專利名稱：蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及降血壓肽的制備方法。
背景技術(shù)：
降血壓肽是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 (angiotensin-converting enzyme, ACE)抑制劑是指具有抑制ACE活性的一類多肽物質(zhì)， 雖然組成這些多肽氨基酸的種類和數(shù)量不同，但這類多肽都具有抑制ACE活性、輔助治療 高血壓病的潛在特性功能，是當(dāng)今應(yīng)對(duì)高血壓疾病的有效藥物。從天然食品原料，如酪蛋 白、乳清蛋白、魚蛋白、大豆蛋白、大米蛋白、玉米蛋白、花生蛋白、雞蛋蛋白等的蛋白水解 物中分離出的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽，因?yàn)榘踩?、無副作用而廣受人們的關(guān)注?，F(xiàn)有的 從卵白蛋白中分離出血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的方法有以胃蛋白酶水解分離法和以糜蛋 白酶水解分離法二種，胃蛋白酶水解分離法是Fujita(Fujita H，Sasaki R, Yoshikawa Μ. 1995.Potentiation of the antihypertensive activity of orally administered ovokinin,a vasorelaxing peptide derived from ovalbumin,by emulsification in egg phosphatidylcholine. Biosci Biotechnol Biochem, 59 (12) :2344_2345)等以胃蛋白酶將 卵白蛋白在強(qiáng)酸條件(PH= 1.6)下水解，調(diào)至中性后，以乙腈為洗脫劑，采用十八烷基硅 烷鍵合硅膠填料的液相色譜(ODS)柱梯度洗脫脫鹽，再利用反相高效液相色譜(RP-HPLC) 純化，得到一種對(duì)犬腸系膜動(dòng)脈具有松弛作用的緩激肽B1抑制肽(ovokinin)，其氨基酸序 列為FRADHPFL，該法在強(qiáng)鹽條件下水解，水解之后的中和要加入大量的堿，因此產(chǎn)鹽量大， 增加了脫鹽處理的工作量；以糜蛋白酶水解分離法是Matoba (Matoba N, Usui H, Fujita H. 1999. A novel anti-hypertensive peptide derived from ovalbumin induces nitric oxide-mediated vasorelaxation in an isolated SHR mesenteric artery. Fed Eur Biochem Soc Lett, 452 (3) 181-184)等以卵白蛋白為底物，利用糜蛋白酶在pH值為7. 8、 溫度為37°C的條件下水解12h后，沸水浴終止反應(yīng)，離心后水解物經(jīng)以十八烷基硅烷鍵 合硅膠(ODS)為填料的反相高效液相色譜(RP-HPLC)柱及苯乙基硅酸柱分離得到的肽段 RADHPF，該方法處理周期長(zhǎng)達(dá)16 20小時(shí)，反應(yīng)終止溫度高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有的從卵白蛋白中分離出血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽的胃蛋 白酶水解分離法制備過程中脫鹽處理的工作量大、洗脫劑乙腈有毒及糜蛋白酶水解分離法 處理周期長(zhǎng)、反應(yīng)終止溫度高的問題，而提供蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法。本發(fā)明的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法按以下步驟進(jìn)行一、蛋白質(zhì)水解 按蛋清與蛋白酶的質(zhì)量比為100 1 3稱取蛋清和蛋白酶，將蛋清配制成濃度為3% 10% (質(zhì)量)的蛋白水溶液并置于反應(yīng)器中，升溫至30°C 50°C，并調(diào)節(jié)蛋白水溶液的pH 值至5 8，然后加入蛋白酶，在溫度為30°C 50°C的條件下，攪拌2h 5h，得到蛋白水解 液；二、脫鹽處理將經(jīng)步驟一得到的蛋白水解液以每小時(shí)7倍 9倍柱體積的流速，先通過強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂柱，然后再通過強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂柱，收集流出液；三、分級(jí) 純化處理將經(jīng)步驟二得到的流出液在溫度為20°C 35°C、壓力為0. 5bar 1. 5bar條件 下通過3kD IOkD的超濾膜，得到濾出液，最后再將濾出液經(jīng)過凝膠過濾預(yù)裝柱Superdex Peptide 10/300GL，收集流出液，得到蛋清蛋白源輔助降血壓肽。本發(fā)明的方法，在溫度為30°C 50°C、pH值為5 8的條件下水解反應(yīng)，得到蛋白 水解物，然后再經(jīng)脫鹽和和純化得到蛋清蛋白源輔助降血壓肽。采用S印hadex 7510/30GL 凝膠色譜柱測(cè)得經(jīng)步驟一水解后得到的蛋白水解物的分子量分布在2040Da 107150Da ； 采用Superdex Peptide 10-300GL凝膠色譜柱測(cè)出蛋清蛋白源輔助降血壓肽的分子量主要 分布在200Da 2282Da。本發(fā)明的蛋清蛋白源輔助降血壓肽對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制率 為88% 92%，具有羥自由基、具有清除超氧陰離子的能力和抑制脂質(zhì)過氧化的能力，只 對(duì)高血壓患者起作用而對(duì)正常人無副作用，且易吸收，可以直接添加到食品中并兼具營(yíng)養(yǎng) 與降血壓功效；在0°C 7°C和50°C 90°C的溫度下穩(wěn)定性良好，在堿性條件下的穩(wěn)定性優(yōu) 于酸性環(huán)境；具備較好的溶解性、乳化性及乳化穩(wěn)定性和起泡性及氣泡穩(wěn)定性。本發(fā)明的方法制備的蛋清蛋白源輔助降血壓肽在溫度范圍為30°C 50°C、pH值 為5 8的條件下水解，再經(jīng)脫鹽和純化后制得，整個(gè)的制備過程僅需7 10小時(shí)，制備的 周期短，同時(shí)，在30°C 50°C的溫度下水解，最大限度地保護(hù)了蛋清蛋白水解物中蘇氨酸、 谷氨酸和亮氨酸不被破壞，蛋清蛋白源輔助降血壓肽中甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、苯 丙氨酸和組氨酸的含量高達(dá)44. 7% 48. 5%，疏水性氨基酸和芳香族氨基酸的含量較水 解物中有所提升，使蛋清蛋白源輔助降血壓肽兼具良好的功能特性和抗氧化性，而且水解 時(shí)的PH值為5 8，作用條件接近中性，后續(xù)處理工藝的產(chǎn)鹽量低，因而脫除鹽工作量小。本方法制備溫度低，周期短，制備過程中不使用任何對(duì)人體有毒害的物質(zhì)，是一種 綠色方法，而且方法簡(jiǎn)單，易操作。


圖1是具體實(shí)施方式
十八的源輔助降血壓肽的分子量分布標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；圖2是具 體實(shí)施方式十八制備的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的凝膠層析色譜圖。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法按以下步驟 進(jìn)行一、蛋白質(zhì)水解按蛋清與蛋白酶的質(zhì)量比為100 1 3稱取蛋清和蛋白酶，將蛋清 配制成濃度為3% 10% (質(zhì)量)的蛋白水溶液并置于反應(yīng)器中，升溫至30°C 50°C，并 調(diào)節(jié)蛋白水溶液的PH值至5 8，然后加入蛋白酶，在溫度為30°C 50°C的條件下，攪拌 2h 5h，得到蛋白水解液；二、脫鹽處理將經(jīng)步驟一得到的蛋白水解液以每小時(shí)7倍 9 倍柱體積的流速，先通過強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂柱，然后再通過強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂柱， 收集流出液；三、分級(jí)純化處理將經(jīng)步驟二得到的流出液在溫度為20°C 35°C、壓力為 0. 5bar 1. 5bar條件下通過3kD IOkD的超濾膜，得到濾出液，最后再將濾出液經(jīng)過凝膠 過濾預(yù)裝柱Superdex Peptide 10/300GL，收集流出液，得到蛋清蛋白源輔助降血壓肽。本實(shí)施方式的方法，在溫度為30°C 50°C、pH值為5 8的條件下水解反應(yīng)， 得到蛋白水解物，然后再經(jīng)脫鹽和和純化得到蛋清蛋白源輔助降血壓肽。采用S印hadex7510/30GL凝膠色譜柱測(cè)得經(jīng)步驟一水解后得到的蛋白水解物的分子量分布在2040Da 107150Da;采用Superdex Peptide 10-300GL凝膠色譜柱測(cè)出蛋清蛋白源輔助降血壓肽的 分子量主要分布在200Da 2282Da。本實(shí)施方式的蛋清蛋白源輔助降血壓肽對(duì)血管緊張素 轉(zhuǎn)化酶的抑制率為88% 92%，具有羥自由基、具有清除超氧陰離子的能力和抑制脂質(zhì)過 氧化的能力，只對(duì)高血壓患者起作用而對(duì)正常人無副作用，可以直接添加到食品中并兼具 營(yíng)養(yǎng)與降血壓功效；在0°C 7°C和50°C 90°C的溫度下穩(wěn)定性良好，在堿性條件下的穩(wěn)定 性優(yōu)于酸性環(huán)境；具備較好的溶解性、乳化性及乳化穩(wěn)定性和起泡性及氣泡穩(wěn)定性。本實(shí)施 方式的方法制備的蛋清蛋白源輔助降血壓肽在溫度范圍為30°C 50°C、pH值為5 8的 條件下水解，再經(jīng)脫鹽和純化后制得，整個(gè)的制備過程僅需7 10小時(shí)，制備的周期短，同 時(shí)，在30°C 50°C的溫度下水解，最大限度地保護(hù)了蛋清蛋白水解物中蘇氨酸、谷氨酸和 亮氨酸不被破壞，蛋清蛋白源輔助降血壓肽中甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和 組氨酸的含量高達(dá)44. 7% 48. 5%，疏水性氨基酸和芳香族氨基酸的含量較水解物中有 所提升，使蛋清蛋白源輔助降血壓肽兼具良好的功能特性和抗氧化性，而且水解時(shí)的PH值 為5 8，作用條件接近中性，后續(xù)處理工藝的產(chǎn)鹽量低，因而脫除鹽工作量小。本方法制備 溫度低，周期短，制備過程中不使用任何對(duì)人體有毒害的物質(zhì)，是一種綠色方法，而且方法 簡(jiǎn)單，易操作。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中所述的蛋 白酶為胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶、堿性絲氨酸蛋白酶 (Alcalase)和霉菌蛋白酶中的一種或其中幾種的組合。其它與具體實(shí)施方式
一相同。本實(shí)施方式中蛋白酶為組合物時(shí)，各種蛋白酶以任意比組合。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟一中蛋清與 蛋白酶的質(zhì)量比為100 1.2 2. 8。其它與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟一中蛋 清與蛋白酶的質(zhì)量比為100 2。其它與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至四之一不同的是步驟一中蛋 白水溶液的濃度為4% 9% (質(zhì)量)。其它與具體實(shí)施方式
一至四之一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟一中蛋 白水溶液的濃度為6% (質(zhì)量)。其它與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至六之一不同的是步驟一中調(diào) 節(jié)蛋白水溶液的PH值至5. 5 7. 5。其它與具體實(shí)施方式
一至六之一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至七之一不同的是步驟一中調(diào) 節(jié)蛋白溶液的PH值至6. 5。其它與具體實(shí)施方式
一至七之一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至八之一不同的是步驟一中蛋 白水溶液在溫度為32°C 46°C的條件下，攪拌2. 5h 4. 5h。其它與具體實(shí)施方式
一至八 之一相同。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至九之一不同的是步驟一中蛋 白水溶液在溫度為40°C的條件下，攪拌3. 5h。其它與具體實(shí)施方式
一至九之一相同。
具體實(shí)施方式
十一本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十之一不同的是步驟二中 所述的強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂是指其交換基團(tuán)為磺酸基(-SO3H)的陽(yáng)離子交換樹脂。其它與具體實(shí)施方式
一至十之一相同。
具體實(shí)施方式
十二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十一之一不同的是步驟二 中所述的強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂是指其交換基團(tuán)為季胺基的陰離子交換樹脂。其它與具體 實(shí)施方式一至十一之一相同。
具體實(shí)施方式
十三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十二之一不同的是步驟二 中蛋白水解液的流速為每小時(shí)7. 3倍 9. 8倍柱體積。其它與具體實(shí)施方式
一至十二之一 相同。
具體實(shí)施方式
十四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十三之一不同的是步驟二 中蛋白水解液的流速為每小時(shí)8倍柱體積。其它與具體實(shí)施方式
一至十三之一相同。
具體實(shí)施方式
十五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十四之一不同的是步驟三 中流出液在溫度為22°C 33°C、壓力為0. 7bar 1. 3bar的條件下通過5kD的超濾膜。其 它與具體實(shí)施方式
一至十四之一相同。
具體實(shí)施方式
十六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十五之一不同的是步驟三 中流出液在溫度為30°C、壓力為1. Obar的條件下通過6kD的超濾膜。其它與
具體實(shí)施例方式
一至十五之一相同。
具體實(shí)施方式
十七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十六之一不同的是步驟三 中所述的超濾膜的為Ultracel-PL再生纖維素超濾膜、聚砜超濾膜、聚丙烯腈超濾膜。其它 與具體實(shí)施方式
一至十六之一相同。
具體實(shí)施方式
十八本實(shí)施方式的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法按以下步 驟進(jìn)行一、蛋白質(zhì)水解按蛋清與胰蛋白酶的質(zhì)量比為100 2稱取蛋清和胰蛋白酶，將 蛋清配制成濃度為8% (質(zhì)量)的蛋白水溶液并置于反應(yīng)器中，升溫至35°C，并調(diào)節(jié)蛋白 水溶液的PH值至6. 5，然后加入胰蛋白酶，在溫度為35°C的條件下，攪拌5h，得到蛋白水解 液；二、脫鹽處理將經(jīng)步驟一得到的蛋白水解液以每小時(shí)8倍柱體積的流速，先通過強(qiáng)酸 性陽(yáng)離子交換樹脂柱，然后再通過強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂柱，收集流出液；三、分級(jí)純化處 理將經(jīng)步驟二得到的流出液在溫度為30°C、壓力為1. Obar條件下通過3kD的超濾膜，得 到濾出液，最后再將濾出液經(jīng)過凝膠過濾預(yù)裝柱Superdex Peptidel0-300GL處理，收集流 出液，得到蛋清蛋白源輔助降血壓肽。本實(shí)施方式所述的強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂的交換基團(tuán)為磺酸基(-SO3H)。本實(shí)施方式所述的強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂的交換基團(tuán)為季胺基。本實(shí)施方式所述的超濾膜的Ultracel-PL再生纖維素超濾膜。本實(shí)施方式經(jīng)步驟一水解后采用S印hadex 7510/30GL凝膠色譜柱對(duì)蛋白水解物 的分子量分布進(jìn)行測(cè)定，其中測(cè)定水解物分子量所用的標(biāo)準(zhǔn)品為2.5mg/mL卵白蛋白(Mr =44287Da)、5mg/mL 溶菌酶(Mr = 14400Da)、0· lmg/mL 維生素 B12 (Mr = 1355Da)和 0. lmg/ mL還原型谷胱甘肽(Mr = 307. 33Da)，用0. 05mol/L的pH值為7. 0的磷酸鹽緩沖溶液沖洗 至基線平穩(wěn)后，將被測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣，上樣量2mL、流速為0. 5mL/min,在254nm波長(zhǎng)處 檢測(cè)。以各標(biāo)準(zhǔn)品洗脫體積為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品分子量對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中標(biāo) 準(zhǔn)品分子量的單位為Da。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品的洗脫體積計(jì)算出蛋清蛋白水解物的分子量 主要分布在2040Da 107150Da范圍內(nèi)；本實(shí)施方式制備的蛋清蛋白源輔助降血壓肽采用Superdex P印tidel0-300GL凝膠色譜柱對(duì)蛋清蛋白源輔助降血壓肽的分子量分布進(jìn)行測(cè)定，所用的標(biāo)準(zhǔn)品為lmg/mL溶 菌酶(Mr = 14400Da)、0· lmg/mL 維生素 B12 (Mr = 1355Da)、0· 2mg/mL 氧化型谷胱甘肽(Mr =612. 66)和 0. lmg/mL 還原型谷胱甘肽(Mr = 307. 33Da)。用 0. 05mol/L pH 值為 7. 0 的 磷酸鹽緩沖溶液沖洗至基線平穩(wěn)后，分別將標(biāo)準(zhǔn)品和本實(shí)施方式的蛋清蛋白源輔助降血壓 肽進(jìn)樣，上樣量2mL、流速為0. 5mL/min，在254nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。以各標(biāo)準(zhǔn)品洗脫體積為橫坐 標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品分子量對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到蛋清蛋白源輔助降血壓肽的分子量 分布標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，從圖1可以看出洗脫體積與分子量對(duì)數(shù)值呈直線關(guān)系。本實(shí)施 方式的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的凝膠層析色譜圖如圖2所示，從圖2可以看出，圖中有 四個(gè)較強(qiáng)的色譜峰，其洗脫體積分別對(duì)應(yīng)著17mL、18. 8mL、20mL和25. 2mL，而洗脫體積大于 20mL的組分的分子量比較小，主要分布在200Da以下，這部分小分子量組分是游離的氨基 酸和蛋清中原有的碳水化合物等物質(zhì)。從圖1中的標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品的洗脫體積可以計(jì)算出 蛋清蛋白源輔助降血壓肽的分子量主要分布在200Da 2282Da。本實(shí)施方式中Mr表示分子量。本實(shí)施方式的蛋清蛋白源輔助降血壓肽對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制率為 89. 06%，具有羥自由基、具有清除超氧陰離子的能力和抑制脂質(zhì)過氧化的能力，只對(duì)高血 壓患者起作用而對(duì)正常人無副作用，可以直接添加到食品中并兼具營(yíng)養(yǎng)與降血壓功效；在 0°C 7°C和50°C 90°C的溫度下穩(wěn)定性良好，在堿性條件下的穩(wěn)定性優(yōu)于酸性環(huán)境；具備 較好的溶解性、乳化性及乳化穩(wěn)定性和起泡性及氣泡穩(wěn)定性。本實(shí)施方式的方法制備的蛋 清蛋白源輔助降血壓肽在溫度范圍為35°C的條件下，經(jīng)7 10小時(shí)制得，在此溫度下水解， 最大限度地保護(hù)了蛋清蛋白水解物中蘇氨酸、谷氨酸和亮氨酸不被破壞，蛋清蛋白源輔助 降血壓肽中甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和組氨酸的含量高達(dá)45.2%，疏水性 氨基酸和芳香族氨基酸的含量較水解物中有所提升，使蛋清蛋白源輔助降血壓肽兼具良好 的功能特性和抗氧化性。本方法制備溫度低，周期短，制備過程中不使用任何對(duì)人體有毒害 的物質(zhì)，是一種綠色方法，而且方法簡(jiǎn)單，易操作。
權(quán)利要求
蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法，其特征在于蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法按以下步驟進(jìn)行一、蛋白質(zhì)水解按蛋清與蛋白酶的質(zhì)量比為100∶1～3分別稱取蛋清和蛋白酶，先將蛋清配制成濃度為3％～10％(質(zhì)量)的蛋白水溶液并置于反應(yīng)器中，升溫至30℃～50℃，并調(diào)節(jié)蛋白水溶液的pH值至5～8，然后加入蛋白酶，在溫度為30℃～50℃的條件下，攪拌2h～5h，得到蛋白水解液；二、脫鹽處理將經(jīng)步驟一得到的蛋白水解液以每小時(shí)7倍～9倍柱體積的流速，先通過強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂柱，然后再通過強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂柱，收集流出液；三、分級(jí)純化處理將經(jīng)步驟二得到的流出液在溫度為20℃～35℃、壓力為0.5bar～1.5bar條件下通過3kD～10kD的超濾膜，得到濾出液，最后再將濾出液經(jīng)過凝膠過濾預(yù)裝柱Superdex Peptide 10/300GL，收集流出液，得到蛋清蛋白源輔助降血壓肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法，其特征在于步驟一中 所述的蛋白酶為胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶、堿性絲氨酸蛋 白酶和霉菌蛋白酶中的一種或其中幾種的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法，其特征在于步驟 一中蛋清與蛋白酶的質(zhì)量比為100 1.2 2. 8。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法，其特征在于步驟一中 蛋白水溶液的濃度為4% 9% (質(zhì)量)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或4所述的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法，其特征在于步 驟一中調(diào)節(jié)蛋白水溶液的pH值至5. 5 7. 5。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法，其特征在于步驟一中 蛋白水溶液在溫度為32°C 46°C的條件下，攪拌2. 5h 4. 5h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4或6所述的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法，其特征在于 步驟二中蛋白水解液的流速為每小時(shí)7. 3倍 9. 8倍柱體積。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法，其特征在于步驟三中 流出液在溫度為22°C 33°C、壓力為0. 7bar 1. 3bar的條件下通過5kD的超濾膜。
全文摘要
蛋清蛋白源輔助降血壓肽的制備方法，它涉及降血壓肽的制備方法，本發(fā)明解決了現(xiàn)有的胃蛋白酶水解分離法制備過程中脫鹽處理的工作量大、洗脫劑乙腈有毒及糜蛋白酶水解分離法處理周期長(zhǎng)、反應(yīng)終止溫度高的問題。本方法將蛋清和蛋白酶在pH值為5～8、溫度為30℃～50℃的條件下攪拌水解，然后將水解液依次經(jīng)強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹脂柱和強(qiáng)堿性陰離子交換樹脂柱脫鹽，流出液經(jīng)超濾膜過濾后經(jīng)凝膠過濾預(yù)裝柱Superdex Peptide 10-300GL純化得到蛋清蛋白源輔助降血壓肽。降血壓肽的分子量分布在200Da～2282Da，兼具營(yíng)養(yǎng)與降血壓功效，制備條件溫和，簡(jiǎn)單，脫鹽的工作量小，可作為高血壓患者的保健食品。
文檔編號(hào)A61K38/17GK101906455SQ20101023310
公開日2010年12月8日 申請(qǐng)日期2010年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月22日
發(fā)明者夏寧, 張華江, 王喜波, 遲玉杰 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)