專利名稱：苯酚類化合物在制備抗補體藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域，涉及苯酚類化合物及其在制備抗補體藥物中的新用途； 所述的苯酚類化合物來源于鴨跖草、紫草或金蕎麥。
背景技術(shù)：
補體系統(tǒng)的過度激活會引發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關(guān)節(jié)炎、急性呼吸窘迫綜合征等多種疾病?？寡a體藥物研究多年來一直是世界藥學研究的熱點和重點。目前對此類疾病尚無理想的治療藥物，因此臨床上急需高效、低毒、專一的新型補體抑制劑。直接從天然產(chǎn)物中研究開發(fā)補體抑制劑的成本低，并且大多數(shù)活性成分作為天然產(chǎn)物的一部分可以直接被機體消化吸收，因此近年來從天然來源中尋找新的具有抗補體活性的藥物受到人們越來越多的關(guān)注。國內(nèi)外的學者從包括海洋生物在內(nèi)的天然產(chǎn)物中分離得到大量的具有補體系統(tǒng)抑制作用的單體化合物，為抗補體藥物的研究與開發(fā)提供了廣闊的前景。鴨跖草科(Commelinaceae)鴨跖草屬(Commelina)植物主要分布于熱帶，少數(shù)種產(chǎn)于亞熱帶和溫帶地區(qū)。中國產(chǎn)13屬49種，多分布于長江以南各省，尤以西南地區(qū)為盛。 鴨跖草為鴨跖草屬(Commelina)植物鴨跖草(Commelina communis Linn.)的全草，性溫味辛，專入脾胃兩經(jīng)，具有清熱解毒，涼血，利尿。功效，在臨床上可單獨或與其他中藥合用用于治療流行性感冒、急性扁桃腺炎、咽炎、水腫、小兒肺炎、泌尿系感染、急性腸炎、黃疸型肝炎、高血壓、關(guān)節(jié)腫育、痢疾、麥粒腫、毒蛇咬傷、瘡療腫毒、痔瘡等一系列與補體系統(tǒng)過度激活所引起的疾病。近年來對鴨跖草的研究僅集中在化學成分的分離及結(jié)構(gòu)鑒定上，從中分離得到了一些黃酮類、留體、萜類化合物，但是迄今為止尚未見對補體系統(tǒng)具有抑制作用的化合物的報道。新疆紫草(Arnebiaeuchroma(Royle) Johnst)為紫草科(Boraginaceae)紫草屬(Arnebia)植物，又稱軟紫草，擬紫草屬植物，主產(chǎn)于新疆，多年生草本，分布于新疆的天山南北坡和西藏的西部以及西伯利亞等地，多生長于海拔2500 4200米的山地礫石質(zhì)陽坡、洪積扇、草地及草甸等處。新疆紫草的干燥根味苦，性寒。有涼血活血、清熱解毒、滑腸通便的功能，可用于預防麻疹、熱病斑疹、黃疸、紫癜、吐衄尿血、血淋、血痢、癰腫瘡毒、丹毒、濕疹、燒傷、熱結(jié)便秘。近年來，紫草的藥理活性、臨床應用及其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)研究較多，并且取得了大量的成果，發(fā)現(xiàn)了紫草中含有萘醌、苯醌、生物堿、酸性多糖等多種生理活性成分，這些成分具有相應的抗菌、抗炎、抗癌、抗生育、增強免疫力、降血糖、護肝等多種作用。近年來對紫草的研究僅集中在化學成分的分離及結(jié)構(gòu)鑒定上，從中分離得到了一些苯醌類、單萜苯酚類等化合物，但是迄今為止尚未見苯酚類化合物及其對補體系統(tǒng)具有抑制作用的報道。金蕎麥為蓼禾斗(Polygonaceae)蕎麥屬 (Fagopyrum)植物金蕎麥(Fagopyrum dibotrys (D. Don) Hara)的干燥根莖。屬于國家II級重點保護野生植物，生于荒地、路旁、 河邊陰濕地。主要分布于全國多個省區(qū)，具有清熱解毒、活血消癰、祛風除濕瘡毒、蛇蟲咬傷等功效。主治肺熱咳喘、咽喉腫痛、痢疾、風濕痹證、跌打損傷和癰腫癌等?，F(xiàn)代藥理研究證明其具有抗癌和抑菌等作用?；瘜W成分研究表明其中主要成分為單寧類化合物，尚未見苯酚類化合物及其抗補體作用的報道。本發(fā)明的目的是提供新的具有抗補體活性的物質(zhì)，具體涉及苯酚類化合物，尤其是來源于鴨跖草、紫草或金蕎麥中的苯酚類化合物，所述的苯酚類化合物包括甲基苯酚 (1)、6_甲氧基-3，5-二甲基-1，2，4_苯三酚(2)、1，2，4_苯三酚(3)、異紫草酚(4)、龍膽酸戊酯(5)、4_甲氧基聯(lián)苯(6)、2，6- 二甲氧基-3-甲基-對苯二酚(7)、1，2，3，4-苯四酚(8) 和2,4, 6-三甲氧基-1，3，5-苯三酚(9)。本發(fā)明的進一步目的是提供上述苯酚類化合物在制備抗補體藥物中的用途。本發(fā)明應用現(xiàn)代藥理篩選方法，對植物藥中抗補體活性物質(zhì)進行研究，從鴨跖草
(Comme 1 inaceae)甲鳥妬胃屬(Commelina) ^直·甲鳥 KCommeIina communis Linn.)
全草乙醇提取物的正丁醇部位、紫草科(Boraginaceae)紫草屬(Arnebia)植物新疆紫草(Arnebia euchroma(Royle) Johnst)干燥根乙醇提取物的乙酸乙酯部位或蓼科 (Polygonaceae)養(yǎng)麥屬(Fagopyrum)植物金養(yǎng)麥(Fagopyrum dibotrys (D. Don) Hara) 的干燥根莖的乙醇提取物的正丁醇部位分離得到苯酚類活性物質(zhì)并證實其有對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑和旁路途徑均有較強的抑制作用。 本發(fā)明的活性苯酚類化合物具有式 I的化學結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.式I的苯酚類化合物，
2.按權(quán)利要求1所述的苯酚類化合物，其特征在于，其中，當R1=OH, R2= R3=R5=R6=H, R4=CH3時，化合物為對甲基苯酚(1)；當R1=K= R4=OH, R3= R5=CH3, I^6=OCH3時，化合物為 6-甲氧基-3，5-二甲基-1，2，4-苯三酚(2);當 R1=K=R4=OH, R3=Ii5=Ii6=H 時，化合物為 1，2，4-苯三酚(3)；當 Ii1=OH, R4-R6=OCH2C(CH3)CHCH2CH2C(CH3)CHCH2 時，化合物為異紫草酚 (4)；當 R1=R4=OH, R2=COOC5H11, R3=R5=R6=H 時，化合物為龍膽酸戊酯(5)；當 Ii1=OCH3, R2=H, R3=-C6H5 時，4-甲氧基聯(lián)苯(6);當 R1=R4=OH, R2=R6=OCH3, R3=CH3, R5=H 時，化合物為 2，6- 二甲氧基-3-甲基-對苯二酚(7);當R1=R2=R3=R4=OH, R5=R6=H時，化合物為1，2，3，4-苯四酚 (8)；當 R1=R3=R5=OH, R2=R4=R6=OCH3 時，化合物為 2，4，6-三甲氧基-1，3，5-苯三酚(9)。
3.權(quán)利要求1的式I的苯酚類化合物的制備方法，其特征在于，從鴨跖草全草乙醇提取物的正丁醇部位、紫草干燥根乙醇提取物的乙酸乙酯部位或金蕎麥的干燥根莖的乙醇提取物的正丁醇部位分離得到苯酚類活性物質(zhì)，其包括步驟取鴨跖草全草粗粉，用95%乙醇室溫冷浸，合并提取液濃縮至無醇味，提取液加水稀釋，依次以石油醚，乙酸乙酯和正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液濃縮至干即得正丁醇部位； 正丁醇部位經(jīng)干法上樣進行硅膠柱層析，以石油醚，60 90°C、石油醚-丙酮、丙酮梯度洗脫，流份以反復柱層析，SephadexLH-20純化和制備層析，分離得到所述的化合物(1)和(2); 或，取紫草根粗粉20 kg,室溫下以95%乙醇反復冷浸、滲漉提取數(shù)次后，減壓回收溶劑，得到浸膏820 g，浸膏懸浮于蒸餾水中，以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯萃取物420 g;乙酸乙酯萃取物180 g經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚，60 90°C、石油醚-丙酮、丙酮梯度洗脫，所得流分以不同洗脫劑進行反復硅膠柱層析，SephadexLH-20純化和制備色譜， 分離得到化合物(3)、(4)、(5)和(6)；或，取金蕎麥根莖粗粉Mkg，用乙醇室溫冷浸，合并提取液濃縮至無醇味，提取液加水稀釋至2L，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液濃縮至干即得正丁醇萃取物790 g ；正丁醇部位220經(jīng)干法上樣進行硅膠柱層析，以氯仿、氯仿-甲醇、甲醇梯度洗脫， 所得流分以不同洗脫劑進行反復硅膠柱層析，SephadexLH-20純化和制備層析，分離得到化合物(7)，(8)和(9)。
4.按權(quán)利要求3的方法，其特征在于，制備化合物(1)和(2)的步驟中，石油醚-丙酮5:1洗脫所得流份，經(jīng)反復柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑，梯度洗脫，流份經(jīng) SephadexLH-20純化，甲醇洗脫，得到化合物(1)；石油醚-丙酮2 1洗脫所得流份，以氯仿-甲醇5 1為展開劑，制備層析，得到化合物(2)。
5.按權(quán)利要求3的方法，其特征在于，制備化合物化合物(3)、(4)、(5)和(6)的步驟中，石油醚-丙酮3:1洗脫所得流份，經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿-甲醇20:1為洗脫劑，流份經(jīng)制備色譜，以氯仿-甲醇10:1為展開劑，得到化合物(3)和(4)；石油醚-丙酮3 1洗脫所得流份，經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿-甲醇20 1為洗脫劑，流份經(jīng)制備色譜，以氯仿-甲醇15:1為展開劑，得到化合物(5 )；石油醚-丙酮2 1洗脫所得流份，經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿-甲醇20 1為洗脫劑，所得流份經(jīng)kphadexLH-20凝膠色譜純化，甲醇為洗脫劑，得到化合物(6)。
6.按權(quán)利要求3的方法，其特征在于，制備化合物(7)，(8)和(9)的步驟中，氯仿-甲醇10:1洗脫所得流份，經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮4:1為洗脫劑，流份經(jīng) SephadexLH-20純化，以氯仿-甲醇1 1為洗脫劑，得到化合物(7 )；氯仿-甲醇2:1洗脫所得流份，經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮1 1為洗脫劑，流份經(jīng) SephadexLH-20純化，以甲醇為洗脫劑，得到化合物(8)；氯仿-甲醇3:1洗脫所得流份，經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮3:1為洗脫劑，流份經(jīng) SephadexLH-20純化，以甲醇為洗脫劑，所得流份經(jīng)制備色譜，以氯仿-甲醇2:1為展開劑， 得到化合物(9)。
7.權(quán)利要求1的苯酚類化合物在制備抗補體藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬中藥制藥領(lǐng)域,涉及式1的苯酚類化合物及其在制備抗補體藥物中的新用途。本發(fā)明從鴨跖草科鴨跖草屬植物鴨跖草乙醇提取物的正丁醇部位、紫草科紫草屬植物新疆紫草干燥根乙醇提取物的乙酸乙酯部位和蓼科蕎麥屬植物金蕎麥的干燥根莖的乙醇提取物的正丁醇部位分離得到苯酚類活性物質(zhì)，并通過體外抗補體活性篩選試驗證實其對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑和旁路途徑具有很強的抑制作用。所述化合物對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑抑制作用的CH50為41±8μg/ml～278±11μg/ml，對旁路途徑抑制作用的AP50為39±5μg/ml～761±110μg/ml，所述化合物可制備抗補體藥物。
文檔編號C07C67/48GK102249862SQ20111002432
公開日2011年11月23日 申請日期2011年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月19日
發(fā)明者金家宏, 陳道峰 申請人:復旦大學