專利名稱：一種蒲公英提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物中草藥中活性物質(zhì)的制備方法，確切地說是一種從中藥材蒲 公英中提取分離富含活性物質(zhì)提取物的方法。
背景技術(shù)：
蒲公英，別名蒲公草、黃花地丁、尿床草、婆婆丁，屬菊科屬多年生草本植物，是 藥食兼用的植物。中華人們共和國藥典2005年版(一部)規(guī)定本品為菊科植物蒲公英 Taraxacunmongo 1 icum Hand-Mazz、減地蒲公英Taraxacum sinicum Kitag或同屬數(shù)禾中植物 的干燥全草。蒲公英原產(chǎn)歐洲，全世界約2000余種。我國有70種，至少有27種中藥蒲公 英來源于本屬，其中以蒲公英T. mongolicum分布最廣，幾遍及全國多數(shù)地區(qū)。蒲公英是一種中草藥。《本草綱目》記載“蒲公英主治婦人乳癰腫，水煮汁飲及封 之立消。解食毒，散滯氣，清熱毒，化食毒，消惡腫、結(jié)核、疔腫。” 2005年版中國藥典蒲公英 項中標明蒲公英的功能為清熱解毒、消腫散結(jié)、利尿通淋，用于治療疔瘡腫毒、乳癰、目赤、 咽痛、肺癰、腸癰、濕熱黃疸和熱淋澀痛。很多研究表明蒲公英具有廣譜抗菌作用、抗胃損傷 作用、保肝膽作用、抗腫瘤作用、抗內(nèi)毒素作用、免疫調(diào)節(jié)作用、抗氧自由基作用等。另外蒲 公英對女性留體激素有影響，蒲公英具有催乳作用，也可用于泌乳不暢引起的乳房腫脹；具 有改善膽固醇血癥與刺激雌激素分泌的作用。蒲公英具有上述等功效，是因為葉子和花中有多酚類物質(zhì)，其中含量最豐富的酚 類物質(zhì)是羥基苯乙烯酸衍生物，尤其是咖啡酸和綠原酸等含量較高，為蒲公英的主要藥理 活性成分。凌云等從蒲公英中得到咖啡酸(caffeic acid)和綠原酸(chlorogenic acid), 其中綠原酸為首次從蒲公英屬植物中分得，為蒲公英抗菌的主要有效成分(凌云、鄭俊 華.中藥蒲公英的研究進展.中國現(xiàn)代應用藥學雜志，1998，15(3) 11)；從堿地蒲公英 T. sinicum的干燥全草中分得咖啡酸、阿魏酸、綠原酸。綠原酸是植物在有氧呼吸過程產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物，具有抗氧化、抗病毒、 抗菌功能作用。特別是綠原酸的生物活性，能促進人體的新陳代謝，調(diào)節(jié)人體各部功能的平 衡等功效，且毒性和副作用小。綠原酸能不可逆地抑制葡萄糖-6-磷酸酶的水解作用，降低 肝糖原的分解并減少外源葡萄糖的吸收。動物體內(nèi)的研究證明，使用綠原酸可以降低由使 用胰高血糖素引起的高血糖峰值。綠原酸可以降低血糖水平，提高肝臟葡萄糖-6-磷酸和 肝糖原的濃度。因此綠原酸的研究和利用越來越受到人們的重視?？Х人峤Y(jié)構(gòu)中含有兩個酚羥基，是天然的自由基淬滅劑，具有優(yōu)異的抗氧化特性， 已有的藥理學研究表明，咖啡酸具有廣譜抗菌、消炎利膽、利尿通淋、活血化淤、鎮(zhèn)咳、祛痰、 抗氧化、抗腫瘤等功效，用于高血壓以及癌癥的治療。據(jù)報道，咖啡酸可以降低進食各種碳 水化合物引起的正常小鼠的餐后血糖升高，并對葡萄糖苷酶的活性有較強的抑制作用?？紤]到綠原酸、咖啡酸在蒲公英中具有上述特殊功效，有必要進行提取分離。而國 內(nèi)對蒲公英活性物質(zhì)的提取分離研究較少。主要采用乙醇水等溶劑進行提取，獲得浸膏，再 采大孔樹脂進行分離純化，獲得富含酚酸類化合物的蒲公英提取物(例如，路保通，張鴦，胡新安，鮮海梅，謝寶東，王艷麗.蒲公英有效成分提取及其抑菌活性作用.《中國獸醫(yī)雜 志》，2008，44(5) :45-46 ；王昌利，呂卓，張明.大孔吸附樹脂純化蒲公英總酚酸的工藝研 究·《陜西中醫(yī)》，2009，30 (12) 1656-1657) 經(jīng)由國家知識產(chǎn)權(quán)局網(wǎng)站檢索，截至2010年9月30日，與蒲公英活性物質(zhì)提取分 離方法直接相關(guān)的授權(quán)發(fā)明專利或申請主要有(1)ZL03132343.X(《含有蒲公英、白芨提取物的化妝品復合添加劑及其制備工藝 和在化妝品中的應用》)本發(fā)明公開了一種含有蒲公英、白芨提取物的化妝品復合添加劑 及其制備工藝和在化妝品中的應用。該制備工藝通過將蒲公英去雜、清洗、切碎，超聲水浸 法提取，過濾，絮凝，離心，超濾，上大孔樹脂吸附，醇洗，濃縮，得蒲公英標準提取物。(2)CN1907314A(申請?zhí)?00610052977. 3，《蒲公英中酚酸類有效部位抑制婦科乳 腺炎癥的用途》)本發(fā)明公開了一種具有預防和治療婦科乳腺感染疾病的蒲公英植物提取 物的新醫(yī)藥用途。本發(fā)明的蒲公英植物提取物由蒲公英植物鮮品或干品經(jīng)醇水提取、柱層 析、醇溶劑洗脫精制而成，提取物中酚酸類化合物作為有效成分含量在20%以上。(3)CN1583134A(申請?zhí)?00410046193. 0，《一種蒲公英泡騰片及其制備方法》) 該發(fā)明公開了一種蒲公英泡騰片及其制備方法，它的原料藥材為蒲公英，其特征是采用醇 提和水提(40% -90%乙醇水)相結(jié)合的工藝，提取處方中藥材的有效成分，得到的提取物 再與藥用輔料組合，制備成泡騰片。(4)CN101023972A(申請?zhí)?00710067772. 7，《蒲公英中酚酸類有效部位治療口腔 潰瘍的用途》)該發(fā)明公開了一種預防和治療單純皰疹病毒感染的蒲公英植物酚酸類有效 部位及其在制備防治口腔潰瘍藥物中的應用。本發(fā)明中的蒲公英植物酚酸類有效部位由蒲 公英植物鮮品或干品經(jīng)醇水提取、柱層析、醇溶劑洗脫精制而成，提取物中酚酸類化合物為 有效成分含量在20%以上。(5)CN101112409A(申請?zhí)?00610036674. 2，《蒲公英中酚酸類有效部位的制備及 其抑制流感病毒的用途》)該發(fā)明公開了一種具有預防和治療流感病毒感染疾病的蒲公英 植物提取物及其制備方法和醫(yī)藥用途。本發(fā)明的蒲公英植物提取物由蒲公英植物鮮品或 干品經(jīng)醇水提取、柱層析、醇溶劑洗脫精制而成，提取物中酚類化合物作為有效成分含量在 20%以上。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在為開發(fā)中藥新藥或保健食品提供高質(zhì)量的原料-蒲公英提取物，所要 解決的技術(shù)問題是蒲公英中多酚類化合物的提取、分離和富集，使提取物中富含綠原酸和 咖啡酸。本發(fā)明的技術(shù)方案是以新鮮蒲公英為起始原料，包括破碎、提取、濃縮、萃取、分離 和純化，與現(xiàn)有技術(shù)的區(qū)別是所述的破碎是采用螺旋榨汁機打碎使細胞破壁，所述的提取 是破碎后的蒲公英用PH3-5的酸水于45-65°C下攪拌提取至少兩次，每次不少于1. 5小時， 過濾分離合并得到提取液；提取液真空濃縮成浸膏，用丙酮萃取至少兩次，分離合并得到萃 取液，萃取液脫溶后得到粉末狀粗提物；粗提物用固定相為羅姆哈斯XAD-8樹脂(美國FDA 認可的類型)層析柱進行純化，依次用去離子水和乙酸乙酯洗脫，收集乙酸乙酯洗脫液，脫 溶后得到綠原酸、咖啡酸總含量> 50%的蒲公英提取物。
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為進一步提高提取物中多酚類化合物的含量，對提取物采用C18反相硅膠填料色 譜柱進一步純化，用85-95% (體積百分濃度，下同)乙醇混合流動相洗脫，收集洗脫液，脫 溶后得到綠原酸、咖啡酸總含量> 90%的高純優(yōu)質(zhì)蒲公英提取物。具體的技術(shù)方案是將新鮮蒲公英選擇采用轉(zhuǎn)速200-400轉(zhuǎn)/分的螺旋榨汁機實現(xiàn)高效細胞破壁，以 提高后續(xù)有效成分的提取率；在酸性水中進行動態(tài)提取，提取液濃縮成浸膏，添加丙酮萃取 除雜，萃取液濃縮后上層析柱，分離填料為羅姆哈斯XAD-8系列樹脂，先用去離子水洗脫， 再用乙酸乙酯洗脫，收集綠原酸或咖啡酸含量> 20%的乙酸乙酯洗脫液、濃縮，得綠原酸、 咖啡酸總含量> 50%的蒲公英提取物；進一步進行精制純化，采用C18反相硅膠填料進行 色譜分離，采用85-95%乙醇洗脫，可制得蒲公英多酚類活性物質(zhì)含量> 90%的高純蒲公 英提取物。具體操作步驟是(1)首先將新鮮蒲公英通過轉(zhuǎn)速200-400轉(zhuǎn)/分的螺旋榨汁機進行破壁打碎；溶 于10-20倍體積的pH3-5的酸性溫水(45-65°C )中，動態(tài)攪拌，轉(zhuǎn)速60r/min，時間120min 左右，過80-100目篩網(wǎng)，提取至少2次；(2)合并上述提取液，真空濃縮為浸膏，再添加5-8倍體積的丙酮進行萃取，獲得 上清萃取液，重復1次，合并上清萃取液，濃縮成粉末，再用2倍體積離子水溶解，用于上 柱；(3)進行柱層析分離，分離介質(zhì)(固定相)選自羅姆哈斯XAD-8樹脂(為美國FDA 認可的類型)等，流動相選擇去離子水、乙酸乙酯，分別依次進行洗脫，收集乙酸乙酯洗脫 液；(4)將上述收集到的流分合并，真空濃縮成浸膏，提取物中綠原酸、咖啡酸多酚物 質(zhì)總含量超過50% ；(5)精制純化，將上述提取物進行反相硅膠色譜分離，固定相為C18反相硅膠，流 動相85-95%乙醇，可制得純度90%以上高純蒲公英多酚類活性物質(zhì)。備注綠原酸、咖啡酸采用高效液相色譜法檢測，具體見中華人民共和國藥典 2005版(上部)附錄VI。本發(fā)明為相關(guān)企業(yè)提供一種集成廉價螺旋壓榨高效細胞破壁+酸水浸提+柱層析 分離分離純化的方法，制備純度達90%高純蒲公英多酚類活性物質(zhì)。適合不同純度的蒲公 英多酚類活性物質(zhì)的制備。本法工藝簡單，無需大量有機溶劑進行提取，綠色、環(huán)保。
具體實施例方式實施例1 1、稱取IOkg蒲公英，通過螺旋榨汁機進行破壁打碎，溶于15倍體積的pH = 4、 50°C純凈水中，動態(tài)攪拌，轉(zhuǎn)速60r/min，時間120min左右，過100目篩網(wǎng)，并提取2次；2、將提取液合并，真空濃縮至干，再添加6倍體積的丙酮進行萃取，共2次，合并上 清液，并濃縮成粉末，再用2倍體積去離子水溶解，用于上柱；3、柱層析分離，分離介質(zhì)為羅姆哈斯XAD-8樹脂，先用3倍柱體積去離子水洗脫， 再用乙酸乙酯洗脫，主要收集純度20%以上的綠原酸或咖啡酸流份；
4、將上述收集到流份合并，真空濃縮成浸膏，綠原酸、咖啡酸總酚的純度達50%以 上；5、精制純化，將上述提取物進行反相硅膠色譜分離，固定相為C18反相硅膠，流動 相乙醇-水(90%, V/V)；6、可制得0. 24g純度達91. 1 %的高純蒲公英多酚類活性物質(zhì)。實施例2 1、稱取IOkg蒲公英，通過螺旋榨汁機進行破壁打碎，溶于12倍體積的pH = 5、 60°C純凈水中，動態(tài)攪拌，轉(zhuǎn)速60r/min，時間120min左右，過80目篩網(wǎng)，并提取2次；2、將提取液合并，真空濃縮至干，再添加8倍體積的丙酮進行萃取，共2次，合并上 清液，并濃縮成粉末，再用2倍體積去離子水溶解，用于上柱；3、柱層析分離，分離介質(zhì)為羅姆哈斯XAD-8樹脂，先用3倍柱體積去離子水洗脫， 再用乙酸乙酯洗脫，主要收集純度20%以上的綠原酸或咖啡酸流份；4、將上述收集到流份合并，真空濃縮成浸膏，綠原酸、咖啡酸總酚的純度達50%以 上；5、精制純化，將上述提取物進行反相硅膠色譜分離，固定相為C18反相硅膠，流動 相乙醇-水(95%, V/V)；6、可制得0. 27g純度達90. 3%的高純蒲公英多酚類活性物質(zhì)。
權(quán)利要求
一種蒲公英提取物的制備方法，以中藥材新鮮蒲公英為起始原料，包括破碎、提取、濃縮、萃取、分離和純化，其特征在于所述的破碎是采用螺旋榨汁機打碎使細胞破壁，所述的提取是破碎后的蒲公英用pH3 5的酸水于45 65℃下攪拌提取至少兩次，得到提取液；提取液濃縮成浸膏，用丙酮萃取至少兩次，得到萃取液；萃取液脫溶后得到粉末狀粗提物；粗提物用固定相為羅姆哈斯XAD 8樹脂的層析柱分離純化，依次用去離子水和乙酸乙酯洗脫，收集乙酸乙酯洗脫液，脫溶后得到綠原酸、咖啡酸總含量≥50％的蒲公英提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于綠原酸、咖啡酸總含量>50%的蒲公英提 取物用反相硅膠C18填料色譜柱進行純化，用85-95%乙醇混合流動相洗脫，收集洗脫液， 脫溶后得到綠原酸、咖啡酸總含量> 90%的蒲公英提取物。
全文摘要
一種蒲公英提取物的制備方法，是一種集細胞破壁-酸水浸提-溶解沉析-柱層析分離的新方法。用該方法對新鮮蒲公英藥材進行加工，可制備較高純度綠原酸、咖啡酸等多酚物質(zhì)的蒲公英提取物。采用螺旋榨汁機進行細胞破壁；用酸水浸提；丙酮溶解沉析；大孔樹脂柱層析填料采用羅姆哈斯XAD-8樹脂等，流動相為乙酸乙酯溶劑；色譜精制純化采用C18反相硅膠為固定相，乙醇水為流動相。產(chǎn)品含量高達90％以上。該提取分離工藝，方法簡便、成本低、易于工業(yè)生產(chǎn)應用。
文檔編號A61P9/12GK101982184SQ20101052405
公開日2011年3月2日 申請日期2010年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月27日
發(fā)明者曹勇, 朱月信, 李文軍, 楊春杰, 楊景生, 馬凱 申請人:安徽濟人藥業(yè)有限公司