專(zhuān)利名稱(chēng)：一種中藥組合物中四種成分的含量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種中藥組合物中四種成分的含量測(cè)定方法，該方法采用高效液相 色譜法同時(shí)測(cè)定芍藥苷、馬錢(qián)苷、小檗堿、丹酚酸B的含量。
背景技術(shù)：
中藥是我國(guó)傳統(tǒng)防治疾病的重要武器，千百年來(lái)，在我國(guó)人民的健康生活中發(fā)揮 著重大的作用。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，傳統(tǒng)中藥也面臨著現(xiàn)代化的問(wèn)題。近年來(lái)，全世 界對(duì)中藥的認(rèn)識(shí)也逐漸加深，開(kāi)始重視，這表明中藥國(guó)際市場(chǎng)的快速發(fā)展時(shí)期已經(jīng)來(lái)臨。當(dāng) 前，中藥要進(jìn)入世界市場(chǎng)，實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化，首當(dāng)其沖是其質(zhì)量的控制，而含量測(cè)定是質(zhì)量 控制最關(guān)鍵的部分。由于中成藥中化學(xué)成分十分復(fù)雜，因此在檢測(cè)前需要提取、分離、精制， 又由于所含有效成分量甚微，故目前多采用色譜、光譜法進(jìn)行檢測(cè)。傳統(tǒng)中藥含量測(cè)定儀薄 層掃描為主，薄層掃描的方法定量存在較大的誤差?，F(xiàn)階段的中藥質(zhì)量控制模式基本上是借鑒化學(xué)藥品質(zhì)量控制的模式，含量測(cè)定作 為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的要害內(nèi)容之一，對(duì)于有效成分制劑而言，可在很大程度上控制藥品質(zhì) 量，但對(duì)于復(fù)方制劑采用多種不同提取方式或多條提取路線的工藝以及多個(gè)有效部位制成 的新藥而言，僅建立某單一成分的含量測(cè)定在很大程度上帶有較大的片面性。雖然研究者 越來(lái)越熟悉到中藥新藥工藝過(guò)程的控制對(duì)于質(zhì)量控制的重要性，但是多數(shù)制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 仍然不能全面反映制劑的過(guò)程控制結(jié)果，即難以全面控制中藥制劑的質(zhì)量。因此，從中藥質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)要求方面，全面提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍然有很大的發(fā)展空間。因此，從中藥研究的 技術(shù)要求方面，將來(lái)的新藥研究有必要在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立多指標(biāo)含量測(cè)定，目的之一是實(shí) 現(xiàn)對(duì)多數(shù)成份指標(biāo)的控制，并將對(duì)中藥制劑工藝過(guò)程的控制直接在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中得到體現(xiàn)。 即處方中含有多個(gè)明確有效成分的，或者處方中藥味分別按不同路線提取等各種不同情況 下，均有必要研究建立多個(gè)指標(biāo)的含量測(cè)定。但是，這就對(duì)質(zhì)量控制的效率帶來(lái)了挑戰(zhàn)，如 果均采用快捷的薄層掃描定量，則準(zhǔn)確度會(huì)較差，如果均采用色譜法測(cè)定，則非常耗費(fèi)時(shí)間 并且顯著增加質(zhì)量控制的成本，在同一色譜系統(tǒng)中同時(shí)測(cè)定幾種成分，則是比較理想的質(zhì) 量控制方法。專(zhuān)利ZL02146572. X公開(kāi)了一種治療冠心病室性早搏的藥物組合物及其制備方 法，本專(zhuān)利申請(qǐng)就是針對(duì)該中藥組合物進(jìn)行的質(zhì)量控制方法研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥組合物四種有效成分的含量測(cè)定方法。該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成人參45-180份、麥冬50-200份、山茱萸125-450份、丹參125-450份、炒酸棗仁 95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鱉蟲(chóng)；35_150份、甘松45-200份、黃連25-90 份、南五味子35-150份、龍骨75-300份。在質(zhì)量控制方面，本發(fā)明提供的測(cè)定方法可同時(shí)測(cè)定該中藥組合物的芍藥苷、馬錢(qián)苷、小檗堿和丹酚酸B四種成分的含量，方法簡(jiǎn)便可行、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。本發(fā)明的含量測(cè)定方法如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱為C18柱，規(guī)格為250mmX4. 6mm，流動(dòng)相A為0. 18%甲酸/甲醇，B為 0. 30%甲酸/水，洗脫梯度0 15min，流動(dòng)相A由5 %增至20% ;2 7min，流動(dòng)相A保 持20% ;7 37min，流動(dòng)相A由20%增至；37 47min，流動(dòng)相A由增至42% ； 47 50min, A保持42% ；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，流速:1. OmL/min，柱溫30-50°C ；芍藥苷、馬 錢(qián)苷、小檗堿、丹酚酸B與各自相鄰峰的分離度均大于1. 5 ；對(duì)照品溶液的配制精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品、馬錢(qián)苷對(duì)照品、小檗堿對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品，加甲醇 分別制成每Iml含芍藥苷0. IOmg,馬錢(qián)苷0. 04mg,小檗堿0. 08mg,丹酚酸BO. 16mg的混合溶 液，即得；供試品溶液配制取本中藥組合物制劑，必要時(shí)去除膠囊殼或包衣，研細(xì)，充分混勻，取0.8g，精密稱(chēng) 定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲30min，放冷，用70%甲 醇補(bǔ)足重量，搖勻，取aiil，0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定方法將對(duì)照品混合溶液和供試品溶液分別注入液相色譜儀，對(duì)照品混合溶液進(jìn)樣量 10 μ L，供試品液進(jìn)樣量為20 μ L，記錄色譜峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。采用本發(fā)明方法測(cè)定含量，所述中藥組合物中原料藥的重量比優(yōu)選為人參89份、麥冬112份、山茱萸2 份、丹參2 份、炒酸棗仁186份、桑寄生186 份、赤芍89份、土鱉蟲(chóng)75份、甘松89份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份?；蛘呷藚?5份、麥冬112份、山茱萸2 份、丹參225份、炒酸棗仁186份、桑寄生186 份、赤芍89份、甘松45份、土鱉蟲(chóng)35份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份?；蛘呷藚?0份、麥冬135份、山茱萸270份、丹參200份、炒酸棗仁150份、桑寄生150 份、赤芍100份、土鱉蟲(chóng)100份、甘松95份、黃連60份、南五味子75份、龍骨150份。上述優(yōu)選的中藥組合物采用本方法測(cè)定含量均能取得良好的精密度和準(zhǔn)確性。為使本發(fā)明含量測(cè)定方法得以實(shí)現(xiàn)，本發(fā)明中藥組合物需要制成成型的制劑，為 此，有必要對(duì)其活性成分進(jìn)行提取。該中藥組合物的活性成分由下列步驟制成a)人參加70%乙醇回流提取三次，合并提取液，濾過(guò)，濃縮，烘干，粉碎成的細(xì)粉；b)南五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松共同加70%乙醇回流提取3次，合并提取 液，濾過(guò)，濃縮的浸膏；c) 土鱉蟲(chóng)粉碎成的細(xì)粉；d)麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水煎煮2次，合并提取液，濃縮的浸膏。e)將步驟b)與d)所得浸膏合并，加入步驟C)所得的藥物細(xì)粉，烘干，粉碎成細(xì) 粉，加入步驟a)所得藥物細(xì)粉，混勻即得該中藥組合物活性成分。
本發(fā)明的應(yīng)用中，所述中藥組合物制劑劑型為膠囊劑、片劑、沖劑或散劑中的一 種，為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時(shí)加入藥學(xué)可接受的輔料，例如填充劑、崩 解劑、潤(rùn)滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑等，填充劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、 乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等，崩解劑包括淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羧 甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等，潤(rùn)滑劑包 括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等，助懸劑包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶 纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等，粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲 基纖維素等，甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矯味劑包括甜味 劑及各種香精，防腐劑包括尼泊金類(lèi)、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類(lèi)、苯扎溴銨、醋酸 氯乙定、桉葉油等。優(yōu)選的，本發(fā)明膠囊劑的制備方法為(1)、人參加8倍量70%乙醇回流提取三次，第一次3小時(shí)，以后每次2小時(shí)，合并 提取液，濾過(guò)，回收乙醇，濃縮，烘干，粉碎成80目粉；(2)、五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松加8倍量70%乙醇回流提取3次，合并提取 液，濾過(guò)，回收乙醇；(3)、土鰲蟲(chóng)粉碎成80目粉；0)、麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水9倍量煎煮2次，合并提取液，濾過(guò)， 與步驟O)的提取液合并，濃縮，與步驟(1)、(3)粉混勻，烘干，粉碎成80目粉，裝膠囊即得。為證實(shí)本發(fā)明含量測(cè)定方法的效果，發(fā)明人進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行優(yōu)選，并對(duì)最 終確定的測(cè)定方法進(jìn)行了科學(xué)的驗(yàn)證，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)如下1儀器與材料高效液相色譜儀(Waters U695)、紫外檢測(cè)器(Waters 2489)、KQ3200DE型醫(yī)用 數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)110736-200933， 中國(guó)藥品生物制品檢定所)、馬錢(qián)苷對(duì)照品(批號(hào)110706-200505，中國(guó)藥品生物制品檢定 所)、鹽酸小檗堿對(duì)照品(批號(hào)110713-200208，中國(guó)藥品生物制品檢定所)、丹酚酸B對(duì) 照品(批號(hào)111562-200807，中國(guó)藥品生物制品檢定所)，甲醇為色譜純，水為重蒸水，其 余試劑為分析純。本發(fā)明中藥組合物膠囊劑為石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司按照實(shí)施例1 制劑的制備方法制得的(批號(hào):090247、090316、090242、09(^45、090247、090312、090307、 090240、090239、090241、090311)。2方法與結(jié)果2. 1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱AgilentExtend C18 Q50mmX 4. 6mm，5 μ m)。流動(dòng)相 A 為 0· 18% 甲酸 / 甲 醇，B 為 0. 30% 甲酸 / 水，洗脫梯度0 15min，20% ) ；2 7min，A(20% ) ；7 37min, A(20%^ 35% ) ；37 47min，A(35% — 42% ) ；47 50min，)。檢測(cè)波長(zhǎng) 為230nm，流速1. OmL ·π η-1，柱溫35°C。在此色譜條件下，得到芍藥苷、馬錢(qián)苷、小檗堿、 丹酚酸B混合對(duì)照品色譜圖及本發(fā)明中藥組合物膠囊劑供試品色譜圖，芍藥苷、馬錢(qián)苷、小 檗堿、丹酚酸B的保留時(shí)間分別為16.9、18. 1,29.9,45. 2min，各自相鄰峰的分離度均大于 1. 5。6
2. 2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品、馬錢(qián)苷對(duì)照品、小檗堿對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品，加甲醇 分別制成每Iml含芍藥苷0. 1004mg,馬錢(qián)苷0. 0404mg,小檗堿0. 0824mg,丹酚酸BO. 1610mg 的混合溶液，即得。2. 3供試品溶液的制備取本品20粒，傾出內(nèi)容物，充分混勻，取0. 8g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加 入70 %甲醇50ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲30min，放冷，用70 %甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，取aiil， 0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾，即得。2. 4線性化范圍試驗(yàn)分別精密吸取芍藥苷(0. 1004mg/ml)，馬錢(qián)苷(0. 0404mg/ml)，小檗堿(0. 0824mg/ ml)，丹酚酸B (0. 1610mg/ml)對(duì)照品混合溶液各4、6、8、10、12、14 μ L注入液相色譜儀，記錄 色譜峰面積，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1，可見(jiàn)該方法在試驗(yàn)范圍內(nèi)線性 關(guān)系良好。表1標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物中四種成分的含量測(cè)定方法，該四種成分分別為芍藥苷、馬錢(qián)苷、小 檗堿、丹酚酸B，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成人參45-180份、麥冬50-200份、山茱萸125-450份、丹參125-450份、炒酸棗仁95-400 份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鱉蟲(chóng)35-150份、甘松45-200份、黃連25-90份、南 五味子35-150份、龍骨75-300份，其特征在于，該方法采用高效液相色譜的方法進(jìn)行測(cè)定， 色譜條件及測(cè)定方法如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱為C18柱，規(guī)格為250mmX 4. 6mm,流動(dòng)相A為0. 18%甲酸/甲醇，B為0. 30%甲 酸/水，洗脫梯度0 15min，流動(dòng)相A由5%增至20% ;2 7min，流動(dòng)相A保持20% ;7 37min，流動(dòng)相A由20%增至；37 47min，流動(dòng)相A由增至42% ；47 50min，A 保持42% ；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，流速1. OmL/min，柱溫30-50°C ；芍藥苷、馬錢(qián)苷、小檗堿、丹 酚酸B與各自相鄰峰的分離度均大于1. 5 ；對(duì)照品溶液的配制精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品、馬錢(qián)苷對(duì)照品、小檗堿對(duì)照品、丹酚酸B對(duì)照品，加甲醇分別 制成每Iml含芍藥苷0. IOmg,馬錢(qián)苷0. 04mg,小檗堿0. 08mg,丹酚酸BO. 16mg的混合溶液， 即得；供試品溶液配制取本中藥組合物制劑，必要時(shí)去除膠囊殼或包衣，研細(xì)，充分混勻，取0. 8g，精密稱(chēng)定， 置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲30min，放冷，用70 %甲醇 補(bǔ)足重量，搖勻，取aiil，0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾，即得；測(cè)定方法將對(duì)照品混合溶液和供試品溶液分別注入液相色譜儀，對(duì)照品混合溶液進(jìn)樣量10 μ L， 供試品液進(jìn)樣量為20 μ L，記錄色譜峰面積，外標(biāo)法計(jì)算含量。
2.如權(quán)利要求1所述的含量測(cè)定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原 料藥制成人參89份、麥冬112份、山茱萸2Μ份、丹參2Μ份、炒酸棗仁186份、桑寄生186份、 赤芍89份、土鱉蟲(chóng)75份、甘松89份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。
3.如權(quán)利要求1所述的含量測(cè)定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原 料藥制成人參45份、麥冬112份、山茱萸2Μ份、丹參225份、炒酸棗仁186份、桑寄生186份、 赤芍89份、甘松45份、土鱉蟲(chóng)35份、黃連45份、南五味子67份、龍骨149份。
4.如權(quán)利要求1所述的含量測(cè)定方法，其特征在于，該中藥組合物由如下重量份的原 料藥制成人參90份、麥冬135份、山茱萸270份、丹參200份、炒酸棗仁150份、桑寄生150份、 赤芍100份、土鱉蟲(chóng)100份、甘松95份、黃連60份、南五味子75份、龍骨150份。
5.如權(quán)力要求1-4所述的含量測(cè)定方法，其特征在于，該中藥組合物的活性成分由下 列步驟制成a)人參加70%乙醇回流提取三次，合并提取液，濾過(guò)，濃縮，烘干，粉碎成的細(xì)粉；b)南五味子、山茱萸、丹參、黃連、甘松共同加70%乙醇回流提取3次，合并提取液，濾過(guò)，濃縮的浸膏；c)土鱉蟲(chóng)粉碎成的細(xì)粉；d)麥冬、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、龍骨加水煎煮2次，合并提取液，濃縮的浸膏；e)將步驟b)與d)所得浸膏合并，加入步驟c)所得的藥物細(xì)粉，烘干，粉碎成細(xì)粉，加 入步驟a)所得藥物細(xì)粉，混勻即得該中藥組合物活性成分。
6.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的含量測(cè)定方法，其特征在于，所述中藥組合物的制 劑劑型為膠囊劑、片劑、沖齊U、散劑或口服液制劑中的一種。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種中藥組合物中四種成分的含量測(cè)定方法，該中藥組合物由人參、麥冬、山茱萸、丹參、炒酸棗仁、桑寄生、赤芍、土鱉蟲(chóng)、甘松等中藥組成，臨床用于治療心律失常。本發(fā)明采用高效液相的方法同時(shí)測(cè)定該中藥組合物的芍藥苷、馬錢(qián)苷、小檗堿、丹酚酸B的含量，方法簡(jiǎn)便可行、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用來(lái)評(píng)價(jià)該中藥組合物的質(zhì)量。
文檔編號(hào)A61K35/64GK102038856SQ20091007566
公開(kāi)日2011年5月4日 申請(qǐng)日期2009年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月13日
發(fā)明者陳玉平 申請(qǐng)人:北京以嶺藥業(yè)有限公司