專利名稱：使用酸性物質(zhì)制備血清褪黑素水平低下動物模型的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動物模型領(lǐng)域，具體涉及使用酸性物質(zhì)構(gòu)建血清褪黑素水平低下動物模型的 方法。
背景技術(shù)：
褪黑素(melatonin,簡稱MT)是1958年耶魯大學(xué)皮膚病學(xué)專家Lerner首次從牛的松果 體分離出的一種吲哚類激素，通常在凌晨機(jī)體內(nèi)含量最高，有以下三個顯著特點(1) MT 在血液濃度中呈晝夜節(jié)律、季節(jié)性節(jié)律的變化，并伴隨年齡的增長，其各種生理功能的晝夜 節(jié)律振幅變小，周期性活動的位相偏移和非同步化現(xiàn)象增加；(2)人類嬰幼兒期夜間MT水 平最高，從兒童到青春期平均MT水平下降80X，以后維持在這一水平，到50歲前后MT水平進(jìn) 一步下降；(3)機(jī)體所處的內(nèi)、外環(huán)境變化能明顯地影響機(jī)體本身MT血液濃度，而機(jī)體MT 受體mRNA水平則受光照和機(jī)體MT濃度的影響。人體的MT主要來源于松果體的分泌，作為一種 調(diào)節(jié)性激素，MT幾乎直接或間接影響其他所有激素的分泌，因而具有廣泛的生理和藥理活性 ，其晝夜、季節(jié)性節(jié)律與機(jī)體免疫、神經(jīng)、內(nèi)分泌和生殖系統(tǒng)等有密切聯(lián)系。
隨著現(xiàn)代分析儀器技術(shù)的提高，尤其是現(xiàn)代生物技術(shù)的運用，如利用酶聯(lián)反應(yīng)檢測MT含 量，使得血清MT的檢測和動態(tài)監(jiān)測成為可能，也使人們對MT與人類疾病之間的關(guān)系有了更多 的了解。臨床研究顯示機(jī)體褪黑素水平降低不僅與老年病人失眠癥、高的癌癥發(fā)病率相關(guān) ，而且具體涉及諸多人類重大疾病，如惡性腫瘤、早老性癡呆(Alzheimer Disease, AD) 、心血管疾病等。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和分子生物技術(shù)的發(fā)展，更多有關(guān)MT及其MT受體在疾病或相 關(guān)病理生理條件下的信息為臨床預(yù)防和治療提供了新的契機(jī)，其中最矚目的成果就是MT受體 激動劑agomelatine即一個擁有全新作用機(jī)制的抗抑郁藥的誕生。
目前作為機(jī)體褪黑素水平降低的主要動物模型有1、去松果體動物模型，即依據(jù)松果 體是MT主要分泌器官，在動物幼年時期除去松果體即會影響動物機(jī)體體內(nèi)MT的水平。2、 MT 受體基因敲出的動物模型；3、持續(xù)光照模型，即依據(jù)哺乳動物松果體細(xì)胞合成和分泌MT的 過程具有明顯的晝夜節(jié)律，主要表現(xiàn)為暗相時MT合成和分泌增加，光照相時MT的合成和分泌 減少。在上述模型中雖然都是著重于對機(jī)體內(nèi)MT水平的影響，但是在第一類模型中，鑒于松果體內(nèi)含有包括MT、五羥色胺(5-HT， MT在體內(nèi)合成的前體物質(zhì))、腎上腺素、去甲腎上腺 素、促生長激素、促性腺釋放激素等近二十種激素，加上開顱手術(shù)的創(chuàng)傷性，使得該模型實 際操作的可行性受到質(zhì)疑，畢竟該模型并不能僅僅只反映出機(jī)體MT水平降低對機(jī)體的影響； 盡管近十年來，應(yīng)用轉(zhuǎn)基因動物、基因打耙和基因敲除技術(shù)，將研究手段精細(xì)到了具體的激 素或激素受體基因，從而準(zhǔn)確復(fù)制出單個激素或激素受體基因過表達(dá)(亢進(jìn))或無表達(dá)(低 下)的動物模型，從腺體切除到基因敲除的確是一種質(zhì)的飛躍，但是同樣的問題也出現(xiàn)在第 二類動物模型中，因為MT受體存在著不同亞型，在哺乳動物機(jī)體內(nèi)分布十分廣泛，其相應(yīng)的 作用機(jī)能的研究并不完善，而且機(jī)體MT濃度影響MT受體mRNA水平，也因此給實際運用帶來一 定的困擾；持續(xù)光照模型制備周期很長，必須考慮季節(jié)性影響和年齡因素，即隨動物年齡增 長其體內(nèi)MT會逐步降低這一事實，因而尚須進(jìn)一步完善。所以構(gòu)建一個血清MT持續(xù)低下的動 物模型，尤其是與臨床癥狀相對應(yīng)的動物模型是當(dāng)務(wù)之急，也是研究與之相關(guān)聯(lián)疾病預(yù)防和 治療的重要方法和手段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種構(gòu)建血清褪黑素水平低下動物模型的方法。該方 法為每只動物口服灌胃酸性物質(zhì)，用量IO. 0-100. 0ml/Kg d，連續(xù)5-15天造模。 其中，上述酸性物質(zhì)的pH值為2《pH值〈7 。
其中，上述酸性物質(zhì)為酒石酸、磷酸緩沖液、食醋、醋酸、稀鹽酸、稀硫酸中的至少一種。
其中，上述酸性物質(zhì)溫度控制在4'C 。
進(jìn)一步的，上述酸性物質(zhì)為2《pH值〈7的中藥浸煎液。
其中，上述中藥為大黃、芒硝、番瀉葉或大承氣湯中的至少一種，每lml浸煎液含每種 中藥l g。上述中藥還可添加枳實、厚樸、檳榔中的至少一種。
本發(fā)明還提供了酸性物質(zhì)在在制備導(dǎo)致動物血清褪黑素水平低下的藥物中的用途。上述 酸性物質(zhì)為酒石酸、磷酸緩沖液、食醋、醋酸、稀鹽酸、稀硫酸中的至少一種。上述酸性物 質(zhì)也可為2《pH值〈7的中藥浸煎液。所述中藥優(yōu)選為大黃、芒硝、番瀉葉或大承氣湯中的至 少一種，還可以添加有枳實、厚樸、檳榔中等破氣中藥中的至少一種。
本發(fā)明方法無創(chuàng)，低成本，周期短，可重復(fù)，能成功且可重復(fù)的建立血清褪黑素水平低 下動物模型?？捎糜谘芯颗cMT相關(guān)聯(lián)的疾病病理生理變化和疾病產(chǎn)生機(jī)制，也可用于相關(guān)疾病的藥物研究，具有好的應(yīng)用前景。


圖l為用本發(fā)明方法建立的第一批褪黑素水平低下動物模型小鼠凌晨1 2點血清MT的 含量(n=15) ，*:實驗組與正常對照組相比，P〈0.05。
圖2為本發(fā)明方法建立的第一批褪黑素水平低下動物模型小鼠凌晨1 2點血清MT的含量 (n=15) ，*:實驗組與正常對照組相比，P〈0.05。
圖3為本發(fā)明方法建立的第一批褪黑素水平低下動物模型小鼠凌晨1 2點血清MT的含 量(n=15) ，*:實驗組與正常對照組相比，P〈0.05。
具體實施例方式
以下通過對本發(fā)明具體實施方式
的描述說明但不限制本發(fā)明。 實施例
實驗動物昆明種小鼠，體重20士2g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動物室提供。
1、 造模方法和分組
將動物隨機(jī)分為模型組和正常對照組，每組15只。
口服灌胃4。C食醋(市售山西陳醋，總酸》4.00g/100ml) 20ml/Kg d，每天一次，連續(xù) 15天造模，然后檢測凌晨1 2時小鼠血清MT濃度。
2、 觀察指標(biāo)
末次給藥后第2天凌晨1 2點去眼球采血，4"C冰箱靜置，4"C離心10min (2500r/min)， 分離血清于-8(TC保存待測。此次實驗于2008年11 12月成都溫江進(jìn)行。采用ELISA法檢測MT (小鼠褪黑素ELISA Kit，武漢中美科技有限公司)，每一份樣本進(jìn)行雙點測定，嚴(yán)格按說 明書進(jìn)行操作。Bio-Rad 680型酶標(biāo)儀檢測MT含量。
3、 統(tǒng)計學(xué)處理方法
數(shù)據(jù)的處理使用SPSSll. O統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理。
4、 結(jié)果
圖1表示偏食醋型脾虛模型小鼠血清MT的含量參照正常對照組值的百分率，結(jié)果顯示了 在凌晨1 2點，偏食醋型脾虛模型組小鼠血清MT濃度與正常對照組相比，P<0.05。為研究本發(fā)明方法的可重復(fù)性，按上述方法再進(jìn)行了兩次造模，造模后檢測的小鼠凌晨 血清MT濃度見圖2和圖3，結(jié)果表明均造模成功。
權(quán)利要求
1.構(gòu)建血清褪黑素水平低下動物模型的方法，其特征在于所述方法為每只動物口服灌胃酸性物質(zhì)，用量10.0-100.0ml/Kg·d，連續(xù)5-15天造模。
2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的構(gòu)建血清褪黑素水平低下動物模型的方法， 其特征在于所述酸性物質(zhì)的pH值為2《pH值〈7。
3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的構(gòu)建血清褪黑素水平低下動物模型的方法， 其特征在于所述酸性物質(zhì)為酒石酸、磷酸緩沖液、食醋、醋酸、稀鹽酸、稀硫酸中的至少 一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的構(gòu)建血清褪黑素水平低下動物模型的方法， 其特征在于所述酸性物質(zhì)溫度為4'C 。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的血清褪黑素水平低下動物模型的構(gòu)建方法， 其特征在于所述酸性物質(zhì)為2《pH值〈7的中藥浸煎液。
6.根據(jù)權(quán)利要求6所述的血清褪黑素水平低下動物模型的構(gòu)建方法， 其特征在于所述中藥為大黃、芒硝、番瀉葉或大承氣湯中的至少一種，每lml浸煎液含每 種中藥l g。
7.根據(jù)權(quán)利要求7所述的血清褪黑素水平低下動物模型的構(gòu)建方法， 其特征在于所述中藥還添加有枳實、厚樸、檳榔中的至少一種。
8.酸性物質(zhì)在制備導(dǎo)致動物血清褪黑素水平低下的藥物中的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于所述酸性物質(zhì)為酒石酸、磷酸緩沖液、食醋、醋酸、稀鹽酸、稀硫酸中的至少一種。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于所述酸性物質(zhì)為2《 pH值〈7的中藥浸煎液。
全文摘要
本發(fā)明屬于實驗動物技術(shù)領(lǐng)域，要解決的技術(shù)問題是提供血清褪黑素水平低下動物模型的構(gòu)建方法。本發(fā)明技術(shù)方案為在每只動物口服灌胃酸性類物質(zhì)10.0-100.0ml/Kg·d，連續(xù)5-15天造模。本發(fā)明方法步驟簡便，能成功且可重復(fù)的建立血清褪黑素水平持續(xù)低下動物模型，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號A61K33/04GK101579407SQ20091030316
公開日2009年11月18日 申請日期2009年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月11日
發(fā)明者凌智群 申請人:成都中醫(yī)藥大學(xué)