專利名稱：5,6,7,4’-四羥基黃酮及衍生物作為jak酪氨酸蛋白激酶抑制劑的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及5，6，7，4’ -四羥基黃酮及其衍生物作為JAK酪氨酸蛋白激酶抑制劑的應(yīng)用，尤其涉及5，6，7，4’ -四羥基黃酮及其衍生物作為JAK酪氨酸蛋白激酶抑制劑用于制備防治JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常相關(guān)疾病的藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
5，6，7，4’ -四羥基黃酮，通用名稱為燈盞花乙素苷元，或稱野黃芩苷苷元，是目前廣泛用于心腦血管疾病的燈盞花素中的主要成分——燈盞花乙素的無糖部分。5，6，7， 4’ -四羥基黃酮為藥用植物燈盞細(xì)辛的黃酮有效成分之一。燈盞細(xì)辛(Erigeron breviscapus (Vant. ) Hand-Mazz)屬菊科短亭飛蓬類植物,具有活血化瘀、散寒解表、舒經(jīng)活絡(luò)等功效，臨床常用于治療心腦血管疾病。5，6，7，4’-四羥基黃酮既可通過植物提取方式從燈盞細(xì)辛等植物中獲得，也可通過人工化學(xué)方式合成而得。 目前對燈盞花(乙)素已進(jìn)行了較為廣泛的藥理研究，研究已涉及清除自由基、抗氧化、抗血栓、抗腫瘤、消炎抗菌等多種功效。研究表明，5，6，7，4’_四羥基黃酮具有增加腦、冠狀血管血流量，降低血管阻力，抗血小板聚集、紅細(xì)胞凝聚，降低血液粘稠度等作用。車慶明報(bào)道，對5，6，7，4’ -四羥基黃酮在動物體內(nèi)的藥代及動力學(xué)進(jìn)行了研究， 認(rèn)為動物口服5，6，7，4’ -四羥基黃酮后的代謝產(chǎn)物為燈盞花乙素，其藥動學(xué)行為呈非線性，并認(rèn)為5，6，7，4’ -四羥基黃酮口服易于吸收，與燈盞花乙素相比，其相對生物利用度為 301.8%。中國專利CN 1657042A公開了燈盞花乙素苷元在制備治療或預(yù)防腦卒中、心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，中國專利CN 1657061A公開了燈盞花乙素苷元或其藥學(xué)上可接受的鹽類與中、西藥組方在治療或預(yù)防心腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。但是這些公開的專利申請和其他文獻(xiàn)資料，大部分所涉及藥效學(xué)研究僅為常見的急性腦缺血試驗(yàn)、纖溶酶的影響、血栓形成的影響，未在更新、更有價(jià)值的靶點(diǎn)上進(jìn)行研究。迄今為止有關(guān)5，6，7，4’ -四羥基黃酮及其衍生物的更加高效和確切的作用靶點(diǎn)、 機(jī)制等尚未被發(fā)現(xiàn)，5，6，7，4’ -四羥基黃酮及其衍生物的準(zhǔn)確應(yīng)用有待研究，以便更好、更精準(zhǔn)的治療疾病，而降低不良反應(yīng)。缺血/再灌注(Ischemia/R印erfusion)是機(jī)體局部組織或器官循環(huán)系統(tǒng)出現(xiàn)暫時(shí)性供血障礙時(shí)發(fā)生的一種應(yīng)急狀態(tài)，常常伴發(fā)于各種缺血性心腦血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中。缺血/再灌注(I/R)過程可分成兩個(gè)階段。第一階段為瞬時(shí)性缺血 (Ischemia)，即局部組織出現(xiàn)低氧狀態(tài)和營養(yǎng)供給不足，導(dǎo)致組織或器官缺血性損傷。第二階段為再灌注Oteperfusion)，是指缺血組織中循環(huán)系統(tǒng)經(jīng)短暫停滯后再疏通的過程。在再灌注過程中，受損組織內(nèi)部由于血液循環(huán)重建而觸發(fā)了一系列局部性應(yīng)急反應(yīng)。I/R過程中被激活的組織包括血管內(nèi)壁細(xì)胞、血液補(bǔ)體系統(tǒng)和淋巴細(xì)胞。被激活的淋巴細(xì)胞不但向周邊組織釋放各種強(qiáng)氧化自由基(Ν0、Η202、Ν03)和各種炎性因子(干擾素、白介素、腫瘤壞死因子和巨噬細(xì)胞刺激因子)，還引發(fā)中性粒細(xì)胞向周邊組織聚集、浸潤等炎性反應(yīng)。另外、被激活的淋巴細(xì)胞同時(shí)還向周圍組織分泌多種影響細(xì)胞生長的因子從而誘導(dǎo)周邊細(xì)胞進(jìn)入非正常凋亡和壞死過程(參見 Coutts SB et al (2003) =Hyperperfusion syndrome toward a stricterdefinition. Neurosurgery. 53 :1053—1058) 。弓I 胃白勺
二次損傷的強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過由于缺血導(dǎo)致的損傷，是多種缺血性心腦血管系統(tǒng)創(chuàng)傷疾病發(fā)展過程中的主要病理過程，而淋巴細(xì)胞的超強(qiáng)活化是再灌注損傷的主要因素之一(參見 Hilfiker-Kleiner et al (2006) :MolecularMechanisms in Heart Failure :Focus on Cardiac Hypertrophy, Inflammation, Angiogenesis，and Apoptosis，J. Am. College of Cardiology, 48 :56-66)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，淋巴細(xì)胞的活化則主要是通過一組分布細(xì)胞膜下的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)(JAK/STAT)的激活來完成，而通過恰當(dāng)?shù)乃幬锓肿痈蓴_JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的激活，可以達(dá)到調(diào)整或抑制淋巴細(xì)胞的過度活化的目的。因此、參與構(gòu)成JAK/ STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的各種蛋白成為探索新一代治療各種缺血性心腦血管系統(tǒng)創(chuàng)傷疾病特效藥的最新研發(fā)靶點(diǎn)(參見Kaminski KA et al (2002) =Oxidativestress and neutrophil activation the two keystones of ischemia/reperfusioninjury.International Journal of Cardiology，86 :41_59)。JAK/STAT是1989年科學(xué)家在利用鏈激酶基因放大技術(shù)(PCR)研究真核細(xì)胞生長控制機(jī)理時(shí)偶然發(fā)現(xiàn)的(參見 Andrew F. W. (1989) =Twoputative protein-tyrosine kinases identified by application ofthe polymerasechain reaction. Proc. Nadl. Acad. Sci. USA,86 :1603-1607)。而STAT則是近期在探索細(xì)胞介素通過受體干予細(xì)胞基因表達(dá)機(jī)理時(shí)發(fā)現(xiàn)的一套信號傳遞系統(tǒng)(參見Kisseleva T. et al, (2002) =Signaling through theJAK/STAT pathway, recent advances and future challenges. Gene.285 114.)。整個(gè)系統(tǒng)由分布于細(xì)胞膜的受體(R)、細(xì)胞膜下的酪氨酸蛋白激酶(JAK)和與之緊密結(jié)合的信號轉(zhuǎn)遞激活蛋白(STAT)組成。JAK酪氨酸蛋白激酶屬于非受體型蛋白激酶， 分布在細(xì)胞膜下。迄今為止，JAK酪氨酸蛋白激酶家族共有四個(gè)成員被鑒定出來JAK1、 JAK2、JAK3和 Κ2。與JAK同時(shí)被鑒定而出的還有與JAK在結(jié)構(gòu)上密切相連的激酶底物 STAT (信號傳導(dǎo)禾口轉(zhuǎn)錄活化蛋白，SignalTransducer and Activator of Transcription, STAT)，參見(Murray PJ(2007) :The JAK-STAT Signaling Pathway :Input and Output Integration, Journal of Immunology，178 :2623-2629)。在相關(guān)的組織和細(xì)胞中，受體激活物-受體-激酶信號轉(zhuǎn)遞系統(tǒng)共同組成一個(gè)精致、有序的信息分析處理中心，使細(xì)胞外部的各種刺激信號可以迅速傳遞至細(xì)胞內(nèi)部，使細(xì)胞作出各種積極、準(zhǔn)確的應(yīng)急反應(yīng)。因此，JAK酪氨酸激酶信號轉(zhuǎn)遞系統(tǒng)在維系各種組織、細(xì)胞的正常生理功能起到及其重要的作用。然而在異常情況下，由于JAK酪氨酸激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活失控也在多種疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用(參見 khindlerCWK2002) =Series Introduction JAK-STAT signaling in human disease, JClin Invest. 109 :1133-1137)，如腫瘤、心腦血管疾病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)、白血病、免疫缺陷疾病、移植物抗宿主反應(yīng)性疾病和過敏反應(yīng)性疾病的發(fā)生發(fā)展。由于天然黃酮類化合物在結(jié)構(gòu)上具有超強(qiáng)抗氧化特點(diǎn)，以及近期關(guān)于氧化自由基的形成與諸多疾病發(fā)生的內(nèi)在聯(lián)系機(jī)理被逐一闡明，探討使用天然黃酮類化合物干預(yù)各種與超氧化物過度合成有關(guān)的疾癥，特別是與I/R密切相關(guān)的心腦血管系統(tǒng)疾病治療理念被重新激活，參見(Akhlaghi and Bandy B(2009) =Mechanisms offlavonoid protectionagainst myocardial ischemia-reperfusion injury, Journal of molecular andcellular cardiology, 46 :309-317 ；Larson A.J. et al(2010) "Quercetin :A Treatment for Hypertension ？ A Review of Efficacy and Mechanism，，， Pharmaceuticals^ :237-250)。作為多種抗心腦血管損傷疾病中藥的主要活性成分，天然黃酮類化合物早已成為國內(nèi)藥界研發(fā)的重點(diǎn)，其中最成功的例子是以燈盞花素為核心成分的各種治療性制劑的開發(fā)和臨床應(yīng)用(參見高晨等O008)燈盞細(xì)辛、燈盞花素注射劑治療腦梗塞、冠心病、心絞痛的應(yīng)用情況及影響因素分析中國藥房，第19卷(XT) 2156-2157)。但是，迄今為止有關(guān)燈盞花乙素的更加高效和確切的作用靶點(diǎn)、機(jī)制等尚未被發(fā)現(xiàn)。因此，JAK酪氨酸激酶信號傳遞系統(tǒng)在維系各種組織、細(xì)胞的正常生理功能起到及其重要的作用。然而在異常情況下，由于JAK酪氨酸激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活失控也在多種疾病(如心腦血管疾病、腫瘤等)的發(fā)生、發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用。因此，這些激酶以及相應(yīng)的受體成為當(dāng)今各大藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)竭力推崇的研究靶點(diǎn)，用以探索、研發(fā)針對各種相關(guān)疾病特效新藥。

發(fā)明內(nèi)容
基于前期研究發(fā)現(xiàn)，5，6，7，4’ -四羥基黃酮及其衍生物具有強(qiáng)烈的阻斷上述信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系激活的作用。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所述5，6，7，4’ -四羥基黃酮及其衍生物可以直接與特定的JAK酪氨酸蛋白激酶發(fā)生專一性結(jié)合，并對酶分子發(fā)生強(qiáng)大的抑制作用。 因此，我們推斷上述信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系中的重要組成之一的JAK酪氨酸蛋白激酶是5，6，7，4’ -四羥基黃酮及其衍生物的攻擊靶點(diǎn)?；谶@一發(fā)現(xiàn)我們進(jìn)一步成功地組建了一個(gè)精確、高效的藥物識別酶篩平臺，對 5,6,7,4'-四羥基黃酮及其衍生物進(jìn)行了篩選，篩選出可抑制JAK酪氨酸蛋白激酶活性的 5,6,7,4'-四羥基黃酮及其衍生物，其結(jié)果如式I所示
權(quán)利要求
1.式I所示化合物作為JAK酪氨酸蛋白激酶抑制劑的應(yīng)用；
2.式I所示化合物作為JAK酪氨酸蛋白激酶抑制劑在制備治療或預(yù)防JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常相關(guān)疾病的藥物中的用途；
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常相關(guān)疾 病為缺血性心腦血管疾病。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常相關(guān)疾 病為損傷性心腦血管疾病。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常相關(guān)疾 病為腫瘤。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常相關(guān)疾 病為白血病。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常相關(guān)疾 病為免疫系統(tǒng)疾病。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述免疫系統(tǒng)疾病為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、移植 物抗宿主反應(yīng)性疾病、過敏反應(yīng)性疾病或免疫缺陷疾病。
9.一種治療或預(yù)防JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常相關(guān)疾病的藥物制劑，由式I所示化 合物和藥學(xué)上可接受的輔料組成，
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物制劑，其特征在于，其為顆粒、軟膠囊、凍干粉針、口服液、滴丸或口腔速崩片。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，公開了5，6，7，4’-四羥基黃酮及其衍生物作為JAK酪氨酸蛋白激酶抑制劑的應(yīng)用，尤其涉及5，6，7，4’-四羥基黃酮及其衍生物作為JAK酪氨酸蛋白激酶抑制劑用于制備治療JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常相關(guān)疾病的藥物的應(yīng)用。本發(fā)明所述5，6，7，4’-四羥基黃酮及其衍生物對JAK酪氨酸蛋白激酶發(fā)生強(qiáng)烈抑制作用，其酶學(xué)結(jié)合特性為競爭性抑制；還可以有效地透過細(xì)胞膜對JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活產(chǎn)生阻竭，從而抑制淋巴細(xì)胞向周邊組織分泌細(xì)胞因子如干擾素的能力。藥理學(xué)研究顯示，對血管有明顯的舒張作用，表明5，6，7，4’-四羥基黃酮及其衍生物在臨床具有重大的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號A61P9/00GK102335184SQ20101023477
公開日2012年2月1日 申請日期2010年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月19日
發(fā)明者劉一丹, 周榮光, 張偉, 普俊學(xué), 楊兆祥, 白奕陽 申請人:昆明制藥集團(tuán)股份有限公司