專利名稱：一種N-乙基-N₂S₂-美金剛胺的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一 種 N-ethyI-N2S2-Memantine ([ 1 _ [N- [N- (2-巰基乙基)]-N- [2- [N- (2-巰基乙 基)氨基]乙基]氨基乙基]氨基_3，5-二甲基金剛烷]的制備方法，屬于放射性藥物標(biāo) 記前體化合物合成技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本發(fā)明的目的提供一種N-ethyl-N2S2-Memantine([l-[N-[N_(2-巰基乙 基)]-N-[2-[N-(2-巰基乙基)氨基]乙基]氨基乙基]氨基-3，5-二甲基金剛烷])的制 備方法，用于制備锝標(biāo)記的放射性藥物99mTc-N-乙基-二硫二氮-美金剛胺，用于腦受體顯 像。采用氟化亞錫作還原劑，與高锝酸鈉鹽溶液反應(yīng)，生成的標(biāo)記物 99mTc-N-Ethyl-N2S2-Memantine ( IV )，同時(shí)對(duì)標(biāo)記條件進(jìn)行優(yōu)化。紙層析測(cè)定標(biāo)記物放 化純和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將標(biāo)記物點(diǎn)樣于聚酰胺薄膜，置于V(乙醇)V(乙酸乙酯)= 1 1.5體系中上行展開，空氣中自然晾干干燥。采用10段法進(jìn)行放射性分布測(cè)量。 99Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine，放化純大于 90%。本發(fā)明的技術(shù)方案一種99mTc標(biāo)記前體Nithyl-N2S2-Memantine,化學(xué)名為 [1-[Ν-[Ν-(2-巰基乙基)]-N-[2-[N-(2-巰基乙基)氨基]乙基]氨基乙基]氨基_3，5_二
甲基金剛烷]，的制備方法，反應(yīng)方程式為 (1)化合物II合成I-N-[N-[2-[S-(4-甲氧基芐基)巰基]乙 基]-N-[2-[N-[2-[S-(4-甲氧基芐基)巰基]乙基]氨基]乙基]氨基乙基]氨基_3， 5-二甲基金剛烷的合成N2保護(hù)下，將5mmol化合物I :N-[2-(S_(4-甲氧基芐基)硫基)乙 基]-N-[(N-(2-(S-(4-甲氧基芐基)硫基)乙基)氨基)甲酰甲基-3，5-二甲基金剛烷胺 基乙酰胺溶解在50mL無水四氫呋喃中，0°C攪拌下，滴加Immol/mL BH3 *THF(硼烷四氫呋喃 溶液)50mL，滴加完回流反應(yīng)24小時(shí)，反應(yīng)完顏色變?yōu)闊o色，冷卻至0°C，緩慢滴加IN鹽酸， 直至沒有氣體產(chǎn)生，然后減壓蒸去THF，得到白色固體，再加入IN鹽酸IOOmL,升溫至90°C 反應(yīng)半小時(shí)，溶液冷卻至0°C，氨水調(diào)節(jié)pH至中性，加二氯甲烷(50mL)萃取分層，有機(jī)相水 洗，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸干得淡黃色油狀液體粗品3g，以甲醇二氯甲烷三乙胺體積 比1 10 0.5混合溶劑為淋洗劑柱層析純化，得無色液體化合物II;(2)化合物III合成1-[Ν-[Ν-(2-巰基乙基)]-N-[2-[N_(2-巰基乙基)氨基] 乙基]氨基乙基]氨基-3，5-二甲基金剛烷的合成控溫0°C，N2保護(hù)下在IOmL單頸燒瓶中將步驟(1)制得的0. 05mmol化合物II溶 解于3. 3mL三氟乙酸中，加干燥苯甲醚0. 13mL和醋酸汞Immol，攪拌30min，油泵真空濃縮 30min，得粘稠油狀物，加入干燥乙醚5mL到上述油狀物中，超聲震蕩5min，有無色固體生 成，過濾，油泵抽干，溶解于5mL無水乙醇中，通干燥H2S還原30min，離心除去黑色粉末狀硫 化汞，傾出三氟乙酸鹽的乙醇溶液，N2保護(hù)下，常溫下蒸干，油泵抽30min，得白色固體化合 物 III ；(3)化合物 IV :99mTc-N-Ethyl-N2S2-Memantine 的制備取40mg/mL葡庚糖酸鈉鹽0. lmL，用0. lmol/L鹽酸配制的lmg/mL氟化亞錫0. ImL, 10mg/mL乙二胺四乙酸0. 05mL于西林瓶中，再加入用70%乙醇溶解的lmg/mL化合物III 4 μ L，最后加入高锝酸鹽溶液(37MBq)，于沸水煮40min，冷卻即得化合物IV。所用原料化合物I的制備方法詳見專利一種美金剛烷二硫二氮衍生物的制備 方法，ZL 200710135512. 9。制備步驟如下式所示，原料化合物I即該專利中的化合物5。 4-甲氧基芐基-(2-氯乙酰胺基乙基)硫醚⑵與4-甲氧基芐基-(2-胺 基乙基)硫醚反應(yīng)得到N-[2-((2-(S-(4-甲氧基芐基)巰基)乙基)氨基)乙酰 基]-S_(4-甲氧基芐基)-2-氨基乙硫醇(3) ； (3)與氯代乙酰-3，5-二甲基金剛烷胺(4) 反應(yīng)，得到N-[2-(S-(4-甲氧基芐基)硫基)乙基]-N-[(N-(2-(S-(4-甲氧基芐基)硫 基)乙基)氨基)甲酰甲基]-3，5-二甲基金剛烷胺基乙酰胺(5) ； (5)用硼烷還原得到 I-N-[N-[2-[S-(4-甲氧基芐基)巰基]乙基]-N-[2-[N-[2-[S-(4-甲氧基芐基)巰基]乙 基]氨基]乙基]氨基乙基]氨基_3，5-二甲基金剛烷(6) ； (6)經(jīng)過與醋酸汞硫化氫反應(yīng) 脫巰基保護(hù)基得到標(biāo)記前體l-[N_[N-(2-巰基乙基)]-N-[2-[N-(2-巰基乙基)氨基]乙 基]氨基乙基]氨基-3，5-二甲基金剛烷(7)。各步反應(yīng)產(chǎn)物均得到了紅外、質(zhì)譜和核磁的 確證。對(duì)N-ethyl-N2S2_Memantine的神經(jīng)生理學(xué)活性進(jìn)行測(cè)定， 還對(duì)99TCm-N-ethyl-N2S2-Memantine的生物活性進(jìn)行測(cè)定，全面考察 "Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine作為NMDA受體顯像劑的可能性。N-ethyl-N2S2-Memantine能夠增加谷氨酸誘導(dǎo)損傷HS-HY5Y細(xì)胞的存活率，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有良好的保護(hù)作用，具有良好的生理學(xué)活性。神經(jīng)細(xì)胞HS-HY5Y 對(duì)"Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine有一定攝取，最高攝取率為3. 84 %。說明 "Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine具有一定的透過血腦屏障到達(dá)腦部特定區(qū)域的能力?；旧锾匦匝芯?Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine的脂水分配系數(shù)IgP為1. 74，電 荷測(cè)定顯示為電中性。高(3.7MBq)中(0. 74MBq)低(0. 148MBq)三個(gè)濃度的血漿蛋白結(jié)合 率分別為77.5%、74. 1%、73.2%，對(duì)濃度不具備依賴性，表明標(biāo)記配基具有良好的生物學(xué) 特性易透過血腦屏障。生物分布及初步藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，99TCm-N-ethyl-N2S2-Memantine在小鼠體內(nèi) 以肝臟、腎臟攝取最多，腦部有一定的攝取，其中丘腦攝取最多，其次是海馬和額葉。本發(fā)明的有益效果放射性受體結(jié)合分析測(cè)得99TCm-N-ethyl-N2S2-Memantine與 NMDA受體結(jié)合的解離常數(shù)Kd = 584. 32nmol/L，最大結(jié)合容量為Bmax = 267. 05nmol/mg,與 NMDA受體親和力較好；競(jìng)爭(zhēng)性受體結(jié)合分析顯示NMDA受體拮抗劑氯胺酮和MK-801能有效 阻斷99TCm-N-ethyl-N2S2-Memantine與NMDA受體的結(jié)合，而多巴胺D2受體和σ受體的拮抗 劑氟哌啶醇則無明顯的抑制作用。小鼠腦部顯像結(jié)果顯示在15min時(shí)，額葉與丘腦攝取明 顯高于對(duì)照組。用99YCm-N-ethyl-N2S2-Memantine有可能用于腦部疾病的深入研究。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 化合物II I-N-[N-[2-[S-(4-甲氧基芐基)巰基]乙 基]-N-[2-[N-[2-[S-(4-甲氧基芐基)巰基]乙基]氨基]乙基]氨基乙基]氨基_3， 5-二甲基金剛烷的合成N2保護(hù)下，將化合物I :N-[2-(S_(4-甲氧基芐基)硫基)乙 基]-N-[(N-(2-(S-(4-甲氧基芐基)硫基)乙基)氨基)甲酰甲基-3，5-二甲基金剛烷胺 基乙酰胺(3. 27g,5mmol)溶解在50mL無水四氫呋喃中，0°C攪拌下，滴加BH3 · THF(50mL, Immol/mL)，滴加完回流反應(yīng)24小時(shí)，反應(yīng)完顏色變?yōu)闊o色，冷卻至0°C，緩慢滴加IN鹽 酸，直至沒有氣體產(chǎn)生，然后減壓蒸去THF，得到白色固體，再加入鹽酸(1N，IOOmL)，升溫 至90°C反應(yīng)半小時(shí)，溶液冷卻至0°C，氨水調(diào)節(jié)pH至中性，加二氯甲烷萃取分層，有機(jī)相 水洗，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸干得淡黃色油狀液體粗品3g，以甲醇二氯甲烷三乙胺 (1 10 0.5體積比)為淋洗劑柱層析純化，得無色液體化合物II。質(zhì)譜MS(m/z) :626(m+l);屯-匪1 金剛烷上2個(gè)甲基-0.896 111(6!1單峰)；金剛烷 上 6 個(gè)亞甲基峰共 12 個(gè)H，1. 18ppm(2H單峰)，1. 25-1. 4ppm(4H多重峰)，1. 65-1. 79ppm(4H, 多重峰)，2ppm(2H,單峰)；金剛烷上一個(gè)CH上的H，2. 2ppm(lH,多重峰)；N2S2環(huán) 上8個(gè)亞甲基共16個(gè)氫，2. 49-2. 51ppm(2H,多重峰)，2. 81-2. 96ppm(6H,多重峰)， 3.03-3. 15ppm(8H，多重峰)；O-CH2-S-上二個(gè)亞甲基峰，3. 69ppm(4H，多重峰)；Φ-OCH3 上 的二個(gè)甲基峰，3. 74-2. 72ppm(6H,多重峰)；苯環(huán)上的8個(gè)Η，6· 83-6. 88ppm(4H,多重峰)， 7. 22-7. 29ppm (4H,多重峰)；N 上二個(gè)活潑氫，9ppm (1H，bs)，9. 14 (1H, bs)。實(shí)施例2 化合物III I-N-[N-(2-巰基乙基)]-N-[2-[N-(2-巰基乙基)氨基] 乙基]氨基乙基]氨基-3，5-二甲基金剛烷的合成控溫0°C，N2保護(hù)下在IOmL單頸燒瓶中將化合物11(0. 31g，0. 05mmol)溶解于 3. 3mL三氟乙酸，加干燥0. 13mL苯甲醚和醋酸汞(318mg，Immo 1)，攪拌30min，油泵真空濃縮30min，得粘稠油狀物，加入干燥乙醚5mL到上述油狀物中，超聲震蕩5min，有無色固體生成，過濾，油泵抽干30min，溶解于5mL無水乙醇中，通干燥H2S還原30min，離心除去黑色粉 末狀硫化汞，傾出三氟乙酸鹽的乙醇溶液，N2保護(hù)下，常溫下蒸干，油泵抽30min，得白色固 體化合物 III。質(zhì)譜 MS(m/z) :386(m+l)。實(shí)施例3 化合物IV =99mTc-N- [N- (2_巰基乙基)]-N- [2_ [N- (2_巰基乙基)氨基] 乙基]氨基乙基]氨基-3，5-二甲基金剛烷的制備取0. ImL 葡庚糖酸鈉鹽(40mg/mL)、0· ImL 氟化亞錫(lmg/mL，0. lmol/L 鹽酸)、 0. 05mL乙二胺四乙酸(EDTA) (10mg/mL)置于西林瓶中，再加入40 μ L化合物III(lmg/mL， 70%乙醇溶液)，最后加入高锝酸鹽溶液(37MBq)，于沸水煮40min，冷卻即得化合物IV。薄層層析(TLC)測(cè)定放化純?chǔ)薛?. 5 7，25 100 μ g N-ethyl_N2S2-Memantine， 30 150 μ gSnF2,0· 2 1. OmgEDTA, 3 6mgGH (葡庚糖酸鈉)，99TcmO4 活度為 37 296MBq、 反應(yīng)體積為0. 1 2mL。沸水浴條件下反應(yīng)40min，薄層層析TLC測(cè)得標(biāo)記率大于92%。室 溫放置6h標(biāo)記率仍然大于90%，穩(wěn)定性較好。實(shí)施例4 :99mTc-N-ethyl-N2S2-Memantine體外放射性受體結(jié)合分析1、飽和實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)分成3組總結(jié)合(TB)、非特異性結(jié)合(NSB)和空白(blank)TB組測(cè)定在系列玻璃管中依次加入倍比稀釋的不同濃度(13. 7， 27. 4,54. 8, 109. 6,219. 2,438. 3,876. 6, 1753. 2,3506. 4nmol/L)的標(biāo)記配基 "Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine,0. ImL HEPES (羥乙基哌嗪乙硫磺酸，非離子兩性緩沖液)緩 沖液，0. 3mL NMDA受體蛋白(0. 5mg/mL)，加緩沖液C (含5 %吐溫-20的pH = 7. 4的IOmmol/ L HEPES緩沖液)終體積為0. 6mL。NSB組測(cè)定在系列玻璃管中除上述外，每管加0. ImL的 N-ethyl-N2S2-Memantine (520 μ mol/L)，加緩沖液 C 終體積為 0. 6mL。blank組測(cè)定在系列玻璃管中加入以上相同倍比稀釋濃度的標(biāo)記配基0. ImL和 0. ImL HEPES緩沖液，加緩沖液C至終體積為0. 6mL。將以上3組玻璃管置于37°C水浴中孵 育35min，冰浴終止反應(yīng)5min。以0. 1 % PEI (聚乙烯亞胺)浸泡過的的玻璃纖維濾紙為濾 膜，用多頭細(xì)胞收集器抽濾，再用緩沖溶液C沖洗4遍，每次3mL。取下濾紙，于、測(cè)量管中 測(cè)計(jì)數(shù)。解離常數(shù)Kd和最大結(jié)合容量Bmax測(cè)定總結(jié)合(TB) = γΤΒ(總結(jié)合計(jì) 數(shù))-Yblank(空白計(jì)數(shù))，非特異結(jié)合(NSB) = Y NSB (非特異結(jié)合計(jì)數(shù))-γ blank (空白 計(jì)數(shù))，特異性結(jié)合(SB)=總結(jié)合(TB)-非特異結(jié)合(NSB)。以各計(jì)數(shù)為縱坐標(biāo)，標(biāo)記配基 濃度為橫坐標(biāo)即得受體結(jié)合曲線；根據(jù)受體B區(qū)理論數(shù)據(jù)模型編制的結(jié)合分析計(jì)算程序分 析處理，求出解離常數(shù)Kd = 584. 32nmol/L(n = 4)，和最大結(jié)合容量Bmax = 267. 05nmol/ mg02、競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合實(shí)驗(yàn)氯胺酮、5-甲基二氫丙環(huán)庚烯亞胺馬來酸(MK-801)分別為NMDA受體不同親和力 的拮抗劑；氟哌啶醇為多巴胺D2受體和ο受體的拮抗劑。步驟同上，每管加入相同濃度 (1. 87 μ mol/L)的標(biāo)記配基 99Tcm-N-ethyl_N2S2-Memantine 0. ImL,加入不同濃度氯胺酮、 MK-801 和氟哌啶醇(氯胺酮1 X IO"1,1 X IO"2,1 X IO"3,1 X IO"4,1 X IO"5,1 X IO"6,1 X IO"7,1 X 1(Γ8，1 X 1(Γ9，1 X l(T10mol/L ；ΜΚ-801 1 X 1(Γ2，1 X 1(Γ3，1 X 1(Γ4，1 X 1(Γ5，1 X 1(Γ6， 1 X IO"7,1 X IO"8,1 X IO"9,1 X IO"10,1 X 10_11mol/L ；氟哌啶醇1 X 10、1 X 1(Γ2，1 X 1(Γ3， 1 X IO"4,1 X IO"5,1 X IO"6,1 X IO"7,1 X IO"8,1 X IO"9,1 X l(T10mol/L)的抑制劑 0. ImL,力口 入
受體蛋白0.3mL，終體積0.6ml，抽濾，洗滌，計(jì)數(shù)。以特異性結(jié)合抑制率(％ )為縱坐標(biāo)， 抑制劑濃度負(fù)對(duì)數(shù)值(-IgC)為橫坐標(biāo)作圖，計(jì)算不同抑制劑的半抑制濃度IC5tl和表觀解 離常數(shù)K”兩種抑制劑氯胺酮和ΜΚ-801的半抑制濃度IC5tl分別為9.48X10_6mol/L和 3. 66X 10_8mOl/L。根據(jù)公式=Ki = IC5tl/(Ι+LT/Kd)，得出氯胺酮和MK-801的表觀解離常數(shù)Ki 分別為 6· 18X l(T6mol/L 和 2. 39 X l(T8mol/L。說明 99Tcm-N-ethyl_N2S2-Memantine 與 NMDA 受體的結(jié)合具有一定的特異性。而實(shí)驗(yàn)中氟哌啶醇組對(duì)99TCm-N-ethyl-N2S2-Memantine與 NMDA受體的特異性結(jié)合無明顯的抑制作用，說明99TCm-N-ethyl-N2S2-Memantine不與多巴 胺D2受體和ο受體結(jié)合，具有結(jié)合的靶向性。實(shí)施例5 :N-ethyl-N2S2-Memantine的神經(jīng)生理學(xué)活性測(cè)定1、SH-HY5Y 對(duì) 99Tcm-N-ethyl_N2S2-Memantine 攝取率的測(cè)定實(shí)驗(yàn)前用含0. 5%小牛血清的PBS浸泡試管Ih以上，以減少非特異性吸附。實(shí) 驗(yàn)分成三組，實(shí)驗(yàn)組依次加入ImL濃度為4.0X105f/mL的細(xì)胞懸液、0. ImL(0. 185MBq) 標(biāo)記配體"Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine ；陰性對(duì)照組依次加入ImL濃度為4. OX IO5個(gè) /mL的細(xì)胞懸液、0. ImL(0. 185MBq)的99Tcm_淋洗液；空白對(duì)照組依次加入ImL培養(yǎng)基、 0. ImL 標(biāo)記配體"Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine。輕輕混勻，置于 37°C、5 % CO2 培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)，分別培養(yǎng) 10min、30min、60min、90min、120min、180min、360min。于每一時(shí)間點(diǎn)同時(shí) 取實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組、空白對(duì)照組，離心2000r/min(r = 6. 0cm) 5min,棄上清，用PBS緩 沖液洗3次，離心，去上清液，沉淀測(cè)放射性計(jì)數(shù)(cpm)除以總計(jì)數(shù)(反應(yīng)管中加入的 總計(jì)數(shù))即為攝取率。HS-HY5Y對(duì)"Tcm_ (對(duì)照組)的攝取率較低(0.5%)，對(duì)標(biāo)記配體 "Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine(實(shí)驗(yàn)組)的攝取率明顯較高，60min時(shí)攝取率達(dá)到3. 84%。2、N-ethyl-N2S2-Memantine 對(duì)受損的 SH-HY5Y 細(xì)胞的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)分為陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組和正常細(xì)胞組。陰性對(duì)照組將培養(yǎng)好的SH-HY5Y細(xì)胞以1. 5 X IO5個(gè)/mL鋪于96孔板， 每孔200 μ L，置于37 °C、5 % CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。棄培養(yǎng)基，加入180 μ L的 HBSS(Hanks' balanced salts，是一種緩沖溶液，也叫Hanks‘緩沖液)，然后加20 μ L的 (50mmol/L)谷氨酸溶液。陽性對(duì)照組培養(yǎng)過夜的細(xì)胞棄上清后，加入160 μ L的HBSS，然后加20 μ L的 (50mmol/L)的谷氨酸溶液，再加20 μ L的(20mmol/L)的鹽酸美金剛胺鹽。實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)過夜的細(xì)胞棄上清后，加入160 μ L的HBSS，然后加20 μ L的 (50mmol/L)的谷氨酸溶液，再加 20 μ L 的 N-ethyI-N2S2-Memantine (5、10、20、40、50、60、80、 120mmol/L)。正常細(xì)胞組將培養(yǎng)過夜的細(xì)胞棄上清后，只加200 μ L的的HBSS。96孔板置于 37°C>5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4h后，每孔加20yL的MTT(噻唑藍(lán))，置于37°C、5% CO2培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)4h。棄培養(yǎng)液，加200 μ LDMSO ( 二甲基亞砜)溶解沉淀。酶標(biāo)儀550nm測(cè)OD值。用谷氨酸作為HS-HY5Y神經(jīng)細(xì)胞損傷誘導(dǎo)劑，谷氨酸濃度為50mmol/L時(shí)，SH-HY5Y 細(xì)胞受損傷(0D值為0. 4246)，是對(duì)照組的49. 9% (未加谷氨酸誘導(dǎo)劑OD值為0. 85)。隨著 N-ethyl-N2S2-Memantine 濃度增加，OD 值明顯上升；當(dāng) N-ethyl_N2S2-Memantine 濃度為4mmol/L時(shí)，OD值為0. 763，接近陽性對(duì)照組(0. 74)。這說明N-ethyl_N2S2-Memantine能夠 增加谷氨酸誘導(dǎo)損傷SH-HY5Y細(xì)胞的存活率，表明Nithyl-N2S2-Memantine對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具 有良好的保護(hù)作用。實(shí)施例6:體內(nèi)實(shí)驗(yàn)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)包括組織分布、初步藥物動(dòng)力學(xué)和放射自顯影實(shí)驗(yàn)，以考察該藥物在體 內(nèi)分布特性和腦內(nèi)分布情況。l、99Tcm-N-ethyl-N2S2_Memantine的小鼠體內(nèi)分布及代謝途徑的測(cè)定48只體重在18 22g的KM小鼠，隨機(jī)分成8組，每組6只。尾靜脈注射 0. 2mL (9. 25MBq)放化純大于 90 % 的 99Tcm-N-ethyl_N2S2-Memantine，分別于注射后 5， 15，30，60，120，180，240和360min頸部放血處死小鼠，取血200 μ L ；解剖，取各器官 并稱重，Y -counter計(jì)數(shù)(cpm)。解剖腦組織，稱重并Y -counter計(jì)數(shù)(cpm)。計(jì)算 "Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine在腦區(qū)各組織中的分布。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示99TCm-N-ethyl-N2S2-Memantine進(jìn)入血液后很快被組織攝取，所 有的組織清除均較快，注射360min后，各組織內(nèi)殘留量很少。肝的放射性分布最多，注 射5min后達(dá)到(16. 69士0.60) % ID/g，之后開始下降，360min時(shí)下降到(5. 25士 1.47)% ID/g。腎和肺的攝取量?jī)H次于肝，在注射5min后達(dá)到峰值，分別為(12. 02士0. 87) % ID/ g、(11. 41 士0. 81) % ID/g，360min 時(shí)分別下降到(2. 60士0. 40) % ID/g、(0. 77士0. 11) % ID/g。顯示"Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine主要通過肝代謝。注射5min后，橋腦和紋狀 體含量最高，分別為(0.86士0.03) % ID/g和(0.74士0.07) % ID/g。15min時(shí)，腦內(nèi)分布 最高的為丘腦，其次是海馬和額葉，分別為(0.97士0.03)% ID/g、(0.92士0.03)% ID/g、 (0. 90士0. 08) % ID/g。2、99Tcm-N-ethyl-N2S2_Memantine 的藥物動(dòng)力學(xué)測(cè)定取六只KM 小鼠(20. 0士 1. Og)，尾靜脈注射 99Tcm-N-ethyl_N2S2-Memantine (10MB q)，分別于注射后 2、5、10、15、30、60、120、180、360min 時(shí)尾靜脈取血 10 μ L, y -counter if 數(shù)(cpm)，繪制血漿藥物濃度-時(shí)間曲線(擬合曲線方程為=C = 0. 449e_°_°9t+0. 157e_°_°°3t)， 顯示99Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine的分布和消除符合二室模型。吸收半衰期是7. 66min, 組織半衰期為271. OOmin03、99Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine 的小鼠腦顯像研究取兩只體重接近的KM小鼠，分成對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組先尾靜脈注射50 μ L 的氯胺酮，3min 后，再尾靜脈注射 150 μ L 的 99Tcm-N-ethyl-N2S2_Memantine (222MBq)，15min 后靜脈放血處死，取完整的腦，用冷凍切片機(jī)切片。實(shí)驗(yàn)組先尾靜脈注射50 μ L的生理鹽 水，3min 后尾靜脈注射 150 μ L 的 99Tcm-N-ethyl_N2S2-Memantine (222MBq)，15min 后靜脈 放血處死，取完整的腦，冷凍切片。將切片在磷屏顯像儀中曝光顯像。腦部自顯影圖顯示， "Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine在額葉有較高的濃集，形成了不錯(cuò)的顯像效果，與對(duì)照組相 比差異明顯。通過體內(nèi)外試驗(yàn)結(jié)果顯示"Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine與NMDA受體有一定的特 異結(jié)合，可以進(jìn)一步深入研究NMDA受體與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的關(guān)系，對(duì)精神分裂癥的發(fā)病機(jī)制 的研究有重大的推動(dòng)作用。
權(quán)利要求
一種99mTc標(biāo)記前體N-ethyl-N2S2-Memantine，化學(xué)名為[1-[N-[N-(2-巰基乙基)]-N-[2-[N-(2-巰基乙基)氨基]乙基]氨基乙基]氨基-3，5-二甲基金剛烷]，的制備方法，其特征是反應(yīng)方程式為(1)化合物II的合成1-N-[N-[2-[S-(4-甲氧基芐基)巰基]乙基]-N-[2-[N-[2-[S-(4-甲氧基芐基)巰基]乙基]氨基]乙基]氨基乙基]氨基-3，5-二甲基金剛烷的合成N2保護(hù)下，將5mmol化合物IN-[2-(S-(4-甲氧基芐基)硫基)乙基]-N-[(N-(2-(S-(4-甲氧基芐基)硫基)乙基)氨基)甲酰甲基-3，5-二甲基金剛烷胺基乙酰胺溶解在50mL無水四氫呋喃中，0℃攪拌下，滴加1mmol/mL硼烷四氫呋喃溶液BH3·THF 50mL，滴加完回流反應(yīng)24小時(shí)，反應(yīng)完顏色變?yōu)闊o色，冷卻至0℃，緩慢滴加1N鹽酸，直至沒有氣體產(chǎn)生，然后減壓蒸去THF，得到白色固體，再加入1N鹽酸100mL，升溫至90℃反應(yīng)半小時(shí)，溶液冷卻至0℃，氨水調(diào)節(jié)pH至中性，加二氯甲烷50mL萃取分層，有機(jī)相水洗，無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸干得淡黃色油狀液體粗品3g，以甲醇∶二氯甲烷∶三乙胺體積比1∶10∶0.5混合溶劑為淋洗劑柱層析純化，得無色液體化合物II；(2)化合物III的合成[1-[N-[N-(2-巰基乙基)]-N-[2-[N-(2-巰基乙基)氨基]乙基]氨基乙基]氨基-3，5-二甲基金剛烷]的合成控溫0℃，N2保護(hù)下在10mL單頸燒瓶中將步驟(1)制得的0.05mmol化合物II溶解于3.3mL三氟乙酸中，加干燥苯甲醚0.13mL和醋酸汞1mmol，攪拌30min，油泵真空濃縮30min，得粘稠油狀物，加入干燥乙醚5mL到上述油狀物中，超聲震蕩5min，有無色固體生成，過濾，油泵抽干，溶解于5mL無水乙醇中，通干燥H2S還原30min，離心除去黑色粉末狀硫化汞，傾出三氟乙酸鹽的乙醇溶液，N2保護(hù)下，常溫下蒸干，油泵抽30min，得白色固體化合物III。FSA00000136864800011.tif
全文摘要
一種N-乙基-N2S2-美金剛胺的制備方法，屬于放射性藥物標(biāo)記前體化合物合成技術(shù)領(lǐng)域。N-ethyl-N2S2-Memantine的化學(xué)名為[1-[N-[N-(2-巰基乙基)]-N-[2-[N-(2-巰基乙基)氨基]乙基]氨基乙基]氨基-3，5-二甲基金剛烷]，本發(fā)明產(chǎn)物是99mTc標(biāo)記前體，用氟化亞錫作還原劑，與高锝酸鈉鹽溶液反應(yīng)，對(duì)標(biāo)記條件進(jìn)行優(yōu)化生成標(biāo)記物99mTc-N-Ethyl-N2S2-Memantine，99Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine放化純大于90％。通過體內(nèi)外試驗(yàn)顯示99Tcm-N-ethyl-N2S2-Memantine與NMDA受體有一定的特異結(jié)合，可以用于研究NMDA受體的變化與精神分裂癥的關(guān)系，對(duì)精神分裂癥的發(fā)病機(jī)制的研究有重大的推動(dòng)作用。
文檔編號(hào)A61P25/00GK101857561SQ20101019657
公開日2010年10月13日 申請(qǐng)日期2010年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月3日
發(fā)明者劉英濤, 周杏琴, 張建康, 徐希杰, 曹國(guó)憲 申請(qǐng)人:江蘇省原子醫(yī)學(xué)研究所