專利名稱：一種促進(jìn)手術(shù)傷口愈合的材料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及 一種促進(jìn)手術(shù)傷口愈合的材料及其制備方法，屬于醫(yī) 用材料領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
當(dāng)人或動物身體遭受包括拔牙在內(nèi)的各種外科手術(shù)，或包括灼傷 在內(nèi)的各種物理創(chuàng)傷時，常常造成軟組織和/或骨組織及神經(jīng)組織的 破壞和斷裂及缺損，并可造成出血和感染的機(jī)會。正常情況下，傷口
可以自然愈合和修復(fù)。傷口自然愈合和修復(fù)的過程包括封閉傷口以 限制血液流失并阻止感染；然后去除受損的組織并通過細(xì)胞吞噬作用 消滅病原微生物；繼之周圍組織中各種類型的細(xì)胞侵入傷口部位并形 成肉芽和瘢痕；最后重建瘢痕組織并改變細(xì)胞群體，以導(dǎo)致傷口的完 全愈合。
在大多數(shù)下，自然愈合過程是很有效的。但由于組織發(fā)生學(xué)上的 原因，某些組織，特別是脊髓和/或外周神經(jīng)組織，則很難修復(fù)和愈 合。另外，有些傷口往往因受病人身體素質(zhì)、創(chuàng)傷大小和嚴(yán)重程度及 并發(fā)感染等因素的影響，大多數(shù)情況下的傷口愈合需要醫(yī)療干預(yù)。
傷口感染、血液循環(huán)障礙、低蛋白癥、某些微量元素缺乏、長期 或大量的使用抗炎藥物等因素均可影響傷口的愈合。納米銀等產(chǎn)品目 前用于抗菌、促進(jìn)傷口愈合，但由于材料性質(zhì)原因容易發(fā)生重金屬過 敏，瘙癢等副作用，使得適用范圍受到較大限制。
比如，CN1228338公開了 一種用于促進(jìn)傷口組織修復(fù)的傷口覆
蓋材料，其包括膠原蛋白海綿層和含有一種或多種生長因子及其穩(wěn)定 劑的纖維素衍生物凝膠層的促進(jìn)傷口組織修復(fù)的傷口覆蓋材料。該傷
口覆蓋材料適用于促進(jìn)涉及腦組織或脊髓組織的傷口的組織修復(fù)和傷口愈合。
CN1339322公開了 一種具有促進(jìn)傷口愈合功能的材料，其由含 有能發(fā)射遠(yuǎn)紅外線的功能氧化物陶瓷納米級粉末的粘膠纖維 5-40wt。/。與95-60wt。/。棉花混紡而成。先制成多功能復(fù)合陶瓷材料的納 米級粉末，然后以粘膠作為載體，制成多功能粘膠纖維與普通纖維混 紡制得；該功能材料能發(fā)射波長為4-14微米的遠(yuǎn)紅外線，由于其發(fā) 射率為85-95%,因此制作紗布和其他敷料，當(dāng)涂敷在傷口處具有能 促進(jìn)傷口處的血液微循環(huán)，增強(qiáng)組織的活性，促進(jìn)傷口愈合的作用。
本發(fā)明的研究人員經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，將天然組織材料處理成生物修 復(fù)材料，可以將生物修復(fù)材料作為促進(jìn)傷口愈合的材料使用，能起到 很好的傷口修復(fù)效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種促進(jìn)手術(shù)傷口愈合的材料，能夠促進(jìn)傷 口的修復(fù)速度和效果，能夠防止傷口的感染，同時在傷口愈合后能夠 減少手術(shù)瘢痕。
本發(fā)明的另 一 目的是提供 一 種制備促進(jìn)手術(shù)傷口愈合材料的方法。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種促進(jìn)手術(shù)傷口愈合的材料， 其按照如下方法制成
1) 先將軟組織材料進(jìn)行去抗原處理；
2) 然后再將步驟l)處理過的材料溶解于酸性溶液、消化溶液或 者二者混合溶液中，分離出上清液，并用堿性溶液進(jìn)行中和到中性；
3) 最后加工處理成固態(tài)或液態(tài)的傷口愈合材料。
其中，所述軟組織材料釆用人或動物的片狀或膜狀軟組織或其衍 生物，主要成分包括細(xì)胞外基質(zhì)。其具體為真皮組織、皮膚組織、 腔狀組織、滑膜組織、腹膜組織、心包膜、硬脊膜、胸膜、伸筋膜、 闊肌膜或大網(wǎng)膜等。步驟1 )中軟組織的去抗原處理是為了去除軟組織材料中的抗原 成分，降低產(chǎn)品免疫性能，提高產(chǎn)品生物相容性。
本發(fā)明的去抗原處理可采用如下任意三種方法之一進(jìn)行
a)將軟組織材料用濃度為1-15% (體積百分?jǐn)?shù))的雙氧水溶液
浸泡2-32h，脫去脂肪成分，用甲醇和氯仿混合溶液浸泡5-45h，脫去
細(xì)胞成分，再進(jìn)一步用濃度為0.05-1.5% (w/v, g/ml)的胰蛋白酶溶
液處理消化1-28小時，用純水充分清洗后備用；每次浸泡溶液與軟
組織材料的用量比為1:1-10;
或b)將軟組織材料于-80。C深低溫冷凍12小時以上；
或c)將軟組織材料釆用濃度為0.5-40% (w/v， g/ml)堿性溶液
浸泡處理0.5-24小時，所述堿性溶液為氫氧化鈉或氫氧化鉀等。
真皮組織、皮膚組織優(yōu)先選擇c)方法進(jìn)行處理。腔狀組織優(yōu)先
選擇a)方法處理，其他組織可任意選擇a)、 b)、 c)方法進(jìn)行處理。 為促進(jìn)步驟2)的進(jìn)一步處理，可將軟組織去抗原處理后進(jìn)行一
下干燥，所述干燥釆用真空冷凍干燥或加熱干燥等方法。
步驟2)中，用堿性溶液處理成中性后，還再通過加入絮凝劑或
鹽析劑得可溶性細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，并用酸性溶液、消化溶液或者二者
混合溶液再次進(jìn)行純化處理。
所述絮凝劑為糖蛋白、粘多糖、纖維素或核酸等的微生物絮凝劑。 所述鹽析劑為NaCl、 KC1或鋁鹽等的無機(jī)鹽析劑。 進(jìn)行純化處理的次數(shù)為1-7次，此時便可得到純凈的可溶性細(xì)胞
外基質(zhì)蛋白。
用于溶解材料所用的酸性溶液為鹽酸、醋酸、硫酸等無機(jī)或有機(jī) 酸(如碳酸，醋酸，甲酸，苯甲酸)。
所述消化溶液為pH值為7-9的胰蛋白酶溶液或腸溶消化酶溶液等。
本發(fā)明的傷口愈合材料可以經(jīng)過不同的加工方式處理成固態(tài)或液態(tài)。
比如固態(tài)，可以按照最終使用方式及使用部位的不同，將生物材 料加工成膜狀、顆粒狀、紡絲成型的網(wǎng)孔狀或粉狀。如通過電紡絲技 術(shù)或冷凍干燥技術(shù)加工成多孔膜狀，流延法加工成膜狀，或者深低溫 粉碎或研磨法加工成粉狀。
比如液態(tài)，可以將處理成的生物材料溶于生物相容性試劑(如生 理鹽水、純化水、甘油等)、弱酸性和/或弱堿性試劑中制成溶液。
本發(fā)明的傷口愈合材料，當(dāng)為固態(tài)產(chǎn)品時，細(xì)胞外基質(zhì)可溶性蛋
白含量達(dá)70%以上，液態(tài)產(chǎn)品時，細(xì)胞外基質(zhì)可溶性蛋白濃度達(dá)8g/L 以上。
本發(fā)明釆用將軟組織材料經(jīng)過一 系列的物理、化學(xué)或生物學(xué)處理 最終得到天然生物修復(fù)材料。本發(fā)明的生物修復(fù)材料，可以促進(jìn)切口 或平面?zhèn)?(包括微創(chuàng)手術(shù)切口 )愈合，在使用過程中可以通過縫合、 貼附、涂抹或注射等外科方法固定于手術(shù)傷口，在傷口愈合過程中起 到促進(jìn)傷口修復(fù)的目的，使用方便，安全，快捷。
相對于常規(guī)的手術(shù)傷口愈合的材料，本材料的優(yōu)點(diǎn)在于能夠促進(jìn) 傷口的修復(fù)速度和效果，能夠防止傷口的感染，同時在傷口愈合后能 夠減少手術(shù)瘢痕。


圖1為使用本發(fā)明所述促進(jìn)手術(shù)傷口愈合的材料后，20天的病理 組織標(biāo)本(Masson染色，x200 );
圖2為使用本發(fā)明所述促進(jìn)手術(shù)傷口愈合的材料后，30天的病理 組織標(biāo)本(Masson染色，x200 )。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。 實(shí)施例l
取新鮮豬小腸粘膜下層(SIS) 200g,剪切后用清水徹底清洗。首先用300ml濃度為8% ( v/v)的雙氧水溶液浸泡8h進(jìn)行脫脂肪處理, 徹底清洗后，再用500ml氯仿和甲醇的混合溶液(比例為1:1)浸泡 處理5h脫去細(xì)胞。用清水徹底清洗后，用400ml濃度為0.1%(g/ml), 酸堿度為8.0的胰蛋白酶溶液處理2h脫除蛋白，徹底清洗至產(chǎn)品潔 凈后，最后將產(chǎn)品在-8(TC下預(yù)凍凍干。用超低溫粉碎機(jī)將其粉碎到 直徑為O.Olmm-lmm大小，包裝封存。 實(shí)施例2
取新鮮羊膜200g,剪切后用清水徹底清洗。首先用200ml濃度為 12%(v/v)的雙氧水溶液浸泡5h進(jìn)行脫脂肪處理，徹底清洗后，再 400ml用氯仿和甲醇的混合溶液(比例為l:2)浸泡處理15脫去細(xì)胞。 用清水徹底清洗后，用200ml濃度為0.25% (g/ml)，酸堿度為8.4的 胰蛋白酶進(jìn)行脫蛋白處理lh，徹底清洗至產(chǎn)品潔凈后，最后將產(chǎn)品 在-8(TC下預(yù)凍凍干。用超低溫粉碎機(jī)將其粉碎到直徑為O.Olmm-lmm 大小，包裝封存。 實(shí)施例3
取新鮮豬小腸粘膜下層(SIS) 300g,剪切后用清水徹底清洗。首 先用300ml濃度為15% ( v/v)的雙氧水溶液進(jìn)行脫脂肪處理lh,徹 底清洗后，再用900ml氯仿和甲醇的混合溶液(比例為1:1 )浸泡處 理2h脫去細(xì)胞。用清水徹底清洗后，用1000ml濃度為0.1%的胰蛋 白酶進(jìn)行脫蛋白處理，處理時間為28h,徹底清洗至產(chǎn)品潔凈后，用 濃度為0.25% (g/ml)，酸堿度為8.4的胰蛋白酶溶液將其溶解3天， 將懸浮溶液分離出上清液。用電紡絲設(shè)備紡絲成形為平面膜狀材料， 釆用對壓力為20kV，使用內(nèi)徑為0.5mm對噴絲頭，噴絲頭距收集板 距離為28cm。其中細(xì)胞外基質(zhì)可溶性蛋白含量達(dá)81%。 實(shí)施例4
取新鮮羊膜500g，剪切后用清水徹底清洗。首先用500ml濃度為 15。/。(v/v)的雙氧水溶液進(jìn)行脫脂肪處理15h，徹底清洗后，再用800ml氯仿和甲醇的混合溶液(比例為1:3)浸泡處理45h脫去細(xì)胞。用清 水徹底清洗后，用1600ml濃度為0.25% ( g/ml)的胰蛋白酶進(jìn)行脫 蛋白處理5h，徹底清洗至產(chǎn)品潔凈后，用醋酸溶液將其溶解5天， 將懸浮溶液分離出上清液。用電紡絲設(shè)備紡絲成形為平面膜狀材料， 釆用對壓力為20kV,使用內(nèi)徑為0.6mm對噴絲頭，噴絲頭距收集板 對距離為45cm。其中細(xì)胞外基質(zhì)可溶性蛋白含量達(dá)83%。 實(shí)施例5
取實(shí)施例1中處理得到的脫細(xì)胞SIS粉末狀材料2g，將其溶解于 45ml濃度為l%(v/v)的醋酸中。待溶解后向其中加入NaOH溶液 將溶液pH值調(diào)節(jié)至中性，離心分離得到上清液。向上清液中滴加濃 度為5% ( g/ml)的NaCl溶液作為絮凝劑，離心分離得到沉淀物，該 沉淀物為可溶性細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，用醋酸純化3次得到促進(jìn)傷口修復(fù) 材料粉末狀顆粒。其中細(xì)胞外基質(zhì)可溶性蛋白含量達(dá)87%。 實(shí)施例6
取實(shí)施例2中處理得到的脫細(xì)胞羊膜粉末狀材料2g,將其溶解于 55ml濃度為2.5% (g/ml)的鹽酸中。待溶解后向其中加入NaOH溶 液將溶液pH值調(diào)節(jié)至中性，離心分離得到上清液。向上清液中滴加 濃度為10% ( g/ml)的NaCl溶液作為絮凝劑，離心分離得到沉淀物， 該沉淀物為可溶性細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，用鹽酸純化3次得到促進(jìn)傷口修 復(fù)材料，用生理鹽水將其溶解到濃度為50mg/g，瓶裝封口。其中細(xì) 胞外基質(zhì)可溶性蛋白濃度達(dá)10g/L。 實(shí)施例7
取新鮮羊膜500g，剪切后用清水徹底清洗。首先用濃度為10% (g/ml)的氫氧化鈉溶液650ml (溶液與材料體積比為1:2)浸泡5h 進(jìn)行脫脂肪去抗原處理，徹底清洗至產(chǎn)品潔凈后，最后將產(chǎn)品在-80 °C條件下預(yù)凍并進(jìn)行冷凍干燥。用超低溫粉碎機(jī)將其粉碎到直徑為 O.Olmm-lmm大小，包裝封存。然后按實(shí)施例6進(jìn)行處理成促進(jìn)傷口 修復(fù)材料。實(shí)施例8
取新鮮羊膜500g，剪切后用清水徹底清洗潔凈后，最后將產(chǎn)品在 -S(TC條件深低溫冷凍24小時進(jìn)行去抗原處理。取出材料并冷凍干燥 后，按照1:3的用量比加入濃度為0.25% (g/ml)，酸堿度為8.4的胰 蛋白酶溶液450ml溶解5天后，離心分離出清液，將溶液在37。C水 洛搖床中濃縮后，經(jīng)過冷凍干燥得到可溶性細(xì)胞外基質(zhì)蛋白粉末。其 中細(xì)胞外基質(zhì)可溶性蛋白含量達(dá)82%。 試驗(yàn)例1
以實(shí)施例4制備得到的電紡絲羊膜材料為例。取長白小豬，在豬 背部左右兩側(cè)分別做4x4cm2大小的皮膚缺損9個，深達(dá)深筋膜。每 側(cè)背部皮膚缺損隨機(jī)分組。對照組空白，僅用生理鹽水紗布覆蓋； 實(shí)驗(yàn)組實(shí)施例4制備得到的電紡絲羊膜材料貼附于創(chuàng)面表面；術(shù)后 20天、30天處死動物，取病理組織標(biāo)本，如圖1和圖2所示。
從圖中可以看出，動物皮膚在愈合過程中實(shí)驗(yàn)組對創(chuàng)面愈合率明 顯高于對照組，實(shí)驗(yàn)組羊膜材料緊密貼附于創(chuàng)傷表面，膠原纖維與新 生皮膚表面平行，特別是中央部分，粘附更緊密，羊膜無血管化，創(chuàng) 面周緣有新生上皮向創(chuàng)面中央方向生長。有上皮覆蓋的區(qū)域炎性細(xì)胞 較少，而無上皮覆蓋的區(qū)域有較多炎性細(xì)胞，創(chuàng)面表面與脫細(xì)胞羊膜 之間有一層薄痂，無覆蓋上皮的區(qū)域?yàn)槿庋拷M織，含有較多的毛細(xì)血 管。有少量細(xì)膠原纖維分布于創(chuàng)面組織內(nèi)。術(shù)后30天，實(shí)驗(yàn)組中大 部分被創(chuàng)面上皮覆蓋，皮下組織內(nèi)炎性細(xì)胞、毛細(xì)血管數(shù)量較術(shù)后 20天減少。在此可以說明用本發(fā)明所述對促進(jìn)手術(shù)傷口愈合的新型 材料覆蓋皮膚缺損可以有效提高創(chuàng)面愈合率，減少炎癥反應(yīng)，控制皮 下組織及肉芽組織中細(xì)胞增殖和凋亡，使膠原纖維有序排列的作用， 減少創(chuàng)面組織的出血和滲出，達(dá)到較好的治療效果。
雖然，上文中已經(jīng)用 一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳 盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本 領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ) 上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1. 一種促進(jìn)手術(shù)傷口愈合材料的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟1)先將軟組織材料進(jìn)行去抗原處理；2)然后再將步驟1)處理過的材料溶解于酸性溶液、消化溶液或者二者混合溶液中，分離出上清液，并用堿性溶液進(jìn)行中和到中性；3)最后加工處理成固態(tài)或液態(tài)的傷口愈合材料。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述軟組織材料釆用人或動物的片狀或膜狀軟組織或其衍生物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述軟組織為真皮組織、皮膚組織、腔狀組織、滑膜組織、腹膜組織、心包膜、硬脊膜、胸膜、伸筋膜、闊肌膜或大網(wǎng)膜。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟1 )所述軟組織材料去抗原處理釆用如下任意一種方法進(jìn)行a)將軟組織材料用濃度為1-15%的雙氧水溶液浸泡2-32h，脫去脂肪成分，用甲醇和氯仿混合溶液浸泡5-45h,脫去細(xì)胞成分，再進(jìn)一步用濃度為0.05-1.5%的胰蛋白酶溶液處理消化1-28小時，用純水充分清洗后備用；每次浸泡溶液與軟組織材料的用量比為1:1-10;或b)將軟組織材料于-8CTC深低溫冷凍12小時以上；或c)將軟組織材料釆用濃度為0.5-40%堿性溶液浸泡處理0.5-24小時。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l-4任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟2)中，用堿性溶液處理成中性后，還再通過加入絮凝劑或鹽析劑得可溶性細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，并用酸性溶液、消化溶液或者二者混合溶液再次進(jìn)行純化處理。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述絮凝劑為糖蛋白、粘多糖、纖維素或核酸；所述鹽析劑為NaCl、 KC1或鋁鹽。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l-6任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟2) 中所述酸性溶液為鹽酸、醋酸或硫酸；所述消化溶液為pH值為7-9 的胰蛋白酶溶液或腸溶消化酶溶液。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l-7任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟3)中所述固態(tài)為加工處理成膜狀、顆粒狀、紡絲成型的網(wǎng)孔狀或粉狀。
9. 根據(jù)權(quán)利要求l-8任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟3) 中所述液態(tài)，釆用將處理成的生物材料溶于生物相容性溶液、弱酸性 和/或弱堿性試劑中制成溶液。
10. 由權(quán)利要求l-9任意一項(xiàng)所述方法制備的促進(jìn)手術(shù)傷口愈合 的材料。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種促進(jìn)手術(shù)傷口愈合的材料，其采用將來源于人和/或動物的片狀或膜狀軟組織或其衍生物，經(jīng)過一系列的物理、化學(xué)或生物學(xué)處理最終得到天然生物修復(fù)材料。本發(fā)明的生物修復(fù)材料可以表現(xiàn)為固態(tài)或液態(tài)，通過縫合、貼附、涂抹或注射等外科方法固定于手術(shù)傷口，在傷口愈合過程中起到促進(jìn)傷口修復(fù)的目的，使用方便，安全，快捷。相對于常規(guī)的手術(shù)傷口的愈合，本材料的優(yōu)點(diǎn)在于能夠促進(jìn)傷口的修復(fù)速度和效果，能夠防止傷口的感染，同時在傷口愈合后能夠減少手術(shù)瘢痕。
文檔編號A61L15/40GK101507831SQ20091008019
公開日2009年8月19日 申請日期2009年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月25日
發(fā)明者李次會 申請人:北京大清生物技術(shù)有限公司