專利名稱：具抗癌活性的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種天然植物成分及其化學修飾物，特別是涉及一種具有抗腫瘤活性 的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物及其制備方法。
背景技術：
熊果酸(Ursolic acid，UA)，又名烏索酸、烏蘇酸，屬五環(huán)三萜類化合物，化學名 (3 β ) -3-Hydroxyurs-12-en-28-oic acid，分子式 C3tlH48O3。其在自然界分布較廣，在多種 植物中以游離形式存在或與糖結合成甙存在。藥理研究發(fā)現(xiàn)，熊果酸具有廣泛的生物學效 應，除保肝、抗炎、抗病毒、抗菌、調節(jié)中樞神經系統(tǒng)等作用外，還具有顯著的抗癌功效，且副 作用小，毒性低，顯示出較大的臨床應用潛力。熊果酸的化學結構式
目前，國內對熊果酸的研究報告多集中在熊果酸的提取分離工藝和藥理學研究，特別 是國內外對熊果酸的抗癌作用研究已見報道。如王濤等的“熊果酸抗腫瘤作用及其機制研 究進展”(《藥物生物技術》，2008, 15[2])；熊斌等的“熊果酸藥理學的研究進展”(《國外醫(yī) 學藥學分冊》，2004，31[[3])；夏國豪等的“熊果酸抗腫瘤作用研究進展”(《國外醫(yī)學腫瘤 學分冊》，2002，29 [6])；等等。研究表明，熊果酸抗始發(fā)突變、抗促癌作用、抗氧化作用、細 胞毒作用、誘導癌細胞分化、抗血管生成作用、誘導細胞凋亡。國內的白育軍等報道了 6種 熊果酸母核修飾物(《華西藥學雜志》，2003，18[2])；楊定菊等報道了具有生物活性的聚乙 二醇支載熊果酸(《中國藥科大學大學學報》，2008，39[1])，并發(fā)表了專利《親水性聚乙二醇 支載熊果酸系列新藥及其制備方法》；孟艷秋等開發(fā)了熊果酸修飾氨基酸、氨基醇、胺、雜環(huán) 等系列衍生物等多項專利。然而，現(xiàn)有專利或文獻尚未涉及經酸性氨基酸或經堿性氨基酸 化學修飾的熊果酸衍生物等方面的研究。本發(fā)明的立足點在于研發(fā)新型的具有抗癌活性的 經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是以熊果酸為先導化合物，對其Rl、R2基團進行結構修飾，合成一 系列新的具有更好抗癌活性的熊果酸衍生物。
本發(fā)明以熊果酸為先導化合物，對其結構進行改造得到的新化合物，其結構式如 式(I)所示
其中r1; r2為羥基、乙酰氧基、酸性氨基酸氨基、酸性氨基酸二酯氨基或酸性氨基酸修 飾琥珀單酰氧基。如上所述的一種經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物，它具有抗腫瘤活性，可 用于制備治療腫瘤疾病的藥物。本發(fā)明的反應流程，是通過下列步驟完成的
(1)熊果酸與乙酸酐或丁二酸酐反應，生成相應的酰氧基熊果酸之6；
(2)化合物之6與草酰氯反應，再與相應的酸性氨基酸反應得化合物(Ja,3b, 7a, 7b)；
(3)化合物、3a,3b)經堿水解后酸化，得化合物iAa, 4b)；
(4)化合物(辦,4b)與溴甲烷反應，得化合物(fe,5b\其中化合物2，3a，3b，4a，4b，5a，5b，6，7a，7b為通式I的系列化合物，它們的相關 基團禮、R2如下表所示
反應流程可見附圖1。 本發(fā)明的優(yōu)點在于，本發(fā)明對天然產物熊果酸進行化學改造，得到一系列熊果酸 的結構修飾物，經過藥理學試驗表明，它們對人肝癌HepG2細胞、人結腸癌HT-29細胞、人胃 癌AGS細胞及人神經母細胞瘤細胞SH-SY5Y均具有較明顯的抑制增值作用。


圖1為制備具有抗癌活性的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物的反應流程 圖。
具體實施例方式
通過下面給出的本發(fā)明的具體實施例可以進一步清楚地了解本發(fā)明，但是它們不是對 本發(fā)明的限定 實施例1
化合物2的制備
IOg熊果酸用45 mL吡啶溶解，在冰浴條件下緩慢滴加25 mL乙酸酐，滴畢室溫下反應 8 h。停止反應，減壓蒸除吡啶，殘余物用二氯甲烷溶解，并依次用鹽酸(5%)、蒸餾水、飽和氯 化鈉溶液洗滌有機相，有機相用無水硫酸鈉除水2h后過濾，濾液于45°C下減壓濃縮后烘干 至恒重，所得粗產品為10. 50 g。粗產物用無水乙醇重結晶，得白色針狀晶體8. 59 g。結晶 產率為 83. 3%,總產率為 80. 5%ο mp 282^283°C。1H WR(600MHz，CDCl3) :5· 32 (t, 1Η，/=3· 6Hz，H-12)，4. 42 (t, 1Η，/=5· 6，H—3)， 2. 22 (d, 1Η，/=11· 2Hz, H-18)，2. 04 (s, 3H, CH3CO)，0. 92 (d, 3Η，/=6· 4Hz, CH3)，0. 85 (d, 3H
，/=3· 6Hz, CH3)，1. 09，1. 00，0. 91，0. 78，0. 74 (s, 15Η, each, CH3)。IR(KBr) :3366，2972，2928，1736，1700, 1455，1370，1246cm—1。實施例2
化合物而的制備
2. 00 g化合物用二氯甲烷溶解，冰浴條件下緩慢滴入2 ml草酰氯，滴加完畢后繼續(xù) 維持冰浴攪拌1 h，后于室溫下繼續(xù)反應24 h。反應完畢，將上述溶液減壓蒸餾，得黃色泡 沫狀固體。分2次各加入少量二氯甲烷并減壓蒸干溶劑，所得產物為淺黃色固體，用IOOmL 二氯甲烷溶解，為備用溶液A。谷氨酸二甲酯鹽酸鹽2. 95g分散于70mL 二氯甲烷中，并加入3mL三乙胺。冰浴下 緩慢滴入上述備用溶液A。滴畢，繼續(xù)冰浴30min，后撤除冰浴，室溫反應12h。依次用5% 鹽酸、蒸餾水、飽和氯化鈉依次洗滌有機層，直至有機層澄清且呈中性，有機層加入足量的 無水硫酸鈉除水2h后過濾，濾液減壓蒸餾，得到粗品淺黃色固體。黃色固體用硅膠柱層析純化，洗脫劑為乙酸乙酯/石油醚=1:6 (V/V)，得2. 40g白色粉末狀固體化合物而，產率為 91. 3% ο mp -JTirC .
1H NMR(600MHz, CDCl3) 6. 54 (d, 1H, /=6. 2Hz, NH), 5. 39 (t, 1Η,/=3. 6Hz, H-12)，4. 54 4· 51 (m, 1H, N顆COOCH3)，4. 49 (t, 1Η，/=5· 6Ηζ, Η—3)，3. 65，3. 60 (s, 6Η, each, -OCH3) , 1. 97 (s, 3H, CH3CO) , 0. 89 (d, 3Η, /=6. 4Hz , C H3), 1. 08，0. 96，0. 92，0. 86，
0. 85，0. 65 (s, 18Η, each, CH3)。IR(KBr) :3411，2950，2872，1738，1660，1505，1451，1371，1246cm—1。 實施例3
化合物劃的制備
按例2中的方法的合成，但是用2. 75g的天門冬氨酸二甲酯鹽酸鹽代替谷氨酸二甲酯 鹽酸鹽。制得2. 38g的白色粉末狀固體勱，產率為92. 7%, mp :153 154°C。1H NMR(600MHz, CDCl3) 6. 78 (d, 1H, /=6. OHz, NH), 5. 40 (t, 1Η,/=3. 5Hz, H-12)，4. 67 4. 64 (m, 1H, NHCHC00CH3)，4. 42 (t, 1Η，/=5. 6Hz, H_3)，3. 75，3. 67
(s, 6H, each, -OCH3)，2. 04 (s, 3H, CH3CO)，0. 88 (d, 3Η，/=6· 4Hz, CH3)，1. 09，0. 95，0. 93，
0. 86，
0. 85，0. 70 (s, 18H, each, CH3)。IR(KBr) :3403，2949，2905，2868，1775，1737，1719，1660，1507，1457，1369，1254cm_10
實施例4
化合物辦的制備
2. 40g化合物3a溶于320mL甲醇/水溶液(V/V=15 1)中，加入氫氧化鉀2. 8g，室溫 攪拌反應8h，TLC (乙酸乙酯/醋酸=100:1，V/V)鑒定反應完畢。減壓蒸除甲醇，余物加入 IOOmL蒸餾水，緩慢滴加稀鹽酸調節(jié)體系ρΗ為;Γ4，析出大量白色晶體。抽濾收集晶體，并 用蒸餾水洗滌至洗滌液呈中性。濾餅減壓干燥，得2. 04g白色晶體辦，產率為95. 3%。mp 218 220 °C。1H NMR (600MHz，DMS0-d6) :7· 22 (d, 1H, /=7. 3Hz, NH), 5. 19 (t, 1Η，/=3· 6Ηζ，Η-12)，
4. 24 (s，1Η, 0H-3)，4. 13 4· 09 (m, 1H, NHCHC000H)，2. 99 (t, 1H, Η-3)，2. 22 (t, 2Η，/=7· 3 Hz, CH2COOH)，0. 83 (d, 3Η，/=6· 4Hz，CH3)，1. 03，0. 91，0. 89，0. 85，0. 67，0. 65 (s, 18H, ea
ch,
CH3)。IR(KBr) :3384，2976，2936，2872，1712，1635，1516，1455 cnT1。
實施例5
化合物辦的制備
按例4中的方法的合成，但是用2. 38g化合物3b代替化合物3a。制得1. 98g的白色粉 末狀固體辦，產率為93. 6%, mp :302 305°C。
1H NMR(600MHz,DMS0-d6) 7. 27 (d, 1H, /=7. 2Hz, NH), 5. 20(t, 1Η,/=3. 6Hz,H-12), 4. 24 (s, 1H, 0H-3)，4. 33 4. 29 (m, 1H, NHCHC000H)，2. 99 (t, 1H, H-3)，2. 22 (t, 2H，/=7. 3Hz, CH2COO H)，0. 83 (d, 3Η，/=6· 4Ηζ，CH3)，1. 02，0. 90，0. 89，0. 84，0. 67，0. 65 (s, 18Η, each, CH3)。IR(KBr) :3417，2971，2928，2871，1731，1636，1515，1455 cnT1。 實施例6
化合物fe的制備
I.17g化合物辦溶于IOOmL丙酮中，加入研細的碳酸鉀粉末1.4g，后加入溴代甲烷 0. 6mL室溫攪拌反應48h，TLC (乙酸乙酯/石油醚=2:1，V/V)鑒定反應完畢。減壓蒸除溶 劑，余物加入IOOmL蒸餾水充分懸浮，緩慢滴加稀鹽酸調節(jié)體系pH為3 4，用200ml乙酸乙 酯分2次萃取。收集有機相，并用蒸餾水洗滌至水相呈中性。加入足量的無水硫酸鈉除水 2h后過濾，濾液經濃縮去除溶劑，余物經快速柱層析純化，洗脫劑為乙酸乙酯/石油醚=1 2 (V/V)，得 1. Olg 白色粉末 fe，產率為 82. 8%。mp :75 76°C。1H NMR (600MHz，CDCl3) :6· 61 (d, 1H, J= 6. 2Hz, NH), 5. 39 (t, 1Η，/=3· 6Ηζ, Η-12 )，4. 53 4· 50 (m, 1Η, NHCHC00CH3)，3. 72，3. 67 (s, 6Η, each, OCH3)， 3. 23 3· 20 (dd, 1H,
/=11. 5，4. 2Hz, H-3)，2. 43 2· 27 (m, 2H, CH2COOCH3)，0. 88 (d, 3Η，/=6· 4Hz，CH3)，1. 09，
0.98，0. 96，0. 89，0. 77，0. 64 (s, 18H, each, CH3)。IR(KBr) :3411，2950，2926，2870，1742，1657，1510，1451，1377，1256 cnT1。
實施例7
化合物涵的制備
按例6中的方法的合成，但是用1. 14g化合物辦代替化合物辦。制得0.97g的白色粉 末狀固體5力，產率為81. 5%, mp :125 127°C。1H NMR (600MHz , CDCl3) 6. 80 (d, 1Η, J= 6. 2Hz, NH), 5. 40 (t, 1Η，/=3· 6Ηζ, Η-12) , 4. 66 4· 63 (m, 1Η, NHCHC00CH3)，3. 76，3. 67 (s, 6Η, each, OCH3)， 3. 23 3· 20 (dd, IH,/=
II.5，4. 2Hz, H-3)，2. 94 2· 93 (m, 2H, CH2COOCH3)，0. 88 (d, 3Η，/=6· 4Hz，CH3)，1. 09，0. 9 8，0. 94，0. 90，0. 77，0. 70 (s, 18H, each, CH3)。IR(KBr) 3509, 3403, 2950, 2925，2868，1728，1663，1527，1456，1287，1245cm_10實施例8
化合物7a的制備
1.14g熊果酸分散于120mL氯仿中，加入琥珀酸酐1. 5g及對甲苯磺酸0. Olg，室溫攪拌 20min后，于65°C回流反應24h。TLC (乙酸乙酯/石油醚=1 1，V/V)鑒定反應完畢，于體系 中加入50mL蒸餾水，維持此溫度繼續(xù)回流0. 5h。反應完畢，分離有機相，有機相依次用蒸餾 水、飽和氯化鈉溶液洗滌至水相為中性。減壓蒸除溶劑，得白色粉末狀固體即化合物&不經 純化，直接進入下一步?；衔?完全溶于70mL 二氯甲烷中。冰浴下緩慢滴入2mL草酰氯，滴畢撤除冰浴， 室溫反應24h以上。分2次各加入少量二氯甲烷并減壓蒸干溶劑，所得產物為淺黃色固體，用IOOmL 二氯甲烷溶解，為備用溶液B。取谷氨酸二甲酯鹽酸鹽1. 69g，分散于含5mL三乙胺的IOOmL 二氯甲烷中。冰浴下 將上述備用溶液B緩慢滴入其中，滴畢，繼續(xù)冰浴30min后，撤除冰浴，室溫反應12h。分別 用5%鹽酸、蒸餾水、飽和氯化鈉依次洗滌有機層，直至有機層澄清且呈中性，分出有機層， 加入足量的無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸餾，得到粗品淺黃色固體。淺黃色固體用硅膠柱 層析純化，洗脫劑為乙酸乙酯/石油醚=1:3 (V/V)，得到1. 33g白色粉末狀固體化合物7a, 產率為 74. 5%ο mp :46 47°C。1H NMR (600MHz, CDCl3) 6. 58 (d, 1H, /=6. OHz, NHa), 6. 38 (d, 1H, /=7. 9Hz, NHb)，
5. 39 (s, 1H, H-12)，4. 63 4. 60 (m, 1H, NHCHC00CH3a)，4. 52 4· 49 (m, 1Η, NHCHC00CH3b), 4. 52 (t, 1Η,/=5. 6，Η_3)，3. 74，3. 72，3. 67，3. 66 (s, 12Η, each, OC H3)，2. 45 2· 37 ( m, 2Η, CE^CH2CON)，2. 23 2· 14 (m, 2H, CH2CON)，0. 89 (d, 3Η，/=6· 4Hz，CH3)， 1. 08，0. 96，0. 92，0. 85，0. 84，0. 65 (s, 18H, each, CH3)。IR(KBr) :3380，2952，1741，1661，1522，1438，1370，1254，1206，1171 cnT1。 實施例9
化合物7b的制備
按例8中的方法的合成，但是用1. 58g的天門冬氨酸二甲酯鹽酸鹽代替谷氨酸二甲酯 鹽酸鹽。制得1. 16g的白色粉末狀固體7b，產率為66. 3%，mp :125 127°C。1H NMR(600MHz, CDCl3) 6. 59, 6. 58 (d, 1H, /=5. 9Hz, NHa), 6. 38 (d, 1H, /=7. 9Hz, NHb)，5. 32 (s, 1H, H-12)，4. 80 4· 77 (m, 1H, NHCHC00CH3a)，4. 60 4· 57 (m, 1Η,
NHCHC00CH3b), 4. 44 (t, 1Η,/=6. 4，Η_3)，3. 68，3. 67，3. 62，3. 60 (s, 12Η, each, OC H3)，2. 45 2· 37 ( m, 2Η, CHaCH2CON)，2. 23 2· 14 (m, 2H, CH2CON)，0. 82 (d, 3Η，/=6· 4Hz，CH3)， 1. 02，0. 88，0. 86，0. 78，0. 77，0. 64 (s, 18H, each, CH3)。IR(KBr) :3385，2962，2871，1733，1660，1521，1438, 1369，1261，1170 cnT1。 實施例10
經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物的抗癌活性
37°C、5%C02條件下常規(guī)培養(yǎng)H印G2、HT-29、AGS及SH-SY5Y。癌細胞接種于96孔 板中，細胞濃度為10000個/孔，待測藥物用DMSO助溶，DMSO終濃度不超過0. 5%，采用MTT 法測試熊果酸修飾物酸性氨基酸的抗癌活性。結果見表廣4，表中化合物1為熊果酸。表1熊果酸及其結構修飾物對人結腸癌細胞株HT-29的抑制作用(抑制率％)
表2熊果酸及其結構修飾物對人神經瘤SH-SY5Y的抑制作用(抑制率％)
表3熊果酸及其結構修飾物對人肝癌HepG2的抑制作用(抑制率％)
表4熊果酸及其結構修飾物對人胃癌AGS的抑制作用(抑制率％)
表1、中，a——化合物在濃度為20 μ mol/L時測得的抑制率； b——表示化合物的半數(shù)有效抑制濃度。
權利要求
一種結構如式(I)所示的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物， 其中R1，R2為羥基、乙酰氧基、酸性氨基酸氨基、酸性氨基酸二酯氨基或酸性氨基酸修飾琥珀單酰氧基。2010101159021100001dest_path_image002.jpg
2.根據權利要求1所述的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物，其特征在于所述酸 性氨基酸為谷氨酸或天門冬氨酸；Rl和R2基團不同時為羥基。
3.權利要求1所述的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物的制備方法，其特征在于a. 熊果酸與乙酸酐反應生成化合物2;化合物2為權利要求1中通式(I)化合物， 其中R1代表AcO，R2代表0H;熊果酸與丁二酸酐反應生成化合物6;化合物6為通式(I)化 合物，其中R1代表H00CCH2CH2C00，R2代表OH ； 與草酰氯反應后，與谷氨酸二甲酯鹽酸鹽反應得到化合物3a，與天門冬氨酸二甲酯鹽酸鹽 反應得到化合物3b ；化合物3a為通式(I)化合物，其中Rl代表AcO，R2如式(II)所示； 化合物3b為通式⑴化合物，其中Rl代表AcO，R2如式(III)所示；c.化合物6與草酰氯反應后，與谷氨酸二甲酯鹽酸鹽反應得到化合物7a，與天門 冬氨酸二甲酯鹽酸鹽反應得到化合物7b ；化合物7a為通式(I)化合物，其中R1如式(VI) 所示，R2代表如式(II)，化合物7b為通式⑴化合物，其中R1如式(ΥΠ)所示，R2代表如 式(III)；d.化合物3a，3b經堿水解后酸化，得化合物4a，4b ；化合物4a為通式(I)化合物， 其中R1代表OH，R2如式(IV)所示，化合物4b為通式⑴化合物，其中R1代表OH，R2如式 (V)所示； e. 化合物4a，4b與溴代甲烷反應，得化合物5a，5b ；化合物5a為通式(I)化合物， 其中R1代表OH，R2如式(II)所示，化合物5b為通式⑴化合物，其中R1代表OH，R2如式 (III)所示。
4.權利要求1所述的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物的制備方法，其特征在于a.IOg 20g熊果酸用4(T80ml吡啶溶解，溶液在_5 5°C下加入25 45ml醋酸酐后，在 1(T3(TC下反應纊12h，之后減壓蒸除溶劑，殘余物用二氯甲烷完全溶解后，并依次用稀鹽 酸、蒸餾水、飽和氯化鈉溶液洗滌，所得有機溶液用無水硫酸鈉除水2飛h，濾液于4(T50°C 下減壓后烘干至恒重，所得粗產品用無水乙醇重結晶，得到化合物2 ；b.2 4g化合物用二氯甲烷完全溶解，-5 5°C條件下滴入2、ml草酰氯，控制速度使 其在25 35min內滴完，滴加完畢后繼續(xù)維持此溫度攪拌0. 5 1 h，后于室溫下繼續(xù)反應12 h以上，反應完畢，將上述溶液減壓蒸餾，得黃色泡沫狀固體，加入2(T40ml 二氯甲烷溶解， 為備用溶液A ；2^4g谷氨酸二甲酯鹽酸鹽分散于10(T200ml 二氯甲烷中，并加入2 4ml三乙胺， 在_5飛。C下滴入上述備用溶液A，控制速度使其在25 35min內滴完，滴畢后維持此溫度并 攪拌0. 5 lh，后于室溫反應6 12h，依次用稀鹽酸、蒸餾水、飽和氯化鈉溶液洗滌有機層，有 機層加入無水硫酸鈉除水2飛h，濾液于4(T50°C下減壓后烘干至恒重，得到粗品淺黃色固 體，淺黃色固體用硅膠柱層析純化，得到白色粉末狀固體而；，1.纊3.8g天門冬氨酸二甲酯鹽酸鹽分散于10(T200ml 二氯甲烷中，并加入2 4ml三乙 胺，在-5飛。C下滴入上述備用溶液，控制速度使其在25 35min內滴完，滴畢后維持此溫度 并攪拌0. 5 lh，后于室溫反應6 12h，依次用稀鹽酸、蒸餾水、飽和氯化鈉溶液洗滌有機層， 有機層加入無水硫酸鈉除水2飛h，濾液于4(T50°C下減壓后烘干至恒重，得到粗品淺黃色 固體，淺黃色固體用硅膠柱層析純化，得到白色粉末狀固體劃；c. 2. 4 4. 8g 化合物 Ja 溶于 16(T320mL 甲醇 / 水溶液(V/V=15 1)中，在 10^30°CT 攪拌進行堿水解反應6、h，反應完畢，在4(T50°C下減壓蒸除甲醇，余物加入15(T300ml蒸 餾水，滴加稀鹽酸調節(jié)體系PH為;Γ4，析出大量白色晶體，抽濾收集晶體，并用蒸餾水洗滌 至洗滌液呈中性，濾餅減壓干燥，得白色晶體辦；，2.3 4. 7g化合物勱溶于16(T320mL甲醇/水溶液(V/V=15:1)中，在1(T3(TC下攪拌 進行堿水解反應6、h，反應完畢，4(T50°C減壓蒸除甲醇，殘余物加入15(T300ml蒸餾水，滴 加稀鹽酸調節(jié)體系PH為;Γ4，析出大量白色晶體，抽濾收集晶體，并用蒸餾水洗滌至洗滌液 呈中性，濾餅減壓干燥，得白色晶體辦；d. 1.2 2.48化合物辦溶于10(T200mL丙酮中，加入1.壙2. 8g碳酸鉀粉末，后加入溴代甲烷0. 6^1. 2mL于1(T3(TC反應24h以上，反應完畢，減壓蒸除溶劑，余物分散于 10(T200ml蒸餾水，滴加稀鹽酸調節(jié)體系pH為;Γ4，用20(T400ml乙酸乙酯萃取，有機相用 蒸餾水充分洗滌后，加入無水硫酸鈉除水2飛h，濾液濃縮得到的粗產品經快速柱層析純化， 得到化合物5a，為白色粉末固體；·1. Γ2. 4g化合物辦溶于10(T200mL丙酮中，加入1. 4 2. 8g碳酸鉀粉末，后加入溴代 甲烷0. 6^1. 2mL于1(T3(TC反應24h以上，反應完畢，減壓蒸除溶劑，余物分散于10(T200ml 蒸餾水，滴加稀鹽酸調節(jié)體系PH為；Γ4，用20(T400ml乙酸乙酯萃取，有機相用蒸餾水充分 洗滌后，加入無水硫酸鈉除水2飛h，濾液濃縮得到的粗產品經快速柱層析純化，得到化合物 涵，為白色粉末固體；e. 2. 3g 6. 9g熊果酸分散于25(T750ml氯仿中，加入廣3g琥珀酸酐及0. θΓθ. 03g對 甲苯磺酸，在6(T70°C下反應24 36h，加入l(T30ml蒸餾水繼續(xù)回流0. 5 lh，冷卻至室溫，依 次用蒸餾水、飽和氯化鈉溶液洗滌，所得有機溶液加入無水硫酸鈉除水2飛h后過濾，濾液 于4(T6(TC下減壓后烘干至恒重，所得粗產品為6 ；·1. lg^4. 4g化合物6用二氯甲烷完全溶解，在_5飛。C條件下滴入2飛ml草酰氯，控制滴 入速度使其在25 35min內滴完，滴加完畢后繼續(xù)維持此溫度下攪拌·0. 5 1 h，后于室溫下 繼續(xù)反應24 h以上，反應完畢，將上述溶液減壓蒸餾，得黃色泡沫狀固體，加入l(T40ml 二 氯甲烷溶解，為備用溶液B;·1.5飛g谷氨酸二甲酯鹽酸鹽分散于10(T200ml 二氯甲烷中，并加入:T6ml三乙胺， 在-5飛。C下滴入上述備用溶液B，控制滴入速度使其在25 35min內滴完，滴畢后維持此溫 度并攪拌0. 5 lh，后于室溫反應6 12h，依次用稀鹽酸、蒸餾水、飽和氯化鈉溶液洗滌有機 層，有機層加入無水硫酸鈉除水2飛h，濾液于4(T50°C下減壓后烘干至恒重，得到粗品淺黃 色固體，淺黃色固體用硅膠柱層析純化，得白色粉末狀固體& ；·1. 5^5. 9g天門冬氨酸二甲酯鹽酸鹽分散于10(T200ml 二氯甲烷中，并加入3飛ml三乙 胺，在-5飛。C下滴入上述備用溶液，控制滴入速度使其在25 35min內滴完，滴畢后維持此 溫度并攪拌0. 5 lh，后于室溫反應6 12h，依次用稀鹽酸、蒸餾水、飽和氯化鈉溶液洗滌有 機層，有機層加入無水硫酸鈉除水2飛h，濾液于4(T50°C下減壓后烘干至恒重，得到粗品淺 黃色固體，淺黃色固體用硅膠柱層析純化，得白色粉末狀固體湯。
5.權利要求3、4中所述的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物的制備方法，其特征 在于進行堿水解時所用的堿為氫氧化鉀或氫氧化鈉固體，用量為化合物而和化合物劃的 物質的量的10 20倍。
6.權利要求1所述的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物，其特征在于具有抗腫瘤 活性，可用于治療腫瘤疾病藥物的制備。
全文摘要
本發(fā)明以熊果酸為母體化合物，通過與酸性氨基酸接合，合成一系列具抗癌活性的經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物。體外藥理試驗表明，經酸性氨基酸化學修飾的熊果酸衍生物對人肝癌HepG2、人結腸癌HT-29、人胃癌AGS及人神經母細胞瘤SH-SY5Y具有明顯的體外抑制能力。
文檔編號A61P35/00GK101928321SQ20101011590
公開日2010年12月29日 申請日期2010年3月2日 優(yōu)先權日2010年3月2日
發(fā)明者孟春, 白鍇凱, 石賢愛, 郭養(yǎng)浩, 陳芬玲 申請人:福州大學