專利名稱：一種湖北海棠總黃酮提取物及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種湖北海棠總黃酮提取物及其制備方法與應用。
背景技術：
糖尿病，中醫(yī)稱消渴癥，是一種因體內胰島素絕對或相對不足所導致的一系列臨床癥候 群，糖尿病是一種常見的、多發(fā)的、伴隨終身的疾病。糖尿病在全世界的發(fā)病率有逐年增高 的趨勢，在發(fā)達國家已被列為繼心血管疾病及腫瘤之后的第三大疾病。目前糖尿病對人類健 康危害最大的是在動脈硬化及微血管病變基礎上產生的多種慢性并發(fā)癥，如糖尿病性心臟病、 糖尿病性肢端壞疽、糖尿病性腦血管病、糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病變及神經病變等。 因糖尿病引起失明者比一般人多10-25倍，目前糖尿病性視網膜病變已成為四大主要致盲疾 病之一；糖尿病性壞疽和截肢者比一般人多20倍；糖尿病較非糖尿病者心血管系發(fā)病率與病 死率高2~3倍；糖尿病導致腎功能衰竭比腎病多17倍?？傊?，糖尿病及其慢性并發(fā)癥對人 類健康的危害是十分嚴重的，已引起全世界醫(yī)學界的高度重視。
湖北海棠(Afo/^/n^Ae似&)屬于薔薇科植物，又名野海棠、茶海棠、樹姿優(yōu)美，歷來 被用作觀賞植物。湖北海棠葉作茶葉飲用已有400多年歷史，是盛夏不可多得的解暑涼茶。 有文獻表明，湖北海棠具有抗菌消炎、耐缺氧、抗疲勞、降血糖、降血脂等多方面作用。
中國專利CN101233887公開了一種以湖北海棠葉為原料，加入松針、甘草、羅漢果等多 種中草藥制成具有清熱解毒、生津止渴、降脂降壓等作用的保健涼茶。該專利為湖北海棠與 其它藥材組成的復方提取而得，不能體現(xiàn)湖北海棠的作用。中國專利CN101199301公開了湖 北海棠磚茶、袋泡茶、濃縮茶片及湖北海棠色素的制備方法，并公開了湖北海棠茶在降血糖、 降血脂中的應用，但該專利沒有明確湖北海棠的有效部位。中國專利CN1351839公開了一種 湖北海棠葉加水煎煮、滅菌制成的飲料，不涉及湖北海棠的藥效學活性。中國專利 CN101011096公開了一種以湖北海棠葉、果及甘草、桑葉等滅菌粉碎制得的茶，不涉及湖北 海棠的提取及藥效。
盡管已有文獻表明湖北海棠具有降血糖作用，國內外對于該植物的化學及藥效學研究并 沒有系統(tǒng)開展，也未見關于其總黃酮的制備及藥效、毒理研究。本申請的發(fā)明人對湖北海棠 的成分進行了系統(tǒng)研究，結果表明該植物主要含有黃酮類成分，包括二氫査爾酮、二氫黃酮、 色原酮、黃酮類化合物，其中文獻報道二氫査爾酮類化合物根皮苷可以通過抑制近曲小管對 葡萄糖的重吸收，增加尿糖排出而降低血糖。

發(fā)明內容
針對上述現(xiàn)有技術，本發(fā)明提供了一種可用于治療糖尿病的湖北海棠總黃酮提取物。 一種湖北海棠總黃酮提取物，是由以下方法制備的
(1) 將湖北海棠枝葉粉碎，用0 95%乙醇(指體積份數(shù)，當取到"0"時即為純水)回流 提取1~8次，每次溶劑用量為藥材重量的1~20倍，每次提取時間為0.5~10小時，合并提取 液，過濾，回收乙醇(如減壓回收)，濃縮得浸膏；
(2) 將上述得到的浸膏加水稀釋，加水量為浸膏重量的2~20倍，然后上大孔樹脂柱或 聚酰胺柱吸附，浸膏重量與吸附填料體積的比是1:0.5 10，單位g:ml，色譜柱徑與柱高比為 1:1~30,然后依次用水和濃度為5~95%的乙醇洗脫，流速為0.5~3.5個柱體積/小時；
(3) 收集乙醇洗脫液，進行減壓濃縮或真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，即得湖北海棠 總黃酮提取物。
所述湖北海棠總黃銅提取物中總黃酮含量大于50%， 二氫査耳酮類化合物根皮苷和3-羥基根皮苷含量之和大于40%，根皮苷與3-羥基根皮苷的質量比為20: 1~5: 1。 一種湖北海棠總黃酮提取物的制備方法，步驟如下
(1) 將湖北海棠枝葉粉碎，用0~95%乙醇(指體積份數(shù)，當取到"O"時即為純水)回流 提取1 8次，每次溶劑用量為藥材重量的1~20倍，每次提取時間為0.5 10小時，合并提取 液，過濾，回收乙醇(如減壓回收)，濃縮得浸膏；
(2) 將上述得到的浸膏加水稀釋，加水量為浸膏重量的2~20倍，然后上大孔樹脂柱或 聚酰胺柱吸附，浸膏重量與吸附填料體積的比是1:0.5 10，單位g:ml，色譜柱徑與柱高比為 1: 1~30,然后依次用水和濃度為5~95%的乙醇洗脫，流速為0.5~3。5個柱體積/小時；
(3) 收集乙醇洗脫液，進行減壓濃縮或真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，即得湖北海棠 總黃酮提取物。
一種湖北海棠總黃酮提取物在制備治療II型糖尿病藥物中的應用。 一種湖北海棠總黃酮提取物在制備預防II型糖尿病保健品中的應用。 所述的應用，是將湖北海棠總黃酮提取物與磷脂按照重量比1:0.2~1:25的比例制成磷脂 復合物；磷脂是一類含有磷酸的脂類，天然磷脂主要包括大豆磷脂和卵磷脂，磷脂與藥物形 成磷脂復合物后往往可以增強藥物活性，提高生物利用度?？梢灾苯訉⒘字瑥秃衔镏瞥煽诜?制劑服用。也可以將湖北海棠總黃酮提取物與醫(yī)學上可接受的輔料混合制成膠囊劑(包括軟 膠囊)、片劑、散劑、顆粒、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑、酊劑中的任意一種服用， 優(yōu)選顆粒劑、膠囊劑、片劑。所述磷脂為大豆磷脂或卵磷脂。 所述乙醇的濃度均為體積份數(shù)。
本申請的發(fā)明人對提取物進行了成分分離，得到的主要成分經NMR確定為根皮苷(l)和 3-羥基根皮苷(2)，結構如下所示
根皮苷(1) 3-羥基根皮苷(2)
采用紫外分光光度法，以根皮苷為對照品，對提取物進行了含量測定，總黃酮含量以根 皮苷計大于50%, HPLC測定了根皮苷和3-羥基根皮苷的含量，二者含量之和大于40%,色 譜圖如圖1所示。
本發(fā)明通過大孔樹脂或聚酰胺吸附的方法制得了湖北海棠總黃酮提取物，其中含有以根 皮苷和3-羥基根皮苷為主的多種黃酮類成分，總黃酮以根皮苷計大于50%， HPLC測定根皮 苷和3-羥基根皮苷含量之和大于40%。鏈脲霉素致高血糖小鼠口服湖北海棠總黃酮提取物20 mg/kg，即可降低模型小鼠血糖水平。


圖1為湖北海棠總黃酮提取物HPLC色譜圖。
具體實施例方式
以下將在實施例中對本發(fā)明進行詳細的說明，但下述實施例僅為說明之目的，并非用于 限制本發(fā)明。
實施例l:湖北海棠總黃酮提取物的制備
湖北海棠枝葉50Kg，以藥材重量8倍的70%乙醇回流提取3次，每次l小時，合并提 取液，過濾，濃縮至浸膏。浸膏加水10倍稀釋，上大孔樹脂柱吸附(HPDIOO，河北寶恩化 工)，原藥材重量與大孔樹脂體積比為1:5,色譜柱徑高比為I:IO,用蒸餾水洗脫，洗脫液棄 去，后用50%乙醇洗脫，流速為l柱體積/小時，乙醇洗脫液減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥，即 得，收率為10.5%。
實施例2:湖北海棠總黃酮提取物的制備
湖北海棠枝葉50 Kg，以藥材重量8倍的70%乙醇回流提取3次，每次1小時，合并提 取液，過濾，濃縮至浸膏。浸膏加水IO倍稀釋，上聚酰胺柱吸附(60~90目)，原藥材重量與聚酰胺體積比為1:3，色譜柱徑高比為1:8，用蒸餾水洗脫，洗脫液棄去，后用50%乙醇洗 脫，流速為l柱體積/小時，乙醇洗脫液減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥，即得，收率為9.6%。 實施例3:湖北海棠總黃酮提取物的制備
湖北海棠枝葉50 Kg，以與藥材重量等重的95%乙醇回流提取8次，每次5小時，合并 提取液，過濾，濃縮至浸膏。浸膏加水20倍稀釋，上大孔樹脂柱吸附(HPDIOO，河北寶恩 化工)，原藥材重量與大孔樹脂體積比為1:10 (g:ml)，色譜柱徑高比為1:20，用蒸餾水洗脫， 洗脫液棄去，后用95%乙醇洗脫，流速為2柱體積/小時，乙醇洗脫液減壓濃縮，濃縮液噴霧 干燥，即得，收率為8.0%。
實施例4:湖北海棠總黃酮提取物的制備
湖北海棠枝葉50Kg，以與藥材重量等重的75%乙醇回流提取5次，每次10小時，合并 提取液，過濾，濃縮至浸膏。浸膏加水10倍稀釋，上大孔樹脂柱吸附(HPDIOO，河北寶恩 化工)，原藥材重量與大孔樹脂體積比為1:0.5 (g:ml)，色譜柱徑高比為1:30，用蒸餾水洗脫， 洗脫液棄去、后用50%乙醇洗脫，流速為3.5柱體積/小時，乙醇洗脫液減壓濃縮，濃縮液噴 霧干燥，即得，收率為8.5%。
實施例5:湖北海棠總黃酮提取物的制備
湖北海棠枝葉50Kg，以藥材重量20倍的5%乙醇回流提取2次，每次10小時，合并提 取液，過濾，濃縮至浸膏。浸膏加水2倍稀釋，上大孔樹脂柱吸附(HPDIOO，河北寶恩化工)， 原藥材重量與大孔樹脂體積比為1:1 (g:ml),色譜柱徑高比為1:1，用蒸餾水洗脫，洗脫液棄 去，后用20%乙醇洗脫，流速為0.5柱體積/小時，乙醇洗脫液減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥， 即得，收率為5.8%。
實施例6:湖北海棠總黃酮提取物的制備
湖北海棠枝葉50Kg，以藥材重量5倍的0%乙醇(即為純水)回流提取1次，提取10 小時，合并提取液，過濾，濃縮至浸膏。浸膏加水15倍稀釋，上聚酰胺柱吸附(60~90目)， 原藥材重量與樹脂體積比為1:8 (g:ml)，色譜柱徑高比為1:5，用蒸餾水洗脫，洗脫液棄去， 后用70%乙醇洗脫，流速為3柱體積/小時，乙醇洗脫液減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥，即得， 收率為5.2%。
實施例7:湖北海棠總黃酮提取物的制備
湖北海棠枝葉50Kg，以藥材重量10倍的20%乙醇回流提取7次，每次0.5小時，合并 提取液，過濾，濃縮至浸膏。浸膏加水IO倍稀釋，上聚酰胺柱吸附(60~90目)，原藥材重 量與樹脂體積比為1:5 (g:ml),色譜柱徑高比為1:25，用蒸餾水洗脫，洗脫液棄去，后用50%乙醇洗脫，流速為2.5柱體積/小時，乙醇洗脫液減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥，即得，收率 為6.5%。
實施例8:湖北海棠總黃酮提取物的制備
湖北海棠枝葉50Kg，以藥材重量10倍的40%乙醇回流提取4次，每次6小時，合并提 取液，過濾，濃縮至浸膏。浸膏加水10倍稀釋，上聚酰胺柱吸附(60~90目)，原藥材重量 與樹脂體積比為1:2 (g:ml)，色譜柱徑高比為1:20，用蒸餾水洗脫，洗脫液棄去，后用60% 乙醇洗脫，流速為2柱體積/小時，乙醇洗脫液減壓濃縮，濃縮液噴霧干燥，即得，收率為7.5%。
實施例9:湖北海棠總黃酮提取物磷脂復合物的制備
湖北海棠總黃酮提取物50 g,加入大豆磷脂50g，混合均勻，加入無水乙醇500 ml，加 熱回流成澄清溶液，回收溶劑，干燥，粉碎，即得。 實施例10:顆粒劑的制備
湖北海棠總黃酮提取物50 g，加入玉米淀粉450 g,充分混勻，加適量90%乙醇制成軟 材，過12目篩制顆粒，干燥得顆粒劑，每lg顆粒含植物提取物100mg。
實施例lh膠囊劑的制備 '
湖北海棠總黃酮提取物50 g，加入淀粉100g、糊精50g，充分混勻，過80目篩，加適 量90%乙醇制軟材，過24目篩制顆粒，干燥，裝膠囊，即得。
用實施例1制得的提取物進行了藥效學和毒理學研究。
一、湖北海棠總黃酮提取物對鏈脲霉素致小鼠高血糖的影響
1、 試驗材料
陽性藥降糖靈(苯乙雙胍片)，250mg/片，山東省莒南制藥廠生產。
造模劑鏈脲霉素(STREPTOZOCIN， STZ)， 規(guī)格lg/瓶，SIGMA公司產品。
試劑盒血糖(GLU)試劑盒，北京中生北控生物科技有限公司。
2、 實驗動物
昆明種雄性小鼠60只，體重25ilg。
3、 實驗方法及結果
昆明種雄性小鼠60只，禁食18h,隨機選10只鼠為正常對照組，其余50只小鼠快速腹 腔注射鏈脲霉素120mg/kg，制備糖尿病模型，注射給藥容積為0.02ml/g。正常對照組腹腔注 射等體積的檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液。造模48小時后，注射鏈脲霉素小鼠均出現(xiàn)多飲、多 尿、多食等糖尿病癥狀。隨機抽取5只，尾靜脈取血用血糖儀檢測空腹血糖，血糖值均高于 11.2mmol/L，說明模型成功，隨后將50只小鼠按體重隨機分為5組，分別為高劑量組100mg/kg、中劑量組50mg/kg、低劑量組20mg/kg;模型組及陽性藥物對照組(降糖靈組)。各 劑量組動物灌胃給予相應的藥物，正常對照及模型對照組給予等體積的飲用水，灌胃體積0.5 ml/20g小鼠，每日灌胃1次，連續(xù)灌胃6天。于給藥第6天，小鼠禁食2小時灌胃給藥，藥 后l小時，各組小鼠摘眼球取血，用全自動生化儀測定小鼠空腹血糖。
檢測結果表明，與正常對照組比較，模型組小鼠血糖水平明顯增高(P<0.01)。與模型 組相比，湖北海棠總黃酮的大、中、小劑量組均可明顯降低血糖水平，說明該提取物具有降 糖作用。
二、湖北海棠總黃酮提取物急性毒性試驗
取正常小鼠20只，雌雄各半，灌胃給予湖北海棠總黃酮提取物，高劑量達到允許的最大 給藥濃度和小鼠最大給藥體積，結果動物無一死亡，健康情況良好，皮毛光亮，活動度良好。 14天后處死動物，肉眼觀察主要臟器，未見明顯異常。表明該提取物毒性極小。
結論由上述初步藥效學實驗可以看出，湖北海棠總黃酮提取物口服給藥可以明顯降低 鏈脲霉素致小鼠糖尿病，急性毒性試驗結果表明，該提取物毒性極低，可以用于制備治療糖 尿病的藥物。
權利要求
1.一種湖北海棠總黃酮提取物，其特征在于，是由以下方法制備的(1)將湖北海棠枝葉粉碎，用0～95％乙醇回流提取1～8次，每次溶劑用量為藥材重量的1～20倍，每次提取時間為0.5～10小時，合并提取液，過濾，回收乙醇，濃縮得浸膏；(2)將上述得到的浸膏加水稀釋，加水量為浸膏重量的2～20倍，然后上大孔樹脂柱或聚酰胺柱吸附，浸膏重量與吸附填料體積的比是1∶0.5～10，單位g∶ml，色譜柱徑與柱高比為1∶1～30，然后依次用水和濃度為5～95％的乙醇洗脫，流速為0.5～3.5個柱體積/小時；(3)收集乙醇洗脫液，進行減壓濃縮或真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，即得湖北海棠總黃酮提取物。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種湖北海棠總黃酮提取物，其特征在于所述湖北海棠總黃酮提 取物中總黃酮含量大于50%， 二氫査耳酮類化合物根皮苷和3-羥基根皮苷含量之和大于 40%，根皮苷與3-羥基根皮苷的質量比為20:l 5:l。
3. —種湖北海棠總黃酮提取物的制備方法，其特征在于，步驟如下(1) 將湖北海棠枝葉粉碎，用0~95%乙醇回流提取1~8次，每次溶劑用量為藥材重量的 1~20倍，每次提取時間為0.5 10小時，合并提取液，過濾，回收乙醇，濃縮得浸膏；(2) 將上述得到的浸膏加水稀釋，加水量為浸膏重量的2 20倍，然后上大孔樹脂柱或聚 酰胺柱吸附，浸膏重量與吸附填料體積的比是1:0.5 10，單位g:ml，色譜柱徑與柱高比為 1:1~30，然后依次用水和濃度為5~95%的乙醇洗脫，流速為0.5~3.5個柱體積/小時；(3) 收集乙醇洗脫液，進行減壓濃縮或真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，即得湖北海棠 總黃酮提取物。
4. 權利要求i所述一種湖北海棠總黃酮提取物在制備治療n型糖尿病藥物中的應用。
5. 權利要求1所述一種湖北海棠總黃酮提取物在制備預防II型糖尿病保健品中的應用。
6. 根據(jù)權利要求4或5所述的應用，其特征在于是將湖北海棠總黃酮提取物與磷脂按照重 量比1:0.2 1:25的比例制成磷脂復合物。
7. 根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于所述磷脂為大豆磷脂或卵磷脂。
8. 根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于將磷脂復合物直接制成口服制劑。
9. 根據(jù)權利要求4或5所述的應用，其特征在于將湖北海棠總黃酮提取物與醫(yī)學上可接受 的輔料混合制成膠囊劑、片劑、散劑、顆粒、口服液、酒劑、丸劑、微丸劑、合劑、酊劑 中的任意一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種湖北海棠總黃酮提取物，是由以下方法制備的先用乙醇提取，然后上大孔樹脂柱或聚酰胺柱吸附，乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，進行減壓濃縮或真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，即得湖北海棠總黃酮提取物。所述湖北海棠總黃銅提取物中總黃酮含量大于50％，二氫查耳酮類化合物根皮苷和3-羥基根皮苷含量之和大于40％，根皮苷與3-羥基根皮苷的質量比為20∶1～5∶1。所得湖北海棠總黃酮提取物毒性低，可用于制備治療II型糖尿病的藥物。
文檔編號A61K36/73GK101537052SQ20091002059
公開日2009年9月23日 申請日期2009年4月24日 優(yōu)先權日2009年4月24日
發(fā)明者任冬梅, 婁紅祥, 王姝麒 申請人:山東大學