和與復(fù)合有人類C5的OMCI的結(jié)合是
(a)可飽和的且b)具有相似的結(jié)合動力學(xué)。圖(a)代表3次實(shí)驗且顯示了原始數(shù)據(jù)。圖
(b)代表2次實(shí)驗且顯示了減去平均陰性對照c.p.m(n= 16)后的c. p. m值。對數(shù)回歸線函數(shù)顯示為0MCI，y = 134. 67Ln (χ)+521. 6，R2 = 0. 98 ；0MCI:hC5,y = 132. 87Ln (χ)+479. 2， R2 = 0. 97。序列說明SEQ ID N0:1是毛白鈍緣蜱的OmCI的多核苷酸序列及所編碼的蛋白序列。
SEQ ID NO 2是毛白鈍緣蜱的OmCI的氨基酸序列。SEQ ID NO :3是SEQ ID NO :2所示的氨基酸19 168的氨基酸序列，是不含SEQID NO 2的蛋白的起始氨基酸序列(即信號序列)的OmCI氨基酸序列。SEQ ID NO 4和5分別是OmCI的多核苷酸及所編碼的蛋白的序列和OmCI的蛋白序列，其中經(jīng)修飾將Asn78變?yōu)镚in、將Asnl02變?yōu)镚ln，且密碼子從AAT和AAC分別變?yōu)?CAA，用于在酵母中表達(dá)時避免高糖基化。SEQ ID NO 6是毛白鈍緣蜱的0mCI_F36W突變蛋白的多核苷酸序列及所編碼的蛋白序列。SEQ ID NO 7是毛白鈍緣蜱的0mCI_F36W突變蛋白的氨基酸序列。SEQ ID NO :8是SEQ ID NO :6所示的氨基酸19 168的氨基酸序列，是不含SEQID NO 6的蛋白的起始氨基酸序列(即信號序列)的0mCI-F36W突變蛋白的氨基酸序列。SEQ ID NO 9是毛白鈍緣蜱的0mCI_F59W突變蛋白的多核苷酸序列及所編碼的蛋白序列。SEQ ID NO 10是毛白鈍緣蜱的0mCI_F59W突變蛋白的氨基酸序列。SEQ ID NO 11是SEQ ID NO 9所示的氨基酸19 168的氨基酸序列，是不含 SEQID NO :9的蛋白的起始氨基酸序列(即信號序列)的0mCI-F59W突變蛋白的氨基酸序列。因此，本發(fā)明提供缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽或編碼所述OmCI多肽的多核苷酸。本文所用的LK/E結(jié)合活性是指野生型OmCI結(jié)合白細(xì)胞三烯和羥基類二十烷酸(包括但不限于LTO4、B4異白細(xì)胞三烯及其任何羥基化衍生物、HETE、HPETE和EET)的能力。OmCI 蛋白可以是從毛白鈍緣蜱的唾液中分離出的源自蜱的補(bǔ)體抑制劑，或者可以是其功能等價物(包括其同源物)以及其或其功能等價物的片段。本發(fā)明的OmCI蛋白優(yōu)選為來自毛白鈍緣蜱的OmCI。該蛋白最初分離自該蜱的唾液腺，并且已發(fā)現(xiàn)其可以抑制經(jīng)典和旁路補(bǔ)體途徑。該蛋白的氨基酸序列示于SEQID NO 2 中。本發(fā)明的多肽可以包括SEQ ID NO :2所示的完整序列，其已經(jīng)過修飾而特定地消除了 LK/E結(jié)合活性。作為另一選擇，所提供的多肽不包括構(gòu)成信號序列的該蛋白序列的起始的 18個氨基酸，且其已經(jīng)過修飾而特定地消除了 LK/E結(jié)合活性。因此，本發(fā)明的多肽可以是 SEQ ID NO 3的多肽，即SEQ ID NO 2的氨基酸序列的氨基酸19 168，其經(jīng)額外修飾而消除了 LK/E結(jié)合活性。本發(fā)明提供來自毛白鈍緣蜱的OmCI蛋白的變體(例如同源物)或片段，所述變體或片段同樣缺乏LK/E結(jié)合活性。同源物可以包括SEQ ID NO :2或3所示的OmCI序列的旁系同源物和直系同源物，并且已經(jīng)過修飾而特定地消除了 LK/E結(jié)合活性，其包括例如來自其他蜱物種的OmCI蛋白序列，所述其他蜱物種包括具尾扇頭蜱、血紅扇頭蜱、囊狀扇頭蜱、美洲鈍眼蜱、卡延鈍眼蜱、希伯來鈍眼蜱、微小牛蜱、具環(huán)牛蜱、消色牛蜱、網(wǎng)紋革蜱、安氏革蜱、邊緣革蜱、變異革蜱、鐵角血蜱、犬血蜱、刻點(diǎn)血蜱、小亞璃眼蜱、駱駝璃眼蜱、邊緣璃眼蜱、蓖子硬蜱、全溝硬蜱、肩突硬蜱、六角形硬蜱、波斯銳緣蜱、鴿銳緣蜱、游走鈍緣蜱、 毛白鈍緣蜱、毛白鈍緣蜱豬亞種和薩氏鈍緣蜱。術(shù)語“同源物”還旨在包括來自下述動物的 OmCI蛋白序列蚊物種，包括庫蚊屬、按蚊屬和伊蚊屬的物種，特別是致乏庫蚊、埃及伊蚊和岡比亞按蚊；跳蚤物種，例如貓櫛首蚤(貓蚤)；馬蠅；白蛉；墨蚊；舌蠅；虱；螨；水蛭；和扁形蟲。在一個實(shí)施方式中，OmCI多肽含有(a)氨基酸序列SEQ ID NO :3，其已經(jīng)過修飾而消除了 LK/E結(jié)合活性；(b)與氨基酸序列SEQ ID NO 3的一致性至少為60%的變體氨基酸序列，其已經(jīng)過修飾而消除了 LK/E結(jié)合活性；(c)與SEQ ID NO 2的氨基酸殘基19至168間的氨基酸序列的一致性至少為60% 的SEQ ID NO 2的變體氨基酸序列，其已經(jīng)過修飾而消除了 LK/E結(jié)合活性；或(d)缺乏LK/E結(jié)合活性的氨基酸序列(a)、(b)或(c)的片段。變體多肽是如下多肽其氨基酸序列與SEQ ID NO :2或3的氨基酸序列不同，但其保留了與本發(fā)明的OmCI多肽相同的本質(zhì)特征，并且已經(jīng)過修飾而消除了 LK/E結(jié)合活性。通常將下述多肽認(rèn)為是上述蛋白的變體所述多肽不僅在與本發(fā)明的經(jīng)修飾的 OmCI多肽中所見位置等同的位置上具有一個或多個LK/E結(jié)合活性消除性修飾，而且與SEQ ID NO 2或3的氨基酸序列的一致性超過約50 %、55 %、60 %或65 %，優(yōu)選為至少60 %、至少70 %、至少80 %、至少90 %，且特別優(yōu)選為至少95 %、至少97 %或至少99 %。只要所述肽可保持本發(fā)明的OmCI多肽的活性，此類變體可以包括等位基因變體以及在蛋白序列內(nèi)的單個氨基酸或氨基酸組的缺失、修飾或添加；而且此類變體經(jīng)額外修飾而消除了 LK/E結(jié)合活性。SEQ ID NO :3變體的一致性可以在SEQ IDNO :3所示序列的至少50個、至少100個、 至少130個或至少140個或更多個連續(xù)氨基酸的區(qū)域上測量，或更優(yōu)選在全長SEQ ID NO 3上測量。氨基酸一致性可以用任何適合的算法來計算。例如，UWGCG軟件包提供了可以用來計算同源性的BESTFIT程序(例如以其默認(rèn)設(shè)置來使用)(Devereux等(1984)Nucleic Acids Research 12,387-395)。PILEUP和BLAST算法可以用來計算同源性或用來排列序列 (例如鑒定等價序列或?qū)?yīng)序列(通常用其默認(rèn)設(shè)置))Jf^nAltschul S. F. (1993) J Mol Evol 36 :290-300 和 Altschul，S，F(xiàn) 等(1990) J Mol Biol 215 :403-410 中所述。執(zhí)行BLAST分析的軟件通過美國國家生物技術(shù)信息中心(http//www. ncbi. nlm. nih.gov/)而向公眾開放。該算法包括首先通過鑒定查詢序列中的長度為W的短字段來鑒定出高分值序列對(HSP)，所述短字段在與數(shù)據(jù)庫序列中長度相同的字段進(jìn)行比對時會形成匹配或滿足某個正值的閾值評分Τ。T稱作鄰近字段評分閾值(neighbourhood word score threshold) (Altschul等，見上)。這些初始的鄰近字段命中項(hit)可作為種子來啟動搜索，從而發(fā)現(xiàn)包含其的HSP。只要累積比對評分能夠得到提高，字段命中項就會始終沿每個序列進(jìn)行雙向延伸。在下述情況發(fā)生時，字段命中項沿每個方向的延伸中止累積比對評分從其曾經(jīng)達(dá)到的最高值下落了量X ；累積評分因一個或多個負(fù)分殘基比對的積累而變?yōu)?或更低；或者已達(dá)到了序列的任一末端。BLAST算法的參數(shù)W、T和X決定了比對的靈敏度和速度。BLAST程序使用的默認(rèn)設(shè)置為字段長度(W)為11，評分矩陣為BL0SUM62(參見 Henikoff 和 Henikoff (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 :10915-10919)，比對數(shù)(B) 為50，期望值(E)為10，M = 5，N = 4，且對兩條鏈都進(jìn)行比較。BLAST算法對兩個序列的相似性進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析；參見例如Kar 1 in和 Altschul (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :5873_5787。BLAST 算法所提供的一種相似性度量是最小概率總和(smallest sum probability) (P(N))，其提供兩條核苷酸或氨基酸序列間會隨機(jī)出現(xiàn)匹配的概率的指示。例如，認(rèn)為一條序列與另一條序列相似的條件是在將第一序列與第二序列進(jìn)行比較時最小概率總和小于約1、優(yōu)選小于約0. 1、更優(yōu)選小于約 0.01、最優(yōu)選小于約0. 001。 變體序列的差異通常為至少1、2、3、5、10、20、30、50或更多個突變(其可以是氨基酸的替換、缺失或插入)。例如，可以做出1 50、2 40、3 30或5 20個氨基酸替換、 缺失或插入。所述替換優(yōu)選為保守性替換，例如表1所示。在第二列的同一區(qū)塊中的氨基酸、優(yōu)選在第三列同一行中的氨基酸可以相互替換。
權(quán)利要求
1.一種OmCI多肽，其具有降低的白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性或缺乏白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性。
2.如權(quán)利要求1所述的OmCI多肽，其中，所述OmCI多肽是毛白鈍緣蜱的源自蜱的補(bǔ)體抑制劑或其功能等價物，所述功能等價物具有降低的白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E) 結(jié)合活性或缺乏白細(xì)胞三烯/羥基類二十烷酸(LK/E)結(jié)合活性。
3.如權(quán)利要求1或2所述的多肽，其中，所述OmCI多肽含有(a)氨基酸序列SEQID NO :3，所述序列已經(jīng)過修飾而消除或降低了 LK/E結(jié)合活性；(b)與所述氨基酸序列SEQID NO :3的一致性至少為60%的變體氨基酸序列，所述變體氨基酸序列已經(jīng)過修飾而消除或降低了 LK/E結(jié)合活性；(C)SEQ ID NO :2的變體氨基酸序列，所述變體氨基酸序列與SEQ ID NO 2的氨基酸殘基19至168間的氨基酸序列的一致性至少為60 %，且所述變體氨基酸序列已經(jīng)過修飾而消除或降低了 LK/E結(jié)合活性；或(d)缺乏LK/E結(jié)合活性的氨基酸序列(a)、(b)或(c)的片段。
4.如前述權(quán)利要求中任一項所述的多肽，其中，所述OmCI多肽的結(jié)合腔內(nèi)的一個或多個氨基酸殘基已突變。
5.權(quán)利要求4的多肽，其中，待突變的一個或多個氨基酸殘基選自W!e36、Arg54、 Leu57、Gly59、Val72、Met74、Phe76、Trp87、Phe89、Glnl05、Argl07、Hisll9、Aspl21 和 Trpl33，其中氨基酸的編號參考SEQ ID NO :2。
6.權(quán)利要求4或5的多肽，其中，至少一個氨基酸突變選自Wie36Trp和Gly59Trp。
7.如前述權(quán)利要求中任一項所述的多肽，其缺乏LTB4結(jié)合活性。
8.一種多核苷酸，其編碼前述權(quán)利要求中任一項所述的OmCI多肽。
9.一種載體，其包含權(quán)利要求8所述的多核苷酸。
10.一種宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求8所述的多核苷酸或權(quán)利要求9所述的載體。
11.一種藥物組合物，其包含藥物可接受的載劑和(a)缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽；(b)編碼缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸；或(c)包含編碼缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸的載體。
12.一種用于治療由補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病或病癥的組合物，其包含(a)具有降低的LK/E結(jié)合活性或缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽；(b)編碼具有降低的LK/E結(jié)合活性或缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸；或(c)包含編碼具有降低的LK/E結(jié)合活性或缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸的載體。
13.如權(quán)利要求11或12所述的組合物，其中，所述OmCI多肽如權(quán)利要求1 5中任一項所定義，所述編碼OmCI多肽的多核苷酸如權(quán)利要求6或7所定義，或所述載體如權(quán)利要求9所定義。
14.如權(quán)利要求11 13中任一項所述的組合物，其中，所述疾病或病癥選自老年性黃斑變性(AMD)、阿爾茨海默病、變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎、同種異體移植、包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在內(nèi)的各種關(guān)節(jié)炎、哮喘、成人型呼吸窘迫綜合征、灼傷、癌、克羅恩氏病、皮膚肌炎、腎小球性腎炎、溶血性貧血、血液透析、遺傳性血管性水腫、特發(fā)性膜性腎病、宮內(nèi)生長受限(IUGR)、缺血再灌注損傷、運(yùn)動神經(jīng)元疾病、多系統(tǒng)器官衰竭、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、心肌梗塞、 腎炎、類天皰瘡、心肺轉(zhuǎn)流術(shù)后、干癬、敗血性休克、自然流產(chǎn)、中風(fēng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、葡萄膜炎、血管滲漏綜合征和異種移植。
15. 一種治療或預(yù)防有需要的受試者的由補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，所述方法包括向受試者施用治療有效量的缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽或編碼缺乏LK/E結(jié)合活性的OmCI多肽的多核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明的方法涉及缺乏LK/E結(jié)合活性的經(jīng)修飾的OmCI多肽或編碼經(jīng)修飾的OmCI多肽的多核苷酸，并且涉及此類多肽和多核苷酸在治療補(bǔ)體介導(dǎo)的疾病或病癥中的應(yīng)用。
文檔編號A61P37/00GK102341407SQ201080010762
公開日2012年2月1日 申請日期2010年2月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月5日
發(fā)明者M·A·怒恩, P·C·羅韋爾西, S·M·萊 申請人:自然環(huán)境研究會