一株降解苯酚類化合物的菌株及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一株降解苯酚類化合物的菌株及其應(yīng)用,所述的菌株分類命名為Sphingomonas paucimobilis DL?10,已于2014年3月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC,保藏編號(hào)為:CCTCC NO:M 2014058。其16S rDNA的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。菌株DL?10為好氧型微生物,最適生長(zhǎng)溫度為30℃,最適生長(zhǎng)pH為6.0,NaCl濃度高于3%時(shí)其生長(zhǎng)即受到明顯的抑制。菌株DL?10在12 h內(nèi)可以完全降解100 mg/L的苯酚,并利用其作為唯一碳源生長(zhǎng),可以完全降解鄰苯二酚、對(duì)苯二酚、鄰甲基苯酚、間甲基苯酚、2,6?二甲基苯酚、3,5?二甲基苯酚、2,6?二甲基對(duì)苯二酚等苯酚類化合物降解。本發(fā)明對(duì)于工業(yè)廢水中苯酚類化合物的生物治理上具有重要的應(yīng)用價(jià)值。CCTCC NO:M201405820140303
【專利說(shuō)明】
一株降解苯酚類化合物的菌株及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物處理技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一株高效降解苯酚類化合物的菌株及其 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 含酚廢水的來(lái)源廣泛、成分復(fù)雜,如醫(yī)藥廢水、焦化廢水、化工及印染廢水等,廢水 中含有的高濃度酚類化合物會(huì)對(duì)微生物的生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用,從而增加生物處理的難度, 成為現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外含酚廢水處理技術(shù)領(lǐng)域亟待解決的一個(gè)難題。
[0003] 生物降解是農(nóng)藥在環(huán)境中的一類重要轉(zhuǎn)化過(guò)程。微生物由于大量存在于自然界、 并且具有種類繁多、繁殖迅速和對(duì)環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn),在農(nóng)藥的生物降解過(guò)程中起到了 重要作用。當(dāng)前國(guó)內(nèi)研究者已分離到一些能降解酚類化合物微生物,但主要集中在苯酚的 降解,其衍生物的微生物降解情況較少。聶玉冰等分離到兩株微生物Alcaligenes faecalis TF1 和Acinetobacte calcoaceticus TF2在20h內(nèi)可以降解 110mg/L的苯酸。許甜 甜等分離到兩株微生物〇61代丨3 8口31'1'-1和5口11;[1^01]10的8 8。]1'1'-3在共代謝的情況下 48h內(nèi)可以降解500mg/L的苯酚。因此,篩選高效廣譜降解苯酚衍生物的菌株,在工業(yè)廢水的 生物治理上具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的是針對(duì)工業(yè)含酚廢水對(duì)生物會(huì)產(chǎn)生高毒性,而現(xiàn)有微生物對(duì)苯酚衍 生物降解量較少的問(wèn)題,提供一種高效廣譜降解苯酚及其衍生物的微生物。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0006] -株降解苯酚類化合物的菌株,所述微生物為少動(dòng)鞘氨醇單胞菌,其分類命名為 Sphingomonas paucimobilis DL-10,已保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC,保藏編號(hào) 為:CCTCC Ν0:Μ 2014058,保藏日期為:2014年3月3日,保藏地址為:中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。
[0007] 本發(fā)明所述的菌株DL-10,其16S rDNA的核苷酸序列如序列表中SEQ ID N0:1所 不。
[0008] 本發(fā)明所述的Sphingomonas paucimobilis DL-10篩選方法:在以苯酸為唯一碳 源的無(wú)機(jī)鹽養(yǎng)基(pH 7.0)中,對(duì)含酚工業(yè)廢水中的苯酚降解菌株進(jìn)行分離篩選。
[0009] 具體地,以含酚工業(yè)廢水菌群作為篩選目標(biāo),利用含l〇〇mg/L苯酚的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基 作為介質(zhì),連續(xù)富集馴化具有苯酚利用能力的菌株,將無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基稀釋涂布至含有 100mg/L苯酚的無(wú)機(jī)鹽固體培養(yǎng)基,30°C培養(yǎng)2-3d,挑取形態(tài)不同的苯酚類化合物降解菌株 進(jìn)行劃線分離獲得純培養(yǎng),命名為菌株DL-10,再次驗(yàn)證純種微生物菌株DL-10對(duì)苯酚降解 能力,利用液相色譜檢測(cè)苯酚殘余含量。
[0010] 具體地,所述的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基是由硝酸銨1. 〇g,氯化鈉1. 〇g,磷酸二氫鉀〇. 5g,磷 酸氫二鉀1.5g,加水至1.0L配制,調(diào)節(jié)pH值至7.0,固體培養(yǎng)基加入瓊脂20.0g、121°C滅菌 20min,使用前添加終濃度100mg/L的苯酸作為碳源。
[0011] 本發(fā)明所述的Sphingomonas paucimobilis DL-10在1/3LB固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較 快,30 °C,48h可形成直徑為2mm的黃色菌落,菌落邊緣整齊,有光澤,突出,粘稠,濕潤(rùn),光滑, 不透明,菌體呈長(zhǎng)桿狀(0· 8 X 1 ·8μηι)。Sphingomonas paucimobilis DL-10的V-P試驗(yàn)、尿酶 試驗(yàn)、接觸酶試驗(yàn)為陽(yáng)性,甲基紅試驗(yàn)、檸檬酸鹽利用試驗(yàn)、淀粉水解試驗(yàn)、脂酶試驗(yàn)、吲哚 試驗(yàn)、精氨酸雙水解試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、產(chǎn)硫化氫試驗(yàn)、苯丙氨酸脫氨酶 試驗(yàn)為陰性,菌株DL-10生理生化鑒定的結(jié)果與鞘氨醇單胞菌屬的特征最為接近。
[0012] 具體地,所述的1/3LB培養(yǎng)基是由蛋白胨3.0g,酵母粉1.5g,氯化鈉3.0g,加水至 1.0L配制,調(diào)節(jié)pH值至7.0,固體培養(yǎng)基加入瓊脂20.0g、121°C滅菌20min。
[0013] 本發(fā)明的另一目的是構(gòu)建含有該苯酚類化合物降解菌株16S rDNA序列的克隆載 體以及含有該載體的工程菌株,在分子水平上對(duì)苯酚降解菌株進(jìn)行鑒定。
[0014] 本發(fā)明的目的可通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0015] 一種含有本發(fā)明所述的苯酸降解菌株Sphingomonas paucimobilis DL-10 16S rDNA序列的克隆載體。
[0016] 所述的重組克隆載體,優(yōu)選出發(fā)載體為pMD19T。
[0017] 含所述的苯酸降解菌株Sphingomonas paucimobilis DL-10 16S rDNA序列的基 因工程菌Escherich coli DH5a(pMD19T-16S)〇
[0018] 所述的基因工程菌Escherich coli DH5a構(gòu)建方法:利用引物27F:5'_ AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'和1492R:5'-TACCTTGTTACGACTT-3'擴(kuò)增菌株DL-10的 16S rDNA, 通過(guò)T/A克隆的方式連接至克隆載體pMD19T,構(gòu)建重組克隆載體pMD19T-16S,將其轉(zhuǎn)化到克 隆宿主菌Escherich coli DH5a獲得重組微生物Escherich coli DH5a(pMD19T-16S),將所 獲得的重組微生物外源片段進(jìn)行測(cè)序,NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)該16SrDNA序列,在分子水平上將菌 株DL-10鑒定至鞘氨醇單胞菌屬。
[0019] 本發(fā)明的又一目的是提供該苯酚降解菌株在苯酚類化合物降解中的應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明的目的可通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0021 ] 一株苯酸類化合物降解菌株Sphingomonas paucimobilis DL-10在廢水處理過(guò)程 中的應(yīng)用,具體步驟如下:
[0022] (1)菌株DL-10種子液培養(yǎng):從1/3LB平板上挑取菌株DL-10單菌落,分別接種于3mL 1/3LB液體培養(yǎng)基中于30°C,搖床180r · mirT1培養(yǎng)48h。然后將該菌株的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到20mL 新鮮的液體1/3LB培養(yǎng)基中,繼續(xù)培養(yǎng)18Κ6000γ · mirT1離心10min,收集菌體,用滅菌的無(wú) 機(jī)鹽培養(yǎng)基洗滌一次后,制成〇〇6(Χ)γ?= 1.0的菌懸液,即種子液。
[0023] (2)菌株DL-10降解苯酚的動(dòng)力學(xué):在苯酚終濃度為100mg/L的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中,按 5%接種量接入種子液,于30°(:,18(^.111^1震蕩培養(yǎng),每隔211取樣一次,測(cè)定006()() 1?和苯酚 的殘留濃度。
[0024] (3)溫度和pH對(duì)菌株DL-10降解苯酚的影響:在苯酚終濃度為lOOmg/1的無(wú)機(jī)鹽培 養(yǎng)基中,按5 %接種量接入種子液,分別于20 °C、25 °C、30 °C、37 °C、42 °C,pH 7 · 0,180r · min-1 震蕩培養(yǎng);分別于初始pH 4.0、6.0、7.0、8.0、10.0,30°C、180r · mirT1震蕩培養(yǎng),測(cè)定溫度和 pH對(duì)菌株DL-10降解苯酚的影響。
[0025] (4)底物初始濃度和接種量對(duì)菌株DL-10降解苯酚的影響:在苯酚終濃度為100mg/ L的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中,分別按1%、3%、5%、10%的接種量接入種子液于30°C,180r · mirT1震 蕩培養(yǎng);分別在苯酸終濃度為5011^凡、10011^凡、20011^凡、30011^凡、40011^凡、50011^凡的無(wú)機(jī) 鹽培養(yǎng)基中,按5%接種量接入種子液,于30°(:,18(^*1^1^震蕩培養(yǎng),測(cè)定底物初始濃度和 接種量對(duì)菌株DL-10降解苯酚的影響。
[0026] (5)菌株DL-10對(duì)苯酚類化合物的降解能力測(cè)定:分別在終濃度為lOOmg/1的含苯 酚,鄰苯二酚,對(duì)苯二酚,鄰甲基苯酚,間甲基苯酚,3,5_二甲基苯酚,3,4_二甲基苯酚,2,6_ 二甲基苯酚的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中,按5%接種量接入種子液,于30°C,180r · mirT1震蕩培養(yǎng),測(cè) 定菌株DL-10對(duì)苯酸類化合物的降解能力。
[0027] 將苯酚、鄰苯二酚、對(duì)苯二酚、鄰甲基苯酚、間甲基苯酚、對(duì)甲基苯酚、2,6-二甲基 苯酚、3,5-二甲基苯酚等苯酚類化合物等濃度混合,終濃度達(dá)到500m g//L作為菌株DL-10降 解底物,接種量10 %,于30°C,180r · min-1震蕩培養(yǎng)48h后,測(cè)定菌株DL-10對(duì)苯酚類化合物 混合物的降解能力。
[0028] 本發(fā)明以化工廢水為分離材料,分離純化到一株可以高效廣譜的降解酚類衍生物 的微生物,對(duì)降解基因資源的開(kāi)發(fā)利用和工業(yè)廢水修復(fù)非常具有現(xiàn)實(shí)意義。
[0029]與現(xiàn)有技術(shù)相比,該菌株對(duì)苯酸類的降解是高效,對(duì)500mg/L苯酸類混合物在48h 降解率達(dá)到80%以上,降解明顯高于現(xiàn)在國(guó)內(nèi)的苯酚降解菌。此外,該菌株對(duì)苯酚類的降解 是廣譜的,它可以降解鄰苯二酚、間苯二酚、對(duì)苯二酚等苯二酚,也可以降解鄰甲基苯酚、間 甲基苯酚等單甲基苯酚類化合物,還可以降解3,5-二甲基苯酚、2,6-二甲基苯酚、2,6-二甲 基對(duì)苯二酚等二甲基苯酚類化合物,降解譜有豐富的多樣性,適合應(yīng)用在工業(yè)廢水的生物 治理上。
【附圖說(shuō)明】
[0030]圖1是菌株DL-10降解苯酚效果圖。
[0031]圖2是菌株DL-10的電鏡圖片。
[0032]圖3a是溫度對(duì)菌株DL-10生長(zhǎng)的影響示意圖。
[0033]圖3b是pH值對(duì)菌株DL-10生長(zhǎng)的影響示意圖。
[0034]圖3c是裝液量對(duì)菌株DL-10生長(zhǎng)的影響示意圖。
[0035]圖3d是鹽濃度對(duì)菌株DL-10生長(zhǎng)的影響示意圖。
[0036]圖4是苯酚降解曲線及菌株DL-10生長(zhǎng)曲線。
[0037]圖5a是溫度對(duì)菌株DL-10降解苯酚的影響示意圖。
[0038]圖5b是pH值對(duì)菌株DL-10降解苯酚的影響示意圖。
[0039]圖5c是底物初始濃度對(duì)菌株DL-10降解苯酚的影響示意圖。
[0040]圖5d是接種量對(duì)菌株DL-10降解苯酚的影響示意圖。
[0041 ]圖5e是金屬離子對(duì)菌株DL-10降解苯酚的影響示意圖。
[0042] 本發(fā)明所述的生物材料,其分類命名為Sphingomonas paucimobilis DL-10,已保 藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC),保藏編號(hào)為:CCTCC NO:M2014058,保藏日期 為:2014年3月3日,保藏地址為:中國(guó).武漢.武漢大學(xué)。
【具體實(shí)施方式】
[0043] 下面結(jié)合【附圖說(shuō)明】和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步描述,但不應(yīng)視為 對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。下述的實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法無(wú)特殊說(shuō)明均為常規(guī)方法。 下述的實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)試劑耗材等無(wú)特殊說(shuō)明均可從商業(yè)用途購(gòu)買。
[0044] 實(shí)施例1
[0045] 苯酸降解菌株Sphingomonas paucimobilis DL-10的分離篩選:
[0046] 取5mL含酸工業(yè)廢水樣品置于100mL含50mg/L苯酸的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中,于30°C、 180r · mirT1培養(yǎng)2-3d。用紫外掃描儀測(cè)定富集液對(duì)苯酸的降解情況,確定苯酸被降解后,以 10%的接種量接入到含75mg/L苯酚無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中,繼續(xù)富集并測(cè)定降解情況,按此方法 直至苯酚濃度提高至200mg/L,并傳代3次。
[0047]將苯酚富集液經(jīng)梯度稀釋后涂布以100mg/L苯酚為唯一碳源的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基平板 上,于30°C培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)2-3d。將平板上長(zhǎng)出的菌落形態(tài)不同的單菌落分別劃線于1/ 3LB平板純化,并接種于以50mg/L苯酸為唯一碳源的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中,于30°C、180r · mirT1 搖床培養(yǎng)2d后,取2mL樣品離心收集上清,在波長(zhǎng)200-350nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描,苯酚最大 吸收峰為240nm和280nm,根據(jù)特征吸收峰的變化情況來(lái)確定富集液和菌株對(duì)苯酚的降解能 力。如圖1所示,通過(guò)紫外掃描發(fā)現(xiàn),編號(hào)為DL-10的菌株可以使苯酚的紫外吸收?qǐng)D譜消失。 [0048]上述無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基是由硝酸銨1.0g,氯化鈉1.0g,磷酸二氫鉀0.5g,磷酸氫二鉀 1.5g,加水至1.0L配制,調(diào)節(jié)pH值至7.0,固體培養(yǎng)基加入瓊脂20.0g、121°C滅菌20min,使用 前添加苯酚作為碳源。
[0049] 上述1/3LB培養(yǎng)基是由蛋白胨3.0g,酵母粉1.5g,氯化鈉3.0g,加水至1.0L配制,調(diào) 節(jié)pH值至7.0,固體培養(yǎng)基加入瓊脂20.0g、121°C滅菌20min。
[0050]將DL-10降解苯酚前后的培養(yǎng)液冷凍干燥后用2mL的甲醇溶解,過(guò)0.22um有機(jī)濾 膜,樣品用于高效液相色譜檢測(cè)(HPLC)。未接菌的對(duì)照培養(yǎng)液中苯酚的保留時(shí)間為 3.97min,而接種菌株DL-10并培養(yǎng)24h后,培養(yǎng)液中苯酚的含量明顯下降,但是苯酚開(kāi)環(huán)后 的產(chǎn)物極容易降解,不會(huì)形成累積,所以沒(méi)有檢測(cè)到中間代謝產(chǎn)物。
[0051 ] 實(shí)施例2
[0052] 苯酸降解菌株Sphingomonas paucimobilis DL-10的鑒定及其生長(zhǎng)特性:
[0053] DL-10 的鑒定:
[0054] 對(duì)DL-10進(jìn)行 16S rDNA鑒定:利用引物27F:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'和 1492R: 5' -TACCTTGTTACGACTT-3'擴(kuò)增菌株DL-10的16S rDNA,通過(guò)T/A克隆的方式連接至克 隆載體PMD19T,構(gòu)建重組克隆載體pMD19T-16S,將其轉(zhuǎn)化到克隆宿主菌Escherich coli DH5a獲得重組微生物Escherich coli DH5a(pMD19T_16S),將所獲得的重組微生物外源片 段進(jìn)行測(cè)序,NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)該16S rDNA序列,在分子水平上將菌株DL-10鑒定至鞘氨醇單 胞菌屬,其16S rDNA的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 1所示。
[0055] DL-10的生長(zhǎng)特性:
[0056] Sphingomonas paucimobilis DL-10在LB平板上生長(zhǎng)較慢,30°C,96h可形成直徑 為2_的黃色菌落,菌落邊緣整齊,有光澤,突出,粘稠,濕潤(rùn),光滑,不透明。其電鏡圖片中菌 體呈長(zhǎng)桿狀,大小為〇.8X 1.8μπι,如圖2所示,基于其16S rDNA序列以及生理生化特征,菌株 DL-10 被鑒定為 Sphingomonas 屬。
[0057] 菌株DL-10的最適生長(zhǎng)溫度為30°C,在37°C也可以很好的生長(zhǎng),但在較低溫度(20 °(:和25°〇和較高溫度(42°C)時(shí),其生長(zhǎng)則受到明顯抑制。菌株DL-10在pH為6和7時(shí),生長(zhǎng)良 好,其最適生長(zhǎng)pH為6;當(dāng)pH為5和8時(shí),其生長(zhǎng)就受到明顯抑制,菌株DL-10生長(zhǎng)時(shí)隨著搖瓶 裝液量的增加其生長(zhǎng)量下降,表明菌株DL-10也是好氧型微生物。菌株DL-10在NaCl濃度為 2%時(shí)生長(zhǎng)良好;當(dāng)NaCl濃度為3%時(shí)其生長(zhǎng)即受到明顯的抑制,如圖3a-3d所示。
[0058] 實(shí)施例3
[0059] 苯酸降解菌Sphingomonas paucimobilis DL-10的降解特性:
[0060]從1/3LB平板上挑取菌株DL-10單菌落,分別接種于3mL 1/3LB液體培養(yǎng)基中于30 °C,搖床180r · mirT1培養(yǎng)48h。然后將該菌株的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接到20mL新鮮的液體1/3LB培養(yǎng)基 中,繼續(xù)培養(yǎng)1811。600〇1· · mirT1離心10min,收集菌體,用滅菌的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基洗滌一次后, 制成0D_· = 1 · 0的菌懸液,即種子液。
[0061] 在苯酚終濃度為100mg/L的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基中,按5%接種量接入0D6Q()nm=1.0菌株 DL-10種子液,于30°C、180r · min-1震蕩培養(yǎng),每隔2h取樣一次,測(cè)定0D6mn4P苯酚的濃度。 [0062]由圖4可以看出,菌株DL-10接種到培養(yǎng)基中2h,就開(kāi)始降解苯酚,而沒(méi)有明顯的延 滯現(xiàn)象;之后降解速率逐漸增加,到12h就已將100mg/L的苯酚基本降解完全。另外,從圖中 還可以看出,隨著苯酚的降解,菌株DL-10的生長(zhǎng)量經(jīng)歷了2h的停滯后,開(kāi)始逐漸增加;當(dāng)苯 酚完全降解以后,菌株DL-10的生長(zhǎng)量也達(dá)到最大;并且在12-14h時(shí),由于培養(yǎng)基中已無(wú)苯 酚可利用,這時(shí)菌株DL-10的生長(zhǎng)量開(kāi)始下降。該結(jié)果表明菌株DL-10可以利用苯酚進(jìn)行生 長(zhǎng)。
[0063] 菌株DL-10在25°C和30°C時(shí),對(duì)苯酚的降解率基本相同;而在37°C時(shí),苯酚的降解 率就受到明顯抑制;當(dāng)溫度為42°C時(shí),幾乎不降解苯酸,如圖5a所示。菌株DL-10在降解苯酚 時(shí)對(duì)pH的適應(yīng)范圍很寬,在pH 5-9之間均具有很好的效果;即使在pH為4時(shí),苯酚的降解率 也可以達(dá)到57%。將此結(jié)果與菌株DL-10的生長(zhǎng)pH相比,發(fā)現(xiàn)其降解pH范圍比生長(zhǎng)pH范圍寬 的多,說(shuō)明菌株DL-10產(chǎn)生的降解酶具有較強(qiáng)的pH適應(yīng)性,如圖5b所示。菌株DL-10對(duì)苯酚的 降解速率隨著底物濃度的增加而降低。當(dāng)苯酚初始濃度為50mg/L時(shí),其在12h的降解率為 95.5% ;而當(dāng)苯酚初始濃度為200mg/L時(shí),其在12h的降解率仍然可以達(dá)到75.3%,說(shuō)明該菌 株對(duì)苯酚具有高效的降解效率如圖5c所示。隨著接種量的增大,苯酚的降解速率明顯增加。 當(dāng)接種量為1 %時(shí),苯酚在12h的降解率為67.3% ;而當(dāng)接種量為5%和10%時(shí),苯酚分別在 10h和6h時(shí)即基本降解完全如圖5(1所示。Fe2+、Ca 2+、Mg2+和Ba2+對(duì)菌株DL-10的降解能力幾乎 沒(méi)有影響;Zn 2+對(duì)菌株DL-10的降解能力有輕微的抑制作用;而Cu2+、Cr3+、C 〇2+、Mn2+、Ni2H +則對(duì)菌株DL-10的降解能力有明顯的抑制作用,在有Mn2+存在時(shí)苯酚的降解率僅為21%,如 圖5e所示。
[0064] 實(shí)施例4
[0065] 苯酸降解菌Sphingomonas paucimobilis DL-10對(duì)其他苯酸類化合物的降解:
[0066] 菌株Sphingomonas paucimobilis DL-10可以將苯酸、鄰苯二酸、對(duì)苯二酸、鄰甲 基苯酚、間甲基苯酚、2,6-二甲基苯酚、3,5-二甲基苯酚、2,6-二甲基對(duì)苯二酚等苯酚類化 合物降解至HPLC檢測(cè)不到物質(zhì),如表1所示,說(shuō)明菌株DL-10可以完全礦化上述底物。
[0067] 將苯酚、鄰苯二酚、對(duì)苯二酚、鄰甲基苯酚、間甲基苯酚、對(duì)甲基苯酚、2,6-二甲基 苯酚、3,5-二甲基苯酚等苯酚類化合物等濃度混合,終濃度達(dá)到500m g//L作為菌株DL-10降 解底物,接種量10 %,于30 °C,180r · mirT1震蕩培養(yǎng)48h后,苯酚、鄰苯二酚、對(duì)苯二酚、鄰甲 基苯酚的降解率在90 %以上,間甲基苯酚、對(duì)甲基苯酚、2,6-二甲基苯酚的降解率在75 %左 右,3,5-二甲基苯酚的降解率在60 %左右。 [0068]表1菌株DL-10的降解底物譜
[0069]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一株降解苯酸類化合物的菌株,其特征在于,分類命名為OffiOfias pauciffioMhs DL-10,已于2014年3月3日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC,保藏編號(hào) 為:CCTCC NO:M 2014058。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌株,其特征在于,其16S rDNA的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO: 1所示。3. 權(quán)利要求1所述菌株的篩選方法,其特征在于,利用含苯酚的無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基作為介 質(zhì),從含酚工業(yè)廢水中連續(xù)富集馴化具有苯酚利用能力的菌株;所述苯酚濃度為100 mg/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基是由硝酸銨1.0 g,氯化 鈉1.0 g,磷酸二氫鉀0.5 g,磷酸氫二鉀1.5 g,加水至1.0 L配制,調(diào)節(jié)pH值至7.0,固體 培養(yǎng)基加入瓊脂20.0 g、121°C滅菌20 min,使用前添加苯酚作為碳源。5. 權(quán)利要求1~2所述菌株在苯酚類化合物降解中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C02F3/34GK105907688SQ201610481724
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年6月27日
【發(fā)明人】董維亮, 馬江鋒, 章文明, 信豐學(xué), 姜岷
【申請(qǐng)人】南京工業(yè)大學(xué)