專利名稱：一種抗移植免疫排斥反應(yīng)的新型j2-海藻酸鈉微球緩釋免疫抑制劑、制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗移植免疫的免疫抑制劑，特別是抗移植免疫排斥反應(yīng)的化合物免疫抑制劑J2的海藻酸鈉微球緩釋制劑，本發(fā)明還涉及該緩釋制劑的制備方法和用途。
背景技術(shù)：
免疫抑制的歷史發(fā)展雖然不長(zhǎng)，卻在器官移植領(lǐng)域獲得了顯著成就。免疫移植劑在器官移植中用于防治排斥反應(yīng)，即，干擾受體對(duì)外來(lái)抗原的識(shí)別和對(duì)非自身細(xì)胞的清除。 免疫移植劑在器官移植中的應(yīng)用大大提高了移植患者的存活率，目前，肝移植、腎移植、角膜移植、皮膚移植、心臟移植、肺臟移植等器官移植已達(dá)到相當(dāng)成功的水平，其中肝、腎、皮膚移植和角膜移植臨床應(yīng)用最多。這些成績(jī)的取得與外科手術(shù)日臻成熟密不可分，但更為重要的是免疫抑制劑在器官移植中的應(yīng)用。20世紀(jì)60年代可以應(yīng)用疫抑制劑十分有限，只有皮質(zhì)激素及硫唑嘌呤；70年代有抗淋巴細(xì)胞球蛋白B多克隆抗體C ；80年代初有環(huán)孢素，近年來(lái)多個(gè)用于控制器官移植排斥反應(yīng)的新型免疫抑制劑進(jìn)入臨床，如西羅莫司， 咪唑立賓，F(xiàn)TY720,⑶3單抗，⑶25單抗，CTLA-4免疫球蛋白等。由于免疫抑制劑的作用是非特異的，選擇性差，有明顯的毒副作用。因此近年來(lái)免疫抑制劑的研究主要集中在提高免疫抑制劑的安全性使用，在降低肝、腎毒性，神經(jīng)毒性和胃腸道毒性等方面有了很大改善， 對(duì)于器官移植的患者來(lái)說(shuō)，目前的免疫抑制劑雖然使抑制物的存活時(shí)間大大延長(zhǎng)，但還未達(dá)到理想的境地，在實(shí)際應(yīng)用中表現(xiàn)特異性較差，對(duì)正常免疫反應(yīng)的抑制作用也較強(qiáng)，所以服用這些免疫抑制劑的患者冒著巨大的危險(xiǎn)。因此，尋找和發(fā)現(xiàn)毒性小，選擇性和特異性好的免疫抑制劑仍是免疫學(xué)家和藥物學(xué)家的重要課題。計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)技術(shù)(Computer-as-sisted drug disgn CADD)在抗原的識(shí)別，淋巴細(xì)胞的活化增殖過程中，細(xì)胞表面與細(xì)胞識(shí)別相關(guān)的蛋白分子接觸是受嚴(yán)格限制的。因此，人們想到如果能有一種藥物可以和這些蛋白質(zhì)分子的某些結(jié)構(gòu)相結(jié)合，就可以阻斷信號(hào)的傳遞，達(dá)到控制免疫過程的目的。Connolly首先提出了靶標(biāo)分子幾何空間構(gòu)象的 DOCK概念，DOCK是目標(biāo)靶分子的三維結(jié)構(gòu)中與其配體結(jié)合發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)的部位?；诖巳藗兺ㄟ^CADD設(shè)計(jì)出藥物。它的基本過程是通過實(shí)驗(yàn)得到目標(biāo)靶分子的三維結(jié)構(gòu)，運(yùn)用計(jì)算機(jī)技術(shù)將已知空間構(gòu)象的化合物進(jìn)行篩選，得到與目標(biāo)靶分子DOCK結(jié)構(gòu)相匹配的藥物，通過體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該藥物的有效性。Song Li基于⑶4分子的domainl的D0CK3. 5 結(jié)構(gòu)，通過CADD技術(shù)從約150，000小分子非肽類有機(jī)化合物中篩選出J2，在體外實(shí)驗(yàn)中具有良好的抑制CD4分子與MHC II分子結(jié)合形成復(fù)合體的作用，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明具有良好的抗排斥作用。小分子非肽類免疫抑制劑與傳統(tǒng)免疫抑制劑相比具有特異性高，副作用少的特點(diǎn)。沒有抗體類藥物的抗原性問題，為抗角膜排斥反應(yīng)提供了一個(gè)新的思路，其在角膜移植中有很好的應(yīng)用價(jià)值。J2的合成方法為直接將1-氯-2，4_ 二硝基苯與甲胺乙醇溶液反應(yīng)，得(2， 4-二硝基苯基)甲胺(I )；再經(jīng)氫化和三乙胺溶液反應(yīng)得到關(guān)鍵中間體(II )，即N-甲
5基-4-硝基苯-1，2-胺；再經(jīng)乙腈溶解，將(E)-3-吲哚丙烯酸溶于無(wú)水四呋喃中，用DCC 縮合法加入化合物(II )反應(yīng)得到黃色固體(III)，即E-3-(吲哚-3-基)-N- -甲胺基-5-硝基-苯基)丙烯酰胺(J2)，其為以吲哚丙烯酰胺為核心結(jié)構(gòu)的CD4抑制劑。
權(quán)利要求
1.一種抗移植免疫排斥反應(yīng)的新型J2-海藻酸鈉微球緩釋免疫抑制劑，其特征在于，所述緩釋免疫抑制劑包括含免疫抑制劑J2的海藻酸鈉微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋免疫抑制劑，其特征在于，所述微球是以海藻酸鈉為載體，交聯(lián)免疫抑制劑J2并將其吸附和包裹在其中形成的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的緩釋免疫抑制劑，其特征在于，所述微球的制備包括下述步驟的方法(1)將免疫抑制劑J2稱重，用無(wú)水乙醇或二甲基亞砜溶解，得到0.1 8.8%質(zhì)量體積百分比的免疫抑制劑J2溶液；(2)將海藻酸鈉稱重，用注射用水或生理鹽水溶解，得到1 6%質(zhì)量體積百分比的海藻酸鈉溶液；(3)將二價(jià)金屬陽(yáng)離子鈣鹽稱重，所述陽(yáng)離子鈣鹽選自乳酸鈣、氯化鈣或氯化鋇，配制成1 15%質(zhì)量體積百分比固化液；在所得固化液中加入無(wú)水乙醇，固化液和無(wú)水乙醇的體積比是3 2 10 1，得到工作固化液；(4)將免疫抑制劑J2溶液和海藻酸鈉溶液混合，得混合液；(5)將上述步驟(4)的混合液通過高壓靜電微球液滴發(fā)生裝置，噴霧微滴，分散于工作固化液中，待沉淀完全后去除上清液，得到含免疫抑制劑J2的海藻酸鈉微球。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的緩釋免疫抑制劑，其特征在于其制備過程的步驟( 使用的高壓靜電微球液滴發(fā)生裝置包括高壓靜電發(fā)生裝置、推進(jìn)泵、噴射頭、無(wú)菌容器、正負(fù)電極、無(wú)菌注射器、升降裝置，所述高壓靜電發(fā)生裝置上有正負(fù)兩極，所述推進(jìn)泵與無(wú)菌注射器和噴射頭相連，所述正極與噴射頭相連，所述負(fù)極與浸在所述固化液中的不銹鋼鋼絲相連接，所述不銹鋼鋼絲與無(wú)菌容器相連，所述不銹鋼鋼絲與無(wú)菌容器下方有調(diào)節(jié)距離的升降裝置。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的緩釋免疫抑制劑，其特征在于其制備過程的步驟( 使用的高壓靜電微球液滴發(fā)生裝置的電壓為220 260伏，頻率為10 100HZ，脈寬為10 199PS，所述推進(jìn)泵的泵速為10 350毫升/小時(shí)，噴射頭為4 20號(hào)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的緩釋免疫抑制劑，其特征在于所述緩釋制劑還包括固化液，所述固化液為乳酸鈣、氯化鈣或氯化鋇的1 15%重量溶液，儲(chǔ)存在固化劑溶液中的微球的粒徑 20 100 μ m、50 150 μ m、150 200 μ m、200 450 μ m、300 500 μ m、500 700 μ m、550 750 μ m、750 950 μ m 或 950 1250 μ m。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的緩釋免疫抑制劑，其特征在于微球儲(chǔ)存在固化溶液中，微球與固化液的重量比為0. 15 3. 5 1 80。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的緩釋制劑，其特征在于所述緩釋制劑中的微球是粉末狀顆粒，其粒徑范圍為 10 50μπι、50 100μπι、50 150 μ m、100 200 μ m、200 450 μ m、 300 500 μ m、500 700 μ m、750 950 μ m。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的緩釋制劑，其特征在于其制備過程的步驟( 完成之后，將上層溶液傾析，將微球用冷凍干燥或烘箱干燥法制得干球。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的緩釋免疫抑制劑，其特征在于其中還包括選自他克莫司、西羅莫司、霉酚酸脂、咪唑立賓、強(qiáng)的松、甲潑尼龍、環(huán)孢素A、賽尼哌或FTY720的活性成分。
11.一種制備權(quán)利要求1或2所述的緩釋免疫抑制劑的方法，其特征在于包括下列步驟(1)將免疫抑制劑J2稱重，用無(wú)水乙醇或二甲基亞砜溶解，得到0.1 8.8%重量的免疫抑制劑J2溶液；(2)將海藻酸鈉稱重，用注射用水或生理鹽水溶解，得到1 6%重量的海藻酸鈉溶液；(3)將二價(jià)金屬陽(yáng)離子鈣鹽稱重，所述陽(yáng)離子鈣鹽選自乳酸鈣、氯化鈣或氯化鋇，配制成1 15%重量固化液；在所得固化液中加入無(wú)水乙醇，固化液和無(wú)水乙醇的體積比是3 2 10 1，得到工作固化液；(4)將免疫抑制劑J2溶液和海藻酸鈉溶液混合，得混合液；(5)將上述步驟(4)的混合液通過高壓靜電微球液滴發(fā)生裝置，噴霧微滴，分散于工作固化液中，待沉淀完全后去除上清液，得含免疫抑制劑J2的海藻酸鈉微球。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的緩釋免疫抑制劑制備方法，其特征在于在步驟( 使用的高壓靜電微球液滴發(fā)生裝置包括高壓靜電發(fā)生裝置、推進(jìn)泵、噴射頭、無(wú)菌容器、正負(fù)電極、無(wú)菌注射器、升降裝置，所述高壓靜電發(fā)生裝置上有正負(fù)兩極，所述推進(jìn)泵與無(wú)菌注射器和噴射頭相連，所述正極與噴射頭相連，所述負(fù)極與浸在所述固化液中的不銹鋼鋼絲相連接，所述不銹鋼鋼絲與無(wú)菌容器相連，所述不銹鋼鋼絲與無(wú)菌容器下方有調(diào)節(jié)距離的升降裝置。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的緩釋免疫抑制劑制備方法，其特征在于其制備過程的步驟 (5)使用的高壓靜電微球液滴發(fā)生裝置的電壓為220 260伏，頻率為10 100HZ，脈寬為 10 199PS，所述推進(jìn)泵的泵速為10 350毫升/小時(shí)，噴射頭為4 20號(hào)需要指明口徑數(shù)值范圍。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的緩釋免疫抑制劑制備方法，其特征在于步驟( 得到的微球儲(chǔ)存在固化劑溶液中，微球的粒徑20 100 μ m、50 150 μ m、150 200 μ m、200 450 μ m、300 500 μ m、500 700 μ m、550 750 μ m、750 950 μ m 或 950 1250 μ m。
15.根據(jù)權(quán)利要求11或14所述的緩釋免疫抑制劑制備方法，其特征在于步驟( 得到微球儲(chǔ)存在固化溶液中，微球與固化液的重量比為0. 15 3. 5 1 80。
16.根據(jù)權(quán)利要求11所述的緩釋免疫抑制劑制備方法，其特征在于步驟( 完成之后， 將微球干燥，得到粉末顆粒。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的緩釋免疫抑制劑制備方法，其特征在于步驟( 完成之后， 微球用冷凍干燥或烘箱干燥法干燥，得到粉末顆粒，即，干球。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的制備方法，其特征在于粉末狀顆粒形式的微球粒徑范圍為 10 50 μ m、50 100 μ m、50 150 μ m、100 200 μ m、200 450 μ m、300 500 μ m、 500 700 μ m 或 750 950 μ m。
19.一種根據(jù)權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的抗移植免疫排斥反應(yīng)的新型J2-海藻酸鈉微球緩釋免疫抑制劑在制備藥物中的用途，所述藥物用于心臟、肝臟、腎臟、肺臟、角膜、皮膚移植后排斥反應(yīng)的預(yù)防和治療。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的制備藥物的用途，其特征在于所述藥物用于角膜移植后排斥反應(yīng)的預(yù)防和治療。
全文摘要
一種抗移植免疫排斥反應(yīng)的新型J2-海藻酸鈉微球緩釋免疫抑制劑、制備方法和用途。所述緩釋制劑以其基質(zhì)材料天然，微球植入方便。該制劑以海藻酸鈉為藥物載體，交聯(lián)J2免疫活性成份，通過微球液滴發(fā)生裝置，在鈣離子的作用下，將免疫抑制劑包裹或吸附在微球里。所述制劑具有對(duì)特定組織器官的靶向性，能延長(zhǎng)藥物局部作用時(shí)間，提高藥物的生物利用度，降低全身毒副作用，其可應(yīng)用于心臟、肝臟、腎臟、肺臟、皮膚、角膜和移植的免疫抑制。
文檔編號(hào)A61K45/00GK102258477SQ20101018598
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2010年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者李新建, 洪宏 申請(qǐng)人:北京宏醫(yī)耀科技發(fā)展有限公司