專利名稱：連翹揮發(fā)油高效活性部位納米乳的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從連翹揮發(fā)油中分離出高效抗病原微生物活性部位并制備成納 米乳的方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著經(jīng)濟(jì)的全球化、信息物流的全球化，加之生態(tài)環(huán)境的惡化，瘟疫即傳染性疾病 的全球化也隨即產(chǎn)生。瘟疫的產(chǎn)生與傳播主要是由于人體感染病原微生物包括細(xì)菌和病 毒，因此，對于傳染性疾病的治療主要就是利用抗生素與抗病毒藥物。目前，市場上的抗生 素與抗病毒藥物均為結(jié)構(gòu)清楚、成分單一的化學(xué)合成或半合成藥物，其問世之初確實(shí)對于 傳染性疾病的預(yù)防和治療起到了顯著的作用。但是，由于化學(xué)藥物的成分單一，其易于被病 原微生物識(shí)別而使病原微生物產(chǎn)生抗藥性，由此導(dǎo)致目前用于傳染性疾病的新藥的研發(fā)明 顯滯后于病原微生物的抗藥性；同時(shí)其在治療過程中產(chǎn)生的對人體的毒副作用也日益突出 和嚴(yán)重，例如四環(huán)素類、鏈霉素類與氨基糖甙類的毒副作用已經(jīng)眾所周知。因此，開發(fā)新型 高效安全的抗傳染性疾病的藥物迫在眉睫。中藥具有多成分、多靶點(diǎn)、多功效的綜合作用特點(diǎn)，有著顯著的廣譜抗菌、抗病毒 作用，且其對人體無毒或毒性與不良反應(yīng)極低。由于其活性成分為復(fù)雜的多成分，所以細(xì)菌 和病毒對于中藥不易產(chǎn)生抗藥性，人體也不易產(chǎn)生耐受性。連翹味苦，微寒，歸肺、心、小腸經(jīng)，具有清熱解毒，消腫散結(jié)之功效，可用于外感風(fēng) 熱、瘟病初起。而現(xiàn)代研究對于多種病毒具有顯著抑制作用，其抗病毒的主要活性成分為揮 發(fā)油。連翹揮發(fā)油具有廣譜抗菌抑病毒作用，對流感病毒感染小鼠有保護(hù)作用；在雞胚內(nèi) 能抑制流感病毒亞甲型、副流感仙臺(tái)株的增殖。其中連翹揮發(fā)油對于甲型流感病毒(京科 68-1株)和I型副流感病毒(仙臺(tái)株)的最低抗病毒濃度為1 65536。揮發(fā)油是一大類中藥活性成分。揮發(fā)油的成分復(fù)雜，且結(jié)構(gòu)相似；具有廣泛的藥理 作用如抗菌、抗病毒與抗炎作用，但具有一定的刺激性，特別是口服刺激性更大。長期以來， 沒有對連翹揮發(fā)油深入的研究。本發(fā)明從連翹揮發(fā)油中分離篩選其高活性部位，然后制備 成納米乳，以降低其刺激性而提高活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種分離連翹揮發(fā)油的高效活性部位并制備納米乳的方 法，該方法不僅提高了連翹揮發(fā)油的活性，同時(shí)降低了其刺激性。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)過程如下一種連翹揮發(fā)油高效活性部位納米乳的制備方法，包括以下步驟(1)連翹揮發(fā)油高效活性部位的分離通過硅膠柱層析法或低壓減壓分餾法分離得到連翹揮發(fā)油不同活性部位，然后將 不同活性部位通過抗菌或抗病毒試驗(yàn)篩選得到高效活性部位；(2)納米乳的制備
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稱取1.0% 2.0%的連翹揮發(fā)油高效活性部位、2% 3%甘油、10% 30%吐 溫-80混合均勻，然后緩緩加入到余量的注射用水中，攪拌均勻，1 4°C放置2 5天，用 0. 45 μ m、0. 22 μ m的微孔濾膜依次過濾，即得連翹揮發(fā)油高效活性部位的納米乳。上述連翹揮發(fā)油的活性部位分離方法可以有兩種(1)硅膠柱層析法按照極性大小不同將連翹揮發(fā)油分離為多個(gè)極性不同的部 位，具體是將連翹揮發(fā)油于硅膠柱上樣，用有機(jī)溶劑進(jìn)行洗脫，分段收集不同的洗脫液，真 空條件下去除有機(jī)溶劑，得到極性大小不同的活性部位。(2)低壓減壓分餾法按沸點(diǎn)不同進(jìn)行分離，分離沸點(diǎn)不同的部位。真空條件下， 在不同溫度下使不同沸點(diǎn)的成分在精餾塔中分離，冷凝，收集得到沸點(diǎn)不同的活性部位。上述連翹揮發(fā)油的高活性部位的篩選方法為將分離得到的不同部位進(jìn)行抗菌或 抗病毒試驗(yàn)，篩選出活性較好的不同部位；然后將不同部位進(jìn)行優(yōu)化組合，再進(jìn)行篩選試 驗(yàn)，從而得出活性最高的部位。上述連翹揮發(fā)油的高活性部位納米乳的組成為連翹揮發(fā)油1. 0 % 2. 0 %，甘油 20Z0 3%，吐溫-8010% 30%，注射用水加至100%。本發(fā)明從連翹揮發(fā)油中分離篩選其高活性部位，然后制備成納米乳，不僅提高了 揮發(fā)油的藥理作用，還降低連翹揮發(fā)油的刺激性并提高其活性，可以通過口服給藥而取得 較好的治療效果。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 硅膠柱層析法分離不同部位用濕法裝柱，加200mL石油醚到70克硅膠中，除區(qū)氣泡，裝柱，上樣1克連翹揮發(fā) 油，分別加石油醚乙酸乙酯=15 1 ；13 1 ；11 1 ；9 1 ；7 1 ；5 1 ；3 1 ；1 1 ； 1 3；1 5洗脫，每個(gè)洗脫液200mL，分管回收每管10mL，點(diǎn)樣，用硫酸乙醇顯色?；厥諛O 性大致相同的部位，即可。實(shí)施例2 低壓減壓分餾法分離不同部位2. 1.用無水乙醇對塔進(jìn)行洗滌，打開冷凝水，在常壓全回流的狀態(tài)下洗塔3小時(shí)， 然后用真空泵將塔內(nèi)乙醇蒸汽抽干。2. 2.量取適量連翹揮發(fā)油，將其和沸石一并加入已洗凈的塔釜中；密封精餾塔并 保證其密閉性；打開真空泵控制塔頂壓力為-0. 07MPa，開始加熱至揮發(fā)油達(dá)到微沸狀態(tài) (150°C 154°C )。2. 3.調(diào)整精餾塔保溫儀使溫度梯度升溫即25°C 30°C— 58°C 6264°C 7285°C 116°C— 120°C 130°C ；分別收集各個(gè)溫度下相應(yīng)的精餾部位即B1、B2、B3、 B4、B5、B6。附注精餾塔的設(shè)備參數(shù)為內(nèi)徑為Cp32mm,塔高1000mm，內(nèi)裝2. 5X2. 5mm θ 玻璃絲網(wǎng)填料，填料裝填高度約為900mm ；塔身由內(nèi)到外采用電保溫帶加熱、玻璃保溫層及 石棉聯(lián)合保溫，電保溫帶加熱功率由調(diào)壓器控制，以補(bǔ)償塔身的熱損失。實(shí)施例3 不同活性部位抑菌實(shí)驗(yàn)(1)菌種的活化受試菌種(標(biāo)準(zhǔn)菌株)接種于固體瓊脂培養(yǎng)基，37°C活化24h，金 黃色葡萄球菌活化48h。(2)菌懸液的制備將活化后的受試菌種用接種環(huán)挑取菌苔于生理鹽水中，制成
4含菌數(shù)濁度約為0. 5Mcf的菌懸液備用。(3)各活性部位溶液的配制將各被試各活性部位溶解于1. 0%的HAc溶液，連翹 揮發(fā)油濃度設(shè)置為2%U. 5%U. 0%,0. 5%,0. 25%。(4)抑菌測試方法(瓊脂擴(kuò)散紙片法)紙片擴(kuò)散法是將含有定量抗生素的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上，紙 片中的藥物在瓊脂中擴(kuò)散，隨著擴(kuò)散距離的增加抗生素的濃度呈對數(shù)減少，在藥物濃度到 達(dá)的范圍內(nèi)對此藥敏感的細(xì)菌不能生長而形成透明的抑菌圈，不同細(xì)菌形成的抑菌圈各不 相同，抑菌圈的大小反映了測試菌對該藥的敏感程度。如果抑菌劑能殺死或抑制皿中供試 菌的生長，則在濾紙片的周圍會(huì)出現(xiàn)一個(gè)無菌生長的透明圈，即抑菌圈。以抑菌圈的直徑作 為評(píng)定指標(biāo)，抑菌圈直徑越大，說明該抑菌劑對此種供試菌的抑制效果越好，反之則抑制效 果越差。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)石油醚乙酸乙酯為15 1 11 1洗脫的活性部位的抑菌圈最大， 達(dá)到26mm，說明該部位是活性成分最集中的部位。脫除有機(jī)溶劑后即得連翹揮發(fā)油高效活 性部位。 實(shí)施例4 納米乳的制備準(zhǔn)確量取連翹揮發(fā)油高效活性部位1. 5ml，甘油2. 5ml,吐溫_8012ml混合均勻；然 后緩緩加入到84ml注射用水中，攪拌均勻；4°C放置96小時(shí)，用0. 45 μ m、0. 22 μ m的微孔濾 膜依次過濾，即得。
權(quán)利要求
連翹揮發(fā)油高效活性部位納米乳的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)連翹揮發(fā)油高效活性部位的分離通過硅膠柱層析法或低壓減壓分餾法分離得到連翹揮發(fā)油不同活性部位，然后將不同活性部位通過抗菌或抗病毒試驗(yàn)篩選得到高效活性部位；(2)納米乳的制備稱取1.0％～2.0％的連翹揮發(fā)油高效活性部位、2％～3％甘油、10％～30％吐溫 80混合均勻，然后緩緩加入到余量的注射用水中，攪拌均勻，1～4℃放置2～5天，用0.45μm、0.22μm的微孔濾膜依次過濾，即得連翹揮發(fā)油高效活性部位的納米乳。
2.根據(jù)連翹揮發(fā)油高效活性部位納米乳的制備方法，其特征在于將連翹揮發(fā)油于硅 膠柱上樣，用有機(jī)溶劑進(jìn)行洗脫，分段收集不同的洗脫液，真空條件下去除有機(jī)溶劑，得到 極性大小不同的活性部位。
3.根據(jù)連翹揮發(fā)油高效活性部位納米乳的制備方法，其特征在于真空條件下，在不 同溫度下使不同沸點(diǎn)的成分在精餾塔中分離，冷凝，收集得到沸點(diǎn)不同的活性部位。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從連翹揮發(fā)油中分離出高效抗病原微生物活性部位并制備成納米乳的方法，該方法涉及連翹揮發(fā)油高效活性部位的分離和納米乳的制備，具體如下通過硅膠柱層析法或低壓減壓分餾法分離得到連翹揮發(fā)油不同活性部位，然后將不同活性部位通過抗菌或抗病毒試驗(yàn)篩選得到高效活性部位；稱取1.0％～2.0％的連翹揮發(fā)油高效活性部位、2％～3％甘油、10％～30％吐溫-80混合均勻，然后緩緩加入到余量的注射用水中，攪拌均勻，1～4℃放置2～5天，用0.45μm、0.22μm的微孔濾膜依次過濾，即得連翹揮發(fā)油高效活性部位的納米乳。本發(fā)明提高了揮發(fā)油的藥理作用，還降低了連翹揮發(fā)油的刺激性并提高其活性，可以通過口服給藥而取得較好的治療效果。
文檔編號(hào)A61K36/634GK101933976SQ20101027525
公開日2011年1月5日 申請日期2010年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月8日
發(fā)明者李偉澤, 郝保華 申請人:西北大學(xué)