專利名稱：一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測定方法，特別地，涉 及一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸含量的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定的 方法。
背景技術(shù)：
第ZL200410012347. 4號專利申請中公開了 一種中藥組合物，該中藥組合物由 如下重量份的原料藥制成黃芪120-360、女貞子100-300、人參30-95、靈芝30-95、莪 術(shù)65-195、白術(shù)30-90、半枝蓮65-195、絞股藍120-360、茯苓30-95、雞內(nèi)金15-45、蛇莓 65-195、白英65-195、茵陳65-195、徐長卿65-195、土鱉蟲10-30、白花蛇舌草65-195。具有 健脾益腎、化瘀解毒的功效，適用于不宜手術(shù)的脾腎兩虛、瘀毒內(nèi)阻型原發(fā)性肝癌的輔助治 療。該中藥組合物中含有女貞子，女貞子中含有齊墩果酸和熊果酸，為有效控制其質(zhì)量，需 要建立該中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸含量的測定方法。齊墩果酸和熊果酸含量的測定往往采用高效液相色譜法，如相延英等的論文[相 延英，楊光.常用中藥中齊墩果酸和熊果酸的含量測定.[J]中國醫(yī)院藥學(xué)雜志.2004， 24(5)316-318]中公開了一種枇杷葉中齊墩果酸和熊果酸的含量測定方法，該法色譜條件 為0DS C18色譜柱，甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(90 10 0.03 0. 06)為流動相；檢 測波長為210nm ；流速0. 6mL/min ；石敏娟等的論文[石敏娟，朱衛(wèi)豐，劉耀明.苦丁茶中的 齊墩果酸和熊果酸的含量測定.[J]中醫(yī)藥學(xué)報.2007，35 (2) 45-46]中公開了苦丁茶中齊 墩果酸和熊果酸的含量測定方法，該法色譜條件為色譜柱為HypersilODS-2 C18(5um, 250mmX4. 6mm)色譜柱；柱溫30°C;流動相甲醇_0. 磷酸水溶液(85 15)；檢測波長 210nm ；流速0. 6ml/min。由于中藥組合物成份復(fù)雜，因此，不同中藥組合物難以采用相同 的方法測定，不同的中藥組合物需要根據(jù)其組合物特點建立其特有的檢測方法，且需要嚴 格的方法學(xué)研究，才可以用于控制該中藥組合物的含量測定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸含量的測定方法。所述中藥組合物是由如下重量份的原料藥制成黃芪120-360 女貞子 100-300 人參 30-95莪術(shù)65-195 白術(shù) 30-90半枝蓮 65-195茯等30-95 雞內(nèi)金 15-45 蛇莓 65-195茵陳65-195 徐長卿 65-195 土鱉蟲 10-30本發(fā)明含量測定方法為高效液相色譜_蒸發(fā)光散射檢測法，測定條件如下色譜條件和檢測條件色譜柱為反相色譜柱，流動相由室溫下60-80體積份的甲 醇、10-30體積份的乙腈和5-15體積份的0. 5%冰乙酸組成，流速為0. 15-1. OOml/min，蒸發(fā) 光散射檢測器的漂移管溫度為75-85°C ；
靈芝30-95 絞股藍120-360 白英65-195 白花蛇舌草65-195 ；
供試品溶液的制備取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細，取0．5一0．7g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇l0一50ml，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理20分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；
對照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對照品和熊果酸對照品適量，加無水乙醇制成每lml約含齊墩果酸0．05一0．15mg和熊果酸0．03一0．09mg的溶液，即得。
優(yōu)選地，本發(fā)明含量測定方法中色譜條件和檢測條件為
色譜柱為規(guī)格為4．6mm×250mm1填料粒徑為5 u m的C18柱，流動相由室溫下70體積份的甲醇120體積份的乙腈和l0體積份的0．5％的冰乙酸混合而成，流速為0．35ml／min，理論塔板數(shù)按齊墩果酸峰計算不得低于10000；蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為80℃。
優(yōu)選地，本發(fā)明含量測定方法中供試品溶液的制備方法為
取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細，取0．6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理20分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
優(yōu)選地，本發(fā)明含量測定方法中對照品溶液的制備方法為
精密稱取齊墩果酸對照品和熊果酸對照品適量，加無水乙醇制成每lml約含齊墩果酸0．10mg和熊果酸0．06mg的溶液，即得。
優(yōu)選地，本發(fā)明含量測定方法中，所述中藥組合物原料藥的重量份比例為
黃芪120女貞子300人參30靈芝95莪術(shù)65白術(shù)90
半枝蓮65絞股藍360茯苓30雞內(nèi)金45蛇莓65
白英195茵陳65徐長卿195土鱉蟲l0白花蛇舌草195
或者
黃芪360女貞子l00人參95靈芝30莪術(shù)195 白術(shù)30
半枝蓮195 絞股藍120茯苓95雞內(nèi)金15蛇莓195
白英65茵陳195徐長卿65土鱉蟲30白花蛇舌草65
或者
黃芪250女貞子200人參65靈芝65莪術(shù)132 白術(shù)64
半枝蓮128 絞股藍256茯苓65雞內(nèi)金30蛇莓128
白英128茵陳128徐長卿128白花蛇舌草128土鱉蟲20。
本發(fā)明含量測定方法中，所述中藥組合物的活性成分是由以下步驟制成的
(1)1按照原料藥重量比例稱取中藥材，淨(jìng)選；
(2)1女貞子1人參加6一l0倍量50一90％乙醇提取卜3次，每次卜4小時，合并提取液，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，藥渣備用；
(3)1莪術(shù)1白術(shù)1徐長卿加4—8倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘渣及水溶液備用；
(4)、土鱉蟲、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細粉；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(1)中所 得人參、女貞子的醇提后殘渣，及步驟(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿提油后殘渣及水溶液 合并，加7-10倍量水，加熱煎煮1-3次，每次1-3小時，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人 參、女貞子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；步驟⑷所得粉碎粉、步驟(3)所得揮發(fā)油與步驟(5)所得的干膏粉共同構(gòu)成該 中藥組合物的活性成分。本發(fā)明含量測定方法中，適用于所述中藥組合物的任何口服或非口服的固體制 劑，所述中藥組合物制劑劑型優(yōu)選為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑或丸劑。本發(fā)明中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測定方法，適用于使用任何方法制 備成的上述劑型固體制劑。優(yōu)選為由如下方法制成的膠囊劑(1)、按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；(2)、人參、女貞子，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時，第二次2小 時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，人參、女貞子殘渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿，合并提取揮發(fā)油，提油時間不少于8小時，揮發(fā)油另器收 集，殘渣及水溶液備用；(4)、土鱉蟲、雞內(nèi)金兩味動物藥，水洗，60°C烘干，與茯苓合并，粉碎成100目粉， 滅菌后備用；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(2)中所 得人參、女貞子的醇提后殘渣，及步驟(3)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿提油后殘渣及水溶液 合并，加9倍量水，加熱煎煮2次，每次2小時，合并煎煮液，加入步驟(2)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成相對密度1. 20-1. 25的清膏，干燥，粉碎，備用；將步驟(5)所得干膏粉加入適當藥學(xué)上可接受的輔料制粒；(6)、將步驟(3)中所得揮發(fā)油噴入步聚(4)中所得茯苓、土鱉蟲、雞內(nèi)金的細粉 中，混勻，與步驟(5)中中所得的顆粒混勻，密閉半小時，裝膠囊即得。本發(fā)明方法測定齊墩果酸和熊果酸的含量從線性關(guān)系，溶液穩(wěn)定性，重現(xiàn)性試驗， 回收試驗和空白干擾方面評價該方法的可行性，評價方法如下1、儀器與試藥高效液相色譜儀(Waters) ；Alltech-500型蒸發(fā)光散射檢測器；齊墩果酸對照品 和熊果酸對照品(含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所)；本發(fā)明藥物(石家莊以嶺 藥業(yè)股份有限公司提供)；甲醇、乙腈均為色譜純，水為雙蒸餾水，其它試劑均為分析純。2、線性關(guān)系考察精密吸取齊墩果酸對照品溶液2、5、10、20iU，注入高效液相色譜儀中，進行測定。 以進樣量的自然對數(shù)為橫坐標，峰面積積分值的自然對數(shù)為縱坐標，繪制標準曲線，進行線 性回歸，計算相關(guān)系數(shù)，相關(guān)系數(shù)應(yīng)該大于0. 99。精密吸取熊果酸對照品溶液2、5、10、20iU，注入高效液相色譜儀中，進行測定。以 進樣量的自然對數(shù)為橫坐標，峰面積積分值的自然對數(shù)為縱坐標，繪制標準曲線，進行線性 回歸，計算相關(guān)系數(shù)，相關(guān)系數(shù)應(yīng)該大于0. 99。
3、溶液穩(wěn)定性試驗精密吸取同一供試品溶液，每隔一定時間進樣，測定峰面積，結(jié)果在測定的24小 時內(nèi)，計算RSD值，齊墩果酸峰面積RSD值和熊果酸峰面積RSD值為均應(yīng)小于5%。4、重復(fù)性試驗取同一批樣品，分別取高、中、低三個樣品量，每個樣品量3份，按供試品溶液的制 備方法，分別進行提取，制備，測定結(jié)果計算齊墩果酸的RSD和熊果酸的RSD均應(yīng)小于3%。5、回收率試驗采用加樣回收實驗，取同一批該中藥組合物9份，分別加入低、中、高三個濃度的 齊墩果酸對照品和熊果酸對照品溶液，按供試品溶液的制備方法，進行提取，制備，測定，計 算回收率。計算齊墩果酸和熊果酸的平均回收率和RSD，RSD值應(yīng)小于3%。6、空白試驗按本發(fā)明中中藥物組合物的制備方法制成不含女貞子的模擬制劑，按供試品溶液 的制備方法制成空白對照品溶液，按含量測定方法進行測定，結(jié)果表明其它組分對測定無 干擾。為更好的理解本發(fā)明中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸含量測定方法的技術(shù)方案， 下面通過以下實施例的實施，不對本發(fā)明方法構(gòu)成任何限制。
具體實施例方式實施例1為了便于本發(fā)明方法的實施，將該中藥組合物制備為膠囊劑處方黃芪120g 女貞子300g人參30g 靈芝95g 莪術(shù)65g 白術(shù)90g半枝蓮65g 絞股藍360g茯苓30g 雞內(nèi)金45g蛇莓65g白英195g 茵陳65g 徐長卿195g 土鱉蟲10g 白花蛇舌草195g制備方法(1)、按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；(2)、人參、女貞子，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時，第二次2小 時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，人參、女貞子殘渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿，合并提取揮發(fā)油，提油時間不少于8小時，揮發(fā)油另器收 集，殘渣及水溶液備用；(4)、土鱉蟲、雞內(nèi)金兩味動物藥，水洗，60°C烘干，與茯苓合并，粉碎成100目粉， 滅菌后備用；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(2)中所 得人參、女貞子的醇提后殘渣，及步驟(3)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿提油后殘渣及水溶液 合并，加9倍量水，加熱煎煮2次，每次2小時，合并煎煮液，加入步驟(2)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成相對密度1. 20-1. 25的清膏，干燥，粉碎，備用；將步驟(5)所得干膏粉加入適當藥學(xué)上可接受的輔料制粒；(6)、將步驟(3)中所得揮發(fā)油噴入步聚(4)中所得茯苓、土鱉蟲、雞內(nèi)金的細粉 中，混勻，與步驟(5)中中所得的顆粒混勻，密閉半小時，裝膠囊即得。
色譜條件和檢測條件色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX250mm、填料粒徑為5iim的C18 柱，流動相由室溫下70體積份的甲醇、20體積份的乙腈和10體積份的0. 5%的冰乙酸混合 而成，流速為0. 35ml/min，理論板數(shù)按齊墩果酸峰計算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測器 的漂移管溫度為80°C。供試品溶液的制備方法取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細，取0. 6g，精 密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理20分 鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對照品溶液的制備方法精密稱取齊墩果酸對照品和熊果酸對照品適量，加無水 乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0. 10mg和熊果酸0. 06mg的溶液，即得。評價結(jié)果表1評價結(jié)果表 實施例2為了便于本發(fā)明方法的實施，將該中藥組合物制備為片劑處方黃芪360g 女貞子100g人參95g 靈芝30g 莪術(shù)195g 白術(shù)30g半枝蓮195g 絞股藍120g茯苓95g 雞內(nèi)金15g蛇莓195g白英65g 茵陳195g 徐長卿65g 土鱉蟲30g 白花蛇舌草65g制備方法(1)、按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；(2)、女貞子、人參加7倍量50%乙醇提取2次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾
液回收乙醇至無醇味，藥渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿加5倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘渣及水 溶液備用；(4)、土鱉蟲、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細粉；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(1)中所 得人參、女貞子的醇提后殘渣，及步驟(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿提油后殘渣及水溶液 合并，加7倍量水，加熱煎煮2次，每次1小時，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；(6)、按常規(guī)制劑方法制成片劑。色譜條件和檢測條件色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX250mm、填料粒徑為5iim的C18 柱，流動相由室溫下60體積份的甲醇、10體積份的乙腈和5體積份的0. 5%的冰乙酸混合 而成，流速為0. 15ml/min，理論板數(shù)按齊墩果酸峰計算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測器 的漂移管溫度為75°C。供試品溶液的制備方法取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細，取0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理20分 鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對照品溶液的制備方法精密稱取齊墩果酸對照品和熊果酸對照品適量，加無水 乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0. 05mg和熊果酸0. 03mg的溶液，即得。評價結(jié)果表1評價結(jié)果表 實施例3為了便于本發(fā)明方法的實施，將該中藥組合物制備為丸劑處方黃芪250g 女貞子200g 人參65g 靈芝65g 64g半枝蓮128g絞股藍256g茯苓65g 雞內(nèi)金30g白英128g 茵陳128g 徐長卿128g白花蛇舌草128g制備方法(1)、按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；(2)、女貞子、人參加8倍量70%乙醇提取3次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾 液回收乙醇至無醇味，藥渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿加6倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘渣及水 溶液備用；(4)、土鱉蟲、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細粉；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(1)中所 得人參、女貞子的醇提后殘渣，及步驟(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿提油后殘渣及水溶液 合并，加8倍量水，加熱煎煮2次，每次3小時，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；(6)、按常規(guī)制劑方法制成丸劑。色譜條件和檢測條件色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX250mm、填料粒徑為5iim的C18 柱，流動相由室溫下80體積份的甲醇、10體積份的乙腈和15體積份的0. 5%的冰乙酸混合 而成，流速為0. 45ml/min，理論板數(shù)按齊墩果酸峰計算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測器 的漂移管溫度為79°C。供試品溶液的制備方法取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細，取0.6g，精 密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇35ml，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理20分 鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對照品溶液的制備方法精密稱取齊墩果酸對照品和熊果酸對照品適量，加無水 乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0. 10mg和熊果酸0. 05mg的溶液，即得。
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莪術(shù)132g 白術(shù)
蛇莓128g 土鱉蟲20g
評價結(jié)果表1評價結(jié)果表 實施例4為了便于本發(fā)明方法的實施，將該中藥組合物制備為散劑處方黃芪250g 女貞子200g 人參65g 靈芝65g 64g半枝蓮128g絞股藍256g茯苓65g 雞內(nèi)金30g白英128g 茵陳128g 徐長卿128g白花蛇舌草128g制備方法(1)、按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；(2)、女貞子、人參加9倍量80%乙醇提取3次，每次4小時，合并提取液，過濾，濾 液回收乙醇至無醇味，藥渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿加8倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘渣及水 溶液備用；(4)、土鱉蟲、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細粉；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(1)中所 得人參、女貞子的醇提后殘渣，及步驟(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿提油后殘渣及水溶液 合并，加9倍量水，加熱煎煮2次，每次2小時，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人參、女貞 子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；(6)、按常規(guī)制劑方法制成散劑。色譜條件和檢測條件色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX250mm、填料粒徑為5iim的C18 柱，流動相由室溫下70體積份的甲醇、20體積份的乙腈和10體積份的0. 5%的冰乙酸混合 而成，流速為0. 75ml/min，理論板數(shù)按齊墩果酸峰計算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測器 的漂移管溫度為85°C。供試品溶液的制備方法取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細，取0. 7g，精 密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理20分 鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對照品溶液的制備方法精密稱取齊墩果酸對照品和熊果酸對照品適量，加無水 乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0. 15mg和熊果酸0. 08mg的溶液，即得。評價結(jié)果表1評價結(jié)果表
莪術(shù)132g 白術(shù)
蛇莓128g 土鱉蟲20g
權(quán)利要求
一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測定方法，該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成黃芪120-360女貞子100-300 人參30-95 靈芝30-95莪術(shù)65-195 白術(shù)30-90 半枝蓮65-195 絞股藍120-360茯苓30-95 雞內(nèi)金15-45 蛇莓65-195白英65-195茵陳65-195 徐長卿65-195土鱉蟲10-30 白花蛇舌草65-195；其特征在于該方法采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測外標法測定，測定條件如下色譜條件和檢測條件色譜柱為反相色譜柱，流動相由室溫下60-80體積份的甲醇、10-30體積份的乙腈和5-15體積份的0.5％冰乙酸組成，流速為0.15-1.00ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為75-85℃；供試品溶液的制備取所述中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細，取0.5-0.7g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10-50ml，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處20分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；對照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對照品和熊果酸對照品適量，加無水乙醇制成每1ml約含齊墩果酸0.05-0.15mg和熊果酸0.03-0.09mg的溶液，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于，色譜條件和檢測條件為色譜柱為規(guī)格為4. 6mmX 250mm、填料粒徑為5 y m的C18柱，流動相由室溫下70體積份 的甲醇、20體積份的乙腈和10體積份的0. 5%的冰乙酸混合而成，流速為0. 35ml/min,理論 塔板數(shù)按齊墩果酸峰計算不得低于10000 ；蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為80°C。
3.如權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于供試品溶液的制備方法為取所述 中藥組合物制劑或制劑內(nèi)容物，研細，取0. 6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25ml，密塞，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理20分鐘，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重 量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的馬錢苷的含量測定方法，其特征在于對照品溶液的制備方法 為精密稱取齊墩果酸對照品和熊果酸對照品適量，加無水乙醇制成每lml約含齊墩果酸 0. 10mg和熊果酸0. 06mg的溶液，即得。
5.如權(quán)利要求1-4任一項所述的含量測定方法，其特征在于所述中藥組合物有如下重 量份的原料藥制成黃芪120 女貞子300 人參30靈芝95莪術(shù)65 白術(shù)90半枝蓮65 絞股藍360 茯苓30雞內(nèi)金45蛇莓65白英195 茵陳65徐長卿195 土鱉蟲10白花蛇舌草195。
6.如權(quán)利要求1-4任一項所述的含量測定方法，其特征在于所述中藥組合物由如下重 量份的原料藥制成黃芪360 女貞子100 人參95靈芝30莪術(shù)195 白術(shù)30半枝蓮195絞股藍120 茯苓95雞內(nèi)金15蛇莓195白英65 茵陳195 徐長卿65 土鱉蟲30白花蛇舌草65。
7.如權(quán)利要求1-4任一項所述的含量測定方法，其特征在于所述中藥組合物由如下重 量份的原料藥制成黃芪250 女貞子200 人參65靈芝65莪術(shù)132 白術(shù)64半枝蓮128絞股藍256 茯苓65雞內(nèi)金30蛇莓128白英128 茵陳128 徐長卿128 白花蛇舌草128 土鱉蟲20。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述中藥組合物的活性成分由以 下步驟制成(1)、按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；(2)、女貞子、人參加6-10倍量50-90%乙醇提取1-3次，每次1-4小時，合并提取液，過 濾，濾液回收乙醇至無醇味，藥渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿加4-8倍量水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，另器收集，殘渣及水溶 液備用；(4)、土鱉蟲、雞內(nèi)金、茯苓粉碎成細粉；(5)、黃苗、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍、蛇莓、白英、茵陳，與步驟⑴中所得人 參、女貞子的醇提后殘渣，及步驟(2)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿提油后殘渣及水溶液合并， 加7-10倍量水，加熱煎煮1-3次，每次1-3小時，合并煎煮液，加入步驟(1)中所得人參、女 貞子醇提液，濃縮成清膏，干燥，粉碎，備用；步驟(4)所得粉碎粉、步驟(3)所得揮發(fā)油與步驟(5)所得的干膏粉共同構(gòu)成該中藥 組合物的活性成分。
9.如權(quán)利要求1-4任一項所述的含量測定方法，其特征在于所述中藥組合物制劑劑型 為膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑或丸劑。
10.如權(quán)利要求9所述的含量測定方法，其特征在于所述中藥組合物膠囊劑由以下步 驟制成(1)、按照原料藥重量比例稱取中藥材，凈選；(2)、人參、女貞子，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小時，第二次2小時，合 并提取液，回收乙醇至無醇味，人參、女貞子殘渣備用；(3)、莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿，合并提取揮發(fā)油，提油時間不少于8小時，揮發(fā)油另器收集， 殘渣及水溶液備用；(4)、土鱉蟲、雞內(nèi)金兩味動物藥，水洗，60°C烘干，與茯苓合并，粉碎成100目粉，滅菌 后備用；(5)、黃芪、靈芝、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍、蛇莓、白英、茵陳，與步驟(2)中所得人 參、女貞子的醇提后殘渣，及步驟(3)中所得莪術(shù)、白術(shù)、徐長卿提油后殘渣及水溶液合并， 加9倍量水，加熱煎煮2次，每次2小時，合并煎煮液，加入步驟(2)中所得人參、女貞子醇 提液，濃縮成相對密度1. 20-1. 25的清膏，干燥，粉碎，備用；將步驟(5)所得干膏粉加入適當藥學(xué)上可接受的輔料制粒；(6)、將步驟(3)中所得揮發(fā)油噴入步聚(4)中所得茯苓、土鱉蟲、雞內(nèi)金的細粉中，混 勻，與步驟(5)中中所得的顆粒混勻，密閉半小時，裝膠囊即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量測定方法。該中藥組合物是由黃芪、女貞子等中藥組合而成，具有益氣養(yǎng)陰、健脾補腎、散結(jié)通絡(luò)的功效。為有效控制其質(zhì)量，本發(fā)明采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器測定了其中齊墩果酸和熊果酸的含量，該方法靈敏、高效、準確、穩(wěn)定，可有效控制該中藥組合物中齊墩果酸和熊果酸的含量。
文檔編號A61K35/37GK101874886SQ200910074239
公開日2010年11月3日 申請日期2009年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月28日
發(fā)明者劉敏彥, 張運芳, 李向軍, 王玉峰, 許紅輝 申請人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司