專利名稱：IgE CH3肽疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及提供新穎免疫原，其包含用于預(yù)防、治療或減輕IgE介導(dǎo)的病癥的優(yōu)選連接于免疫原性載體的抗原性IgE肽。本發(fā)明進(jìn)一步涉及制造這些藥物、免疫原性組合物及藥物組合物的方法及其于醫(yī)學(xué)中的用途。
背景技術(shù)：
在過(guò)去幾十年間，過(guò)敏性疾病已增加至幾乎流行的程度且估計(jì)顯示許多西方國(guó)家的總?cè)丝诘?0-30%受到影響。IgE在引發(fā)過(guò)敏性反應(yīng)中的關(guān)鍵作用得到充分文獻(xiàn)證明。IgE自B淋巴細(xì)胞釋放后結(jié)合于肥大細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞上存在的高親和力IgE受體 (FceRI)。隨后特異性過(guò)敏原與這些細(xì)胞上的相鄰IgE分子交聯(lián)，接著導(dǎo)致其活化，使得釋放多種促炎介質(zhì)(例如組胺、白三烯、前列腺素)以及關(guān)鍵細(xì)胞因子及趨化因子。因此，在急性局部反應(yīng)之后募集及活化其它炎癥細(xì)胞(例如嗜酸性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞)，從而擴(kuò)大過(guò)敏性級(jí)聯(lián)反應(yīng)。樹突狀細(xì)胞，例如存在于過(guò)敏性發(fā)炎部位(例如肺)的那些細(xì)胞亦可表達(dá)FceRl，且可使用此受體來(lái)選擇性及有效地占據(jù)與IgE形成的免疫復(fù)合物中存在的過(guò)敏原并選擇性地加工這些過(guò)敏原以呈遞至過(guò)敏原特異性T細(xì)胞，由此提供持續(xù)性T細(xì)胞活化及病理性炎癥應(yīng)答的機(jī)制。大部分當(dāng)前治療方案的目的在于緩解癥狀而非治療病因且主要基于使用抗組胺、 抗白三烯、色甘酸鹽、激動(dòng)劑及基于普通消炎化合物(諸如皮質(zhì)類固醇)。盡管一些受影響患者用這些藥物使其疾病處于相對(duì)良好控制下，但其施用頻率(通常每日一次或甚至每日若干次)通常導(dǎo)致不良患者順應(yīng)性及隨后疾病惡化。另外，在諸如重度哮喘及重度異位性皮膚炎的一些情況下，現(xiàn)有治療不足以控制疾病。最近，單克隆抗體(奧馬珠單抗(omalizumab)，亦稱為Ε25，以商品名稱Xolair 銷售；I^resta等人J Immunol. 1993 Sep 1 ；151 (5) 2623-320 )獲得全世界若干機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)， 其主要用于治療重度哮喘及鼻炎。盡管顯示針對(duì)重度哮喘的功效，但此抗體仍具有一些缺點(diǎn)。第一，此為人化鼠單克隆抗體，因此并不完全排除人類患者的免疫反應(yīng)，由此可能產(chǎn)生一些安全性問(wèn)題。第二，用于治療重度哮喘的奧馬珠單抗的劑量基于體重與循環(huán)游離IgE 的含量。不推薦體重及循環(huán)游離IgE偏離特定范圍的患者使用此治療。那些可治療的患者可能需要接受多達(dá)三次皮下注射，每?jī)芍芤淮?。此?yán)重影響了治療成本(估計(jì)每位患者的治療成本在每年US$ 15，000-44，000范圍內(nèi))以及患者的生活質(zhì)量，使得難以用作治療過(guò)敏的普通策略。為克服高成本及頻繁施用的問(wèn)題，替代方法為藉由疫苗接種來(lái)觸發(fā)我們自身免疫系統(tǒng)產(chǎn)生治療抗體。在其研究期間，過(guò)敏領(lǐng)域的先前工作者已遇到許多在設(shè)計(jì)新抗過(guò)敏治療時(shí)必須考慮的考慮因素及問(wèn)題。最危險(xiǎn)問(wèn)題之一圍繞IgE交聯(lián)參與組胺釋放信號(hào)。最通常情況為， 在主動(dòng)疫苗接種期間，抗IgE抗體的產(chǎn)生能夠藉由在過(guò)敏原不存在下使相鄰IgE-受體復(fù)合物交聯(lián)而觸發(fā)自身組胺釋放。此現(xiàn)象被稱為過(guò)敏原性(anaphylactogenicity)。實(shí)際上，許多通常用于IgE檢測(cè)的市售抗IgE單克隆抗體具有過(guò)敏原性，并因此無(wú)效，若向患者施用， 則可能會(huì)有危險(xiǎn)。因此，為了安全且有效，被動(dòng)施用或疫苗誘導(dǎo)的抗體必須結(jié)合在IgE中能夠抑制IgE活性而自身不具過(guò)敏性的區(qū)域內(nèi)。人類IgE的與IgE高親和力受體FceRI α亞單位相互作用的恒定域(constant domain) CH3-CH4 的結(jié)構(gòu)已解出(Wurzburg BA 等人 Q000) Immunity 13(3)375-85 ；Garman SC等人，(2000) Nature 20 ；406 (6793) :259-66)。先前工作亦已鑒別出許多IgE肽或衍生的肽或模擬表位(mimotope)，其被視為適用于誘導(dǎo)非過(guò)敏原性抗IgE抗體(W0 1993/005810 ； WO 99/67293 ；WO 2004/058799、WO 9731948、WO 2000/25722、WO 05/075504、US 2002/0645525、US 2004/146504 及 US 2006/062782 ；WO 00/050461、WO 02/34288 及 WO 2003/092714 ；Chen 等人(2008) J. Immunologic. Meth. 333 :10-23 ；Hellman Expert Rev. Vaccines 7(2) 193-208 (2008)) 0此類IgE域或肽通常連接于載體以增加其免疫原性，以便破壞個(gè)體對(duì)IgE的自身耐受性。因此，需要提供一種組合物，諸如與免疫原性載體偶聯(lián)(couple)的抗原性IgE肽或其若干組合，且任選與一或多種佐劑一起施用，能夠誘導(dǎo)個(gè)體的有效非過(guò)敏原性抗IgE 抗體，能夠顯著減少循環(huán)游離IgE的含量。效能增加通常將產(chǎn)生以下益處達(dá)成臨床益處所需的劑量更低、例如用于皮下或肌肉內(nèi)施用所需的注射體積更低(例如與單克隆抗體治療相比)、治療成本更低、治療成功的可能性增加、治療方案中的施用頻率降低，由此使得能夠治療更廣泛的患者群體(包括具有更高體重和/或高循環(huán)IgE含量的患者)且改善患者的生活質(zhì)量。發(fā)明概述本發(fā)明涉及一種免疫原，其包含優(yōu)選連接于免疫原性載體的抗原性IgE肽。所述 IgE抗原性肽包含選自由SEQ ID No :1至430組成的組、優(yōu)選選自由SEQ ID NO :1至153 及220至430組成的組、甚至更優(yōu)選選自由SEQ ID NO :220至430組成的組的氨基酸序列。 所述抗原性IgE肽可經(jīng)修飾用于綴合目的，優(yōu)選藉由添加半胱氨酸或賴氨酸殘基和/或添加接頭(諸如GC/GGC接頭)來(lái)達(dá)成。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述抗原性IgE肽是構(gòu)象受限制的(constrain)，優(yōu)選是受簡(jiǎn)單限制的。所述免疫原性載體為異源蛋白質(zhì)，優(yōu)選為病毒樣顆粒(virus-like particle，VLP)，更優(yōu)選為HBcAg、HBsAg或Q β VLP。本發(fā)明亦關(guān)于產(chǎn)生該優(yōu)選連接于免疫原性載體的抗原性IgE肽的方法。本發(fā)明亦關(guān)于包含該優(yōu)選連接于免疫原性載體的抗原性IgE肽的免疫原性組合物，優(yōu)選任選包含優(yōu)選選自以下的佐劑的免疫原性組合物明礬；含有CpG的寡核苷酸，優(yōu)選為CpG7909及CpG24555 ；及基于皂苷的佐劑，優(yōu)選為Iscomatrix。優(yōu)選地，所述含有CpG 的核酸包含一或多個(gè)經(jīng)修飾的鍵，優(yōu)選為一或多個(gè)硫代磷酸酯鍵，甚至更優(yōu)選地，寡核苷酸的所有核苷酸間鍵均為硫代磷酸酯鍵。本發(fā)明的另一方面涉及包含本發(fā)明的抗原性IgE肽或其免疫原性組合物的藥物組合物，以及此類組合物的醫(yī)學(xué)用途。具體地，本發(fā)明涉及本發(fā)明的抗原性IgE肽或其免疫原性或藥物組合物，其用作藥物，優(yōu)選用于治療、減輕或預(yù)防IgE介導(dǎo)的病癥。本發(fā)明亦關(guān)于誘導(dǎo)個(gè)體對(duì)自身IgE的免疫應(yīng)答的方法及治療、減輕或預(yù)防IgE介導(dǎo)的病癥的方法，其包含施用有效量的所述抗原性IgE肽或其免疫原性或藥物組合物。


圖1 人類IgE的CH3-CH4區(qū)域與其高親和力受體FceRI之間的相互作用的結(jié)構(gòu)顯示。顯示4個(gè)環(huán)(藍(lán)色、紫色、橙色及黃色)，其分別對(duì)應(yīng)于SEQ ID No :165、312、1及220 的4種肽。圖2 用于誘導(dǎo)針對(duì)人類IgE的結(jié)構(gòu)確定的表位的抗體應(yīng)答的肽形式的圖解。發(fā)明詳述定義及通用技術(shù)除非另有定義，否則與本發(fā)明關(guān)聯(lián)使用的科學(xué)及技術(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所了解的含義。通常，本文所述的與細(xì)胞及組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)及蛋白質(zhì)與核酸化學(xué)及雜交關(guān)聯(lián)使用的命名及其技術(shù)是本領(lǐng)域公知和常用的。除非另有指示，否則本發(fā)明的方法及技術(shù)一般根據(jù)本領(lǐng)域公知的和常規(guī)的方法來(lái)進(jìn)行且如整個(gè)本說(shuō)明書中所引用及論述的各種一般及更特定的參考文獻(xiàn)中所述來(lái)進(jìn)行。例如參見 Sambrook J.及 Russell D. Molecular Cloning :A Laboratory Manual，第 3 片反， Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N. Y. (2000) ；Ausubel 等人，Short Protocols in Molecular Biology :A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, John & Sons, Inc. (2002) ；Harlow及Lane Using Antibodies :A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, N. Y. (1998)；及Coligan 等人，Short Protocols in Protein Science, Wiley, John & Sons，he. 0003)。根據(jù)制造商的說(shuō)明書進(jìn)行酶促反應(yīng)及純化技術(shù)，通常如本領(lǐng)域或如本文所述完成。本文所述與分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)及醫(yī)學(xué)及藥物化學(xué)關(guān)聯(lián)使用的命名及實(shí)驗(yàn)步驟及技術(shù)是本領(lǐng)域公知的和常用的。在本說(shuō)明書及權(quán)利要求中，詞語(yǔ)“包含”應(yīng)理解為意指包括所述整數(shù)或整數(shù)的組， 而不排除任何其它整數(shù)或整數(shù)的組。術(shù)語(yǔ)“包含”、“由...組成”及“基本上由...組成”意思可互換。除非另有指示，否則當(dāng)本案使用術(shù)語(yǔ)“一”、“一個(gè)”或“一種”時(shí)，其意謂“至少一個(gè)(種)”或“一或多個(gè)(種)”。此外，除非另外要求，否則單數(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括復(fù)數(shù)，且除非內(nèi)容另外明確規(guī)定，否則復(fù)數(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括單數(shù)。本文中所引用的所有出版物、專利及專利申請(qǐng)(無(wú)論上文或下文)均以全文引用的方式并入本文中。一般定義術(shù)語(yǔ)“肽”或“多肽”指氨基酸的聚合物而不論該聚合物的長(zhǎng)度；因此，肽、寡肽及蛋白質(zhì)包括在多肽定義中。此術(shù)語(yǔ)亦不指定或排除多肽的表達(dá)后修飾，例如包括糖基、乙?；?、磷酸基、脂質(zhì)基團(tuán)等等共價(jià)連接的多肽明確地涵蓋于術(shù)語(yǔ)多肽。該定義亦包括含有一或多種氨基酸類似物(包括例如非天然存在的氨基酸、僅天然存在于不相關(guān)生物系統(tǒng)中的氨基酸、經(jīng)修飾的哺乳動(dòng)物系統(tǒng)的氨基酸等)的多肽，具有經(jīng)取代的鍵以及本領(lǐng)域中已知的其它修飾(天然存在與非天然存在)的多肽。術(shù)語(yǔ)“經(jīng)分離的蛋白質(zhì)”、“經(jīng)分離的多肽”或“經(jīng)分離的肽”為根據(jù)其衍生起源或來(lái)源如下的蛋白質(zhì)、多肽或肽(1)不與其天然狀態(tài)下伴隨的天然相關(guān)聯(lián)(associate)的組份相關(guān)聯(lián)；( 不含相同物種的其它蛋白質(zhì)；C3)由不同物種的細(xì)胞表達(dá)；或(4)不存在于自然界中。因此，以化學(xué)方式合成或在不同于其天然起源的細(xì)胞的細(xì)胞系統(tǒng)中合成的肽將與其天然相關(guān)聯(lián)組份“分離”。蛋白質(zhì)亦可藉由使用本領(lǐng)域中熟知的蛋白質(zhì)純化技術(shù)分離而實(shí)質(zhì)上不含天然相關(guān)聯(lián)組份。如本文中所使用，當(dāng)關(guān)于分子(例如肽、多肽或蛋白質(zhì))使用術(shù)語(yǔ)“經(jīng)純化”時(shí)，其意謂該經(jīng)純化的分子的濃度已相對(duì)于其天然環(huán)境或其產(chǎn)生、發(fā)現(xiàn)或合成環(huán)境中與其相關(guān)聯(lián)的分子增加。天然相關(guān)聯(lián)的分子包括蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)及糖類，但一般不包括添加用于維持經(jīng)純化分子的完整性或有助于純化的水、緩沖液及試劑。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)化合物按重量的至少20 %、至少30 %、至少40 %、至少50 % 或至少60%不含與其天然相關(guān)聯(lián)或在制造期間與其相關(guān)聯(lián)的有機(jī)分子時(shí)，該化合物為實(shí)質(zhì)上純或經(jīng)純化。在一些實(shí)施方案中，制備物為按重量的至少70 %、至少75 %、至少90 %、至少95%或至少99%的所需化合物(相對(duì)于其污染物)。實(shí)質(zhì)上純或經(jīng)純化的化合物可例如藉由自天然來(lái)源(例如細(xì)菌)提取，藉由化學(xué)合成化合物，或藉由純化及化學(xué)修飾的組合來(lái)獲得。實(shí)質(zhì)上純或經(jīng)純化的化合物亦可藉由例如富集具有結(jié)合所需抗體的化合物的樣品來(lái)獲得。純度可藉由任何適當(dāng)方法來(lái)測(cè)量，例如層析法、質(zhì)譜法、高效液相層析分析等。如本文在IgE肽或多肽的情形下所使用，當(dāng)IgE多肽融合蛋白質(zhì)包含IgE肽或多肽及“異源”多肽時(shí)，術(shù)語(yǔ)“異源”指不為IgE肽或多肽的多肽，例如在自然界中通常不與IgE 肽或多肽相關(guān)聯(lián)的多肽。舉例而言，異源多肽與IgE肽或多肽不具有顯著氨基酸序列相同性，例如該異源多肽與IgE肽或多肽具有小于約50%、小于約40%、小于約30%或小于約 20%的氨基酸序列相同性。如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“IgE介導(dǎo)的病癥”或“IgE相關(guān)病癥”意謂特征為免疫球蛋白質(zhì)IgE的過(guò)量產(chǎn)生和/或?qū)γ庖咔虻鞍踪|(zhì)IgE的過(guò)敏反應(yīng)的病狀或疾病。具體而言，其應(yīng)解釋為包括與過(guò)敏性超敏反應(yīng)(anaphylactic hypersensitivity)及異位性過(guò)敏相關(guān)的病狀，包括例如哮喘、過(guò)敏性哮喘、過(guò)敏性鼻炎及結(jié)膜炎(枯草熱)、濕疹、蕁麻疹、異位性皮膚炎及食物過(guò)敏(包括花生過(guò)敏)。由例如蜂螫傷、蛇咬傷、食物或藥物引起的過(guò)敏性休克的嚴(yán)重生理學(xué)病狀亦涵蓋于此術(shù)語(yǔ)的范疇內(nèi)。其它IgE介導(dǎo)的病癥包括重度過(guò)敏、接觸性皮膚炎、過(guò)敏性胃腸病、過(guò)敏性肺曲菌病、過(guò)敏性紫癜、濕疹、高IgE(喬布氏(Job’ s))綜合癥、過(guò)敏性超敏反應(yīng)、IgE骨髓瘤、炎癥性腸病(例如克羅恩氏病(Crohn’ s disease)、潰瘍性結(jié)腸炎、未定型結(jié)腸炎及傳染性結(jié)腸炎)、蕁麻疹及牛皮癬。本發(fā)明的抗原性IgE肽本發(fā)明涉及IgE肽及其衍生的肽，其已鑒別為能夠形成參與CH3-CH4區(qū)與其高親和力受體FceRI的相互作用的環(huán)的IgE CH3結(jié)構(gòu)域部分(參看圖1)。展示此類IgE肽具有免疫原性且為非過(guò)敏原性的。此類抗原性IgE肽可單獨(dú)使用或組合使用，優(yōu)選為與免疫原性載體綴合使用，以誘導(dǎo)個(gè)體的自身抗IgE抗體以便治療、預(yù)防或改善IgE相關(guān)病癥。詳言之，本發(fā)明涉及一種免疫原，其由優(yōu)選連接于免疫原性載體的抗原性IgE肽組成、基本上由該抗原性IgE肽組成或包含該抗原性IgE肽。在一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :1至430及其功能活性變體、優(yōu)選選自SEQ ID No :1至430的氨基酸序列組成、基本上由該氨基酸序列組成或包含該氨基酸序列。在另一實(shí)施方案中，該抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :1至153及其功能活性變體、優(yōu)選選自SEQ ID No :1至153的氨基酸序列組成、基本上由該氨基酸序列組成或包含該氨基酸序列。在另一實(shí)施方案中，該抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :1 至219 及其功能活性變體、優(yōu)選選自SEQ ID No :巧4至219的氨基酸序列組成、基本上由該氨基酸序列組成或包含該氨基酸序列。在又一實(shí)施方案中，該抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :220 至310及其功能活性變體、優(yōu)選選自SEQ ID No :220至310的氨基酸序列組成、基本上由該氨基酸序列組成或包含該氨基酸序列。在又一實(shí)施方案中，該抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :311至430及其功能活性變體、優(yōu)選選自SEQ ID No :311至430的氨基酸序列組成、基本上由該氨基酸序列組成或包含該氨基酸序列。在本發(fā)明的含義中，術(shù)語(yǔ)“抗原性IgE肽”包括所有IgE CH3衍生的肽，優(yōu)選來(lái)自哺乳動(dòng)物物種，更優(yōu)選來(lái)自人類，以及其展現(xiàn)“抗原性IgE肽生物學(xué)活性”的變體、類似物、直系同源物、同系物及衍生物以及其片段。優(yōu)選地，術(shù)語(yǔ)“抗原性IgE肽”指包含選自SEQ ID No :1至430的氨基酸序列、由該氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成的肽，以及其展現(xiàn)基本上相同生物活性的變體、同系物及衍生物。更優(yōu)選地，術(shù)語(yǔ)“抗原性IgE肽”指包含選自SEQ ID 1至430的氨基酸序列、由該氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成的肽，更優(yōu)選為包含選自SEQ ID No :1至153及220至430的氨基酸序列、由該氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成的肽，甚至更優(yōu)選為包含選自SEQ ID No :220至430 的氨基酸序列、由該氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成的肽。在一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成:SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、 45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、 70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、 95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、 115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、 134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、 153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、 172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、 191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、 210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、 229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、 248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、 267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、 286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、 305、306、307、308、309、310、311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、 324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、341、342、 343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、 362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、 400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、 419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429 及 430。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成:SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、 43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、 68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、 93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、 114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、 133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、 152及153。優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成:SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、22、23、對(duì)、25、 26、27、28、29、30、31、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、49、50、51、52、53、54、 55、56、57、58、59、60、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、76、77、78、79、80、81、82、83、 84、85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、99、100、101、102、103、104、105、106、109、110、111、 112、113、114、115、118、119、120、121、122、123、126、127、128、129、130、133、134、135、136、 139、140、141、144、145及148。更優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成:SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、49、50、51、52、53、54、55、56、 57、63、64、65、66、67、68、69、70、76、77、78、79、80、81、82、88、89、90、91、92、93、99、100、101、 102、103、109、110、111、112、118、119、120、126、127、133 及 139。甚至更優(yōu)選地，該抗原性 IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No:l、2、3、4、 5、6、7、8、9、18、19、20、21、22、23、24、25、34、35、36、37、38、39、40、49、50、51、52、53、54、63、 64、65、66、67、76、77、78、79、88、89、90、99、100、101 及 109。甚至更優(yōu)選地，該抗原性 IgE 肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、 18、19、20、21、22、34、35、36、37、49、50、51、63、64 及 76。甚至更優(yōu)選地，該抗原性 IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No :1、2、3、18、19及34。 最優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由SEQ ID No :1或18的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成:SEQ ID No :154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、 165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、 184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、 203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218 及 219。優(yōu)選地， 該抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No 154、155、156、157、158、159、160、161、162、165、166、167、168、169、170、171、172、175、176、 177、178、179、180、181、184、185、186、187、188、189、192、193、194、195、196、199、200、201、 202、205、206、207、210、211、214及217。更優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成:SEQ ID No :154、155、156、157、158、159、165、166、 167、168、169、175、176、177、178、184、185、186、192、193、199 及 200。甚至更優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No :154, 155、156、165、166及175。最優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由SEQ ID No :巧4或165的氨基酸序
列組成或基本上由該氨基酸序列組成。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、 231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、 250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、 269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、 288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、 307、308、309及310。優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、233、234、 235、236、237、238、239、240、241、242、245、246、247、248、249、250、251、252、253、256、257、 258、259、260、261、262、263、266、267、268、269、270、271、272、275、276、277、278、279、280、 283、284、285、286、287、290、291、292、293、296、297、298、301、302 及 305。更優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No:220、 221、222、223、224、225、226、227、233、234、235、236、237、238、239、245、246、247、248、249、 250、256、257、258、259、260、266、267、268、269、275、276、277、283、284 及 290。甚至更優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No :220、221、222、223、224、233、234、235、236、245、246、247、256、257 及 266。甚至更優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :220、221、222、233、234及245的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成。最優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由SEQ ID No :220或233的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、 322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、 341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、 360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、 379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、 398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、 417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429 及 430。優(yōu)選地，該抗原性 IgE 肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No :311、312、313、 314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、326、327、328、329、330、331、332、333、334、 335、336、337、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、353、354、355、356、357、 358、359、360、361、362、365、366、367、368、369、370、371、372、373、376、377、378、379、380、 381、382、383、386、387、388、389、390、391、392、395、396、397、398、399、400、403、404、405、 406、407、410、411、412、413、416、417、418、421、422 及 425。更優(yōu)選地，該抗原性 IgE 肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、326、327、328、329、330、331、332、333、334、340、341、342、343、 344、345、346、347、353、354、355、356、357、358、359、365、366、367、368、369、370、376、377、 378、379、380、386、387、388、389、395、396、397、403、404 及 410。甚至更優(yōu)選地，該抗原性 IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成SEQ ID No :311,312, 313、314、315、316、317、326、327、328、329、330、331、340、341、342、343、344、353、354、355、 356、365、366、367、376、377及386。甚至更優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :311、 312、313、314、326、327、328、；340、341及353的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成。甚至更優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :311、312及326的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成。最優(yōu)選地，該抗原性IgE肽由SEQ ID No :311或312的氨基酸序列組成或基本上由該氨基酸序列組成。當(dāng)本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“抗原性IgE肽生物學(xué)活性”指本發(fā)明的抗原性IgE肽誘導(dǎo)患者的具有拮抗譜(antagonistic profile)的自身抗IgE抗體的能力，此類自身抗體能夠減少循環(huán)游離IgE的含量，同時(shí)不會(huì)引起任何顯著IgE介導(dǎo)的炎癥介質(zhì)釋放且同時(shí)實(shí)質(zhì)上不會(huì)與結(jié)合其高親和力受體的IgE結(jié)合。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將顯而易見，何種技術(shù)可用于證實(shí)特定構(gòu)建體是否屬于本發(fā)明的范疇內(nèi)。此類技術(shù)包括(但不限于)本申請(qǐng)案的實(shí)施例部分中所述的技術(shù)以及以下技術(shù)。可測(cè)定假定肽以確定構(gòu)建體的免疫原性，因?yàn)橛杉俣囊鸬目寡迮c天然IgE分子交叉反應(yīng)，且亦具有阻斷過(guò)敏性介質(zhì)自過(guò)敏性效應(yīng)細(xì)胞釋放的功能。這些應(yīng)答的特異性可藉由IgE的下拉(pulldown)可被定量的功能性測(cè)定和/或可藉由抑制表達(dá)IgE受體的細(xì)胞的去顆粒(degranulation)來(lái)證實(shí)，或藉由競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)(通過(guò)阻斷抗血清對(duì)肽自身或天然IgE的活性，和/或阻斷已知結(jié)合IgE中的表位的特異性單克隆抗體的活性)來(lái)證實(shí)。確定結(jié)合于IgE-FcRI的技術(shù)亦為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。在一實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原性IgE肽具有使其模擬選自存在天然表位的整個(gè) IgE域的區(qū)域的大小。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原性IgE肽的長(zhǎng)度小于100個(gè)氨基酸，優(yōu)選短于75個(gè)氨基酸，更優(yōu)選小于50個(gè)氨基酸，甚至更優(yōu)選小于40個(gè)氨基酸。本發(fā)明的抗原性 IgE 肽的長(zhǎng)度通常為 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、 23、24、25、26、27、28、四或30個(gè)氨基酸，優(yōu)選為4至20個(gè)氨基酸，例如6至12個(gè)或6至9 個(gè)氨基酸。在序列表中提供本發(fā)明的抗原性IgE肽的具體實(shí)例且其包括長(zhǎng)度在4至20個(gè)氨基酸范圍內(nèi)的肽。本發(fā)明的抗原性肽包括衍生自人類IgE CH3的一部分的氨基酸序列，人類CH3的該衍生部分對(duì)應(yīng)于天然存在的IgE的氨基酸序列或?qū)?yīng)于變體IgE，亦即少量氨基酸已經(jīng)被取代、添加或缺失但保留基本上相同免疫性質(zhì)的天然存在的IgE的氨基酸序列。另外，該衍生的IgE CH3部分可進(jìn)一步由氨基酸修飾，尤其在N及C末端，使得抗原性IgE肽的構(gòu)象受限制和/或使得在進(jìn)行適當(dāng)化學(xué)作用后抗原性IgE肽與免疫原性載體偶聯(lián)。本發(fā)明的抗原性IgE肽涵蓋衍生自其氨基酸被缺失、插入或經(jīng)取代但基本上不降低其免疫性質(zhì)的IgE CH3的氨基酸序列的功能活性變體肽，亦即此類功能活性變體肽保留實(shí)質(zhì)上抗原性IgE肽生物活性。通常，此類功能變體肽具有與選自SEQ ID No :1至430的氨基酸序列、更優(yōu)選選自SEQ ID No:l至153及220至430的氨基酸序列、甚至更優(yōu)選選自SEQ ID No :220至430的氨基酸序列同源、優(yōu)選高度同源的氨基酸序列。在一實(shí)施方案中，此類功能活性變體肽與選自SEQ ID No :1至430的氨基酸序列、 更優(yōu)選選自SEQ ID No 1至153及220至430的氨基酸序列、甚至更優(yōu)選選自SEQ ID No 220至430的氨基酸序列展現(xiàn)至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%的相同性。多肽的序列相似性(亦稱為序列相同性)通常使用序列分析軟件來(lái)量測(cè)。蛋白質(zhì)分析軟件使用歸因于各種取代、缺失及其它修飾(包括保守性氨基酸取代)的相似性的度量來(lái)匹配相似的序列。舉例而言，GCG含有諸如“Gap”及“Bestfit”的程序，其在默認(rèn)參數(shù)下用于測(cè)定密切相關(guān)多肽(諸如來(lái)自不同生物物種的同源多肽)之間或野生型蛋白質(zhì)與其突變蛋白質(zhì)之間的序列同源性或序列相同性。例如參見6. 1版GCG。多肽序列亦可使用 FASTA (6. 1版GCG中的程序)，使用默認(rèn)或推薦參數(shù)來(lái)比較。FASTA (例如FASTA2及FASTA3) 提供查詢及搜索序列之間的最優(yōu)選重疊區(qū)域的比對(duì)及序列相同性百分比(Pearson， Methods Enzymol. 183 :63-98(1990) ；Pearson, Methods Mol. Biol. 132 :185-219(2000))。 當(dāng)將本發(fā)明的序列與含有大量來(lái)自不同生物的序列的數(shù)據(jù)庫(kù)作比較時(shí)，替代算法為使用默認(rèn)參數(shù)的計(jì)算機(jī)程序BLAST，尤其為blastp或tblastn。例如參見Altschul等人，J. Mol. Biol. 215 :403-410(1990) ；Altschul 等人，Nucleic Acids Res. 25 :3389-402 (1997)。功能活性變體包含天然存在的功能活性變體(諸如等位基因變體及物種變體)及可藉由例如誘變技術(shù)或藉由直接合成而產(chǎn)生的非天然存在的功能活性變體。功能活性變體與SEQ ID No :1至430、更優(yōu)選SEQ ID No :1至153及220至430、 甚至更優(yōu)選SEQ ID No :220至430所示的任一肽的不同之處為約例如1、2、3、4、5、6、7、8、9 或10個(gè)氨基酸殘基，但仍保留抗原性IgE生物活性。當(dāng)此比較需要比對(duì)時(shí)，比對(duì)序列的最大同源性。變異位點(diǎn)可出現(xiàn)于肽的任何地方，只要生物活性實(shí)質(zhì)上類似于SEQ ID No:l至 430中所示的肽，更優(yōu)選地實(shí)質(zhì)上類似于SEQ ID No :1至153及220至430中所示的肽，甚至更優(yōu)選地實(shí)質(zhì)上類似于SEQ ID No 220至430中所示的肽即可。關(guān)于如何產(chǎn)生表型沉默氨基酸取代的指導(dǎo)提供于Bowie等人，Science, 247 1306-1310(1990)中，該文獻(xiàn)教示存在兩種研究氨基酸序列對(duì)改變的容許度(tolerance) 的主要策略。第一種策略利用在進(jìn)化過(guò)程期間藉由自然選擇的氨基酸取代容許度。藉由比較不同物種的氨基酸序列，可鑒別物種間保守的氨基酸位置。這些保守的氨基酸可能對(duì)于蛋白質(zhì)功能很重要。相反，自然選擇所容許的取代所在的氨基酸位置表示對(duì)于蛋白質(zhì)功能不重要的位置。因此，可修飾容許氨基酸取代的位置，同時(shí)仍維持經(jīng)修飾肽的特異性免疫原性活性。第二種策略利用遺傳工程改造在克隆的基因的特定位置處引入氨基酸變化以鑒別對(duì)于蛋白質(zhì)功能重要的區(qū)域。舉例而言，可使用定點(diǎn)誘變或丙氨酸掃描誘變(Cunningham 等人，Science, 244 1081-1085 (1989))。接著可測(cè)試所得變體肽的特異性抗原性IgE生物學(xué)活性。根據(jù)Bowie等人，此兩種策略已揭露蛋白質(zhì)驚人地容許氨基酸取代。作者進(jìn)一步指出在蛋白質(zhì)中的某些氨基酸位置處可能容許何種氨基酸變化。舉例而言，大部分內(nèi)埋或內(nèi)部(在蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)內(nèi))氨基酸殘基需要非極性側(cè)鏈，而一般極少表面或外部側(cè)鏈的特征是保守的。將突變引入蛋白質(zhì)的氨基酸中的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。例如參見 Ausubel (編)，Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Inc. (1994) ；T. Maniatis, Ε. F. Fritsch 及 J. Sambrook, Molecular Cloning :A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)。亦可使用市售試劑盒(諸如“QuikChangeTM定點(diǎn)誘變?cè)噭┖小?Stratagene))或直接藉由肽合成來(lái)引入突變。藉由置換不顯著影響抗原性IgE肽的功能的氨基酸來(lái)產(chǎn)生該抗原性IgE肽的功能活性變體可由本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)完成。一類可在本發(fā)明的一種肽中進(jìn)行的氨基酸取代為保守性氨基酸取代?！氨Ｊ匦园被崛〈笔前被釟埢?jīng)另一具有化學(xué)性質(zhì)(例如電荷或疏水性)類似的側(cè)鏈R基團(tuán)的氨基酸殘基取代的氨基酸取代。一般而言，保守性氨基酸取代不會(huì)實(shí)質(zhì)上改變蛋白質(zhì)的功能性質(zhì)。在兩個(gè)或兩個(gè)以上氨基酸序列互不相同之處為保守性取代的情況下，可調(diào)高序列相同性或相似度百分比以校正該取代的保守性質(zhì)。進(jìn)行此調(diào)節(jié)的方式為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。例如參見 Pearson, Methods Mol. Biol. 243 :307-31 (1994)。具有化學(xué)性質(zhì)類似的側(cè)鏈的氨基酸組的實(shí)例包括1)脂肪族側(cè)鏈甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸及異亮氨酸；幻脂肪族羥基側(cè)鏈絲氨酸及蘇氨酸；幻含有酰胺的側(cè)鏈 天冬酰胺及谷氨酰胺；4)芳香族側(cè)鏈苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸力)堿性側(cè)鏈賴氨酸、 精氨酸及組氨酸；6)酸性側(cè)鏈天冬氨酸及谷氨酸；及7)含硫側(cè)鏈半胱氨酸及甲硫氨酸。 優(yōu)選保守性氨基酸取代組為纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、谷氨酸-天冬氨酸及天冬酰胺-谷氨酰胺?；蛘撸Ｊ匦灾脫Q是Gonnet等人，Science 256 1443-45 (199 中所揭示的 PAM250對(duì)數(shù)似然矩陣具有正值的任何改變。“中度保守性”置換為PAM250對(duì)數(shù)似然矩陣具有非負(fù)值的任何改變。功能活性變體肽亦可使用雜交技術(shù)來(lái)分離。簡(jiǎn)言之，使用與編碼所需肽、多肽或蛋白質(zhì)(例如SEQ ID No :1至430)的核酸序列的全部或一部分具有高同源性的DNA來(lái)制備功能活性肽。因此，本發(fā)明的抗原性IgE肽亦包括功能上等同于SEQ ID No :1至430的一或多種肽以及由與編碼SEQ ID No :1至430中的任一者的核酸或其互補(bǔ)序列雜交的核酸分子編碼的肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員可容易地使用易于得到的密碼子表來(lái)確定編碼本發(fā)明的肽的核酸序列。因此，本文中不提供這些核酸序列。編碼功能活性變體的肽、多肽或蛋白質(zhì)的核酸的雜交嚴(yán)格性為例如10%甲酰胺、 5 X SSPEU X登哈特溶液(Denhart，s solution)及IX鮭魚精DNA (低嚴(yán)格性條件)。更優(yōu)選條件為25%甲酰胺、5X SSPE、1 X登哈特溶液及IX鮭魚精DNA(中等嚴(yán)格性條件)， 且甚至更優(yōu)選條件為50%甲酰胺、5XSSPE、1X登哈特溶液及IX鮭魚精DNA(高嚴(yán)格性條件)。然而，除上述甲酰胺濃度外，若干種因素可影響雜交嚴(yán)格性，且本領(lǐng)域技術(shù)人員可適當(dāng)?shù)剡x擇這些因素以達(dá)到類似嚴(yán)格性。編碼功能活性變體的核酸分子亦可藉由基因擴(kuò)增方法來(lái)分離，諸如使用編碼所需肽、多肽或蛋白質(zhì)(例如SEQ ID No :1至430所示的任一肽)的核酸分子DNA的一部分作為探針的PCR。出于本發(fā)明的目的，應(yīng)認(rèn)為本發(fā)明的若干種抗原性IgE肽可組合使用?？深A(yù)想各種可能組合。舉例而言，可使用包含一種以上優(yōu)選選自SEQ ID No :1至430、更優(yōu)選選自SEQ ID No :1至153及220至430、甚至更優(yōu)選選自SEQ ID No :220至430的抗原性IgE肽的多肽，其中同一多肽分子上使用相同抗原性IgE肽的若干拷貝，或其中同一多肽分子上使用具有不同氨基酸序列的抗原性IgE肽；此類不同抗原性IgE肽或拷貝直接彼此融合或由適當(dāng)接頭隔開。如本文中所使用，術(shù)語(yǔ)“多聚化抗原性IgE(多)肽”是指兩種類型的組合，其中具有不同或相同氨基酸序列的抗原性IgE肽存在于單個(gè)多肽分子上。2至約20個(gè)相同和 /或不同抗原性IgE肽，優(yōu)選2、3、4、5、6或7個(gè)抗原性IgE肽，可因此存在于單個(gè)多聚化抗原性IgE多肽分子上。在本發(fā)明的一方面中，免疫原由多聚化抗原性IgE肽組成、基本上由該肽組成或包含該肽，該多聚化IgE肽由至少一個(gè)選自SEQ ID No :1至430及其功能活性變體、優(yōu)選選自SEQ ID No :1至430的氨基酸序列組成、基本上由該氨基酸序列組成或包含該氨基酸序列。在一實(shí)施方案中，該多聚化IgE肽包含含有選自SEQ ID No :1至153的氨基酸序列的第一抗原性IgE肽及含有選自SEQ ID No 154至219或SEQ ID No :220至310或SEQ ID No 311至430的氨基酸序列的第二抗原性IgE肽。在另一實(shí)施方案中，該多聚化IgE肽包含含有選自SEQ ID No 154至219的氨基酸序列的第一抗原性IgE肽及含有選自SEQ ID No :1至153或SEQ ID No :220至310或SEQ ID No :311至430的氨基酸序列的第二抗原性IgE肽。在又一實(shí)施方案中，該多聚化IgE肽包含含有選自SEQ ID No :220至310的氨基酸序列的第一抗原性IgE肽及含有選自SEQ ID No :1至153或SEQ ID Νο:1Μ至219或 SEQ ID No 311至430的氨基酸序列的第二抗原性IgE肽。在又一實(shí)施方案中，該多聚化 IgE肽包含含有選自SEQ ID No :311至430的氨基酸序列的第一抗原性IgE肽及含有選自 SEQ ID No :1 至 153 或 SEQ ID No :154 至 219 或 SEQ ID No :220 至 310 的氨基酸序列的第二抗原性IgE肽。在又一實(shí)施方案中，該多聚化IgE肽包含含有選自SEQ ID No :311至430 的氨基酸序列的第一抗原性IgE肽、含有選自SEQ ID No :220至310的氨基酸序列的第二抗原性IgE肽及含有選自SEQ ID No :巧4至219或SEQ ID NO :1至153的氨基酸序列的第三抗原性IgE肽。在本發(fā)明的一實(shí)施方案中，本發(fā)明的肽、多肽或蛋白質(zhì)是來(lái)源于天然來(lái)源且分離自諸如人類、靈長(zhǎng)類動(dòng)物、貓、狗、馬、小鼠或大鼠的哺乳動(dòng)物，優(yōu)選分離自人類來(lái)源。因此， 本發(fā)明的肽、多肽或蛋白質(zhì)可使用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)純化技術(shù)自細(xì)胞或組織來(lái)源分離?；蛘?，本發(fā)明的肽、多肽及蛋白質(zhì)可以化學(xué)合成或使用重組DNA技術(shù)產(chǎn)生。舉例而言，本發(fā)明的肽、多肽或蛋白質(zhì)可藉由本領(lǐng)域中熟知的固相程序來(lái)合成。合適的合成可藉由使用“ T-boc ”或“F-moc ”程序來(lái)執(zhí)行。環(huán)狀肽可藉由固相程序，使用熟知的 “F-moc”程序及聚酰胺樹脂，在完全自動(dòng)裝置中合成?；蛘?，本領(lǐng)域技術(shù)人員將知曉手動(dòng)執(zhí)行過(guò)程的必要實(shí)驗(yàn)步驟。用于固相合成的技術(shù)及程序描述于E. Atherton及R. C. Sheppard 的"Solid Phase Peptide Synthesis :A Practical Approach，，，由 Oxford University Press 的 IRL 出版(1989)及 D. Andreau 等人的"Methods in Molecular Biology，，，第 35 卷P印tide Synthesis Protocols (M. W. Pennington 及 B. Μ. Dunn 編)，第 7 章，第 91—171 頁(yè)中。或者，可使用本領(lǐng)域中熟知的技術(shù)將編碼本發(fā)明的肽、多肽或蛋白質(zhì)的多核苷酸引入可在合適的表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的表達(dá)載體中，隨后分離或純化所表達(dá)的所需肽、多肽或CN 102245198 A
說(shuō)明書
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蛋白質(zhì)。本領(lǐng)域可獲得各種細(xì)菌、酵母、植物、哺乳動(dòng)物及昆蟲表達(dá)系統(tǒng)且可使用任何此類表達(dá)系統(tǒng)。任選地，編碼本發(fā)明的肽、多肽或蛋白質(zhì)的多核苷酸可在無(wú)細(xì)胞翻譯系統(tǒng)中翻譯。本發(fā)明的抗原性IgE肽亦可包含由存在多個(gè)基因、選擇性轉(zhuǎn)錄事件、選擇性RNA拼接事件及選擇性翻譯與翻譯后事件所產(chǎn)生的那些肽。肽可在引起與該肽在天然細(xì)胞中表達(dá)時(shí)所存在的實(shí)質(zhì)上相同的翻譯后修飾的系統(tǒng)(例如培養(yǎng)細(xì)胞)中表達(dá)，或在引起在天然細(xì)胞中表達(dá)時(shí)所存在的翻譯后修飾(例如糖基化或裂解)的改變或省略的系統(tǒng)中表達(dá)。本發(fā)明的肽、多肽或蛋白質(zhì)(諸如抗原性IgE肽)可以融合蛋白質(zhì)形式產(chǎn)生，該融合蛋白質(zhì)含有其它非IgE或非IgE衍生的氨基酸序列，諸如氨基酸接頭或信號(hào)序列或如本文所定義的免疫原性載體，以及適用于蛋白質(zhì)純化的配體，諸如谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、組氨酸標(biāo)簽及葡萄球菌蛋白質(zhì)A。一種以上本發(fā)明的抗原性IgE肽可以融合蛋白質(zhì)形式存在。 異源多肽可例如與本發(fā)明的肽、多肽或蛋白質(zhì)的N端或C端融合。本發(fā)明的肽、多肽或蛋白質(zhì)亦可以包含同源氨基酸序列(亦即其它IgE或IgE衍生的序列)的融合蛋白質(zhì)形式產(chǎn)生。本發(fā)明的抗原性IgE肽可呈線性或構(gòu)象受限制。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，抗原性IgE肽的構(gòu)象受限制。如本文中關(guān)于分子所使用，術(shù)語(yǔ)“構(gòu)象受限制”意謂三維結(jié)構(gòu)隨時(shí)間實(shí)質(zhì)上維持一種空間排列的分子(諸如肽、多肽或蛋白質(zhì))。構(gòu)象受限制的分子可具有改良的性質(zhì)，諸如親和力、代謝穩(wěn)定性、膜滲透性或溶解性增加。另外，預(yù)期此類構(gòu)象受限制的分子以類似于其天然環(huán)構(gòu)象的構(gòu)象提供抗原性IgE 表位，從而誘導(dǎo)抗IgE抗體更易識(shí)別完整的天然自身IgE分子或以增加的親和力識(shí)別自身 IgE分子。構(gòu)象限制的方法為本領(lǐng)域所熟知且包括(但不限于)橋接(bridging)及環(huán)化。現(xiàn)有技術(shù)中已知存在若干種將構(gòu)象限制引入線性肽或多肽鏈中的方法。舉例而言，肽中兩個(gè)相鄰氨基酸之間的橋接引起局部構(gòu)象改變，與規(guī)則肽相比，其柔性 (flexibility)受限制。形成此類橋接的一些可能性包括內(nèi)酰胺及哌嗪酮的摻入(關(guān)于評(píng)論，請(qǐng)參見 Giannis and. Kolter, Angew. Chem. Int. Ed.，1993,32 :1244)。如本文中關(guān)于肽所使用，術(shù)語(yǔ)“環(huán)狀”是指包括在兩個(gè)非相鄰氨基酸或氨基酸類似物之間的分子內(nèi)鍵的結(jié)構(gòu)。環(huán)化可經(jīng)由共價(jià)或非共價(jià)鍵來(lái)實(shí)現(xiàn)。分子內(nèi)鍵包括(但不限于)主鏈與主鏈、側(cè)鏈與主鏈、側(cè)鏈與側(cè)鏈、側(cè)鏈與端基、端與端之間的鍵。環(huán)化方法包括(但不限于)在非相鄰氨基酸或氨基酸類似物的側(cè)鏈之間形成二硫鍵；在Lys與Asp/ Glu殘基之間形成酰胺鍵；在絲氨酸殘基與Asp/Glu殘基之間形成酯鍵；例如在一個(gè)氨基酸或其類似物的側(cè)鏈基團(tuán)與氨基端殘基的N端胺之間形成內(nèi)酰胺鍵；及形成賴氨酸正亮氨酸及二酪氨酸鍵。亦可使用二硫鍵的碳形式(例如乙烯基或乙基鍵)(J. P印tide Sc. ,2008, 14,898-902)，以及與適當(dāng)經(jīng)多取代的親電試劑(諸如二鹵烷烴、三鹵烷烴或四鹵烷烴)的燒基化反應(yīng)(PNAS, 2008,105 (40), 15293-15298 ；ChemBioChem，2005，6，821-824)。各種經(jīng)修飾的脯氨酸類似物亦可用于將構(gòu)象限制并入肽中Chang等人，J.Med Chem. , 1996, 39 2738-2744 ；Pfeifer 及 Robinson, Chem. Comm.，1998，1977-1978)。可用于環(huán)化本發(fā)明的肽的化學(xué)作用產(chǎn)生經(jīng)包括(但不限于)以下的鍵環(huán)化的肽內(nèi)酰胺、腙、肟、噻唑烷、硫醚或锍鍵。US 10/114918中所述的設(shè)計(jì)構(gòu)象受限制的肽的另一種方法在于將所需短氨基酸序列連接于模板，產(chǎn)生環(huán)狀受限制的肽。此類環(huán)狀肽不僅藉由其模板使得結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，且藉此提供可模擬天然蛋白質(zhì)上(諸如病毒及寄生蟲上)或自身蛋白質(zhì)(自體性哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)，諸如IgE)上的構(gòu)象表位的三維構(gòu)象，而且在血清中其比線性肽更抗蛋白質(zhì)水解降解。US 10/114918進(jìn)一步揭示藉由制備合成氨基酸以與適當(dāng)位置處的氨基酸進(jìn)行主鏈偶聯(lián)以便使肽的超二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定來(lái)合成構(gòu)象受限制的交聯(lián)肽。交聯(lián)可藉由正交保護(hù)的Os， 3R)-3-氨基脯氨酸殘基的一級(jí)氨基與適當(dāng)位置處的谷氨酸的側(cè)鏈羧基進(jìn)行酰胺偶聯(lián)來(lái)達(dá)成。在制備CS蛋白質(zhì)的構(gòu)象受限制的四肽重復(fù)時(shí)按照此方法，其中至少一個(gè)脯氨酸由QS， 3R)-3-胺基脯氨酸置換且為了引入側(cè)鏈羧基，并入谷氨酸以置換丙氨酸。交聯(lián)策略亦包括應(yīng)用格羅布斯關(guān)環(huán)復(fù)分解反應(yīng)(Grubbs ring-closing metathesis reaction)以形成設(shè)計(jì)成模擬α螺旋構(gòu)象的“訂書釘型(stapled) ”肽 (Angew. Int. Ed. Engl.，1998，37，3281 JACS，2000，122，5891)；使用多官能醣；使用氨基羧乙基硫色氨酸鍵(Chemistry Eu. J. ,2008,24,3404-3409)；使用疊氮化合物與炔烴的“點(diǎn)擊(click)”反應(yīng)，其可以側(cè)鏈氨基酸殘基形式并入或位于肽序列的主鏈中(Drug Disc. Today, 2003, 8 (24), 1128-1137).文獻(xiàn)中亦已知金屬離子可經(jīng)由螯合與金屬陽(yáng)離子配位的特定殘基(例如組氨酸)而使線性肽的受限制構(gòu)象穩(wěn)定(Angew. Int. Ed. Engl. ,2003,42, 421)。類似地，用非天然酸及胺官能度或多元胺及多元酸官能度使線性肽序列官能化可用于在活化及酰胺鍵形成后得到環(huán)化結(jié)構(gòu)。根據(jù)一實(shí)施方案，抗原性IgE肽因抗原性IgE肽的兩個(gè)非相鄰氨基酸(例如N及C 端氨基酸)的彼此分子內(nèi)共價(jià)鍵接而構(gòu)象受限制。根據(jù)另一實(shí)施方案，本發(fā)明的抗原性IgE 肽因共價(jià)結(jié)合于支架(scaffold)分子而構(gòu)象受限制。根據(jù)另一實(shí)施方案，抗原性IgE肽受簡(jiǎn)單限制，亦即在一端(C或N端)或經(jīng)由不位于任一端的另一氨基酸與骨架分子偶聯(lián)。根據(jù)另一實(shí)施方案，抗原性IgE肽受雙重限制，亦即在C端與N端與骨架分子偶聯(lián)。根據(jù)另一實(shí)施方案，抗原性肽藉由經(jīng)由左右異向雙脯氨酸(Diproline)單元(D-Pro-L-Pro)的模板作用進(jìn)行環(huán)化而受限制(Spath 等人，1998，Helvetica Chimica Acta 81，第 1726-1738 頁(yè))。本發(fā)明的說(shuō)明性但非限制性構(gòu)象受限制的肽的實(shí)例在圖2中圖標(biāo)描述。支架(亦稱為“平臺(tái)”)可為能夠經(jīng)由共價(jià)鍵接減少抗原性IgE肽可采用的構(gòu)象數(shù)的任何分子。構(gòu)象限制性支架的實(shí)例包括蛋白質(zhì)及肽，例如脂質(zhì)運(yùn)載蛋白相關(guān)分子(諸如含有β桶的硫氧還原蛋白及硫氧還原蛋白樣蛋白質(zhì))、核酸酶(例如RNaseA)、蛋白酶(例如胰蛋白酶)、蛋白酶抑制劑(例如水蛭蛋白酶抑制劑(eglin)C)、抗體或其結(jié)構(gòu)剛性片段、 熒光蛋白(諸如GFP或YFP)、芋螺毒素(conotoxin)、纖維結(jié)合蛋白III型域的環(huán)區(qū)、CTL-A4 及病毒樣顆粒(VLP)。其它合適的平臺(tái)分子包括碳水化合物，諸如瓊脂糖。該平臺(tái)可為線性或環(huán)狀分子， 例如接近形成環(huán)。平臺(tái)一般對(duì)于抗原性IgE肽為異源性的。認(rèn)為此類連接于平臺(tái)的構(gòu)象受限制的肽比線性肽對(duì)蛋白質(zhì)水解降解更具抗性。根據(jù)一優(yōu)選實(shí)施方案，該支架為如本申請(qǐng)案中所定義的免疫原性載體，優(yōu)選為異源載體蛋白質(zhì)或VLP。在另一實(shí)施方案中，抗原性IgE肽簡(jiǎn)單限制于免疫原性載體上。在另一實(shí)施方案中，抗原性IgE肽雙重限制于免疫原性載體上。以此方式，抗原性IgE肽形成構(gòu)象受限制的環(huán)結(jié)構(gòu)，其經(jīng)證明為尤其適合作為細(xì)胞內(nèi)識(shí)別分子的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的抗原性IgE肽可經(jīng)修飾以易于與平臺(tái)結(jié)合，例如藉由在一端或兩端添加末端半胱氨酸和/或藉由添加連接序列(諸如雙甘氨酸頭或尾、以賴氨酸殘基終止的接頭或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知執(zhí)行該功能的任何其它接頭)來(lái)達(dá)成。亦可使用使完整肽序列與載體偶聯(lián)的生物正交化學(xué)作用(諸如上述點(diǎn)擊反應(yīng))，由此避免任何區(qū)域化學(xué)及化學(xué)選擇性問(wèn)題。已知?jiǎng)偦宇^(Rigidified linker)(諸如 Jones 等人 Angew. Chem. Int. Ed. 2002， 41 :4241-4244中所述的接頭)引起改良的免疫應(yīng)答且亦可使用此類接頭。在另一實(shí)施方案中，抗原性IgE肽連接于自身與載體偶聯(lián)的多價(jià)模板，由此增加抗原密度(參見下文)。該多價(jià)模板可為經(jīng)適當(dāng)官能化的聚合物或寡聚物，諸如(但不限于)寡谷氨酸(oligoglutamate)或寡聚葡萄胺糖。
權(quán)利要求
1.包含至少一種連接于免疫原性載體的抗原性IgE肽的免疫原，其中所述抗原性IgE 肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :312、311、313、314、315、316、317、318、319、 320、321、322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、 339、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、 358、359、360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、 377、378、379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、 396、397、398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、 415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429、430、1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、 33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、 58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、 83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、 106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、 125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、 144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、 163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、 182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、 201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、 220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、 239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、 258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、 277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、 296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309 及 310。
2.權(quán)利要求1的免疫原，其中所述抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、 27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、 52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、 77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、 102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、 121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、 140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152 及 153。
3.權(quán)利要求1的免疫原，其中所述抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成SEQID No 154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、 172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、 191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、 210、211、212、213、214、215、216、217、218 及 219。
4.權(quán)利要求1的免疫原，其中所述抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成SEQID No :220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、 238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250、251、252、253、254、255、256、·257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、 276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、·294、 295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、307、308、309 及 310。
5.權(quán)利要求1的免疫原，其中所述抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成SEQID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、324、325、326、327、328、 329、330、·331、332、333、334、335、336、337、338、339、；340、341、342、343、344、345、346、347、 348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365、366、 ·367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、379、380、381、382、383、384、385、 386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、398、399、400、401、402、403、·404、 405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、 424、425、426、427、428、429 及 430。
6.權(quán)利要求2的免疫原，其中所述抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、 29、30、31、·34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、49、50、51、52、53、54、55、56、57、 58、59、60、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、·88、·89、90、91、92、93、94、95、96、99、100、101、102、103、104、105、106、109、110、111、112、113、 114、115、118、119、120、121、122、123、126、127、128、129、130、133、134、135、136、·139、140、 141、144、145及148 ；更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11、12、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、34、35、36、37、38、39、40、·41、42、43、49、 50、51、52、53、54、55、56、57、63、64、65、66、67、68、69、70、76、77、78、79、80、81、82、88、89、·90、91、92、93、99、100、101、102、103、109、110、111、112、118、119、120、126、127、133及 139 ； 甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、18、19、20、·21、 22、23、24、25、34、35、36、37、38、39、40、49、50、51、52、53、54、63、64、65、66、67、76、77、78、 79、88、89、90、99、100、101及109;甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No: ·1、2、3、4、5、6、18、19、20、21、22、34、35、36、37、49、50、51、63、64 及 76 ；甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :1、2、3、18、19及34 ；所述抗原性IgE肽最優(yōu)選由SEQ ID No 1或18的氨基酸序列組成。
7.權(quán)利要求3的免疫原，其中所述抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成SEQID No 154、155、156、157、158、159、160、161、162、165、166、167、168、169、170、171、172、175、 176、177、·178、179、180、181、184、185、186、187、188、189、192、193、194、195、196、199、200、 201、202、205、206、207、210、211、214及217 ；更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No 154、155、·156、157、158、159、165、166、167、168、169、175、176、177、178、184、185、186、 192、193、199及200 ；甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :154,155,156, 165、166及175 ；所述抗原性IgE肽最優(yōu)選由SEQ ID No 154或165的氨基酸序列組成。
8.權(quán)利要求4的免疫原，其中所述抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、233、234、235、236、237、238、 239、240、241、242、·245、246、247、248、249、250、251、252、253、256、257、258、259、260、261、 262、263、266、267、268、269、270、271、272、275、276、277、278、279、280、283、284、285、286、 287、290、·291、292、293、296、297、298、301、302及305 ；更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、233、234、235、236、237、238、239、245、 246、247、248、249、250、256、257、258、259、260、266、267、268、269、275、276、277、283、284 及 290 ；甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :220、221、222、223、2對(duì)、233、 234、235、236、對(duì)5、對(duì)6、對(duì)7、256、257及沈6 ；甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成 SEQ ID No :220、221、222、233、234 及 245 ；所述抗原性 IgE 肽最優(yōu)選由 SEQ ID No :220 或 233的氨基酸序列組成。
9.權(quán)利要求5的免疫原，其中所述抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成SEQID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、322、323、326、327、328、329、330、 331、332、333、334、335、336、337、340、341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、365、366、367、368、369、370、371、372、373、376、 377、378、379、380、381、382、383、386、387、388、389、390、391、392、395、396、397、398、399、 400、403、404、405、406、407、410、411、412、413、416、417、418、421、422 及 425 ；更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、326、 327、328、329、330、331、332、333、334、340、341、342、343、344、345、346、347、353、354、355、 356、357、358、359、365、366、367、368、369、370、376、377、378、379、380、386、387、388、389、 395、396、397、403、404及410 ；甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :311、 312、313、314、315、316、317、326、327、328、329、330、331、340、341、342、343、344、353、354、355、356、365、366、367、376、377及386；甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :311、312、313、314、326、327、328、340、341及353 ；甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :311,312及326 ；所述抗原性IgE肽最優(yōu)選由SEQ IDNo :311或312的氨基酸序列組成。
10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的免疫原，其中所述抗原性IgE肽還包含在其C端，一種具有式(6)工的接頭，其中11為一個(gè)選自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9及10，優(yōu)選選自0、1、2、3、4及5，更優(yōu)選選自0、1、2及3的整數(shù)，η最優(yōu)選為0或1(當(dāng)η等于0時(shí)， 該式表示半胱氨酸)；或在其N端，一種具有式C(G)n的接頭，其中η為一個(gè)選自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9及10，優(yōu)選選自0、1、2、3、4及5，更優(yōu)選選自0、1、2及3的整數(shù)，η最優(yōu)選為0或1(當(dāng)η等于0時(shí)， 該式表示半胱氨酸)；或在其C端，一種具有式(6)工的接頭，其中11為一個(gè)選自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9及10，優(yōu)選選自0、1、2、3、4及5，更優(yōu)選選自0、1、2及3的整數(shù)，η最優(yōu)選為0或1(當(dāng)η等于0時(shí)， 該式表示半胱氨酸)，及在其N端，一種具有式C(G)n的接頭，其中η為一個(gè)選自0、1、2、3、 4、5、6、7、8、9及10，優(yōu)選選自0、1、2、3、4及5，更優(yōu)選選自0、1、2及3的整數(shù)，η最優(yōu)選為0 或1 (當(dāng)η等于0時(shí)，該式表示半胱氨酸)。
11.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的免疫原，其中所述免疫原性載體為選自由HBcAg、 HBsAg及Q β VLP組成的組的病毒樣顆粒。
12.權(quán)利要求11的免疫原，其中所述抗原性IgE肽以化學(xué)方式與所述病毒樣顆粒交聯(lián)。
13.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的免疫原，其中所述抗原性IgE肽是構(gòu)象受限制的。
14.組合物，其包含至少兩種權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原。
15.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、 38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、 63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、 88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、 110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、 129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、 148、149、150、151、152 及 153。
16.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、34、35、36、37、38、39、40、41、 42、43、44、45、46、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、63、64、65、66、67、68、69、70、 71、72、73、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、88、89、90、91、92、93、94、95、96、99、100、101、 102、103、104、105、106、109、110、111、112、113、114、115、118、119、120、121、122、123、126、 127、128、129、130、133、134、135、136、139、140、141、144、145 及 148。
17.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、49、50、51、52、 53、54、55、56、57、63、64、65、66、67、68、69、70、76、77、78、79、80、81、82、88、89、90、91、92、 93、99、100、101、102、103、109、110、111、112、118、119、120、126、127、133 及 139。
18.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、7、8、9 18、19、20、 21、22、23、24、25、34、35、36、37、38、39、40、49、50、51、52、53、54、63、64、65、66、67、76、77、 78、79、88、89、90、99、100、101 及 109。
19.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :1、2、3、4、5、6、18、19、20、21、22、 34、35、36、37、49、50、51、63、64 及 76。
20.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :1、2、3、18、19及；34的氨基酸序列組成。
21.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自SEQ ID No 1及18的氨基酸序列組成。
22.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由SEQ ID No 1的氨基酸序列組成。
23.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、 165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、 184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、 203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218 及 219。
24.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :154、155、156、157、158、159、160、161、162、165、166、 167、168、169、170、171、172、175、176、177、178、179、180、181、184、185、186、187、188、189、 192、193、194、195、196、199、200、201、202、205、206、207、210、211、214 及 217。
25.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :154、155、156、157、158、159、165、166、167、168、169、 175、176、177、178、184、185、186、192、193、199 及 200。
26.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No :154、155、156、165、166 及 175 的氨基酸序列組成。
27.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No 154及165的氨基酸序列組成。
28.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No 165的氨基酸序列組成。
29.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、 231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、 250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、 269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、 288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、 307、308、309 及 310。
30.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、 233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、245、246、247、248、249、250、251、252、253、 256、257、258、259、260、261、262、263、266、267、268、269、270、271、272、275、276、277、278、 279、280、283、284、285、286、287、290、291、292、293、296、297、298、301、302 及 305。
31.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、233、234、235、 236、237、238、239、245、246、247、248、249、250、256、257、258、259、260、266、267、268、269、 275、276、277、283、284 及 290。
32.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、233、234、235、236、M5、M6、 247、256、257 及 266。
33.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No :220、221、222、233、234 及 245 的氨基酸序列組成。
34.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No 220或233的氨基酸序列組成。
35.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由SEQ ID No 220的氨基酸序列組成。
36.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、·322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、 341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、·359、 360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、 379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、·395、396、397、 398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、·417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429及 430。
37.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、 322、323、326、327、328、·329、330、331、332、333、334、335、336、337、340、341、342、343、344、 345、346、347、348、349、350、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、365、366、367、 368、369、370、·371、372、373、376、377、378、379、380、381、382、383、386、387、388、389、390、 391、392、395、396、397、398、399、400、403、404、405、406、407、410、411、412、413、416、417、·418、421、422及 425。
38.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、326、 327、328、329、330、331、·332、333、334、340、341、342、343、344、345、346、347、353、354、355、 356、357、358、359、365、366、367、368、369、370、376、377、378、379、380、386、387、388、389、 395、396、397、·403、404 及 410。
39.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、326、327、328、329、 330、331、340、341、342、·343、344、353、354、355、356、365、366、367、376、377 及 386 ；甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、326、327、328、；340、；341 及353;甚至更優(yōu)選由選自以下的氨基酸序列組成SEQ ID No :311、312及326 ；所述抗原性 IgE肽最優(yōu)選由SEQ ID No :311或312的氨基酸序列組成。
40.權(quán)利要求15至22中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No 312的氨基酸序列組成。
41.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No 154、155、156、157、158、159、160、 161、162、163、164、165、166、·167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、 180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、 199、200、201、202、·203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、 218 及 219。
42.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No 154、155、156、157、158、159、160、 161、162、165、166、167、168、·169、170、171、172、175、176、177、178、179、180、181、184、185、 186、187、188、189、192、193、194、195、196、199、200、201、202、205、206、207、210、211、214 及 217。
43.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :154、155、156、157、158、159、165、. 166、167、168、169、175、176、177、178、184、185、186、192、193、199 及 200。
44.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自SEQ ID No 154、155、156、165、166及175的氨基酸序列組成。
45.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :巧4及165的氨基酸序列組成。
46.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由SEQ ID No :165的氨基酸序列組成。
47.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、 231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、 250、251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、265、266、267、268、 269、270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、284、285、286、287、 288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、303、304、305、306、 307、308、309 及 310。
48.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、 233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、245、246、247、248、249、250、251、252、253、 256、257、258、259、260、261、262、263、266、267、268、269、270、271、272、275、276、277、278、 279、280、283、284、285、286、287、290、291、292、293、296、297、298、301、302 及 305。
49.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、227、233、234、235、 236、237、238、239、245、246、247、248、249、250、256、257、258、259、260、266、267、268、269、 275、276、277、283、284 及 290。
50.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、233、234、235、236、M5、M6、 247、256、257 及 266。
51.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :220、221、222、223、224、233、234、235、236、M5、M6、 247、256、257 及 266。
52.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No :220、221、222、233、234 及 245 的氨基酸序列組成。
53.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No 220及233的氨基酸序列組成。
54.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由SEQ ID No 220的氨基酸序列組成。
55.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、 322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、 341、342、343、344、.345、.346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、·360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、 379、380、381、382、383、384、385、386、·387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、 398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、·414、415、416、·417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429及 430。
56.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、·319、320、321、 322、323、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、340、341、342、343、344、 345、346、347、348、349、·350、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、365、366、367、 368、369、370、371、372、373、376、377、378、379、380、381、382、·383、386、387、388、389、390、 391、392、395、396、397、398、399、400、403、404、405、406、407、410、411、412、413、416、417、·418、421、422及 425。
57.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、·319、320、326、 327、328、329、330、331、332、333、334、340、341、342、343、344、345、346、347、353、354、355、 356、357、358、359、365、·366、367、368、369、370、376、377、378、379、380、386、387、388、389、 395、396、397、403、404 及 410。
58.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、326、·327、328、329、 330、331、340、341、342、343、344、353、354、355、356、365、366、367、376、377 及 386。
59.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No :311、312、313、314、326、327、328、340、341 及 353 的氨基酸序列組成。
60.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ IDNo :311、312及326的氨基酸序列組成。
61.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ IDNo :311及312的氨基酸序列組成。
62.權(quán)利要求41至46中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由SEQ ID No 312的氨基酸序列組成。
63.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :220、221、222、223、·224、225、226、 227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、 246、247、248、249、250、·251、252、253、254、255、256、257、258、259、260、261、262、263、264、 265、266、267、268、269、270、271、272、273、274、275、276、277、·278、279、280、281、282、283、 284、285、286、287、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、302、 303、304、·305、306、307、308、309 及 310。
64.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :220、221、222、223、·224、225、226、 227、228、229、230、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、245、246、247、248、249、 250、251、252、253、256、·257、258、259、260、261、262、263、266、267、268、269、270、271、272、 275、276、277、278、279、280、283、284、285、286、287、290、291、·292、··293、296、297、298、301、·302 及 305。
65.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :220、221、222、223、224、225、226、 227、233、234、235、236、237、238、239、245、246、247、248、249、250、256、257、258、259、260、 266、267、268、269、275、276、277、283、284 及 290。
66.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成=SEQ ID No :220、221、222、223、224、233、234、 235、236、245、246、247、256、257 及 266。
67.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :220、221、222、233、2；34及M5的氨基酸序列組成。
68.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由選自SEQ ID No :220及233的氨基酸序列組成。
69.權(quán)利要求14的組合物，其中所述組合物包含兩種免疫原且其中所述第一免疫原的抗原性IgE肽由SEQ ID No :220的氨基酸序列組成。
70.權(quán)利要求63至69中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、 322、323、324、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、338、339、340、 341、342、343、344、345、346、347、348、349、350、351、352、353、354、355、356、357、358、359、 360、361、362、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373、374、375、376、377、378、 379、380、381、382、383、384、385、386、387、388、389、390、391、392、393、394、395、396、397、 398、399、400、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、413、414、415、416、417、418、419、420、421、422、423、424、425、426、427、428、429及 430。
71.權(quán)利要求63至69中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、321、 322、323、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、336、337、340、341、342、343、344、 345、346、347、348、349、350、353、354、355、356、357、358、359、360、361、362、365、366、367、 368、369、370、371、372、373、376、377、378、379、380、381、382、383、386、387、388、389、390、 391、392、395、396、397、398、399、400、403、404、405、406、407、410、411、412、413、416、417、418、421、422及 425。
72.權(quán)利要求63至69中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、318、319、320、326、 327、328、329、330、331、332、333、334、340、341、342、343、344、345、346、347、353、354、355、 356、357、358、359、365、366、367、368、369、370、376、377、378、379、380、386、387、388、389、 395、396、397、403、404 及 410。
73.權(quán)利要求63至69中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自以下的氨基酸序列組成:SEQ ID No :311、312、313、314、315、316、317、326、327、328、329、 330、331、340、341、342、343、344、353、354、355、356、365、366、367、376、377 及 386。
74.權(quán)利要求63至69中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No :311、312、313、314、326、327、328、340、341 及 353 的氨基酸序列組成。
75.權(quán)利要求63至69中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ IDNo :311、312及326的氨基酸序列組成。
76.權(quán)利要求63至69中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由選自 SEQ ID No :311及312的氨基酸序列組成。
77.權(quán)利要求63至69中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原的抗原性IgE肽由SEQ ID No 312的氨基酸序列組成。
78.權(quán)利要求14至77中任一項(xiàng)的組合物，所述抗原性IgE肽連接于選自由HBcAgVLP, HBsAg VLP及Q β VLP組成的組的免疫原性載體。
79.權(quán)利要求14至78中任一項(xiàng)的組合物，其中此類抗原性IgE肽單獨(dú)地與所述免疫原性載體綴合。
80.包含兩種免疫原的組合物，這些免疫原各自由單獨(dú)地與免疫原性載體綴合的抗原性IgE肽組成。
81.權(quán)利要求80的組合物，其中所述第一免疫原由連接于免疫原性載體的抗原性IgE 肽組成，所述抗原性IgE肽由或基本上由SEQ ID No :220、221、233、234、Μ4及246的一種氨基酸序列組成。
82.權(quán)利要求81的組合物，其中所述抗原性IgE肽由或基本上由SEQID No :220或233 的氨基酸序列組成。
83.權(quán)利要求82的組合物，其中所述抗原性IgE肽由或基本上由SEQID No :220的氨基酸序列組成。
84.權(quán)利要求81至83中任一項(xiàng)的組合物，其中所述免疫原性載體選自由HBcAgVLP, HB sAg VLP及Q β VLP組成的組。
85.權(quán)利要求84的組合物，其中所述免疫原性載體為Qβ VLP。
86.權(quán)利要求85的組合物，其中所述Qβ病毒樣顆粒由SEQID NO :435的Qi3病毒樣顆粒組成。
87.權(quán)利要求85或86的組合物，其中所述抗原性IgE肽通過(guò)使用SMPH(丁二酰亞胺基-6-[ β-順丁烯二酰亞胺基丙酰胺基]己酸酯)作為交聯(lián)劑經(jīng)由硫醚鍵以化學(xué)方式與所述Q3病毒樣顆粒交聯(lián)，所述鍵位于所述病毒樣顆粒的賴氨酸殘基與所述抗原性IgE肽的半胱氨酸殘基之間。
88.權(quán)利要求81至87中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原由連接于第二免疫原性載體的第二抗原性IgE肽組成，所述第二抗原性IgE肽由或基本上由SEQ ID No :311,312 或326的一種氨基酸序列組成。
89.權(quán)利要求88的組合物，其中所述第二抗原性IgE肽由或基本上由SEQID No :311 或312的氨基酸序列組成。
90.權(quán)利要求89的組合物，其中所述第二抗原性IgE肽由或基本上由SEQID No :312 的氨基酸序列組成。
91.權(quán)利要求88至91中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二抗原性IgE肽在其C端進(jìn)一步包含GC接頭，優(yōu)選具有式GGC。
92.權(quán)利要求91的組合物，其中在C端包含GC接頭的所述第二抗原性IgE肽由或基本上由SEQ ID No 457的氨基酸序列組成。
93.權(quán)利要求88至92中任一項(xiàng)的組合物，其中所述第二免疫原性載體選自由HBcAg VLP、HBsAg VLP 及 Q β VLP 組成的組。
94.權(quán)利要求93的組合物，其中所述免疫原性載體為Qβ VLP。
95.權(quán)利要求94的組合物，其中所述Qi3病毒樣顆粒由SEQID NO :435的Qi3病毒樣顆粒組成。
96.權(quán)利要求94或95的組合物，其中在C端包含GC接頭的所述第二抗原性IgE肽通過(guò)使用SMPH( 丁二酰亞胺基-6-[ β -順丁烯二酰亞胺基丙酰胺基]己酸酯)作為交聯(lián)劑經(jīng)由硫醚鍵以化學(xué)方式與所述Q3病毒樣顆粒交聯(lián)，所述鍵位于所述病毒樣顆粒的賴氨酸殘基與所述C端接頭的半胱氨酸殘基之間。
97.包含兩種免疫原的組合物，其中這些免疫原各自由單獨(dú)地與Qi3病毒樣顆粒綴合的抗原性IgE肽組成，其中第一免疫原由與SEQ ID而435的00病毒樣顆粒交聯(lián)的SEQ ID No :220的抗原性 IgE肽組成，其中所述抗原性IgE肽通過(guò)使用SMPH( 丁二酰亞胺基-6-[β -順丁烯二酰亞胺基丙酰胺基]己酸酯)作為交聯(lián)劑經(jīng)由硫醚鍵以化學(xué)方式與所述Q0病毒樣顆粒交聯(lián)，所述鍵位于所述病毒樣顆粒的賴氨酸殘基與所述抗原性IgE肽的半胱氨酸殘基之間，及第二免疫原由與SEQ ID而435的00病毒樣顆粒交聯(lián)的SEQ ID No :457的多肽組成，其中所述多肽通過(guò)使用SMPH( 丁二酰亞胺基-6-[β-順丁烯二酰亞胺基丙酰胺基]己酸酯)作為交聯(lián)劑經(jīng)由硫醚鍵以化學(xué)方式與所述Q3病毒樣顆粒交聯(lián)，所述鍵位于所述病毒樣顆粒的賴氨酸殘基與所述多肽的半胱氨酸殘基之間。
98.免疫原性組合物，其包含權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原或權(quán)利要求14至97 中任一項(xiàng)的免疫原組合物，其進(jìn)一步包含至少一種選自由明礬、含有CpG的寡核苷酸及基于皂苷的佐劑組成的組的佐劑。
99.權(quán)利要求98的免疫原性組合物，其中所述至少一種佐劑為選自由CpG7909(SEQ ID NO :433)、CpG 10103 (SEQ ID NO :432)及 CpG24555 (SEQ ID NO :431)組成的組的含有 CpG 的寡核苷酸。
100.權(quán)利要求98的免疫原性組合物，其中所述至少一種佐劑為基于皂苷的佐劑，優(yōu)選為 Iscomatrix0
101.免疫原性組合物，其包含權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原或權(quán)利要求14至97 中任一項(xiàng)的免疫原組合物，其進(jìn)一步包含至少兩種選自由明礬、含有CpG的寡核苷酸及基于皂苷的佐劑組成的組的佐劑。
102.權(quán)利要求101的免疫原性組合物，其中所述佐劑為明礬及CpG24555(SEQ ID NO: 431)。
103.藥物組合物，其包含權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原，或權(quán)利要求14至97中任一項(xiàng)的免疫原組合物，或權(quán)利要求98至102中任一項(xiàng)的免疫原性組合物，及醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑。
104.權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原或權(quán)利要求14至97中任一項(xiàng)的免疫原組合物或權(quán)利要求98至102中任一項(xiàng)的免疫原性組合物或權(quán)利要求103的藥物組合物，其用作藥物。
105.權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原或權(quán)利要求14至97中任一項(xiàng)的免疫原組合物或權(quán)利要求98至102中任一項(xiàng)的免疫原性組合物或權(quán)利要求103的藥物組合物，其用于預(yù)防、減輕或治療IgE介導(dǎo)的病癥。
106.權(quán)利要求105的免疫原、免疫原性組合物或藥物組合物，其中所述IgE介導(dǎo)的病癥為哮喘。
107.一種預(yù)防、減輕或治療個(gè)體的IgE相關(guān)病癥的方法，包括使用治療有效量的權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原或權(quán)利要求14至97中任一項(xiàng)的免疫原組合物或權(quán)利要求 98至102中任一項(xiàng)的免疫原性組合物或權(quán)利要求103的藥物組合物。
108.權(quán)利要求107的方法，其中所述IgE介導(dǎo)的病癥為哮喘。
109.核酸，其編碼權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原。
110.表達(dá)載體，其包含權(quán)利要求109的核酸。
111.宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求110的表達(dá)載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及提供新穎免疫原，其包含優(yōu)選連接于免疫原性載體的抗原性IgE肽，用于預(yù)防、治療或減輕IgE介導(dǎo)的病癥。本發(fā)明進(jìn)一步關(guān)于產(chǎn)生這些藥物、其免疫原性組合物及藥物組合物的方法，及其于醫(yī)學(xué)中的用途。
文檔編號(hào)A61P37/08GK102245198SQ200980149635
公開日2011年11月16日 申請(qǐng)日期2009年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月9日
發(fā)明者A·D·布朗, A·M·K·謝爾斯特倫, B·R·錢皮恩, C·克里斯蒂, D·C·普賴德, D·M·懷亞特, D·P·熱爾韋, L·H·瓊斯, L·R·羅伯茨 申請(qǐng)人:輝瑞疫苗有限責(zé)任公司