專利名稱：：甘草苷制劑及應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬藥物用途，涉及甘草苷藥物制劑及用途，具體涉及甘草苷在制備治療咳嗽和痰多藥物中的應用。
背景技術：
：隨著全球經(jīng)濟的發(fā)展，工業(yè)與民用污染源不斷增加，加之環(huán)境治理不力等因素，呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，其引起的死亡率也逐年上升，目前呼吸系統(tǒng)疾病已成為人類幾大"殺手"之一。不過，這也給生產(chǎn)呼吸系統(tǒng)疾病藥物的企業(yè)創(chuàng)造了更廣闊的市場空間。作為呼吸系統(tǒng)藥物的重要組成部分，祛痰鎮(zhèn)咳藥物的市場也逐年遞增。咳嗽和痰多是呼吸系統(tǒng)疾病的主要癥狀，應用祛痰和鎮(zhèn)咳藥是對癥治療的重要手段。合理應用祛痰鎮(zhèn)咳藥不僅可以減輕病人的痛苦，并可防止并發(fā)癥的發(fā)生和原發(fā)疾病的進一步惡化。在中國藥品市場中，祛痰和鎮(zhèn)咳藥每年的市場份額約為200億元。因此，從中藥中尋找和提取鎮(zhèn)咳、祛痰和平喘藥具有良好的社會效益和經(jīng)濟效益。甘草苷(Liquiritin)是從甘草總黃酮中分離純化獲得的一個天然藥物，屬于二氫黃酮類，其化學結構見圖l。至今為止尚未見有它制備成藥品和治療任何疾病或癥狀的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種甘草苷制劑，以甘草苷為主要活性成分，加入常規(guī)的賦形劑、調味劑、防腐劑、潤滑劑、濕潤劑、粘合劑、增稠劑、增溶劑等藥物輔料，具體組成以制成IOOO粒計，甘草苷40g，氫氧化鈉3.2g，聚維酮15g，葡甲胺10g，微晶纖維素115g，乳糖20g。所述甘草苷英文名liquiritin，分子式C26H3()013，分子量550，結構式-HO本發(fā)明所述的制劑劑型有膠囊劑、片劑、口服液體劑等。本發(fā)明的另一個目的是提供甘草苷制劑在制備治療急、慢性咳嗽和痰多癥狀藥物中的應用。本發(fā)明提供的甘草苷經(jīng)過初步的藥理實驗證實，具有鎮(zhèn)咳和祛痰作用，因此，將甘草苷單獨或與其它活性組份或輔料配合制成藥劑，可用于咳嗽和痰多癥狀的改善。本發(fā)明提供的甘草苷用了2種動物鎮(zhèn)咳試驗模型，即枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽模型和電剌激喉上神經(jīng)引起的咳嗽反射模型。證實甘草苷抑制枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽反應和辣椒苷引起的小鼠咳嗽反應，提示甘草苷具有很強的鎮(zhèn)咳作用。本發(fā)明還用了2種動物祛痰試驗模型，小鼠氣道酚紅排泄模型和蛙上腭和食道纖毛運動模型。證實甘草苷促進小鼠氣道酚紅排泄，增強蛙上腭和食道纖毛運動，提示甘草苷具有很強的祛痰作用。本發(fā)明提供的甘草苷均具有治療或改善急、慢性咳嗽和祛痰的作用，其藥效明顯強于甘草黃酮，作用強度是甘草黃酮的10倍以上。本發(fā)明的甘草苷來源于天然植物，因此，可以將甘草苷制成保健品。本發(fā)明為臨床治療提供了毒副作用較小、療效顯著的天然鎮(zhèn)咳和祛痰藥物。圖1為本發(fā)明膠囊制劑制備工藝流程。具體實施例方式本發(fā)明結合附圖和實施例作進一步的說明。實施例1一、甘草苷膠囊制劑組成及制備工藝1.組成制成1000粒甘草苷40g氫氧化鈉3.2g聚維酮15g葡甲胺10g微晶纖維素115g乳糖20g共203.2g2.制劑組成依據(jù)及篩選過程2.1制劑組成依據(jù)根據(jù)藥效學試驗制訂甘草苷膠囊，規(guī)格甘草苷含量40mg/粒。輔料在處方中的作用氫氧化鈉增溶劑；聚維酮粘合劑；葡甲胺增溶劑；微晶纖維素稀釋劑、崩解劑；乳糖稀釋劑。將甘草苷用氫氧化鈉乙醇溶液溶解，預試驗表明在甘草苷完全成鹽的理論值(甘草苷:氫氧化鈉=40:3.1)時并不完全溶解，稍過量的氫氧化鈉即甘草苷:氫氧化鈉=40:3.2時能正好完全溶解。然后將溶液濃縮干燥至濃溶液，加入不同的稀釋劑攪拌使分散均勻，制濕顆粒，6(TC干燥，整粒，加入潤滑劑混合均勻，壓片即得。根據(jù)我們在開發(fā)甘草苷片劑時的結果，聚維酮和葡甲胺分別為15mg和10mg時較適宜。賦形劑采用的是乳糖和微晶纖維素，在預試驗的基礎上采用不同處方及試驗結果見表5-1。結果表明，處方1雖然制軟材較容易，但制得的產(chǎn)品溶出度(按實際含藥量計算)略低。處方2、3和4三個處方的溶出度均較好，但從加入稀釋劑后軟材的濕潤程度看處方2較好。且處方2制得的顆粒流動性良好，膠囊裝量差異完全符合規(guī)定，因此，采用處方2作為本品的處方。_表l甘草苷膠囊的處方篩選__][_^_3_^_甘草苷40404040氫氧化鈉3.23.23.23.22.5光照取膠囊除去外包裝置于表面皿中，在45001x光照條件下放置10天，分別于第5、IO天取樣，檢查外觀、內(nèi)容物性狀、溶出度、降解產(chǎn)物并測定含量，與O天比較，檢査方法見資料含量測定資料。表2樣品光照IO天的試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.2制備工藝2.2.1操作步驟1.在適量的乙醇中加入甘草苷和氫氧化鈉，攪拌使溶解；2.將溶液濃縮至濃溶液；3.取乳糖、聚維酮、葡甲胺和微晶纖維素混合均勻，加入上述溶液攪拌制軟材，20目篩制濕顆粒，6(TC干燥；4.整粒裝填入膠囊，打光；5.包裝、質檢即得。2.3工藝流程，參見圖1。2.4試制一批樣品的影響因素試驗結果40mg/粒除去外包裝，裸露放置080428格裝號規(guī)包批000光滑膠囊白色粉末99.0199.710.178042光滑膠囊白色粉末97.4398.520.19o10光滑膠囊白色粉末98.5799.030.22樣品光照10天的試驗結果見表2。由結果可以看出光照10天樣品降解產(chǎn)物、性狀、溶出度和含量未發(fā)生明顯改變。8.4.2高溫取膠囊除去外包裝裸露置于表面皿中，在40°C、60。C條件下放置10天，分別于第5、IO天取樣，檢査外觀、內(nèi)容物性狀、溶出度、降解產(chǎn)物并測定含量，與O天比較。表3高溫10天的試驗結果(批號080428)條件時間(天)外觀內(nèi)容物性狀溶出度(%)含量(%)降解產(chǎn)物(％)0光滑膠囊白色粉末99.0199.710.17。CJo寸光滑膠囊白色粉末97.79100.120.2010光滑膠囊白色粉末97.6399.340.220光滑膠囊白色粉末99.0199.710.17po。光滑膠囊白色粉末98.1998.950.2110光滑膠囊白色粉末98.5199.380.21樣品高溫10天的試驗結果見表3。由結果可以看出樣品高溫放置10天，降解產(chǎn)物、性狀、溶出度和含量未發(fā)生明顯改變。8.4.3高濕取膠囊，除去外包裝，裸露置于表面皿中，分別在25。CRH75%、RH92.5n/。條件下放置10天，分別于第5、IO天取樣，檢査外觀、內(nèi)容物性狀、溶出度、降解產(chǎn)物并測定含量，與O天比較。試驗結果見表4。表4樣品高濕10天的試驗結果(批號080428)內(nèi)容物吸濕增重(％)溶出含量性狀度(％)(%)降解產(chǎn)物(%)7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>由結果可以看出高濕條件下樣品有吸濕現(xiàn)象，RH75。/。濕度下放置10天，樣品吸濕5.23°/。，RH92.5。/。濕度下放置10天，樣品吸濕增重26.01%。降解產(chǎn)物、溶出度和含量未發(fā)生明顯改變。實施例2藥效學研究參照國家食品藥品監(jiān)督管理局《新藥(西藥)臨床前研究指導原則匯編(藥學藥理學毒理學)》，設計了本實驗方案。選用2種鎮(zhèn)咳藥實驗動物模型、2種祛痰藥實驗動物模型和3種平喘試驗方法，對甘草苷膠囊或片劑進行了平喘、鎮(zhèn)咳和祛痰方面的研究。試驗材料、方法和結果如下1、材料藥品與試劑1)枸櫞酸上?；瘜W試劑一廠，批號20070201，用蒸餾水配制成15%的濃度備用；2)磷酸可待因片青海制藥廠，批號20060615;蒸餾水配制成0.5mg/ml混懸液；3)Capsaicin(辣椒素)SigmaChemicalCompany,lot:123H78341,新鮮配制稱取Capsaicin3mg，用10%乙醇lml溶解，力tU0。/o吐溫80lml，研磨后加水至100ml。4)地西泮注射液江蘇濟川制藥有限公司，批號20060309;5)酚紅試劑上?；瘜W試劑三廠；批號20070615;精密稱取酚紅試劑2g，加生理鹽水至80ml。由于酚紅在生理鹽水不能完全溶解，因此置超聲波洗滌器內(nèi)超聲溶解30min,使酚紅顆粒均勻，配制成0.25%酚紅懸液。6)氫氧化鈉浙江蕭山化學試劑廠，批號20060726;7)carbamylcholine:SigmaChemicalCompany,lot:08348)異丙腎上腺素上海信宜制藥業(yè)有限公司，批號200702129)甘草苷膠囊自制，批號20080206;將甘草苷10粒膠囊或片劑的原料藥加蒸餾水至100ml。整體試驗劑量以mg/kg表示，離體試驗以mol濃度。動物1)ICR品系小鼠，體重1822g，雌雄各半。2)Hartley品系豚鼠，體重350-500g，雌雄不拘。購于浙江大學實驗動物中心，合格證號220010014。所有的操作和實驗流程均遵守《實驗動物管理條例》。動物在實驗前均自由進食和進水。3)青蛙，體重2540g，雌雄不拘。購于市場。2、方法2.1小鼠酚紅排泌試驗將2.5%酚紅置電磁攪拌器上邊混合邊注射，2.5%酚紅0.2mL/10g體重ip，30min后脫臼處死動物，分離氣管(避免分離氣管時出血)，取喉結下至肺門的主氣管，每一氣管放置一支5mL試管內(nèi)，加生理鹽水1.0mL，震蕩洗滌30min后，力B1mmoL/LNaOH0.1mL，混勻后150g離心10min，取上清液于722型分光光度儀以A546nm測定酚紅含量。標準曲線繪制取4.17xl(T7、8.34xl(T7、1.67xl(^g/L濃度的酚紅液在A546nm測定A值，繪制曲線。實驗結果根據(jù)酚紅標準曲線的回歸方程計算出小鼠的氣道酚紅排泌量(|ig/mL)。分組共分6組，每組812只小鼠，雌雄各半。具體分組情況如下A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水灌胃給藥B.甘草苷6mg/kgC.甘草苷20mg/kgD.甘草苷60mg/kgE.甘草苷120mg/kgF.15%氯化銨1.35mL/kgG.15%氯化銨2.10mL/kgH.15%氯化銨3.28mL/kgI.15°/。氯化銨6.40mL/kg給藥劑量和容積所有試驗小鼠饑餓過夜，均在注射酚紅前30min給藥一次。采用等容不等量ig。2.2青蛙食道纖毛運動實驗將毀腦脊髓后的蛙固定于板上，分離口腔上腭至食道末端的粘膜，取2.5cmxl.5cm粘膜平貼于板上，加以固定，定時以任氏液濕潤粘膜表面。每只試驗的蛙食道粘膜均先用活性炭(半粒芝麻大小)測定一次2.0cm長度的運動時間，作為粘膜標本的篩選，剔除運動時間<803、>1503的標本。篩選合格的粘膜標本以含受試藥物的任氏液濕潤，用同樣大小的活性炭粒再測定一次運動2.0cm長度的運動時間作為用藥后所需要的運動時間，并與加任氏液對照組比較組間顯著性差異。分組A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水加入B.甘草苷lxlO-9lxl(T6mol/L4個濃度C.陽性對照藥乙酰膽堿組lxlO"tlxl(^mol/L4個濃度2.3枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽試驗分組共分5組，每組89只豚鼠，雌雄不拘。具體分組情況如下A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水灌胃給藥B.甘草苷3mg/kgC.甘草苷10mg/kgD.甘草苷30mg/kgE.可待因10mg/kg篩選豚鼠用超聲波霧化器氣霧15W枸櫞酸2min后，10min內(nèi)咳嗽次數(shù)在IO次以上的豚鼠作為實驗豚鼠，棄去10次以下的豚鼠。24h后給豚鼠灌胃給藥(ig)，進行藥物鎮(zhèn)咳試驗。給藥劑量和容積所有試驗豚鼠均在枸櫞酸引咳前30min給藥1次。采用等容不等量灌胃給藥(ig)。實驗步驟將豚鼠放入20xl0xl0cm體積描記盒中，用高靈敏度壓力換能器將豚鼠呼吸頻率和容積信號輸入微機Pclab生物信號采集系統(tǒng)，記錄豚鼠咳嗽次數(shù)。豚鼠放入體積描記盒穩(wěn)定lmin后，用超聲波霧化器氣霧15。/。枸櫞酸2min，計數(shù)自氣霧開始10min內(nèi)的咳嗽次數(shù)，每一次咳嗽均以聽到豚鼠咳嗽聲音和微機Pclab上見到的明顯的咳嗽記錄結合分析。2.4電剌激豚鼠喉上神經(jīng)引咳試驗分組共分5組，每組89只豚鼠，雌雄不拘。具體分組情況如下A.生理鹽水對照組，以等量生理鹽水灌胃給藥B.甘草苷3mg/kg10C.甘草苷10mg/kgD.甘草苷30mg/kgE.可待因15mg/kg試驗步驟按文獻方法[2]，用25%烏拉坦按lg/kg腹腔注射麻醉豚鼠，麻醉后分離出豚鼠的喉上神經(jīng)，及進行氣管插管，用Y字型的接頭一頭與換能器相連，一頭與大氣相通。用高靈敏度壓力換能器將豚鼠呼吸頻率和容積信號通過AD、DA接口傳入微機Pclab生物信號采集系統(tǒng)(版本1丄36,MicSignStarCorp)，分別用刺激電極刺激氣管和喉上神經(jīng)，刺激參數(shù)為主周期ls，脈沖數(shù)10次，間隔10ms，波寬lms。除電壓外，其他所有參數(shù)不變，即以電壓為唯一刺激變量。刺激電壓由小加大，刺激時間為12s，兩次刺激之間至少相隔5min，記錄其刺激引咳閾值。每一次咳嗽均以聽到豚鼠咳嗽聲音和微機Pclab上見到的明顯的咳嗽記錄結合分析。2.5統(tǒng)計用微機和SigmaStat統(tǒng)計軟件(Sigmastat1.01forWindows95，1992，Jandelcorporation,USA)。ED50(95%可信限)和EC50(95%可信限)用上?？茖W技術出版社POMS2.0版軟件計算。具體方法見結果中的表注。3結果3.1對小鼠氣道酚紅排泄的促進作用甘草苷能促進小鼠氣道酚紅排泄，見表5。甘草苷組ED5Q(95%可信限)為0.50(0.46~0.56)mL/kg;氯化銨組為2.89(2.51-3.31)mL/kg。表5.甘草苷對小鼠氣道酚紅排泄的促進作用(5±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>統(tǒng)計方法Dunnett's，與生理鹽水組比較*P<0.01，"P<0.01，"'P<0.001，下表同3.2對蛙上腭和食道粘膜纖毛運動的增強作用甘草苷和陽性對照藥乙酰膽堿組均呈劑量反應增加蛙上腭和食道纖毛運動,見表6。甘草苷組EC5Q(95%可信限)為3.1x10°(7.0xlO-4~1.3xlO-2)mL/L;乙酰膽堿組為9.8xl(T7(l,9xl(T7~5.0xlO-6)mL/L0表6.甘草苷對蛙上腭和食道粘膜纖毛運動的促進作用(5±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表注同上表3.3對豚鼠枸櫞酸引晐模型的抑制作用甘草苷能抑制枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽。甘草苷ID5C(95%可信限)為2.72(2.023.67)mLkg"。結果見表7.—表7.甘草苷對枸櫞酸引起豚鼠咳嗽反應的抑制作用(n=10，^±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>30.0mg.kf124.3±9.911.0±9.(T58.5統(tǒng)計方法T-test，與生理鹽水組比較*P<0.05,"P<0.01。3.4對電刺激豚鼠喉上神經(jīng)引起的咳嗽的影響甘草苷能抑制電刺激喉上神經(jīng)引起的咳嗽反射，使引起咳嗽反射所需的閾值電壓明顯增高，見表8。ED5o(95%可信限)為0.85(0.641.14)ml.kg"。表8電刺激豚鼠喉上神經(jīng)給藥前后的閾值變化<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>統(tǒng)計方法Pairedt-test;給藥前后咳嗽刺激闔值比較'PO.05，"PO.014討論與小結在本實驗中，采用了2種動物鎮(zhèn)咳試驗模型，枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽模型和電刺激喉上神經(jīng)引起的咳嗽反射模型。甘草苷抑制枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽反應和電刺激喉上神經(jīng)引起的咳嗽反射，提示甘草苷具有很強的鎮(zhèn)咳作用。在本實驗中，采用了2種動物祛痰試驗模型，小鼠氣道酚紅排泄模型和蛙上腭和食道纖毛運動模型。甘草苷促進小鼠氣道酚紅排泄，增強蛙上腭和食道纖毛運動，提示甘草苷具有很強的祛痰作用。枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽反應主要通過刺激外周C纖維釋放遞質引起咳嗽反射和支氣管收縮反應，因此可歸類于外周性咳嗽模型，外周性鎮(zhèn)咳藥物對該模型有較強的抑制作用。而電刺激喉上神經(jīng)能快速傳導到咳嗽中樞，反射性引起咳嗽反應，因而把它歸類于中樞性咳嗽模型。IshiiR等曾將豚鼠的喉上神經(jīng)刺激模型用于研究一種外周鎮(zhèn)咳藥moguisteine時發(fā)現(xiàn)，可待因(中樞性和外周性混合作用)靜脈注射(0.54mg.kg'1)和腦室內(nèi)注射(520昭)呈劑量依賴抑制電剌激喉上神經(jīng)引起的咳嗽，但moguisteine無論靜脈注射(4和20mg.kg")還是腦室內(nèi)注射(2(Hig)都不起作用，而對枸櫞酸引咳模型模型卻有非常明顯的作用，證明moguisteine的作用機制是屬于外周性的[2]。本實驗中，我們應用這一模型對甘草苷的作用部位進行了初步探討，發(fā)現(xiàn)甘草苷對枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽模型和電刺激喉上神經(jīng)引起的咳嗽反射模型均有明顯抑制作用。這些結果表明甘草苷的鎮(zhèn)咳作用可能是中樞性的和周圍性兼顧的。權利要求1.一種甘草苷制劑，所述甘草苷的分子式C26H30O13，分子量550，其特征在于將甘草苷單獨或與其它活性組份或輔料配合制成藥劑，制劑組成以制成1000粒計，甘草苷40g，氫氧化鈉3.2g，聚維酮15g，葡甲胺10g，微晶纖維素115g，乳糖20g。2.根據(jù)權利要求1所述的一種甘草苷制劑在制備治療急、慢性咳嗽和痰多癥狀藥物中的應用。3.根據(jù)權利要求1所述的一種甘草苷制劑，其特征在于所述的制劑劑型為膠囊劑、片劑或口服液體劑。全文摘要本發(fā)明提供一種甘草苷制劑，所述甘草苷分子式C₂₆H₃₀O₁₃，分子量550，將甘草苷單獨或與其它活性組份或輔料配合制成藥劑，制劑組成以制成1000粒計，含甘草苷40g。經(jīng)過初步的藥理實驗證實，具有較強的鎮(zhèn)咳和祛痰作用，因此，將甘草苷單獨或與其它活性組份或輔料配合制成藥劑，可用于咳嗽和痰多癥狀的改善，可在制備治療急、慢性咳嗽和痰多癥狀藥物中的應用。本發(fā)明提供的甘草苷制劑來源于天然植物，可制成保健品。本發(fā)明為臨床治療提供了毒副作用較小、療效顯著的天然鎮(zhèn)咳藥物。文檔編號A61K31/7042GK101518542SQ20091009749公開日2009年9月2日申請日期2009年4月7日優(yōu)先權日2009年4月7日發(fā)明者吳希美,睿曹,董新威,謝強敏,謝詒誠申請人:浙江大學