一種新型通用型基質疫苗佐劑及其制備方法和用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種新型通用型基質疫苗佐劑及其制備方法和用途。
【背景技術】
[0002] 疫苗接種是預防和控制傳染性疾病最經(jīng)濟、有效的手段。DNA疫苗、重組疫苗和 合成肽疫苗等新型疫苗是近年來發(fā)展迅速的一類生物制劑，比常規(guī)疫苗具有抗原純度高、 特異性強、安全性好等優(yōu)勢。然而，這些新型疫苗的免疫原性弱，免疫效力低下[Oyston P，RobinsoK.Thecurrentchallengesforvaccinedevelopment.JMedMicrobiol 2012; 61(7): 889 - 894h同此，當前疫苗研究正面臨一些復雜病原如瘧疾、結核、人免 疫缺陷病毒等的重要挑戰(zhàn)[Leroux-RoelsG.Unmetneedsinmodernvaccinology: Adjuvantstoimprovetheimmuneresponse.Vaccine2010; 28(Supp. 3):C25 - 36]〇 佐劑是傳統(tǒng)疫苗和當前新型疫苗必不可少的組成成分，不僅能影響機體對疫苗免疫應 答的強度，而且能針對特定病原體誘導最有效的免疫應答類型[MbowML，DeGregorio E，ValianteNM,etal.Newadjuvantsforhumanvaccines.CurrentOpinionin Immunology2010; 22(3): 411-416]。目前報道的免疫佐劑種類很多，如油佐劑、弗氏 佐劑、微生物及其代謝產(chǎn)物、核酸及其類似物、細胞因子、脂質體等[DeyAK，Srivastava IK.Noveladjuvantsanddeliverysystemsforenhancingimmuneresponses inducedbyimmunogens.ExpertRevVaccines2011; 10: 227 - 51]，但由于存在不 同程度的毒副作用或安全隱患等一些不可避免的缺陷而難以實際應用[MbowML，De GregorioE，ValianteNM,RappuoliR.Newadjuvantsforhumanvaccines.Curr OpinImmunol2010, 22(3): 411 - 6;Batista-DuharteA,LindbladEB,Oviedo-OrtaE.Progressinunderstandingadjuvantimmunotoxicitymechanisms.Toxicol Lett2011; 203(2): 97 - 105]。鋁膠佐劑自1920s使用以來，直至最近由鋁鹽和TLR4激 動劑3-0 -去酰基-4' -單磷酰脂質A組成的AS04被批準之前一直是唯一通過FDA 批準的人用疫苗佐劑[MarrackP，McKeeAS，MunksMW.Towardsanunderstanding oftheadjuvantactionofaluminium.NatRevImmunol2009; 9: 287 - 293]。然 而，鋁膠佐劑存在一些弊端：①主要通過誘導Th2型免疫應答產(chǎn)生抗體起保護作用，不 能誘生Thl型免疫應答和細胞介導的免疫反應，只適用于以抗體為主要保護性免疫的疫 苗（ExleyC，SiesjoP，ErikssonH.Theimmunobiologyofaluminiumadjuvants: howdotheyreallyworkTrendsImmunol2010; 31: 103 - 109);②對人免疫缺陷病 毒、丙型肝炎病毒、單純皰疹病毒、流感病毒以及血吸蟲病、百日咳和傷寒等多種抗原無佐 劑作用[0'HaganDT，DeGregorioE.Thepathtoasuccessfulvaccineadjuvant- 'thelongandwindingroad' ?DrugDiscovToday2009; 14: 541 - 551];③可促 進IgE抗體產(chǎn)生，容易誘導機體產(chǎn)生過敏反應；④在局部形成肉芽腫，甚至發(fā)生局部無菌 性膿腫；⑤因其理化性質特點，含鋁膠的疫苗怕凍，凍后鋁膠容易變性；⑥對人、畜神經(jīng) 系統(tǒng)可能有影響。因此，鋁膠佐劑已遠遠不能滿足新型疫苗發(fā)展的要求[KoolM，F(xiàn)ierens K，LambrechtBN.Alumadjuvant:someofthetricksoftheoldestadjuvant.J MedMicrobiol2012; 61 (7): 927 - 934]。尋找安全、有效、新型的免疫佐劑是當前疫 苗研究領域的一個熱點[SchijnsVEJC，LavelleEC.Trendsinvaccineadjuvants. ExpertRevVaccines2011; 10(4): 539 - 550]。免疫佐劑研究已被列為疫苗研究的優(yōu)先 令頁域[HarandiAM,MedagliniD，ShattockRJ.Vaccineadjuvants:Apriorityfor vaccineresearch.Vaccine2010; 28(12): 2363 - 2366;HarandAM,BreweJ,Schijn V.ConferenceScene:Recentadvancementsinimmunopotentiatorsformodern vaccines.Immunotherapy2011; 3(11) : 1297 - 301] 〇
[0003] 天然藥物用于防治疾病具有悠久的歷史。當今，F(xiàn)DA批準的藥物約30%來源于天 然藥物。新的具有免疫活性的天然產(chǎn)物的發(fā)現(xiàn)日益成為研究重點，尤其在尋找新一代疫苗 佐劑方面[LicciardiPV,UnderwoodJR.Plant-derivedmedicines:Anovelclass ofimmunologicaladjuvants.IntImmunopharmaco1 2011; 11 (3): 390-398] 〇 阜苷 (saponin)是一類廣泛存在于中藥和天然藥物中的重要免疫活性物質[RiosJL.Effects oftriterpenesontheimmunesystem.JEthnopharmacol2010; 128: 1-14]〇 自 1951年發(fā)現(xiàn)皂苷能增強機體對口蹄疫疫苗的免疫應答以來，其佐劑作用受到了廣泛的關 注。研究最多的是南美阜樹（)樹皮中篩選到具有佐劑活性 總阜苷--QuilA及其活性成分QS-21[SkeneCDandSuttonP.Saponin-adjuvanted particulatevaccinesforclinicaluse.Methods2006; 40: 53-9]。QuilA和QS-21 對外源性抗原既能刺激Thl免疫應答，又能誘導細胞毒性T淋巴細胞（CTL)應答。這一 獨特的特性使其成為亞單位疫苗、細胞內病原體疫苗及癌癥疫苗的理想佐劑[Mbawuike I，ZangY，CouchRB.Humoralandcell-mediatedimmuneresponsesofhumansto inactivatedinfluenzavaccinewithorwithoutQS21adjuvant.Vaccine2007; 25(17): 3263-9]。但QuilA存在嚴重的缺陷：溶血性強、毒副作用大，可引起局部組織壞 死，甚至全身不良反應和中毒[WaiteDC，JacobsonEW，EnnisFA，EdelmanR，WhiteB， KammerR，etal.Threedouble-blind,randomizedtrialsevaluatingthesafety andtoleranceofdifferentformulationsofthesaponinadjuvantQS-21.Vaccine 2001; 19: 3957-7.]。目前除了用于為某些絕癥設計的疫苗如癌癥疫苗和人免疫缺陷病 重組疫苗等人用疫苗外，主要限用于口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗等獸用疫苗。因此，從天然藥 物中尋找篩選高效、低毒的皂苷佐劑受到國內外學者高度的關注[SunHX，XieY，YeYP. Advancesinsaponin-basedadjuvants.Vaccine2009， 27(12): 1787-1796]〇
[0004] 我們以前的研究表明，合歡皮皂苷（AJS)對卵清蛋白（OVA)和多種商品疫苗(禽流 感重組雞痘病毒載體活疫苗、新城疫活疫苗、豬偽狂犬gE基因缺失活疫苗、豬鏈球菌疫苗 等）均具有顯著的佐劑作用，能同時誘生機體對抗原產(chǎn)生Thl和Th2免疫應答反應，其佐劑 作用優(yōu)于QuilA，而溶血性和毒性遠遠低于后者，是一種理想的疫苗候選佐劑（SunHX，He Sff,ShiMH.Adjuvant-activefractionfromAlbizziajulibrissinsaponinsimproves immuneresponsesbyinducingcytokineandchemokineatthesiteofinjection. InternationalImmunopharmacology. 14(12)，2047-2056，2014.)D 合歡皮阜苷可以 從豆科（Leguminosae)植物合歡 ^Durazz?、山合歡A如/^ora( Roxb.)Prain、闊葉合歡AJeMd、羽狀合歡A等中提取，是一類由齊墩果焼 型苷元與8~10個單糖分子以及1~4分子單萜烯酸（辛二烯酸衍生物）結合而成的三 萜皂苷。合歡皮皂苷雖然具有較好的佐劑活性，但其使用劑量相對較大，溶血性較強。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種新型通用型基質疫苗佐劑及其制備方法和用途。
[0006]本發(fā)明的合歡皮阜苷基質佐劑saponins-basedmatrixadjuvant, ASMA)含有合歡皮皂苷、膽固醇和卵磷脂，且三者的重量比為5~20:1:1。
[0007] 所述的合歡皮阜苷是合歡皮屬植物中的阜苷，它可以從豆科（Leguminosae)植 物合歡 Ji/JiAriw/nDurazz.、山合歡A々a/feira(Roxb.)Prain、闊葉合歡A 々、羽狀合歡A 等中提取，是一類由齊墩果燒型苷元、8~10個單糖分子以 及1~4單萜烯酸（辛二烯酸衍生物）分子結合而成的三萜皂苷。
[0008] 所述的卵磷脂為磷脂酰膽堿、大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂。
[0009] 所述的佐劑是由長度為300~700nm片狀和/或鏈狀微粒構成，該片狀或鏈狀微 粒由粒徑10