一種plga?ha?pva支架修飾ha?pva人工軟骨材料的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種PLGA?HA?PVA支架修飾HA?PVA人工軟骨材料的制備方法，該方法是將HA?PVA初乳液注入人工軟骨模具I中，進(jìn)行凍融，形成預(yù)交聯(lián)HA?PVA水凝膠；將所述預(yù)交聯(lián)HA?PVA水凝膠置于尺寸比人工軟骨模具I較大的人工軟骨模具II中央；向所述人工軟骨模具II中注入熱PLGA?HA?PVA初乳液，進(jìn)行凍融，即得生物相容性好、生物力學(xué)性能與軟骨相近的新型梯度PLGA?HA?PVA支架修飾HA?PVA人工軟骨材料。
【專利說明】
一種PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[00011本發(fā)明涉及一種人工軟骨的制備方法，特別涉及一種PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法，屬于醫(yī)用材料制備領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 關(guān)節(jié)軟骨的損傷是骨科的臨床常見疾病。目前，對(duì)于關(guān)節(jié)軟骨損傷的修復(fù)的方法 有同體、異體軟骨移植，微骨折技術(shù)，人工關(guān)節(jié)置換以及組織工程化軟骨和人工軟骨材料。 同體軟骨移植的供體來源有限，而異體軟骨移植存在供受體之間的免疫排斥反應(yīng)等問題。 近十年來，多位學(xué)者報(bào)道微骨折技術(shù)治療軟骨缺損效果良好，但是也存在修復(fù)過程緩慢，康 復(fù)方案繁瑣，修復(fù)物為纖維軟骨而不是透明軟骨等缺點(diǎn)。傳統(tǒng)的人工關(guān)節(jié)置換不僅成本昂 貴，使用年限（10-15年)遠(yuǎn)小于自然關(guān)節(jié)軟骨的使用壽命(60-70年）。組織工程化軟骨被認(rèn) 為是最有應(yīng)用前景的關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)材料，但是通過何種方法獲取數(shù)量充足，活力和分化良 好的軟骨細(xì)胞，以及選擇何種支架材料作為細(xì)胞載體是軟骨組織工程研究的關(guān)鍵問題。既 往的研究表明組織工程化軟骨方法在體內(nèi)能夠產(chǎn)生部分新生軟骨組織，但存在與周圍組織 整合困難、力學(xué)性能較差及后期退化等問題。目前仍處于繼續(xù)探索階段。
[0003] 人工軟骨也是一種非常有前景的治療方案。和組織工程不同，其不要求使軟骨再 生，而是通過采用一些具有良好生物相容性，能和周圍組織整合，同時(shí)具有良好的力學(xué)性能 和摩擦學(xué)性能的材料來替代軟骨功能。
[0004]目前在研的人工軟骨材料有：聚乙烯醇水凝膠、透明質(zhì)酸水凝膠、殼聚糖水凝膠、 纖維蛋白水凝膠、藻酸鹽凝膠以及多種材料制備的復(fù)合水凝膠。其中與天然關(guān)節(jié)軟骨結(jié)構(gòu) 與功能接近的聚乙稀醇凝膠(poly vinyl alcohol hydrogen PVA-H)被認(rèn)為是一種有發(fā)展 前景的關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)材料。其優(yōu)點(diǎn)有:①眾多的研究者發(fā)現(xiàn)聚乙烯醇水凝膠具有與關(guān)節(jié)軟 骨相似的結(jié)構(gòu)。首先，其三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中含有大量大小不等的孔隙，孔隙大小大約為幾個(gè)μπι 至幾十個(gè)Mi數(shù)量級(jí)。這些具有微米量級(jí)的孔隙結(jié)構(gòu)同自然關(guān)節(jié)軟骨的微觀結(jié)構(gòu)非常相似， 能為骨細(xì)胞的長(zhǎng)入提供附著面;其網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi)含有大量水分具有可滲透性，屬于微孔結(jié)構(gòu) 的親水材料，能為關(guān)節(jié)面提供潤(rùn)滑，避免磨肩產(chǎn)生;②它還有良好的生物相容性，長(zhǎng)期植入 體內(nèi)無明顯的毒性反應(yīng)。③在力學(xué)性能方面最接近軟骨。PVA-H具有良好的粘彈性，可以像 軟骨一樣緩沖震蕩，其拉伸和壓縮彈性模量和軟骨相近，明顯優(yōu)于聚乙烯和不銹鋼等常規(guī) 人工關(guān)節(jié)材料。
[0005] 但是大量研究發(fā)現(xiàn)，通過現(xiàn)有常規(guī)的方法制備的人工軟骨難以和周圍軟骨細(xì)胞完 全整合，限制了軟骨組織材料功能的發(fā)揮。骨細(xì)胞雖然能在人工軟骨周圍生長(zhǎng)但很難和它 完全結(jié)合并長(zhǎng)入其結(jié)構(gòu)內(nèi)部。研究者認(rèn)為人工軟骨難以和周圍組織整合的原因主要為：1、 微觀孔隙結(jié)構(gòu)不佳，目前制備的PVA水凝膠三維多孔結(jié)構(gòu)聯(lián)通孔太少，孔隙率和孔徑太小， 不適合軟骨細(xì)胞的長(zhǎng)入。2、PVA的親水性導(dǎo)致細(xì)胞的粘附能力差。
[0006] 綜上所述，關(guān)節(jié)軟骨損傷發(fā)病率高，治療效果差，是臨床上一個(gè)棘手的難題。人工 軟骨材料是有前景的解決方案，PVA水凝膠生物力學(xué)性質(zhì)好，但存在不能和周圍軟骨完全整 合的問題，因此研究解決這個(gè)問題的方法是個(gè)非常迫切的科學(xué)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 針對(duì)現(xiàn)有的人工軟骨存在微觀孔隙結(jié)構(gòu)不佳及人工軟骨材料親和力差等缺陷，本 發(fā)明的目的是在于提供一種生物相容性好、生物力學(xué)性能與軟骨相近的新型梯度PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料，其核心區(qū)符合生物力學(xué)要求，能完全取代軟骨功能，支 架區(qū)孔隙結(jié)構(gòu)明顯，生物相容性好，符合組織工程支架要求，使PLGA-HA-PVA支架修飾人工 軟骨能夠替代軟骨的承重的基礎(chǔ)上，能良好地與周圍組織整合。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明提供了一種PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟 骨材料的制備方法，該方法包括以下步驟：
[0009] 1)將HA-PVA初乳液注入人工軟骨模具I中，進(jìn)行1~2次凍融，形成預(yù)交聯(lián)HA-PVA水 凝膠；
[0010] 2)將所述預(yù)交聯(lián)HA-PVA水凝膠置于人工軟骨模具II中央，所述人工軟骨模具II內(nèi) 腔形狀與所述人工軟骨模具I內(nèi)腔一致，且所述人工軟骨模具II內(nèi)腔尺寸大于所述人工軟 骨模具I內(nèi)腔尺寸；
[0011 ] 3)向所述人工軟骨模具II中注入溫度為80 °C~100 °C的PLGA-HA-PVA初乳液，進(jìn)行 4~6次凍融，即得PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨。
[0012] 優(yōu)選的方案，每次凍融的條件為:在-25 °C~-20 °C冷凍18~24小時(shí)后，在室溫下融 化2~4小時(shí)。最優(yōu)選在-20°C冷凍21小時(shí)，在室溫下融化3小時(shí)。
[0013] 優(yōu)選的方案，步驟1)中進(jìn)行1次凍融。優(yōu)選進(jìn)行一次凍融，能防止HA-PVA過度交聯(lián)。
[0014] 優(yōu)選的方案，步驟3中進(jìn)行5次凍融。優(yōu)選5次凍融，能使復(fù)合凝膠充分交聯(lián)成型。 [0015] 優(yōu)選的方案，將PVA和n-HA粉末溶于水中，在80°C~100°C溫度下攪拌反應(yīng)，形成 HA-PVA初乳液。最優(yōu)選在90°C溫度下攪拌反應(yīng)。
[0016] 較優(yōu)選的方案，HA-PVA初乳液中PVA含量為15~25wt%，HA含量為3~7wt%DHA-PVA初乳液中PVA含量最優(yōu)選為20wt %，HA含量最優(yōu)選為5wt %。在該優(yōu)選范圍內(nèi)，獲得的HA-PVA具有最佳的力學(xué)性能。
[0017] 優(yōu)選的方案，將PLGA粉末溶于二氯甲烷形成PLGA初乳液，所述PLGA初乳液加入HA-PVA初乳液中，在80 °C~100 °C攪拌反應(yīng)，待二氯甲烷完全揮發(fā)后，得到PLGA-HA-PVA初乳液。 最優(yōu)選在90°C下攪拌反應(yīng)。
[0018] 較優(yōu)選的方案，將PVA和n-HA粉末溶于水中，在80°C~100°C溫度下攪拌反應(yīng)，形成 HA-PVA初乳液。最優(yōu)選在90°C溫度下攪拌反應(yīng)。
[0019] 較優(yōu)選的方案，PLGA-HA-PVA初乳液中PLGA含量為25~35wt%，HA含量為2~ 7wt%，PVA含量為10~20wt% WLGA-HA-PVA初乳液中PLGA含量最優(yōu)選為30wt%，HA含量最 優(yōu)選為5wt %，PVA含量最優(yōu)選為15wt %。在該優(yōu)選的范圍內(nèi)，獲得的PLGA-HA-PVA支架材料 孔隙結(jié)構(gòu)明顯，生物相容性好，成軟骨能力最強(qiáng)。
[0020] 優(yōu)選的方案，所述人工軟骨模具II內(nèi)腔尺寸為所述人工軟骨模具I內(nèi)腔尺寸的 1.05~1.30倍;其中，內(nèi)腔尺寸以截面半徑計(jì)。最優(yōu)選為所述人工軟骨模具II內(nèi)腔尺寸為所 述人工軟骨模具I內(nèi)腔尺寸的10/9倍。當(dāng)人工軟骨模具I的內(nèi)腔尺寸與所述人工軟骨模具II 的比值越接近1時(shí)，PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的生物力學(xué)性能越佳。
[0021] 本發(fā)明的技術(shù)方案的關(guān)鍵技術(shù)在于:先利用小尺寸的模具使HA-PVA初乳液預(yù)交聯(lián) 成凝膠，將預(yù)交聯(lián)的HA-PVA凝膠置于大尺寸的模具中，將溫度在90 °C左右的PLGA-HA-PVA初 乳液注入大尺寸的模具中，巧妙地利用PLGA-HA-PVA初乳液的熱量使HA-PVA凝膠的邊緣部 分溶解，同時(shí)利用PVA水溶液具有的良好的粘接性，通過共同凍融，兩部分的PVA分子相互交 織形成緊密的交聯(lián)界面，制得的HA-PVA人工軟骨核心區(qū)與外部修飾的PLGA-HA-PVA支架完 美結(jié)合。
[0022] 相對(duì)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的技術(shù)方案帶來的有益技術(shù)效果：
[0023] 1)本發(fā)明的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料內(nèi)部的人工軟骨核心區(qū)由 HA-PVA材料構(gòu)成，其具有優(yōu)異的力學(xué)性能，符合生物力學(xué)要求，能完全取代軟骨功能；而外 部的支架區(qū)由PLGA-HA-PVA材料構(gòu)成，其具有豐富的孔結(jié)構(gòu)，生物相容性好，符合組織工程 支架要求，使PLGA-HA-PVA支架修飾人工軟骨能夠替代軟骨的承重的基礎(chǔ)上，具有良好的與 周圍組織整合能力。
[0024] 2)本發(fā)明的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料通過特殊的方法制備得 到，其HA-PVA人工軟骨核心區(qū)與PLGA-HA-PVA支架區(qū)之間通過物理交聯(lián)完美結(jié)合成整體，有 利于改善人工軟骨材料的性能。
[0025] 3)本發(fā)明的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料制備方法操作簡(jiǎn)單，成本 低，易于實(shí)施，有利于大規(guī)模生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0026]【圖1】為制備PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的流程示意圖；
[0027]【圖2】為PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料照片；
[0028]【圖3】為PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨材料壓縮應(yīng)力隨應(yīng)變的變化關(guān) 系曲線；
[0029]【圖4】為PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料各組成部分的掃描電鏡圖；
[0030] 【圖5】為軟骨細(xì)胞體外共培養(yǎng)免疫組化、Π 型膠原免疫組化軟骨細(xì)胞體外共培養(yǎng) 及體內(nèi)成軟骨免疫組化、Π 型膠原免疫組化圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 以下實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本
【發(fā)明內(nèi)容】
，而不是限制本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范 圍。
[0032] 實(shí)施例1
[0033] 1)HA-PVA初乳液制備方法:秤取一定量的PVA和n-HA粉末置入燒杯中，加入對(duì)應(yīng)量 的雙蒸水，置于恒溫磁力攪拌器上水浴加熱至90°C，進(jìn)行磁力攪拌，形成HA-PVA初乳液，其 中，PVA含量為20wt%，HA含量為5wt%。
[0034] 2)PLGA-HA-PVA初乳液制備方法:秤取PLGA粉末，加入5mL二氯甲烷中，持續(xù)超聲波 震蕩，待PLGA完全溶解，形成均質(zhì)的乳白色初乳液;將初乳液加入按上述方法制備的HA-PVA 初乳液中，加熱至90°C繼續(xù)磁力攪拌10分鐘，使得二氯甲烷完全揮發(fā)，制備出PLGA-HA-PVA 初乳液，其中，PLGA含量為30wt%，HA含量為5wt%，PVA含量為15wt%。
[0035] 3)將HA-PVA初乳液注入模具I，凍融1次(-20°C冷凍21小時(shí)，室溫融化3小時(shí)）形成 未充分交聯(lián)的人工軟骨核心區(qū)，然后將此HA-PVA水凝膠置入半徑稍大的模具II中，模具II 的截面半徑為模具I截面半徑的10/9倍，注入90°C的PLGA-HA-PVA初乳，注入的溶液散發(fā)的 熱量使HA-PVA凝膠的邊緣部分溶解，同時(shí)PVA水溶液具有良好的粘接性，使得兩部分相互交 織形成交界部，再次，凍融5次(_20°C冷凍21小時(shí)，室溫融化3小時(shí)，重復(fù)5次），兩部分的PVA 分子形成緊密的物理交聯(lián)，從而制備出PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨。
[0036]制備的PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨如圖2所示。制備的軟骨材料其表 面光滑，內(nèi)部的HA-PVA人工軟骨核心區(qū)與外部的PLGA-HA-PVA支架完全融合成一整體，無法 分咼。
[0037]人工軟骨性能測(cè)試數(shù)據(jù)如下：
[0038] 1、生物力學(xué)檢測(cè):對(duì)于人工軟骨PVA-HA部分(起承重作用，通過測(cè)試其生物力學(xué)即 壓縮力學(xué)實(shí)驗(yàn)）：測(cè)試發(fā)現(xiàn)制備的PLGA-HA-PVA修飾的HA-PVA人工軟骨為一種粘彈性材料。 通過制備不同半徑比的PLGA-HA-PVA修飾的HA-PVA人工軟骨材料，由圖3可知，制備的各組 HA-PVA人工軟骨壓縮應(yīng)力隨應(yīng)變的變化為非線性關(guān)系，表現(xiàn)為指數(shù)函數(shù)的變化規(guī)律，說明 我們所制備的此種新型人工軟骨為一種粘彈性材料。
[0039]
[0041 ] 2、掃描電鏡觀察:PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨不同部位環(huán)境掃描電 鏡照片如圖4所示:從圖中看出制備的PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨各構(gòu)成部分 都有明顯的多孔結(jié)構(gòu)。支架部孔隙結(jié)構(gòu)明顯，孔徑約幾十微米至一百多微米。孔隙主要結(jié)構(gòu) 由PVA構(gòu)成，內(nèi)部孔隙的邊緣附著有PLGA微球，粒徑約30-40微米，納米級(jí)羥基磷灰石均勻分 布于PVA構(gòu)成的支架內(nèi)部。交界部孔隙結(jié)構(gòu)減少，孔徑約幾十微米，PLGA微球分布明顯減少。 核心部孔隙結(jié)構(gòu)明顯減少，孔徑約為十微米量級(jí)，未見PLGA微球存在。
[0042] 3、體外實(shí)驗(yàn)：
[0043] 體外實(shí)驗(yàn)（14天）：PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨材料冷凍干燥后，環(huán)氧 乙烷消毒備用。0.25 %胰酶消化收集2代軟骨細(xì)胞，用含10 %胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)液制 成細(xì)胞懸液，每個(gè)PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨材料滴細(xì)胞濃度為5 X 106個(gè)/mL 的細(xì)胞懸液300yL，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2h后，各種均加入DMEM培養(yǎng)液2mL，繼續(xù)放入細(xì) 胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隔天換液一次，14天后支架復(fù)合人工軟骨經(jīng)4%多聚甲醛固定24h，石蠟包 埋，切成約5μπι的薄片。行蘇木素-伊紅(HE)染色，Π 型膠原免疫組化，光鏡下觀察。
[0044] HE染色結(jié)果如下:HE染色均呈陽性，細(xì)胞分泌基質(zhì)較多，并有軟骨樣基質(zhì)形成，陷 窩結(jié)構(gòu)成片狀或巢狀，如圖5(A)。
[0045] Π型膠原免疫組化:支架材料內(nèi)部可見Π型膠原免疫組化棕黃色陽性表達(dá)，細(xì)胞 成顆粒狀分布;如圖5(B)。
[0046]體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)該材料具有良好的細(xì)胞親和力，可以使軟骨細(xì)胞長(zhǎng)入其中。 [0047] 體內(nèi)成軟骨實(shí)驗(yàn)（12周）：PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨料冷凍干燥后 環(huán)氧乙烷消毒備用。0.25%胰酶消化收集2代軟骨細(xì)胞，用含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng) 液制成細(xì)胞懸液，PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨滴細(xì)胞濃度為5X10 6個(gè)/mL的細(xì) 胞懸液300yL，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)7天，隔天換液一次。取4周齡健康裸鼠，備皮后， 消毒背部皮膚，在無菌條件下將PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨材料-軟骨細(xì)胞復(fù) 合物植入裸鼠背部皮膚，6周后PLGA-HA-PVA支架修飾的HA-PVA人工軟骨經(jīng)4 %多聚甲醛固 定24h，石蠟包埋，切成約5μπι的薄片。行蘇木素-伊紅(HE)染色，Π 型膠原免疫組化，光鏡下 觀察。
[0048] HE染色:支架內(nèi)陽性表達(dá)，胞核藍(lán)染，細(xì)胞外基質(zhì)紅染，如圖5(C)。
[0049] Π型膠原免疫組化:細(xì)胞外基質(zhì)內(nèi)有棕黃色陽性異染區(qū)，輪廓清晰，分布均勻，如 圖 5(D)。
[0050] 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)可見支架材料外有類軟骨樣物質(zhì)生成，HE染色及二型膠原免疫組化證實(shí) 該材料有較好的體內(nèi)成軟骨能力。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法，其特征在于:包括以下 步驟： 1) 將HA-PVA初乳液注入人工軟骨模具I中，進(jìn)行1~2次凍融，形成預(yù)交聯(lián)HA-PVA水凝 膠； 2) 將所述預(yù)交聯(lián)HA-PVA水凝膠置于人工軟骨模具II中央;所述人工軟骨模具II內(nèi)腔形 狀與所述人工軟骨模具I內(nèi)腔一致，且所述人工軟骨模具II內(nèi)腔尺寸大于所述人工軟骨模 具I內(nèi)腔尺寸； 3) 向所述人工軟骨模具II中注入溫度為80 °C~100 °C的PLGA-HA-PVA初乳液，進(jìn)行4~6 次凍融，即得PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法，其特 征在于:每次凍融的條件為:在-25°C~_20°C冷凍18~24小時(shí)后，在室溫下融化2~4小時(shí)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法，其特 征在于:將PVA和n-HA粉末溶于水中，在80 °C~100 °C溫度下攪拌反應(yīng)，形成HA-PVA初乳液。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法，其特 征在于:HA-PVA初乳液中PVA含量為15~25wt%，HA含量為3~7wt%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法，其特 征在于:將PLGA粉末溶于二氯甲烷形成PLGA初乳液，所述PLGA初乳液加入HA-PVA初乳液中， 在80 °C~100 °C攪拌反應(yīng)，待二氯甲烷完全揮發(fā)后，得到PLGA-HA-PVA初乳液。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法，其特 征在于:將PVA和n-HA粉末溶于水中，在80 °C~100 °C溫度下攪拌反應(yīng)，形成HA-PVA初乳液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法，其特 征在于:PLGA-HA-PVA初乳液中PLGA含量為25~35wt%，HA含量為2~7wt%，PVA含量為10~ 20wt% 〇8. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的PLGA-HA-PVA支架修飾HA-PVA人工軟骨材料的制備方法， 其特征在于:所述人工軟骨模具II內(nèi)腔尺寸為所述人工軟骨模具I內(nèi)腔尺寸的1.05~1.30 倍;其中，內(nèi)腔尺寸以截面半徑計(jì)。
【文檔編號(hào)】A61L27/26GK106039418SQ201610584777
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年7月22日 公開號(hào)201610584777.6, CN 106039418 A, CN 106039418A, CN 201610584777, CN-A-106039418, CN106039418 A, CN106039418A, CN201610584777, CN201610584777.6
【發(fā)明人】胡懿郃, 蘇偉平, 謝杰, 李明清, 曾敏, 汪龍
【申請(qǐng)人】胡懿郃