專利名稱：硫代紫杉烷類衍生物新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)和醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種硫代紫杉烷類衍生物的用途。
背景技術(shù)：
據(jù)世界衛(wèi)生組織資料顯示，目前全球患乙肝的人超過(guò)3億，其中25%的患者面臨 肝硬化及肝癌的威脅。我國(guó)是乙肝病毒感染的高發(fā)區(qū)，乙肝表面抗原(HBsAg)攜帶率為 10%，慢性乙肝病人約3000萬(wàn)，此類患者病情遷延不愈，部分可發(fā)展為肝硬化和肝癌，對(duì)人 類健康危害極大。接種乙肝疫苗預(yù)防乙肝是最有效的措施，但一旦發(fā)病則必須積極的治療。目前國(guó)內(nèi)公認(rèn)的治療乙肝的療法是綜合治療，具體為1)清除病毒，祛病毒是乙 肝的根本治療措施，只有清除病毒，病根才能去，亦即中醫(yī)所說(shuō)的“治本”。近年國(guó)內(nèi)外公認(rèn) 的抗乙肝病毒有效藥物是干擾素，但用后HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率僅30 50%，停藥后易反跳。新 近研究發(fā)現(xiàn)，安體維康、拉米夫定、法昔洛韋、華蟾素有抗HBV作用，幾種藥物聯(lián)用可使療效 持久。但長(zhǎng)期服用拉米夫定治療引起乙型肝炎病毒變異；2)調(diào)，調(diào)整免疫，提高T細(xì)胞功能 也是治療乙肝的有效措施。常用的免疫調(diào)整藥物有DNA疫苗、基因佐劑、日達(dá)仙、胸腺肽、白 介素多糖、靈芝胺多糖、左旋咪唑(涂布劑)等，這類藥物常和抗病毒藥聯(lián)合應(yīng)用；3)保，保 肝降酶退黃疸是治療乙肝之“標(biāo)”的一種措施。常用的藥物有肝力寶、硫普羅寧、水飛薊素、 聯(lián)苯雙脂等；4)阻，預(yù)防和阻止肝炎發(fā)展為肝硬化和肝癌，常用的藥物有蟲(chóng)草化纖膠囊、秋 水仙堿、D-青霉胺、復(fù)方861等。上述藥物雖然對(duì)于乙肝的治療具有一定的作用，但是仍然存在著療效不明顯、毒 副作用較大等問(wèn)題。因此，尋找天然、安全、作用機(jī)制明確的新的治療乙肝藥物具有重要的 科學(xué)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。而關(guān)于紫杉烷類化合物抗病毒方面的研究至今還沒(méi)有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供具有抗乙肝病毒作用的新型硫代紫杉烷類衍生物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該新型硫代紫杉烷類衍生物在制備治療乙肝藥物上 的應(yīng)用。式(1)所示的硫代紫杉烷類衍生物
0HO O OH
R、S人 NH O V=UII
δΗΗ0 δ 0Y0
^ ( 1 )其中，
R為氫、Cl 18烷基、Cl 18取代烷基、C2 10烯基、C2 10炔基、C3 6環(huán)
烷基、C4 6環(huán)烯基、芳基、取代芳基、雜環(huán)基或取代雜環(huán)基，所述的取代基選自Cl 8烷 基、Cl 8烷氧基、Cl 8鹵代烷基、鹵素、芳基、硝基或氨基中的一種或幾種。
R優(yōu)選為氫、Cl 18直鏈或支鏈烷基、Cl 18直鏈或支鏈取代烷基、C2 6直 鏈或支鏈烯基、C2 6直鏈或支鏈炔基、C3 6環(huán)烷基、C4 6環(huán)烯基、芳基、取代芳基、 C5 6雜環(huán)基，所述的取代基選自Cl 8烷基、Cl 8烷氧基、Cl 8鹵代烷基、鹵素、芳 基、硝基或氨基中的一種或幾種。R進(jìn)一步優(yōu)選為Cl 18烷基或苯代Cl 18烷基。R更進(jìn)一步優(yōu)選為Cl 12烷基或苯代Cl 4烷基。R最優(yōu)選為C2 12直鏈烷基、C3 6支鏈烷基或芐基。除非另外說(shuō)明，在說(shuō)明書和權(quán)利要求中使用的以下術(shù)語(yǔ)具有下面討論的含義“烷基”是包括直鏈的烷基和支鏈的烷基。“取代烷基”是指烷基被一個(gè)或多個(gè)取代基取代的烷基?！胺蓟北硎?至12個(gè)碳原子的全碳單環(huán)或稠合多環(huán)基團(tuán)，具有完全共軛的π電 子系統(tǒng)，包括單環(huán)芳基、多環(huán)芳基以及非苯芳基。芳基的非限制性實(shí)例有苯基、萘基和蒽基?！半s環(huán)基”是含有一個(gè)或多個(gè)雜原子的環(huán)狀基團(tuán)，包括具有芳香性基團(tuán)和非芳香性 基團(tuán)，而雜原子一般是指N、0、S、P等。雜環(huán)基包括但不限于四氫吡喃基、2，2-二甲基-1， 3-二氧戊環(huán)、哌啶子基、N-甲基哌啶-3-基、哌嗪子基、N-甲基吡咯烷-3-基、吡咯烷基、嗎 啉代基、硫代嗎啉代基、硫代嗎啉代-1-氧化物、硫代嗎啉代-1，1-二氧化物、4-乙氧羰基哌 嗪子基、3-氧代哌嗪子基、2-咪唑啉酮、2-吡咯烷酮、四氫嘧啶-2-酮及其衍生物?！胞u素”包括氟、氯、溴和碘。本發(fā)明進(jìn)一步提供硫代紫杉烷類衍生物在制備治療乙肝藥物上的應(yīng)用。藥理研究 顯示式(1)所示的硫代紫杉烷類衍生物具有明顯抗乙肝病毒作用以及良好的劑量依賴關(guān)系。因此，本發(fā)明的硫代紫杉烷類衍生物可制成包含安全有效量硫代紫杉烷類衍生物 及藥用載體的各種制劑。“安全有效量”指的是化合物的量足以明顯改善病情，而不至于產(chǎn)生嚴(yán)重的副作 用。安全有效量根據(jù)治療對(duì)象的年齡、病情、療程等來(lái)確定?！八幱幂d體”指的是一種或多種相容性固體或液體填料或凝膠物質(zhì)，它們適合于 人使用，而且必須有足夠的純度和足夠低的毒性?！跋嗳菪浴痹诖酥傅氖墙M合物中各組份能 和本發(fā)明的化合物以及它們之間相互摻和，而不明顯降低化合物的藥效。藥學(xué)上可以接受 的載體部分例子有糖(如葡萄糖、蔗糖、乳糖等)，淀粉(如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉等)，纖維 素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素鈉、纖維素乙酸酯等)，明膠，滑石，固體潤(rùn) 滑劑(如硬脂酸、硬脂酸鎂)，硫酸鈣，植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄欖油等)，多元醇 (如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)，乳化劑(如吐溫. )、潤(rùn)濕劑(如十二烷基硫酸鈉)， 著色劑，調(diào)味劑，穩(wěn)定劑，抗氧化劑，防腐劑，無(wú)熱原水等。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但這些實(shí)施例絕不是對(duì)本發(fā)明的任何限制。實(shí)施例1 取IOOmL三口燒瓶，燒干，通氮?dú)?，?°C溫度下，加入BTC(3. 82g)后，加入干燥的 CH2Cl2 (40mL)，BTC全溶后，加入乙基硫醇(2. 41mL)，緩慢滴加Et3N(4. 48mL)，有白色沉淀產(chǎn) 生，滴加完畢后，室溫過(guò)液，反應(yīng)液濾去不溶物，得硫代酰氯的溶液不經(jīng)任何處理，直接用于 下一步反應(yīng)。取一 IOOmL三口燒瓶，加入紫杉醇中間體化合物2 (500mg)、用CH2Cl2(IOmL) 溶解，冰水浴中緩慢滴加過(guò)量酰氯，滴加完畢，室溫下攪拌過(guò)液，停止反應(yīng)，乙酸乙酯萃取， 飽和氯化鈉溶液洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，柱層析(洗脫液石油醚/乙酸乙酯= 2/1)。得中間體化合物3為0. 165g，收率30.6%。取一 IOmL單口圓底燒瓶，烘干，沖氮?dú)猓?加入中間體化合物3(135mg)、Zn(270mg)，然后加入CH3OH,滴加冰HOAc (3mL)，在50°C下反 應(yīng)，TLC檢測(cè)(展開(kāi)劑石油醚/乙酸乙酯=2/1)，2小時(shí)后原料消失，除去甲醇，加入乙 酸乙酯，用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水分別洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，除去溶劑，柱層析 (洗脫液石油醚/丙酮=2/1)得產(chǎn)物Ia為67mg，收率70. 1%?；衔飈a(R 為乙基)/H NMR (300MHz，CDCl3) δ 1. 11 (s, 3Η, 17-CH3), 1. 11 (t, 3H, J = 6. 9Hz,2 “ -CH3)，1. 23 (s, 3H, 16_CH3)，1. 73 (s, 3H, 19_CH3)，1. 83 (s, 3H, 18_CH3)，
2.24 (m, 2H, 14_CH2)，2. 36 (s, 3H, OAc)，1. 83 和 2. 54 (2m, 2H, 6_CH2)，2. 77 (q, 2H, J = 6. 9Hz)，
3.87 (d, 1H, J = 6. 9Hz，3-CH)，4. 18 和 4· 30 (2d, 2Η, J = 8. 7Hz，20_CH2)，4. 23 (m, 1H, 7-CH)，
4.70 (br s, 1H,2 ‘ -CH)，4. 93 (d, 1H, J = 9. 0Hz，5-CH)，5. 27 (s, 1H, 10-CH)，5. 60 (d, 1H, J =7. 2Hz，3' -CH)，5. 65 (d, 1H, J = 6. 9Hz，2_CH)，6. 24 (t, 1H, J = 8. 7Hz, 13-CH) ,6. 55 (d, 1H, J = 7. 5Hz，-C0NH-)，7. 34(m，1H，p_Ph)，7. 39(m，4H，o-Ph 和 m_Ph)，7. 51(t，2H，J = 7. 5Hz, m-OBz)，7. 62 (t, 1H, J = 7. 5Hz, p-0Bz) ,8. ll(d，2H，J = 7. 5Hz, o-0Bz) ；ESIMS m/z 818. 2[M+Na]+. lb :R = (CH2)2CH3Ic :R = (CH2)3CH3Id :R = (CH2)4CH3Ie :R = (CH2)5CH3lf:R= (CH2)11CH3除將乙基硫醇分別替換為丙基硫醇外、其他方法同實(shí)施例1，得到化合物lb， ESIMSm/z832. 1 [M+Na+]。除將乙基硫醇分別替換為丁基硫醇外、其他方法同實(shí)施例1，得到化合物lc， ESIMSm/z846. 2[M+Na+]。除將乙基硫醇分別替換為戊基硫醇外、其他方法同實(shí)施例1，得到化合物ld，ESIMS m/z 860. 2 [M+Na+]。除將乙基硫醇分別替換為己基硫醇外、其他方法同實(shí)施例1，得到化合物le， ESIMSm/z874. 2[M+Na+]。除將乙基硫醇分別替換為十二烷基硫醇外、其他方法同實(shí)施例1，得到化合物lf， ESIMSm/z958. 4[M+Na+]。實(shí)施例2 Ig :R = (CH3)3CIhR = CH3CH2 (CH3) CH
Ii :R = CH3CH2(CH3)2CIj :R = (CH3)2CHCH2IK :R= (CH3)2CH(CH3)CH 化合物lg(R 為異丙基)/H NMR(300MHz, CDCl3) δ 1. 11 (s，3H，17_CH3)，1. 14 (d, 3H, J = 7. 2Hz, 1 “ -CH3)，1. 19(d，3H，J = 7. 2Hz，3 〃 -CH3)，1. 24(s，3H，16_CH3)，1. 72 (s, 3H, 19-CH3)，1. 83 (s，3H, 18_CH3)，2. 25 (d, 2H, J = 7. 5Hz, 14_CH2)，2. 35 (s, 3H, OAc)，1. 83 禾口 2. 53 (2m, 2H, 6_CH2)，3. 49 (m, 1H, 2 “ -CH)，3. 86 (d, 1H, J = 6. 6Hz，3-CH)，4. 17 和 4. 30 (2d, 2H，J = 8.7Hz，20-CH2)，4.21(m，lH，7-CH)，4.45(s，lH，2' -OH),4. 72 (br s, 1H,2' -CH)， 4. 93 (d, 1H, J = 9. 0Hz，5-CH)，5· 30 (s, 1H, 10-CH)，5· 59 (d, 1H, J = 9. 0Hz，3' -CH), 5. 65 (d, 1H, J = 6. 6Hz，2-CH)，6. 24(t,1H, J = 8. 7Hz，13-CH)，6. 52(d,1H, J = 8. 7Hz, -C0NH-)，
7.33 (m, 1H, p-Ph)，7. 39 (m, 4H, o-Ph 和 m-Ph)，7. 50 (t, 2H, J = 7. 5Hz, m-OBz)，7. 62 (t, 1H, J = 7. 5Hz，p-OBz)，8. 11 (d，2H，J = 7. 5Hz，o-OBz) ；ESIMSm/z832. 1 [M+Na] +·化合物lh(R 為叔丁基)/H NMR (300MHz, CDCl3) δ 1. 11 (s，3H，17_CH3)，1. 24 (s， 3H, I6-CH3)，1. 35(s，9H，t_Bu)，1. 71 (s，3H，19_CH3)，1. 85(s，3H，18_CH3)，2. 29(d，2H，J =
8.7Hz，14-CH2)，2. 34(s，3H，OAc)，1. 85 和 2. 51 (2m，2H，6_CH2)，2. 84 (d，1H，J = 6. OHz, 1-OH), 3. 85 (d, 1H, J = 6. 9Hz，3_CH)，4. 16 和 4. 30(2d，2H，J = 8. 7Hz，20_CH2)，4. 21 (m, 1H, 7-CH),4. 41(br s，lH，2' -OH)，4. 54 (s，1H，10-0H)，4. 74 (br s，lH，2' -CH)，4. 94 (d，1H， J = 9. 3Hz，5-CH)，5. 35 (s, 1H, 10-CH)，5. 57 (d, 1H, J = 8. 4Hz,3 ' -CH)，5. 65 (d, 1H, J = 6. 6Hz，2-CH)，6. 22 (t, 1H, J = 8. 7Hz, 13-CH) ,6. 49 (d, 1H, J = 9. OHz, -C0NH-)，7. 33 (m, 1H, p-Ph)，7. 41(m，4H，o-Ph 和 m_Ph)，7. 49(t，2H，J = 7. 5Hz, m_0Bz)，7. 61 (t, 1H, J = 7. 5Hz, p-OBz) ,8. 10(d，2H，J = 7. 5Hz,o-OBz) ；ESIMSm/z846. 2[M+Na]+?；衔颕i (R 為 1-甲基丙基)，ESIMSm/z846. 2[M+Na]+?；衔颕j (R 為 1，I- 二甲基丙基)，ESIMSm/z860. 2[M+Na]+?；衔颕k (R 為 2-甲基丙基)，ESIMSm/z846. 2 [M+Na] +?；衔?1 (R 為 1，2 二甲基丙基)，ESIMSm/z860. 2[M+Na]+。實(shí)施例3化合物Im (R 為苯甲基)，1H NMR(400MHz, CDCOCD3) δ 1. 14 (s，3Η，17_CH3)， 1. 19 (s，3H, 16-CH3)，1· 71 (s，3H, 19_CH3)，1. 86 (s, 3H, 18_CH3)，2. 20 (m, 2H, 14_CH2)，2. 36 (s, 3H, OAc)，1. 82and 2. 44 (2m, 2H, 6_CH2)，3. 77 (s, 1H, 2' -OH)，3. 90 (d, 1H, J = 7. OHz，3-CH)， 4. 07(d,2H, J = 4. OHz, 1 “ -CH2)，4· 15 (d，2H，J = 5· 1Hz，20_CH2)，4· 29 (m，1Η，7-CH)， 4. 35 (s，1H, 10-0H)，4. 68 (d, 1H, J = 4. 8Hz,2' -CH)，4. 94 (d, 1H, J = 9. 5Hz，5-CH)，5. 21 (s， 1H, 10-CH)，5. 55 (d, 1H, J = 6. 0Hz,3 ' -CH)，5. 66 (d, 1H, J = 7. 0Hz，2_CH)，6. 18 (t, 1H, J =8. 8Hz, 13-CH)，7. 25 (m, 1H, p-Ph), 7. 28 (t, 1H, J = 7. 7Hz, p_l〃 -Ph)，7. 39(m，4H，o-Ph and m-Ph)，7. 40(t，2H，J = 7. 2Hz，m_l〃 -Ph)，7. 47(d，2H，J = 7. 3Hz，o_l〃 -Ph)，7. 56 (t, 2H, J = 7. 5Hz, m-OBz)，7. 64 (t, 1H, J = 7. 3Hz, p-0Bz)，7. 90 (m, 1H, J = 5. 2Hz, -C0NH-)， 8. 10(d，2H，J = 7. 3Hz, o-0Bz) ；ESIMSm/z880. 3[M+Na]+?；衔飈n(R 為對(duì)甲基苯基)，ESIMS m/z 880. 3[M+Na]+?；衔颕o (R 為對(duì)甲氧基苯基)，ESIMS m/z 896. 3 [M+Na]+。實(shí)施例4
體外抗乙型肝炎病毒(HBV)的體外活性測(cè)試試驗(yàn)(一)試驗(yàn)?zāi)康臉悠房挂倚透窝撞《?HBV)活性篩選。試驗(yàn)包括在病毒-細(xì)胞水平的試驗(yàn)中，檢 測(cè)樣品的細(xì)胞毒性、對(duì)乙型肝炎病毒表面和核心抗原的分泌，以及病毒核酸(DNA)的復(fù)制 水平的影響作用。( 二)試驗(yàn)方法DMTT法檢測(cè)樣品對(duì)IfepG 2. 2. 15細(xì)胞的毒性將H印G 2. 2. 15細(xì)胞在96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)3天后，加入不同濃度含藥培養(yǎng)液，繼 續(xù)培養(yǎng)9天(每3天換液一次)，收集培養(yǎng)上清液待測(cè)。向96孔培養(yǎng)板中加MTT，4小時(shí)后加 入150 μ L DMS0,震蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解，置入酶聯(lián)檢測(cè)儀中以570nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔 光吸收值(OD值)，重復(fù)3次，依照Reed2Muench法計(jì)算藥物對(duì)H印G 2. 2. 15細(xì)胞的毒性作 用，影響細(xì)胞生長(zhǎng)的狀況，導(dǎo)致半數(shù)細(xì)胞死亡量所需的濃度(TC5tl)和最大無(wú)毒濃度(TCtl)。
2)培養(yǎng)上清液中HBsAg和HBeAg含量的檢測(cè)(ELISA法)用上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)公司的HBsAg和HBeAg診斷試劑盒測(cè)定，向包被好的條 形板中加入樣品，并加入等量的酶標(biāo)結(jié)合物，37°C反應(yīng)1小時(shí)后洗板，重復(fù)5次。加入顯色 液A和B，15分鐘后終止反應(yīng)，測(cè)定0D45(i/63(i，并根據(jù)OD值計(jì)算樣品對(duì)HBV抗原的抑制率。(三)試驗(yàn)結(jié)果表1硫代紫杉烷類衍生物對(duì)HBsAg和HBeAg的抑制 *測(cè)試?yán)追蚨w外抗乙肝病毒活性通用濃度。
試驗(yàn)結(jié)果表明硫代紫杉烷類衍生物對(duì)HBsAg和HBeAg的抑制均有一定的抑制，且 大部分化合物的抑制率均高于陽(yáng)性對(duì)照拉米夫定。
權(quán)利要求
一種式(1)所示的硫代紫杉烷類衍生物在制備治療乙肝藥物中的用途，其中，R為氫、C1～18烷基、C1～18取代烷基、C2～10烯基、C2～10炔基、C3～6環(huán)烷基、C4～6環(huán)烯基、芳基、取代芳基、雜環(huán)基或取代雜環(huán)基，所述的取代基選自C1～8烷基、C1～8烷氧基、C1～8鹵代烷基、鹵素、芳基、硝基或氨基中的一種或幾種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫代紫杉烷類衍生物，其中R為氫、Cl 18直鏈或支鏈烷 基、Cl 18直鏈或支鏈取代烷基、C2 6直鏈或支鏈烯基、C2 6直鏈或支鏈炔基、C3 6環(huán)烷基、C4 6環(huán)烯基、芳基、取代芳基、C5 6雜環(huán)基，所述的取代基選自Cl 8烷基、 Cl 8烷氧基、Cl 8鹵代烷基、鹵素、芳基、硝基或氨基中的一種或幾種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫代紫杉烷類衍生物，其中R為Cl 18烷基或苯代Cl 18烷基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫代紫杉烷類衍生物，其中R為Cl 12烷基或苯代Cl 4焼基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的硫代紫杉烷類衍生物，其中R為C2 12直鏈烷基、C3 6支鏈烷基或芐基。
6.藥物組合物，包括權(quán)利要求1 5中任一項(xiàng)所述的硫代紫杉烷類衍生物及藥用載體。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種硫代紫杉烷類衍生物的新用途，硫代紫杉烷類衍生物具有式(1)結(jié)構(gòu)，其中，R為氫、C1～18烷基、C1～18取代烷基、C2～10烯基、C2～10炔基、C3～6環(huán)烷基、C4～6環(huán)烯基、芳基、取代芳基、雜環(huán)基或取代雜環(huán)基，所述的取代基選自C1～8烷基、C1～8烷氧基、C1～8鹵代烷基、鹵素、芳基、硝基或氨基中的一種或幾種。本發(fā)明的硫代紫杉烷類衍生物可以應(yīng)用于制備治療乙肝藥物方面。
文檔編號(hào)A61P1/16GK101838250SQ201010156619
公開(kāi)日2010年9月22日 申請(qǐng)日期2010年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月27日
發(fā)明者孫遜, 昌軍, 林國(guó)強(qiáng), 檀愛(ài)民, 章思及, 謝晨, 陸洪福 申請(qǐng)人:江蘇先聲藥物研究有限公司