專利名稱：一種具有抗腫瘤作用的黃三七總皂苷的提取方法及其組成的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物黃三七總皂苷的提取制備及其在腫瘤的化學預防和治療中的應用；同時涉及通過植物化學分離手段從黃三七活性部位中分離出具有抗腫瘤活性的13個環(huán)菠蘿蜜烷型三萜及其木糖皂苷化合物及其制備方法。
背景技術：
黃三七[Souliea vaginata(Maxim. )Franch.]為毛茛科升麻族黃三七屬多年生草本植物，為單屬單種，是我國特有的藥用植物，主要分布于西藏、云南、四川、甘肅、陜西等省，為民間常用草藥，其全草或根狀莖可供藥用，具有清熱解毒、消炎和消腫等功效，民間用來治療眼結膜炎、風濕性關節(jié)痛、紅白痢、咽喉腫痛等，外敷可以治療瘡癤和毒蛇咬傷。對黃三七化學成分的研究，文獻報道較少，僅報道6個環(huán)菠蘿蜜烷型三萜皂苷。在化學分類學上，升麻族植物含有特征性環(huán)菠蘿蜜烷型三萜皂苷及桂皮酸的衍生物，這一點有別于毛茛科其他植物類群。已報道的此種類型的皂苷具有廣泛的藥理學活性，其活性涉及到解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗風濕、抗腫瘤、抑制核苷轉運、抗骨質(zhì)疏松、心血管和免疫學領域。但目前國內(nèi)外對黃三七在抗腫瘤方面的研究為一片空白，特別是針對黃三七在抗腫瘤活性部位及其有效成分組成方面沒有文獻報道。本發(fā)明通過對黃三七總皂苷的系統(tǒng)研究，藥理篩選發(fā)現(xiàn)黃三七總皂苷對多種癌細胞具有顯著的抑制作用，在此基礎上，進一步對黃三七總皂苷中單體成分進行了研究， 分離得到了黃三七皂苷A(soulieosides A)，黃三七皂苷B(soulieosides B)，黃三七皂 1^f C(soulieosides C)，黃三七阜苷 D(soulieosides D)，黃三七阜苷 E(soulieosides
E)，黃三七皂苷F(soulieosidesF)，黃三七皂苷G(soulieosides G)，黃三七皂苷 H(soulieosidesH)，黃三七阜苷 I (soulieosides I)，黃三七素 A(soulieonins A)， 25-anhydrocimicigenol, 25-0-乙酰升麻醇木糖苷[25-0-acetylcimigenol-3-0- β -D-xy lopyranoside],26(R)-甲氧基阿特素口 6 (R)-methoxyactein]共 13 種三萜皂苷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供安全有效毒副作用低的抗腫瘤效果顯著的中藥活性部位，并提供一種制備方法。本發(fā)明目的之二是提供一種具有抗腫瘤活性的藥物，以黃三七提取物和藥用輔料組成。本發(fā)明目的之三是對黃三七活性部位中單體成分進行研究，以期尋找抗腫瘤活性強的單體皂苷。本發(fā)明的目的之四是提供制備這13種化合物(黃三七皂苷A(S0Ulie0SideS A)，黃三七皂苷B(soulieosides B)，黃三七皂苷C(soulieosides C)，黃三七皂苷 D(soulieosides D)，黃三七阜苷 E(soulieosidesE)，黃三七阜苷 F(soulieosides
F)，黃三七皂苷G(soulieosidesG)，黃三七皂苷H(soulieosides H)，黃三七皂苷I (soulieosides I),黃三七素 A (soulieonins A), 25-anhydrocimicigenol, 25-0-乙酉先升麻醇木糖苷[25-0-acetylcimigenol-3-0- β -D-xylopyran-oside]，26 (R)-甲氧基阿特素 [26(R)-methoxyactein])的方法。本發(fā)明的技術方案依次包含如下方法步驟1、黃三七活性部位的制備將黃三七全草粉碎后，用10倍量水或含水有機溶劑回流或超聲提取3次；每次回流提取時間為1-3小時，超聲提取時間為0. 5-2小時，提取液減壓濃縮至波密度為1. 12時， 加入吸附劑(硅膠或硅藻土)進行柱層析；先以己烷或石油醚洗去油脂，然后用乙酸乙酯洗脫，得到的乙酸乙酯部分經(jīng)減壓濃縮得到總皂苷，收率為6-8%左右。提取中所用含水有機溶劑是指含不同量的水的甲醇、乙醇、異丙醇等。所得黃三七活性部位中應含有如下成分黃三七皂苷A(soulieosides A)，黃三七皂苷B(soulieosides B)，黃三七皂 1^f C(soulieosides C)，黃三七阜苷 D(soulieosides D)，黃三七阜苷 E(soulieosides E)，黃三七皂苷F(soulieosides F)，黃三七皂苷G(soulieosides G)，黃三七皂苷 H(soulieosides H)，黃三七阜苷 I (soulieosides I)，黃三七素 A(soulieoninsA)， 25-anhydrocimicigenol，25-0-乙酰升麻醇木糖苷[25-0-acetylcimigenol-3-0- β -D-xy lopyranoside]，26 (R)-甲氧基阿特素[26 (R) -methoxyactein]。2、本發(fā)明中皂苷單體化合物的提取分離步驟和方法如下黃三七全草^g，按步驟1提取得黃三七總皂苷400g，進行柱色譜層析分離，用氯仿-甲醇梯度洗脫，TLC檢測，將相同餾分合并，得到SVA-a(30g)、SVA-M2lg)、SVA-c (37g) 和SVA-d(60g)四個部分。SVA-a(30g)經(jīng)300 400目硅膠柱層析，以氯仿甲醇 (10 0 9 1)梯度洗脫，分為 SVA-a-fr. 3、SVA-a-fr. 8、SVA-a-fr. 9、SVA-a-fr. 12、 SVA-a-fr. 14幾個部分，對SVA-a-fr. 3 (800mg)經(jīng)300 400目硅膠柱層析，石油醚乙酸乙酯甲醇(70 30 3)洗脫，得化合物 I ；SVA-a-fr. 8 和 SVA-a-9 合并 SVA-a-fr. 8， 9(3g)后，經(jīng)氯仿:甲醇(99 1 95 5)洗脫，分為 SVA-a-8，9-fr. 4、SVA-a-8，9-fr. 7、 SVA-a-8,9-fr. 9、SVA-a-8,9-fr. 11 幾個部分，對 SVA-a-8,9-fr. 4 (70mg) 300 400 目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯甲醇(70 30 3)分為SVA-a-8，9-fr. 4-fr. 7幾部分，對SVA-a-8，9-fr. 4-fr. 7經(jīng)300 400目硅膠氯仿甲醇(1 1)柱層析，再經(jīng)重結晶，得IV(5mg) ；SVA-a-8,9-fr. 7 (300mg)經(jīng)300 400目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酉旨甲醇(70 30 4)，得化合物 V(52mg) ；SVA_a_8，9-fr. 9 和 SVA_a_8，9-fr. 11 合并后(700mg)，經(jīng)300 400目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯甲醇(70 30 5) 洗脫，得化合物IIlO60mg)。SVA-a-fr. 12(1. Ig)，經(jīng)300 400目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯甲醇(70 30 5)洗脫，得化合物II(37mg) ；SVA-a-fr. 14(Ig)以經(jīng) 300 400目硅膠柱層析，以氯仿甲醇(98 2 95 5)洗脫，得化合物VI (12mg)。 SVA-b(21g)以丙酮溶解過濾，丙酮不溶部分(13. 7g)，經(jīng)300 400目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯甲醇O 8 1.6)J4 5 0. 3 4 5 1)洗脫，分為SVA-b-fr. 3、 SVA-b-fr. 11幾個部分，對SVA-b-fr. 3 (6g)經(jīng)300 400目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯甲醇(65 35 7)洗脫，得化合物 XII(1050mg)，SVA-b-fr. ll(300mg)經(jīng) 300 400目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯甲醇(60 40 8)，得化合物￥111(10511^)，對 SVA-b-fr. 11-fr. 7經(jīng)300 400目硅膠柱層析和重結晶，得化合物IX (8mg)。對SVA_c (37g)經(jīng)300 400目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯甲醇G 5 0. 5 4 5 1 4:6: 1.2)梯度洗脫，分為SVA-c-fr. 3幾個部分，對SVA-c-fr. 3經(jīng)300 400目硅膠柱層析，氯仿甲醇(93 7)，得化合物乂111(6011^)。SVA_d(60g)經(jīng)300 400目硅膠柱層析， 以石油醚丙酮(10 0-7 3)梯度洗脫，分為 SVA-d-fr. 14、SVA_d-fr. 15、SVA_d-fr. 17 幾個部分，對 SVA-d-fr. 14 和 SVA-d-fr. 15 合并 SVA-d-fr. 14，15(1. 5g)后，以石油醚丙酮(95 5-70 30)梯度洗脫，分為 SVA-d-fr. 14,15-fr. 11 幾個部分，對 SVA-d-fr. 14， 15-fr. 11經(jīng)300 400目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯(85 15)洗脫，得化合物 XI (13mg)，對SVA-d-fr. 17(500mg)經(jīng)300 400目硅膠柱層析，以石油醚丙酮(85 15) 洗脫，得化合物X OOmg)。水層上大孔樹脂DlOl的95%乙醇洗脫物GOg)，經(jīng)100 200目硅膠柱層析，分別以氯仿甲醇(10 0 9 1)、氯仿甲醇水(8 2 0.2)、氯仿 甲醇水(65 35 3. 5)梯度洗脫，分為fr. 13幾個部分，對fr. 13(1. 2g)經(jīng)300 400 目硅膠柱層析，以氯仿甲醇(88 12)，分為fr. 13-fr. 4幾個部分，對fr. 13-fr. 4 (90mg) 經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯甲醇O 8 1.6)洗脫，得化合物VII(40mg)。具體化合物結構如下
權利要求
1.一種具有抗腫瘤作用的黃三七總皂苷的提取方法，其特征在于將黃三七全草粉碎后，用10倍量水或含水有機溶劑回流或超聲提取3次；每次回流提取時間為1-3小時，超聲提取時間為0. 5-2小時，提取液減壓濃縮至波密度為1. 12時，加入吸附劑(硅膠或硅藻土) 進行柱層析；先以己烷或石油醚洗去油脂，然后用乙酸乙酯洗脫，得到的乙酸乙酯部分經(jīng)減壓濃縮得到總皂苷，收率為6-8%左右。
2.具有抗腫瘤作用的黃三七總皂苷的組成，其特征在于黃三七皂苷A(S0Ulie0SideS A)，黃三七皂苷B(soulieosides B)，黃三七皂苷C(soulieosides C)，黃三七皂苷 D(soulieosides D)，黃三七阜苷 E(soulieosidesE)，黃三七阜苷 F(soulieosides F)，黃三七皂苷G(soulieosides G)，黃三七皂苷H(soulieosides H)，黃三七皂苷 I (soulieosides I),黃三七素 A (soulieonins A), 25-anhydrocimicigenol, 25-0-乙酉先升麻醇木糖苷[25-O-acetylcimigenol-3-O-0 -D-xylopyranoside]J6(R)-甲氧基阿特素 [26(R)-methoxyactein]。
3.黃三七總皂苷的抗癌活性，其特征在于在體外對人結腸癌HCT-8細胞、人肝癌細胞BEL-7402、人胃癌MGC-823細胞、肺腺癌細胞A549、人白血病HL-60細胞、人肝腫瘤細胞 H印G2、乳腺癌細胞SF-268和乳腺癌細胞McF_7均有良好的抑制作用，而對正常小鼠肝細胞損傷作用相對微弱，可望用作臨床腫瘤預防和治療藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黃三七總皂苷的提取組成及其在腫瘤治療、腫瘤預防和抗氧化損傷中的應用，所說總皂苷是將黃三七藥材粉碎過篩后，用80％乙醇加熱回流提取、過濾、減壓濃縮，加入吸附劑(硅膠或硅藻土)進行柱層析，先以工業(yè)己烷洗去油脂，然后用乙酸乙酯洗脫，得到的乙酸乙酯部分經(jīng)減壓濃縮得總皂苷，工藝簡單，收率提高，成本降低，極有利于工業(yè)化生產(chǎn)，藥效學實驗證明，所說總皂苷可望用于制備腫瘤化學預防和治療藥物。
文檔編號A61P35/00GK102188502SQ201010120858
公開日2011年9月21日 申請日期2010年3月10日 優(yōu)先權日2010年3月10日
發(fā)明者吳海峰, 周亮, 楊峻山, 許旭東, 陳士林 申請人:中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所