專利名稱：：具抗癌活性的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種天然產(chǎn)物的化學(xué)修飾物及其制備方法，具體說是一種具有抗腫瘤活性的熊果酸衍生物及其制備方法，更具體的說是具有抗癌活性的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯及其制備方法。熊果酸(Ursolicacid，UA)，又名烏索酸、烏蘇酸，屬五環(huán)三萜類化合物，化學(xué)名(3P)-3-Hydroxyurs-12-en-28-oicacid，分子式C3。H4803。其在自然界分布較廣，在多種植物中以游離形式存在或與糖結(jié)合成甙存在。藥理研究發(fā)現(xiàn)，熊果酸具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，除保肝、抗炎、抗病毒、抗菌、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用外，還具有顯著的抗癌功效，且副作用小，毒性低，顯示出較大的臨床應(yīng)用潛力。熊果酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為目前，國內(nèi)對熊果酸的研究報(bào)告多集中在熊果酸的提取分離工藝和藥理學(xué)研究，對熊果酸的合成改造設(shè)計(jì)較少。其中對熊果酸的抗癌作用研究較深入。如王濤等的"熊果酸抗腫瘤作用及其機(jī)制研究進(jìn)展"(《藥物生物技術(shù)》，2008，15[2]);熊斌等的"熊果酸藥理學(xué)的研究進(jìn)展"(《國外醫(yī)學(xué)藥學(xué)分冊》，2004，31[[3]);夏國豪等的"熊果酸抗腫瘤作用研究進(jìn)展"(《國外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊》，2002，29[6]);等等。研究表明，熊果酸抗始發(fā)突變、抗促癌作用、抗氧化作用、細(xì)胞毒作用、誘導(dǎo)癌細(xì)胞分化、抗血管生成作用、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。國內(nèi)的白育軍等報(bào)道了6種熊果酸母核修飾物(《華西藥學(xué)雜志》，2003，18[2]);楊定菊等報(bào)道了具有生物活性的聚乙二醇支載熊果酸(《中國藥科大學(xué)大學(xué)學(xué)報(bào)》，2008，39[1])，并發(fā)表了專利《親水性聚乙二醇支載熊果酸系列新藥及其制備方法》；孟艷秋等開發(fā)了熊果酸修飾氨基酸、氨基醇、胺、雜環(huán)等系列衍生物等多項(xiàng)專利。本發(fā)明的立足點(diǎn)在于研發(fā)新型的具抗癌活性的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯及其制備方法，國內(nèi)外未見其報(bào)道。
背景技術(shù)：
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發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是以熊果酸為先導(dǎo)化合物，合成具有抗癌活性的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯。其結(jié)構(gòu)式如式(I)所示如上所示的具有抗腫瘤活性的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯，具有抗腫瘤活性，可用于治療腫瘤疾病。本發(fā)明的反應(yīng)流程，是通過下列步驟完成的(1)熊果酸與乙酸酐反應(yīng)，生成乙酰熊果酸；乙酰熊果酸的結(jié)構(gòu)式如式II所示。(2)乙酰熊果酸與草酰氯反應(yīng)，再與三乙醇胺反應(yīng)得乙酰熊果酰三乙醇胺單酯；反應(yīng)流程可見附圖1。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，本發(fā)明對天然產(chǎn)物熊果酸進(jìn)行化學(xué)改造，得到乙酰熊果酰三乙醇胺單酯，經(jīng)過藥理學(xué)試驗(yàn)表明，其對所有測試細(xì)胞株均具有良好的抑制能力，其中對H印G2、PC-3、MKN45的抑制作用優(yōu)于母核熊果酸。圖1為本發(fā)明中乙酰熊果酰三乙醇胺單酯的合成路線。具體實(shí)施例通過下面給出的本發(fā)明的具體實(shí)施例以及對比實(shí)施例可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明，但是它們不是對本發(fā)明的限定實(shí)施例1乙酰熊果酸的制備10g熊果酸用45mL吡啶溶解，在冰浴條件下緩慢滴加25mL乙酸酐，滴畢室溫下反應(yīng)58h。停止反應(yīng)，減壓蒸除吡啶，殘余物用二氯甲烷溶解，并依次用鹽酸(5%)、蒸餾水、飽和氯化鈉溶液洗滌有機(jī)相，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，濾液于45t:下減壓濃縮后烘干至恒重，所得粗產(chǎn)品為10.50g。粗產(chǎn)物用無水乙醇重結(jié)晶，得白色針狀晶體8.59g。結(jié)晶產(chǎn)率為83.3%，總產(chǎn)率為80.5%。mp:282283°C。丄HNMR(600MHz，CDC13):5.32(t，lH，/=3.6Hz，H—12)，4.42(t，lH，/=5.6，H—3)，2.22(d，1H，/=11.2Hz，H-18)，2.04(s，3H，CH3CO)，0.92(d，3H，/=6.4Hz，CH3)，0.85(d，3H，/=3.6Hz，CH3)，1.09，1.00，0.91，0.78，0.74(s，15H，each,CH3)。IR(KBr):3366，2972，2928，1736，1700，1455，1370，1246cm—、實(shí)施例2乙酰熊果酰三乙醇胺單酯的制備2.OOg乙酰熊果酸用二氯甲烷溶解，冰浴條件下緩慢滴入2ml草酰氯，滴加完畢后繼續(xù)維持冰浴攪拌lh，后于室溫下繼續(xù)反應(yīng)24h。反應(yīng)完畢，將上述溶液減壓蒸餾，得黃色泡沫狀固體。分2次各加入少量二氯甲烷并減壓蒸干溶劑，所得產(chǎn)物為淺黃色固體，用100mL二氯甲烷溶解，備用。在冰浴及充分?jǐn)嚢钘l件下，將上述備用溶液緩慢滴入含lg三乙醇胺(80%)的50mL二氯甲烷中。滴畢，繼續(xù)冰浴30min，后撤除冰浴，室溫反應(yīng)12h。分別用5%鹽酸、蒸餾水、飽和氯化鈉依次洗滌有機(jī)層，直至有機(jī)層澄清且呈中性，分出有機(jī)層，加入足量的無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸餾，得到粗品淺黃色固體。黃色固體用硅膠柱層析純化，洗脫劑為乙酸乙酯/石油醚=1:2(V/V)，得1.03g淡黃色粉末乙酰熊果酰三乙醇胺單酯，產(chǎn)率為40.7%。mp:184186。C。丄HNMR(600MHz，CDCl3):6.38(br，1H，N[H]+)，5.33(t，lH，/=3.6Hz，H—12),4.434.41(t，lH，/=5.6，H-3)，3.703.67(m，2H，COO￡^CH2N)，3.483.45(m，1H，0Ha)，3.253.22(m，1H，0Hb)，2.04(s，3H，CH3CO)，0.88(d，3H，/=6.4Hz，CH3)，1.09，0.95，0.94，0.87，0.85，0.81(s，3H，each,CH3)。IR(KBr):3406，2972，2925，1735，1633，1527，1455，1370，1245，1145，1027cm—工。實(shí)施例3乙酰熊果酰三乙醇胺單酯的抗癌活性37°C、5%C02條件下常規(guī)培養(yǎng)H印G2、PC_3、AGS、BGC及MKN45。癌細(xì)胞接種于96孔板中，細(xì)胞濃度為2500個/孔，待測藥物用匿SO助溶，匿SO終濃度不超過0.5%，采用MTT法測試熊果酸修飾物酸性氨基酸的抗癌活性。結(jié)果見表1。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求具抗癌活性的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯，其特征在于結(jié)構(gòu)式如式I所示I。dest_path_image002.jpg2.制備權(quán)利要求1所述的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯的方法，其特征在于該方法包括以下步驟(1)熊果酸與乙酸酐反應(yīng)，生成乙酰熊果酸；乙酰熊果酸的結(jié)構(gòu)式如式II所示；(2)乙酰熊果酸與草酰氯反應(yīng)，再與三乙醇胺反應(yīng)得乙酰熊果酰三乙醇胺單酯。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>3.制備權(quán)利要求1所述的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯的方法，其特征在于該方法包括以下步驟a.10g20g熊果酸用4080ml吡啶溶解，溶液在-55°0下加入2545ml醋酸酐后，在103(TC下反應(yīng)812h，之后減壓蒸除溶劑，殘余物用二氯甲烷完全溶解后，并依次用稀鹽酸、蒸餾水、飽和氯化鈉溶液洗滌，所得有機(jī)溶液用無水硫酸鈉除水26h，濾液于4050°C下減壓后烘干至恒重，所得粗產(chǎn)品用無水乙醇重結(jié)晶，得到乙酰熊果酸；b.24g乙酰熊果酸用二氯甲烷完全溶解，_551:條件下滴入24ml草酰氯，控制速度使其在2535min內(nèi)滴完，滴加完畢后繼續(xù)維持此溫度攪拌0.5lh，后于室溫下繼續(xù)反應(yīng)12h以上，反應(yīng)完畢，將上述溶液減壓蒸餾，得黃色泡沫狀固體，加入2040ml二氯甲烷溶解，為備用溶液，將12g三乙醇胺(純度為80%)完全溶于5(Tl00ml二氯甲烷，然后于-55t:下將前述備用溶液滴入其中，同時(shí)控制滴加速度，使其在2535min內(nèi)滴完，滴畢繼續(xù)維持-55t:下反應(yīng)0.5lh，后撤除冰浴，于103(TC下反應(yīng)612h，依次用稀鹽酸、蒸餾水、飽和氯化鈉溶液洗滌有機(jī)層，有機(jī)層加入無水硫酸鈉除水23h后過濾，濾液于4(T5(TC下減壓蒸餾后烘干至恒重，得到粗品淺黃色固體，黃色固體用硅膠柱層析純化，得淡黃色粉末狀乙酰熊果酰三乙醇胺單酯。4.權(quán)利要求1所述的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯，其特征在于具有抗腫瘤活性，可用于治療腫瘤疾病藥物的制備'全文摘要本發(fā)明以熊果酸為母體化合物，通過與三乙醇胺接合，合成具抗癌活性的乙酰熊果酰三乙醇胺單酯。體外藥理試驗(yàn)表明，乙酰熊果酰三乙醇胺單酯對人肝癌HepG2、人結(jié)腸癌PC-3、人胃癌AGS、BGC-823、MKN45具有明顯的體外抑制能力。文檔編號A61P35/00GK101792477SQ20101011591公開日2010年8月4日申請日期2010年3月2日優(yōu)先權(quán)日2010年3月2日發(fā)明者于舟,孟春,白鍇凱,石賢愛,郭養(yǎng)浩申請人:福州大學(xué)