專利名稱：抗人nkg2d抗體及其用途的制作方法
抗人NKG2D抗體及其用途
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及抗人NKG2D抗體(hNKG2D)及其在治療或預(yù)防人類患者的疾病及病癥 中的用途。
背景技術(shù)：
免疫受體NKG2D通常在人⑶8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞上表達(dá)。在活化前的⑶8+細(xì)胞中， 人NKG2D (hNKG2D)同二聚體受體通過其DAPlO締合而作為TCR和⑶28+TCR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的共 激活劑起作用，而在NK細(xì)胞中，則作為直接激活劑起作用。已經(jīng)鑒定并表征了 hNKG2D的各 種配體，包括MHCI類相關(guān)配體MICA和MICB、UL16結(jié)合蛋白(ULBP)家族和視黃酸早期轉(zhuǎn)錄 物 (retinoic acid early transcript, RAET1)家在慢性自身免疫病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中，hNKG2D在⑶4+⑶28—T細(xì)胞亞型上 表達(dá)，并參與刺激其增殖和IFNy產(chǎn)生，并且MIC表達(dá)被上調(diào)(Groh等，PNAS 2003 ； 100 9452)。研究還表明，在克羅恩病(Crohn，s disease)中的表達(dá)hNKG2D的CD4+T細(xì)胞通 過MICA相互作用介導(dǎo)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞毒反應(yīng)(Allez等，Gastroenterology2007 ；132 2346-2358)。NKG2D是自身免疫炎癥的主要推動(dòng)力的初步推測來自在糖尿病鼠模型(NOD小 鼠)中通過結(jié)合并阻斷鼠NKG2D(CX5)的單克隆抗體(mAb)來預(yù)防和治療導(dǎo)致糖尿病的炎 癥(Ogasawara 等，Immunity 2004 ;20 :757_767)，這表明了抗 NKG2D 抗體的治療應(yīng)用。這 類應(yīng)用參見例如 US20050158307、W02005097160、W02005115517 和 W02006024367。雖然抗人NKG2D的鼠mAb已有記載(參見例如Pende等，Eur JImmunol 2001 ；31 1076-86 ；W002068615 ；Bauer 等，Science 1999 285 :727_9 ；Castriconi 等，PNAS 2003 ； 100 :4120-25 ；以及 Andr6 等，Eur J Immunol 2004 ;34 :1_11)或者是市售的(例如得自 R&DSystems，MN，USA 的抗體 149810 和得自 Beckman Coulter Inc.的 0N72)，但是它們具有 免疫原性。據(jù)報(bào)道，文獻(xiàn)中披露的唯一完整人抗NKG2D mAb對NKG2D信號轉(zhuǎn)導(dǎo)同時(shí)具有激 動(dòng)作用和拮抗作用(Kwong等，J Mol Biol 2008 ;384 :1143_1156)，使其較不適于作為炎癥 性疾病和/或自身免疫病的治療劑。因此，存在對在炎癥性疾病和病癥和/或自身免疫疾病和病癥的治療用途中具有 最優(yōu)性質(zhì)的抗hNKG2D mAb的需求。本發(fā)明滿足這些需要和其它需求，并且提供若干將在本 文其余部分中描述的另外的益處。發(fā)明概述本發(fā)明提供用于人體治療應(yīng)用的分離抗hNKG2D單克隆抗體。所述抗體通常是完 整人或人源化抗體，當(dāng)給予患者時(shí)，會(huì)使針對抗體的免疫應(yīng)答風(fēng)險(xiǎn)降到最低。如本文所述， 其它抗原結(jié)合分子，例如抗原結(jié)合抗體片段、抗體衍生物和多特異性分子可以設(shè)計(jì)自或來 源于這類抗體。在一個(gè)方面，抗體的特征在于一種或多種功能性質(zhì)或者功能性質(zhì)的組合。示例性 的特征包括例如防止hNKG2D介導(dǎo)的表達(dá)hNKG2D的NK細(xì)胞或T細(xì)胞的活化；與至少一種 天然hNKG2D配體或與若干種配體競爭結(jié)合hNKG2D ；降低表達(dá)hNKG2D的NK細(xì)胞或T細(xì)胞 表面上的hNKG2D的量；還結(jié)合食蟹猴(cynomolgous)NKG2D和/或獼猴(rhesus) NKG2D ；每
4個(gè)hNKG2D 二聚體只結(jié)合一個(gè)抗體分子；當(dāng)加入表達(dá)hNKG2D的NK細(xì)胞和/或T細(xì)胞中時(shí)， 使不超過2個(gè)的hNKG2D 二聚體交聯(lián)；結(jié)合時(shí)對hNKG2D信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的激動(dòng)劑效應(yīng)不明顯；和/ 或與hNKG2D結(jié)合的解離常數(shù)(KD)為InM以下。本發(fā)明的某些抗hNKG2D抗體進(jìn)一步或者 備選地可與一種或多種本文所述的特定人抗hNKG2D抗體(包括抗體MS和21F2)競爭；與 所述抗體結(jié)合基本相同的表位；或者以與所述抗體相同或更高的親和力結(jié)合。例如，在一個(gè) 實(shí)施方案中，與已知的鼠抗hNKG2D抗體(例如上述抗體)相比，所述抗體進(jìn)一步或者備選 地更能競爭或者阻斷hNKG2D與MS和/或21F2的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體與MS 和/或21F2結(jié)合相同的hNKG2D表位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體進(jìn)一步或者備選地 與MS結(jié)合相同的表位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體進(jìn)一步或者備選地與21F2結(jié)合相 同的表位。技術(shù)人員應(yīng)理解的是，由本發(fā)明的實(shí)施方案提供的抗體和/或用于本發(fā)明實(shí)施 方案的抗體可具有3、4或更多個(gè)的上述性質(zhì)。在另一個(gè)方面，所述抗體進(jìn)一步或者備選地包含一個(gè)或多個(gè)與本文所述的MS或 21F2抗原互補(bǔ)位和/或抗原結(jié)合序列相同或相似的抗原互補(bǔ)位和/或抗原結(jié)合序列。在其它方面，本發(fā)明提供編碼本發(fā)明抗體的核酸、包含這類核酸的表達(dá)載體、包含 這類核酸的宿主細(xì)胞、產(chǎn)生本發(fā)明抗體的宿主細(xì)胞以及通過在適當(dāng)條件下培養(yǎng)這類宿主細(xì) 胞以產(chǎn)生抗hNKG2D抗體的方法。本發(fā)明還提供這類抗體的抗體結(jié)合片段以及包含這類抗原結(jié)合片段的分子，包括 工程改造的抗體片段、抗體衍生物、雙特異性抗體和其它多特異性分子。本發(fā)明還提供包含這類抗體或其它分子的藥物組合物和藥盒或其它制品。本發(fā)明還提供使用這類抗體、分子和組合物來降低或抑制hNKG2D活化、hNKG2D 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或者表達(dá)hNKG2D的NK細(xì)胞或T細(xì)胞活化的方法，或減輕炎癥的方法，以及治療 或預(yù)防自身免疫疾病或病癥和/或炎癥性疾病或病癥的方法，包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎、包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎在內(nèi)的炎性腸病(IBD)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic erythromatosis lupus、SLE)、銀屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、乳糜瀉、病毒性疾病 (例如病毒性肝炎)以及各種器官和組織(包括但不限于心臟和骨髓)的移植排斥反應(yīng)。附圖簡述

圖1表示對來自KM mouse 品系的經(jīng)hNKG2D免疫接種的小鼠的示例性血清進(jìn)行 的分析。在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上對表達(dá)NKG2D的BAF/3細(xì)胞或?qū)φ占?xì)胞(BAF/3細(xì)胞)的流式細(xì) 胞術(shù)分析揭示1 μ 1血清中抗體與NKG2D選擇性結(jié)合的效價(jià)升高㈧。與第6次免疫接種后 所采集的血清(1 μ 1)的預(yù)孵育物含有能夠阻止MICA-Fc與NKG2D結(jié)合的抗體(B)。圖2表示與表達(dá)NKG2D的細(xì)胞(A)特異性結(jié)合但不與不表達(dá)NKG2D的同一細(xì)胞系 (B)特異性結(jié)合的雜交瘤上清液形式的人抗體的實(shí)例。將抗體以雜交瘤上清液的形式加入 細(xì)胞中。還顯示了直接標(biāo)記的陽性對照鼠抗NKG2D抗體149810與表達(dá)NKG2D的細(xì)胞(C) 和不表達(dá)NKG2D的細(xì)胞(D)的結(jié)合。黑色輪廓代表背景染色，實(shí)心峰代表特異性染色。圖3表明與市售鼠抗體(0Ν72和149810)相比，重組表達(dá)并純化的完整人IgG4抗 體(16F16、16F31、MS和21F2)的NKG2D結(jié)合表達(dá)NKG2D的細(xì)胞的劑量反應(yīng)。圖4表示人抗hNKG2D抗體16F16和16F31 (A)以及IgG4同種型的MS和21F2 (B) 的重鏈(H)和輕鏈(L)的氨基酸序列，突出顯示可變區(qū)(粗體字)和CDR區(qū)(下劃線)。表 1提供氨基酸序列的相應(yīng)序列標(biāo)識符和各種突出顯示的部分。
圖5表示VH和VL序列與相應(yīng)重組種系序列的比對。⑶R區(qū)用粗體字Kabat編 號注明，體細(xì)胞高變用粗體字下劃線文本注明。(A) 16F16IgG4H鏈；⑶16F16IgG4L鏈； (C)16F31IgG4H 鏈；(D)16F31IgG4L 鏈；(E)MS IgG4H 鏈；(F)MS IgG4L 鏈；(G)21F2 IgG4H 鏈；(H)21F2 IgG4 L 鏈。SEQ ID NOS :27_30 分別對應(yīng)于重組 VH3_21/D3_9/JH4、VKI_L15/ JK2、VH3_20/D3-10/JH6 和 VKIII_A27/JK3，SEQ ID NOS 60-63 分別對應(yīng)于重組 VH4_59// JH3、VKIII_A27/JK1、VH5_51/D3_10_R3/JH4 和 VKIII_L6/JK1。圖6表示通過由雜交瘤上清液中的抗體預(yù)孵育所致配體結(jié)合的阻斷，證實(shí)了示例 性人抗NKG2D抗體對配體(MICA-)結(jié)合的阻斷。輪廓圖代表背景，灰色代表沒有預(yù)孵育的 配體結(jié)合，黑色虛線代表有預(yù)孵育的配體結(jié)合。圖7表示對重組表達(dá)并純化的完整人抗hNKG2D抗體(16F16、16F31、MS和21F2 ； IgG4同種型)的各種濃度進(jìn)行分析時(shí)所得到的劑量反應(yīng)曲線，給出了 IC50和完全阻斷Iyg MICA-mFc結(jié)合所需要的劑量。圖8表示與含有16F16的雜交瘤上清液預(yù)孵育完全阻止0N72對NKG2D的NKG2D 結(jié)合。輪廓代表背景，灰色代表沒有預(yù)孵育的0N72結(jié)合，黑色虛線代表有預(yù)孵育的0N72結(jié)
I=I ο圖9表示完整人抗hNKG2D抗體阻斷鼠抗hNKG2D抗體隨后與NKG2D結(jié)合的能 力，反之亦然。(A)16F16 與重組表達(dá)并純化的16F16(0.同種型)預(yù)孵育阻止 0Ν72 (0. 3 μ g)與NKG2D結(jié)合。顛倒孵育順序顯示，與0N72 (0. 3 μ g)預(yù)孵育只阻止85%重組 表達(dá)并純化的IgG4同種型(0. 3 μ g) 16F16的結(jié)合，說明一部分NKG2D依然可被完整人抗體 結(jié)合，這就表明至少部分表位與0N72結(jié)合的表位不同?？贵w149810只顯示對重組表達(dá)并純 化的16F16(IgG4同種型)有約50%的交叉抑制，當(dāng)149810與16F16分別按1 1 (0. 3 μ g, 0. 3 μ g)和按3 1 (1 μ g，0. 3 μ g)的抗體濃度進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，很可能再次說明NKG2D上結(jié)合 表位的差異。采用下列孵育和檢測組合沒有(a)或有(b) 16F16預(yù)孵育的0N72的檢測；沒 有(c)或有(d)0N72預(yù)孵育的16F16的檢測；沒有(e)或有(f) 16F16預(yù)孵育(0. 3 μ g)的 149810 (0. 3 μ g)的檢測；沒有(g)或有(h) 149810預(yù)孵育(0. 3 μ g)的16F16的檢測；沒有 ⑴或有(j) 16F16預(yù)孵育(0. 3 μ g)的149810(1 μ g)的檢測；沒有(k)或有(1) 149810預(yù)孵 育(1 μ g)的 16F16 (0. 3 μ g)的檢測；16F16 檢測(0. 3 μ g)。(B)MS 將 0. 1 μ g 鼠抗 hNKG2D 抗體在有或沒有與0. 1 μ g MS抗體預(yù)孵育的情況下進(jìn)行孵育，接著采用流式細(xì)胞術(shù)用抗小 鼠抗體進(jìn)行檢測。在沒有與MS預(yù)孵育的情況下，將與0，Iyg 0N72、1D11或149810的孵育 標(biāo)準(zhǔn)化為100%，分別見(a)、(C)和(e)。與0. 1 μ g MS孵育30分鐘，接著分別對0N72、IDll 或149810進(jìn)行的孵育和檢測，見(b)、(d)和(f)。與MS預(yù)孵育分別抑制NKG2D與0N72、 IDll和149810結(jié)合的98%、88%和96. 5%，這就表明至少一些抗體的表位相似。(C)21F2 在有(a)或沒有(b)與21F2預(yù)孵育的情況下檢測0N72結(jié)合；在有(c)或沒有(d)與21F2 預(yù)孵育的情況下檢測IDll結(jié)合；以及在有(e)或沒有(f)21F2的情況下檢測149810結(jié)合 (所有抗體為0. 1 μ g)。圖10表示獼猴或食蟹猴(cyno)細(xì)胞與0N72和自原始雜交瘤純化的16F16抗體 的染色。㈧食蟹猴NK細(xì)胞，⑶食蟹猴CD8+ T細(xì)胞，(C)獼猴NK細(xì)胞，和⑶獼猴CD8+ T細(xì)胞。值用結(jié)合的平均熒光強(qiáng)度(MFI)表示，其中減去了僅與第二抗體結(jié)合的MFI。在兩 種物種中都未觀察與CD4+ T細(xì)胞的結(jié)合。
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圖11表示人抗體MS以不同抗體濃度與外周血單核細(xì)胞(PBMC)的人或食蟹猴CD8 陽性細(xì)胞的結(jié)合，證實(shí)了與人和食蟹猴NKG2D的親和力相似。圖12表示在51Cr釋放測定法中，加入阻斷配體的抗體(0N72或重組表達(dá)并純化的 16F16 (IgG4同種型))，以劑量依賴性方式阻斷NK介導(dǎo)的殺死表達(dá)MICA的靶細(xì)胞。圖13表示重組表達(dá)并純化的16F16和16F31 (均為IgG4同種型)能夠以劑量依賴 性的方式抑制帶有MICA (A)和ULBP3(B)兩者的靶細(xì)胞(BaF/3)被NK-92細(xì)胞殺死，其中兩 種配體被0. 8 μ g/ml的16F16幾乎完全阻斷，兩種配體被20 μ g/ml最高試驗(yàn)劑量的16F31 部分阻斷。圖14表示重組表達(dá)并純化的MS、21F2和16F16 (均為IgG4同種型)能夠抑制NK 介導(dǎo)的殺死表達(dá)配體的靶細(xì)胞。(A)通過MS或21F2抑制NK-92細(xì)胞殺死ULBP3_BaF/3細(xì) 胞。(B)通過MS或16F16抑制NKL細(xì)胞殺死BaF/3-MICA細(xì)胞。圖15表示使用用NKG2D和DAPlO轉(zhuǎn)染的BaF/3細(xì)胞時(shí)，抗體誘導(dǎo)的細(xì)胞表面NKG2D 的減少。該圖表示與對照相比(在沒有抗NKG2D抗體過夜孵育后的細(xì)胞表面NKG2D受體 =100% )，在與0N72 (Iyg)或重組表達(dá)并純化的人抗體16F16 (1 μ g ;IgG4同種型)或 16F31(3yg;IgG4同種型)過夜孵育后，余留在細(xì)胞表面上NKG2D受體的百分比。圖16表示使用用NKG2D和DAPlO轉(zhuǎn)染的BaF/3細(xì)胞(按圖15進(jìn)行)㈧或從外 周血新鮮制備的人NK細(xì)胞(B)時(shí)，MS抗體誘導(dǎo)的細(xì)胞表面NKG2D的減少。在(B)中，將人 NK細(xì)胞在人血清(模擬血中有IgG存在的情況)存在下，與不同濃度的MS抗體孵育過夜。 甚至在最底濃度下也達(dá)到最大的下調(diào)，相當(dāng)于在NKG2D+NK細(xì)胞上的相似條件下，在結(jié)合測 定法中測量的受體飽和狀態(tài)的約60%。圖17表示在與規(guī)定的21F2抗體濃度過夜孵育后人NK細(xì)胞上細(xì)胞表面NKG2D減 少的百分比。圖18表示在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)上，在人血樣中不同類型的細(xì)胞中，0N72、MS和21F2對 表面存在的NKG2D的作用。各抗體的濃度為0. 1 μ g/ml。在不受理論的束縛下，實(shí)驗(yàn)中表面 存在的NKG2D的減少可能代表NKG2D內(nèi)化。圖(A)-(C)分別表示抗體誘導(dǎo)的表達(dá)NKG2D的 NK細(xì)胞、⑶8+ T細(xì)胞和δ γ T細(xì)胞的NKG2D內(nèi)化。MS和21F2導(dǎo)致表面締合的NKG2D的減 少比0Ν72的低。圖19表示使用兩種不同的低于最佳劑量的CD3以提供共刺激，用于測定固定化MS 和0Ν72對T細(xì)胞增殖的激動(dòng)作用的試驗(yàn)結(jié)果。(A) [CD3] = 0. lng/ml ； (B) [CD3] = 0. 3ng/ ml。在按規(guī)定用固定化抗體刺激3天接著IL-2刺激4天的PBMC群中，通過CFSE稀釋評價(jià) 了 T細(xì)胞增殖。所包括的CD28刺激作為共刺激的陽性對照。對于MS未能檢測到顯著的激 動(dòng)作用，而0N72則對T細(xì)胞增殖具有低卻顯著的作用。圖20表示與抗NKG2D抗體(MS或hz0N72)的Fab片段或與MICA配體復(fù)合的hNKG2D 二聚體的三維疊加圖。hNKG2D同二聚體(‘NKG2D’)以表面圖像表示，一個(gè)單體的顏色比另 一個(gè)的深。Fab片段(分別為‘MS，和‘hz0N72，)用黑色管狀形式表示，而MICA( ‘MICA，) 用淺色示意性二級結(jié)構(gòu)圖像形式表示。(A)、(B)重疊的hNKG2D/MSFab和hNKG2D/MICA晶 體復(fù)合體結(jié)構(gòu)(Li 等，Nat Immunol 2001 ；2 443-451 ；PDB 代碼 1HYR，使用共同 hNKG2D 分 子的C- α -原子作為模板)。由于MICA和MS兩者以不對稱方式與NKG2D 二聚體結(jié)合，因此 (A)和(B)表示當(dāng)與NKG2D-二聚體結(jié)合時(shí)，兩個(gè)配體分子的兩種可能的相對結(jié)合方向。在
7對hNKG2D的重疊計(jì)算法中，對于兩種方向在MICA和MS Fab之間存在相當(dāng)大的重疊，表明 了 MS Fab阻斷MICA與hNKG2D受體結(jié)合的能力。參見實(shí)施例11。(C) hNKG2D/hz0N72 Fab 和hNKG2D/MICA復(fù)合體晶體結(jié)構(gòu)的重疊。hNKG2D的每個(gè)單體被hz0N72 Fab結(jié)合。在對 hNKG2D的重疊計(jì)算中，hz0N72抗體同樣與MICA結(jié)合位點(diǎn)有相當(dāng)大的重疊，表明了 hz0N72 可以阻斷MICA與hNKG2D結(jié)合。參見實(shí)施例12。圖21表示在兩個(gè)hNKG2D單體單元的序列(SEQ ID NO 2)中用于MS Fab (A)、 hz0N72 Fab(B)和MICA分子(C)的hNKG2D 二聚體中各個(gè)NKG2D單體單元序列(SEQ ID NO 2)中的表位殘基。與晶體結(jié)構(gòu)配體原子相距4.0人以內(nèi)的NKG2D殘基視為結(jié)合表位的組 成部分并標(biāo)有下劃線。雙下劃線殘基參與與配體的氫結(jié)合。(A)hNKG2D 二聚體中hNKG2D 單體單元1和2上單一 MS Fab的結(jié)合表位。在NKG2D單體單元1中晶體單體N和C結(jié)合， 在NKG2D單體單元2中晶體單體M和D結(jié)合。在單體單元2中，Lys 150側(cè)鏈原子N ζ只 參與兩個(gè)晶體學(xué)上獨(dú)立的復(fù)合體之一的氫結(jié)合。亦見表9-12。(B)兩個(gè)hz0N72Fab同時(shí)與 hNKG2D單體單元1和2結(jié)合的相應(yīng)的結(jié)合表位。Trp 166參與晶體學(xué)上獨(dú)立的分子復(fù)合體 (一個(gè)hz0N72 Fab分子與一個(gè)hNKG2D單體復(fù)合)之一的氫結(jié)合，但是對于另一個(gè)的氫結(jié) 合則距離太遠(yuǎn)。參見表14-15。(C)hNKG2D單體單元1和2上MICA分子的結(jié)合表位。MICA 顯示與hNKG2D 二聚體不對稱結(jié)合，因此可能以相對于MS-Fab的兩個(gè)方向結(jié)合。只是2個(gè) 單體單元圖像的互換便可獲得MICA的第二種取向。圖22表示表面圖像的hNKG2D分子，其中一個(gè)單體比另一個(gè)略微較深。圖中顯示 與其相應(yīng)晶體結(jié)構(gòu)MS/hz0N72/MICA Fab原子相距4.0人以內(nèi)的NKG2D原子的顏色為黑色， (A)對應(yīng)于MS Fab、(B)對應(yīng)于2個(gè)hz0N72 Fab, (C)和(D)對應(yīng)于MICA。由于MICA和MS Fab兩者均以不對稱的方式與NKG2D二聚體結(jié)合，因此對NKG2D的相關(guān)結(jié)合方向可能有所不 同。圖中作出說明，在(C)和⑶中表示MICA相對于MS的兩種可能的結(jié)合方向。亦見表 9-12 和 14-15。定義除非另有說明或與本文內(nèi)容相抵觸，否則本文使用的“hNKG2D”和術(shù)語“NKG2D”亦 稱“NKG2-D ”、“ CD314 ”、“D12S2489E ”、“KLRK1”、“殺傷細(xì)胞凝集素樣受體亞家族K成員1” 和“KLRK1”，是指人殺傷細(xì)胞激活性受體基因，其mRNA (例如NCBI RefSeq NM_007360 ；SEQ IDNO 1)及其基因產(chǎn)物(NCBI RefSeq NP_031386 ；SEQ ID NO 2)或其天然存在的變體。在 NK細(xì)胞和T細(xì)胞中，配體結(jié)合形式的hNKG2D受體是同二聚體(Li等，Nat Immunol 2001 ；2 443-451)。HNKG2D 受體通常存在于表面，與 DAPlO 復(fù)合(Wu 等，J Exp Med 2000 ；192 1059 參照以下；NCBI檢索號AAG29425、AAD50293)，研究表明還形成更高級的復(fù)合體。本文中由 hNKG2D提供的任何活性，例如細(xì)胞活化、抗體識別等，也可由與DAPlO和/或其它組分的復(fù) 合體或更高級復(fù)合體形式中的hNKG2D提供。除非另有說明或與本文內(nèi)容相抵觸，否則本文中以最廣義和具體使用的術(shù)語“抗 體”包括全長單克隆抗體、多克隆抗體和抗原結(jié)合片段、抗體變體、及其多特異性分子，只要 它們具有所需要的生物活性即可。全長抗體一般是包含通過二硫鍵相互連接的至少兩條 重(H)鏈和兩條輕(L)鏈的糖蛋白或其抗原結(jié)合部分。每條重鏈由重鏈可變區(qū)(本文簡 稱VH)和重鏈恒定區(qū)組成。重鏈恒定區(qū)由CH1、CH2和CH3三個(gè)結(jié)構(gòu)域組成。每條輕鏈由輕 鏈可變區(qū)(本文簡稱VL)和輕鏈恒定區(qū)組成。輕鏈恒定區(qū)由一個(gè)CL結(jié)構(gòu)域組成。VH區(qū)和VL區(qū)還可進(jìn)一步細(xì)分成超變性區(qū)，稱為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，散布在稱為構(gòu)架區(qū)(FR)的較保 守的區(qū)域內(nèi)。VH和VL各由3個(gè)CDR和4個(gè)FR組成，按下列順序從氨基端到羧基端排列 FRl、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區(qū)含有與抗原相互作用的結(jié)合結(jié) 構(gòu)域?？贵w分子結(jié)構(gòu)和各種與產(chǎn)生抗體相關(guān)的技術(shù)的通用原理可參見例如Harlow和Lane， ANTIBODIES :A LABORATORY MANUAL,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, N. Y.，(1988)?？贵w的“抗原結(jié)合片段”是包含能夠可檢測地與抗原結(jié)合的全長抗體的一部分的 分子，其通常包含至少VH區(qū)的一個(gè)或多個(gè)部分?？乖Y(jié)合片段包括多價(jià)分子和單鏈構(gòu)建 體，所述多價(jià)分子包含1、2、3個(gè)或更多個(gè)抗體的抗原結(jié)合部分，所述單鏈構(gòu)建體中VL區(qū)和 VH區(qū)或其選定部分通過合成接頭或通過重組方法連接形成功能性的抗原結(jié)合分子。雖然一 些抗體的抗原結(jié)合片段可以通過較大抗體分子的實(shí)際斷裂(例如酶促切割)來獲得，但是 大多數(shù)通常由重組技術(shù)產(chǎn)生。術(shù)語“抗體衍生物”和“免疫綴合物”在本文中可互換使用，是指包含全長抗體或 其抗原結(jié)合片段的分子，其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸是經(jīng)化學(xué)修飾的，例如通過烷基化、聚乙二 醇化、酰化、酯形成或酰胺形成等，例如以將抗體連接至第二分子。示例性修飾包括聚乙二 醇化(例如半胱氨酸-聚乙二醇化)、生物素化、放射性標(biāo)記和與第二種藥劑(例如細(xì)胞毒 劑)綴合?！岸嗵禺愋苑肿印卑贵w或其抗原結(jié)合片段，其與至少一種其它的功能性分子 (例如另一種肽或蛋白質(zhì)，例如另一種抗體或受體的配體)締合或連接，從而形成與至少兩 個(gè)不同結(jié)合位點(diǎn)或靶分子結(jié)合的分子。示例性多特異性分子包括雙特異性抗體和與可溶性 受體片段或配體連接的抗體。本文所使用的術(shù)語“人抗體”旨在包括具有其中構(gòu)架區(qū)和CDR區(qū)兩者都來源于人 種系免疫球蛋白序列(即與之相同或基本相同)的可變區(qū)的抗體。此外，如果抗體含有恒 定區(qū)，則恒定區(qū)同樣“來源于”人種系免疫球蛋白序列。本發(fā)明的人抗體可以包括不是由人 種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過體外隨機(jī)誘變或位點(diǎn)專一誘變或通過 體內(nèi)體細(xì)胞突變所引入的突變)。然而，本文所使用的術(shù)語“人抗體”不包括其中將來源于 其它哺乳動(dòng)物物種(例如小鼠)種系的CDR序列植入人構(gòu)架序列的抗體。“人源化”抗體是含有來源于非人類免疫球蛋白的最小序列的人/非人類嵌合 抗體。就大部分而言，人源化抗體是人免疫球蛋白(受體抗體)，其中受體超變區(qū)的殘基 置換成來自具有所需要的特異性、親和力和能力的非人類物種(供體抗體)超變區(qū)的殘 基，所述非人類物種例如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類。在一些情況下，人免疫球蛋白的 FR殘基被相應(yīng)的非人類殘基置換。此外，人源化抗體可包含不存在于受體抗體或供體抗 體的殘基。這些修飾使抗體性能進(jìn)一步完善。一般來講，人源化抗體可包含至少一個(gè)、通 常兩個(gè)基本全部的可變結(jié)構(gòu)域，其中全部或基本上全部的超變環(huán)對應(yīng)于非人類免疫球蛋 白的超變環(huán)，且全部或基本上全部的FR殘基是人免疫球蛋白序列的FR殘基。人源化抗 體任選還可包含免疫球蛋白恒定區(qū)(通常為人免疫球蛋白恒定區(qū))的至少一部分(Fe)。 更多詳情參見例如 Jones 等，Nature 321 :522_525 (1986) ；Riechmann 等，Nature 332 323-329(1988)；以及 Presta，Curr. Op. Struct. Biol. 2 593-596 (1992) ；WO 92/02190 ；美 國專利申請 20060073137 以及美國專利 6750325、6632927、6639055、6548640、6407213、
96180370、6054297、5929212、5895205、5886152、5877293、5869619、5821337、5821123、 5770196、5777085、5766886、5714350、5693762、5693761、5530101、5585089 和 5225539。術(shù)語“超變區(qū)”當(dāng)用于本文時(shí)是指負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的抗體的氨基酸殘基。超變區(qū)一 般包含來自“互補(bǔ)決定區(qū)”即“CDR”的氨基酸殘基(輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中的殘基24-34(Ll)、 50-56 (L2)和 89-97 (L3)以及重鏈可變結(jié)構(gòu)域中的 31-35 (HI)、50_65 (H2)和 95-102 (H3)； (Kabat 等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第 5 版， U. S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 (美國 衛(wèi)生與公共事務(wù)部國立衛(wèi)生研究院頒布號91-3242))和/或來自“超變環(huán)”的那些殘基 (輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中的殘基26-32(Ll)、50-52(L2)和91_96(L3)以及重鏈可變結(jié)構(gòu)域中的 26-32 (Hl)、53-55 (H2)和 96-101 (H3) ；Chothia 和 Lesk，J. Mol. Biol 1987;196:901-917)。 通常，該區(qū)中氨基酸殘基的編號通過Kabat等人(出處同上)所述方法進(jìn)行。短語例如 "Kabat位”、“可變結(jié)構(gòu)域殘基編號同Kabat”和“按照Kabat”在本文中是指該用于重鏈可變 結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的編號系統(tǒng)。采用Kabat編號系統(tǒng)，肽的實(shí)線性氨基酸序列可含 有與可變結(jié)構(gòu)域FR或CDR縮短或插入相應(yīng)的較少或添加的氨基酸。例如，重鏈可變結(jié)構(gòu)域 在⑶R H2的殘基52之后可包括單個(gè)氨基酸插入(按照Kabat的殘基52a)，在重鏈FR殘基 82之后可包括插入殘基(例如按照Kabat的殘基82a、82b和82c等)。對于給定抗體，殘 基的Kabat編號由通過該抗體序列與“標(biāo)準(zhǔn)”Kabat編號的序列在同源區(qū)進(jìn)行比對來確定。“構(gòu)架區(qū)”或“FR”殘基是除本文定義的⑶R以外的VH或VL殘基?！氨砦弧被颉敖Y(jié)合位點(diǎn)”是指抗原上的區(qū)域或區(qū)，抗原結(jié)合肽(例如抗體)與之特異 性結(jié)合。蛋白質(zhì)表位可包含直接參與結(jié)合的氨基酸殘基(亦稱表位的免疫顯性組分)和不 直接參與結(jié)合的其它氨基酸殘基，例如被特異性抗原結(jié)合肽有效阻斷的氨基酸殘基(換句 話說，氨基酸殘基在特異性抗原結(jié)合肽的“溶劑排斥表面(solvent-excluded surface) ”和 /或“足跡(footprint) ”內(nèi))。本文中的術(shù)語表位包括hNKG2D任何特定區(qū)域中的兩種類 型的氨基酸結(jié)合位點(diǎn)，其特異性結(jié)合抗hNKG2D抗體或本發(fā)明的另一種hNKG2D特異性藥劑 (hNKG2D-specific agent)，除非另有說明(例如在某些情況下本發(fā)明涉及與特定氨基酸殘 基直接結(jié)合的抗體)。NKG2D可包含多種不同的表位，其可包括而不限于(1)線性肽抗原決 定簇，(2)構(gòu)象抗原決定簇，其由成熟NKG2D構(gòu)象中的一個(gè)或多個(gè)彼此位置接近的非連續(xù)氨 基酸組成；以及(3)翻譯后抗原決定簇，全部或部分由與NKG2D共價(jià)連接的分子結(jié)構(gòu)組成， 例如糖基。除非另有說明或與本文內(nèi)容相抵觸，否則構(gòu)象抗原決定簇包含與抗原結(jié)合肽的 原子相距約4 A范圍內(nèi)的NKG2D氨基酸殘基。“溶劑排斥表面”是某一分子的區(qū)域，在計(jì)算機(jī)計(jì)算中，任何水分子都無法達(dá)到 (例如由于所述分子與配體結(jié)合所致)所述區(qū)域(Lee和Richards，J Mol Biol 1971 ；55 379-400，該文獻(xiàn)通過引用結(jié)合到本文中)。短語“結(jié)合與目標(biāo)抗體(例如MS或21F2)基本相同的表位或決定簇”是指某一抗 體與目標(biāo)抗體“競爭”目標(biāo)抗體所特異性結(jié)合的NKG2D分子?！翱乖パa(bǔ)位”是特異性結(jié)合抗原的某一抗體的抗原結(jié)合部分的某一區(qū)域或區(qū)。除 非另有說明或顯然與本文內(nèi)容相抵觸，否則抗原互補(bǔ)位可包括直接參與表位結(jié)合的氨基酸 殘基(其中若干個(gè)通常在CDR中)和不直接參與結(jié)合表位結(jié)合的其它氨基酸殘基，例如被 特異性結(jié)合的抗原有效阻斷的氨基酸殘基(換句話說，所述氨基酸殘基在特異性結(jié)合的抗
10原的“溶劑排斥表面”和/或“足跡”內(nèi))。抗NKG2D抗體“阻斷” NKG2D分子與天然NKG2D配體(例如MICA)結(jié)合的能力，是 指在使用可溶性或細(xì)胞表面締合的NKG2D和配體分子的試驗(yàn)中，抗體以劑量依賴性方式可 檢測地減少NKG2D分子與配體的結(jié)合，而在抗體不存在時(shí)NKG2D分子則可檢測地與配體結(jié) 合。測定抗NKG2D抗體是否能夠阻斷MICA結(jié)合的示例性試驗(yàn)見實(shí)施例3。同一試驗(yàn)可用于 測定抗體介導(dǎo)的對其它NKG2D配體的阻斷。多肽的“變體”是指具有與通常為天然或“親本”多肽的參比多肽基本相同的氨基 酸序列的多肽。多肽變體可在天然氨基酸序列內(nèi)某些位置上具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、 缺失和/或插入和/或在一端或兩端具有氨基酸添加。在文中，術(shù)語兩個(gè)氨基酸序列“基本相同”是指例如通過采用默認(rèn)空位權(quán)重 (default gap weight)的程序GAP或BEST-FIT進(jìn)行最佳比對時(shí)，序列共有至少約50%序 列同一性。作為基本相同的序列通?？删哂兄辽偌s60 %、至少約70 %、至少約80 %、至少約 90%、至少約95%、至少約98%或至少約99%序列同一性。在兩個(gè)基本相同的氨基酸序列中“相應(yīng)的，，氨基酸位置是經(jīng)過本文所提及的任何 蛋白質(zhì)分析軟件比對的氨基酸位置。核酸序列(或元件)當(dāng)被放置在與另一核酸序列有功能關(guān)系的位置上時(shí)，與另一 核酸序列(或元件)“有效連接”。例如，如果某一多肽作為參與所述多肽分泌的前蛋白表 達(dá)，則前序列或分泌前導(dǎo)序列的DNA與所述多肽的DNA (即編碼多肽表達(dá)的DNA)有效連接； 如果啟動(dòng)子或增強(qiáng)子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則其與所述序列有效連接；或者如果將核糖體 結(jié)合位點(diǎn)置于促進(jìn)翻譯的位置，則所述核糖體結(jié)合位點(diǎn)與編碼序列有效連接。一般而言， “有效連接”是指所連接的DNA序列是鄰接的，在分泌前導(dǎo)序列的情況中，是鄰接且位于讀相 (reading phase)內(nèi)。然而，一些元件，例如增強(qiáng)子，不必與編碼序列鄰接便可有效連接。連 接通常通過在適宜的限制位點(diǎn)上連接來完成。如果這類位點(diǎn)不存在，則可按照常規(guī)做法使 用合成的寡核苷酸銜接子或接頭。“分離的”分子是在組成成分中相對于其所屬的分子類別而言是主要種類的分子 (即在組成成分中該分子類型構(gòu)成至少約50%，通常可構(gòu)成該分子種類(例如組成成分中 的肽)的至少約70%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%以上)。通常， 對于抗體分子，在組成成分的所有本發(fā)明的肽類的情況下，或者在所給出用途的情況下至 少相對于主要活性肽類而言，抗體分子的組成成分可具有98%、98%或99%同質(zhì)性。在本發(fā)明的情況下，“治療(treatment/treating) ”是指預(yù)防、緩解、控制、治愈或 減輕一種或多種癥狀或者疾病或病癥的臨床相關(guān)表現(xiàn)，除非與本文內(nèi)容相抵觸。例如對確 定為無癥狀或者疾病和病癥的臨床相關(guān)表現(xiàn)的患者進(jìn)行“治療”是防治性或預(yù)防性治療，而 對已確定具有癥狀或者疾病和病癥的臨床相關(guān)表現(xiàn)的患者的臨床性、治療性或治標(biāo)性“治 療” 一般不構(gòu)成防治性或預(yù)防性治療。各種治療形式可視為本發(fā)明的獨(dú)特方面。發(fā)明詳述本發(fā)明部分基于具有適于治療患有NKG2D相關(guān)病癥(例如自身免疫疾病和病癥和 炎癥性疾病和病癥)的人類患者的性質(zhì)的抗NKG2D抗體。本發(fā)明的抗體通常是完整人或人 源化抗體以使得由患者自身免疫系統(tǒng)對抗體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答風(fēng)險(xiǎn)降到最低，并且以其活性 形式即位于細(xì)胞表面并與DAPlO締合的同二聚體與hNKG2D結(jié)合。
本發(fā)明的抗體通常用于治療其中應(yīng)降低NKG2D活性的疾病。這類抗體可以減少或 抑制表達(dá)NKG2D的NK和/或T細(xì)胞的活性，通過例如與一種或多種內(nèi)源性NKG2D配體競爭 結(jié)合NKG2D或者阻斷一種或多種內(nèi)源性NKG2D配體結(jié)合NKG2D、下調(diào)或減少結(jié)合時(shí)細(xì)胞表面 NKG2D的量、和/或引發(fā)針對細(xì)胞的ADCC或CDC反應(yīng)。在一個(gè)方面，本發(fā)明的抗體是拮抗劑并且與一種或多種天然配體例如MICA競爭 結(jié)合人NKG2D，從而降低配體誘導(dǎo)的NKG2D活化。MICA分子無疑涉及炎癥性疾病，而且，如 實(shí)施例3中所述，若干人抗體、特別是與MS和21F2有效阻斷MICA與細(xì)胞表面NKG2D的結(jié) 合，表位測定表明MS Fab阻礙MICA結(jié)合(實(shí)施例11，圖20)。MS和21F2兩者也都在阻斷 NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性中十分有效(實(shí)施例6)。因此，這些結(jié)果證實(shí)本發(fā)明提供具有這類 性質(zhì)的抗體。在一個(gè)更具體的方面，本發(fā)明的抗體是有效的拮抗劑，但對hNKG2D信號轉(zhuǎn)導(dǎo)卻也 沒有顯著的激動(dòng)作用，因此不會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生NKG2D驅(qū)動(dòng)的炎癥。例如，如圖19所示，未能檢測 到固定化MS對CD3觸發(fā)的PBMC增殖的共刺激，但是固定化0N72引起小卻顯著的共刺激。在 不受理論的束縛下，這種差異可能至少部分是由于表位上的差異所引起，見圖20-22。二價(jià) MS抗體的抗原結(jié)合部分與hNKG2D 二聚體復(fù)合體中的一個(gè)單體牢固結(jié)合，但卻阻斷第二 MS 抗體(或同一抗體的第二個(gè)抗原結(jié)合部分)與第二個(gè)單體結(jié)合。相比之下，當(dāng)二價(jià)hz0N72 抗體的抗原結(jié)合部分與hNKG2D 二聚體中的第一個(gè)單體結(jié)合時(shí)，這不阻斷第二個(gè)hz0N72抗 體(或同一抗體的第二抗原結(jié)合部分)與第二個(gè)單體的結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供人或人源化的抗NKG2D抗體，該抗體當(dāng)加入表達(dá) NKG2D的NK細(xì)胞或T細(xì)胞中時(shí)，使不超過二個(gè)hNKG2D 二聚體交聯(lián)。這類抗體優(yōu)選是二價(jià) 的。其抗原結(jié)合部分與NKG2D單體單元的結(jié)合阻斷進(jìn)一步結(jié)合第二 NKG2D單體單元的二價(jià) 抗體(例如MS)至多僅可使二個(gè)hNKG2D 二聚體交聯(lián)。相比之下，可結(jié)合hNKG2D 二聚體中 的一個(gè)NKG2D單體單元而不會(huì)阻斷結(jié)合hNKG2D 二聚體中的第二 NKG2D單體單元的二價(jià)抗 體可以引起任何數(shù)目的hNKG2D 二聚體發(fā)生交聯(lián)。在受體活化時(shí)通常出現(xiàn)表面受體的聚簇。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供人或人源化抗NKG2D抗體，該抗體當(dāng)加入表達(dá) NKG2D的NK細(xì)胞或T細(xì)胞中時(shí)，僅與hNKG2D 二聚體復(fù)合體中的一個(gè)單體牢固結(jié)合。在不 受理論的束縛下，與二聚體的兩個(gè)單體牢固結(jié)合可為NKG2D受體活化的前提條件。MICA和 hz0N72與hNKG2D 二聚體中的兩個(gè)單體單元牢固結(jié)合。然而，MS與hNKG2D 二聚體的結(jié)合以 結(jié)合單體單元之一占優(yōu)勢，而與第二單體單元的結(jié)合弱且無特異性，而且在第二 hNKG2D單 體上具有較小的溶劑排斥表面積(實(shí)施例11)。在單獨(dú)和特定的優(yōu)選實(shí)施方案中，被本發(fā)明 抗體結(jié)合的第一和第二 NKG2D單體單元的溶劑排斥表面積之比大于約1 1，至少約2 1， 或至少約3 1。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供與MS結(jié)合基本上相同表位的人或人源化抗NKG2D 抗體。在不受理論的束縛下，在hNKG2D 二聚體上配體與特定殘基或殘基組合的相互作用可 能避免或最小化激動(dòng)劑活性。在獨(dú)立和具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位包含至少1 個(gè)殘基選自、至少3個(gè)殘基選自、至少5個(gè)殘基選自、至少8個(gè)殘基選自、至少10個(gè)殘基選 自、至少12個(gè)殘基選自或所有殘基都選自hNKG2D (SEQ ID NO 2)的Lys 150,Ser 15UTyr 152,Thr 180、Ile 181、Ile 182,Glu 183,Met 184,Gln 185、Leu 191、Lys 197,Tyr 199、 Glu 201、Thr 205、Pro 206、Asn 207和 Thr 208。
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在一個(gè)方面，本發(fā)明提供完整人抗體或其抗原結(jié)合片段，其有效防止表達(dá)hNKG2D 的NK細(xì)胞或T細(xì)胞的NKG2D介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，在結(jié)合hNKG2D時(shí)至少與MICA競爭；結(jié)合時(shí) 通過例如刺激hNKG2D的下調(diào)、hNKG2D的內(nèi)化和/或防止hNKG2D的再現(xiàn)，來減少細(xì)胞表面 hNKG2D的量；與hNKG2D的親和力為IOnM以下，與食蟹猴和/或獼猴NKG2D交叉反應(yīng)；以及 例如因具有IgG4同種型而為非耗盡性的(non-d印leting)。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，抗 體是IgG4同種型的非耗盡性完整人抗體，與hNKG2D的親和力為InM以下，優(yōu)選300pM以 下，它阻斷至少50%、至少70%或至少90%的內(nèi)源性hNKG2D配體結(jié)合，以及減少細(xì)胞表面 hNKG2D的量達(dá)至少10%、至少30%或至少50%。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，抗體是二價(jià) 非耗盡性IgG4同種型的完整人抗體，其親和力低于ΙΟΟρΜ，阻斷完全飽和劑量的MICA-Fc與 細(xì)胞表面締合的NKG2D結(jié)合的EC50濃度低于0. Olng/ml，結(jié)合時(shí)能夠減少細(xì)胞表面NKG2D 的量達(dá)至少75%，并且任選，降低配體誘導(dǎo)的NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性的EC50濃度小于結(jié)合細(xì)胞 表面締合的NKG2D所必需的EC50濃度。在使用表達(dá)NKG2D的細(xì)胞的試驗(yàn)中，抗體還能夠以 低于獲得飽和的hNKG2D受體所必需的濃度(即飽和劑量)，達(dá)到其hNKG2D下調(diào)的最大水 平。在包括實(shí)施例在內(nèi)的下列各部分中，將更詳細(xì)地描述特異性結(jié)合hNKG2D和具有 這些性質(zhì)的一些或全部的抗體的產(chǎn)生、表征和用途。抗NKG2D 抗體本發(fā)明抗體的特征在于特殊功能和/或結(jié)構(gòu)特征或性質(zhì)。在實(shí)施例中詳細(xì)描述了 評價(jià)抗hNKG2D抗體的功能活性的試驗(yàn)，下面將描述結(jié)構(gòu)性質(zhì)，例如氨基酸序列。功能性質(zhì)本發(fā)明的抗體與hNKG2D結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體以高親和力與 hNKG2D結(jié)合，例如KD為ICT7M以下，KD為ICT8M以下，KD為InM以下，KD為0. 3nM以下，KD 為0. 2nM以下，0. InM以下，0. 05nM以下或0. OlnM以下。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，抗體以 0. InM以下的親和力與hNKG2D結(jié)合。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供還與猴例如食蟹猴(Macaca fascicularis, NCBI檢索號 AJ426429)和獼猴(Macaca mulatta, NCBI 檢索號 AJ554302)的一種或多種 NKG2D 直向同 源物結(jié)合和/或與hNKG2D同二聚體、正確折疊的單體全長hNKG2D、包含hNKG2D的胞外部分 的hNKG2D片段、變性hNKG2D或與前述NKG2D形式的任何組合結(jié)合的抗體。例如，如實(shí)施例 5中所證實(shí)的一樣，按照相應(yīng)的EC50 (即最大有效濃度的一半)值，人抗體21F2和MS與特 定食蟹猴細(xì)胞類型的結(jié)合分別比其與同一人細(xì)胞類型的結(jié)合多約65%和約75%。因此，在 一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體與食蟹猴和/或獼猴NKG2D的結(jié)合具有與其結(jié)合hNKG2D相 似的親和力或功效。例如，抗體可與表達(dá)NKG2D的食蟹猴或獼猴NK細(xì)胞或T細(xì)胞結(jié)合，其 EC50為表達(dá)NKG2D的人NK細(xì)胞或T細(xì)胞相應(yīng)群體的相應(yīng)EC50的約50%以上、約65%以上 或約75%以上。此外或者備選地，抗體可與食蟹猴或獼猴NKG2D結(jié)合的親和力是對hNKG2D 的親和力的約30%以上，約50%以上，約65%以上或約75%以上，約80%以上，約85%以 上或約90%以上。這類抗體具有優(yōu)勢，可供在用于人體前在大多數(shù)合適動(dòng)物模型(或多個(gè) 模型)中進(jìn)行毒性試驗(yàn)。在一個(gè)具體的方面，本發(fā)明的抗體還結(jié)合已知鼠抗hNKG2D抗體(例如0N72)不 結(jié)合的NKG2D形式。確切地講，如實(shí)施例3中所述，與0N72預(yù)孵育只阻斷約82%的隨后加入的人16F16抗體與hNKG2D結(jié)合，而與16F16預(yù)孵育則阻斷約95%的隨后加入的0N72與 hNKG2D 結(jié)合。此外，本發(fā)明的抗體可以降低或抑制hNKG2D介導(dǎo)的NK細(xì)胞或T細(xì)胞的活化，即拮 抗hNKG2D受體。這可在例如本文所述的或本領(lǐng)域已知的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞毒性測定法中驗(yàn) 證。例如，與在任何抗hNKG2D抗體不存在時(shí)或與在非特異性對照抗體存在時(shí)的靶細(xì)胞殺死 相比，如果抗體抑制NK細(xì)胞或T細(xì)胞介導(dǎo)的殺死表達(dá)NKG2D配體的靶細(xì)胞達(dá)至少10%，更 優(yōu)選達(dá)至少30 %，甚至更優(yōu)選達(dá)至少40 %，至少50 %，至少60 %，至少70 %，至少80 %或至 少90%，則抗體抑制hNKG2D介導(dǎo)的NK細(xì)胞或T細(xì)胞的活化。作為hNKG2D拮抗劑的本發(fā)明抗體可能無激動(dòng)劑活性或激動(dòng)劑活性低下。這類抗 體優(yōu)選是人或人源化抗體。以本文所述試驗(yàn)之一或本領(lǐng)域已知試驗(yàn)測定激動(dòng)劑活性。例如， 一種試驗(yàn)類型是共刺激試驗(yàn)，測定在固定化抗NKG2D抗體存在或不存在時(shí)，低水平CD3刺激 的外周血淋巴細(xì)胞(PBMC)的增殖(參見實(shí)施例10)。在這類試驗(yàn)中，與抗體不存在時(shí)相比， 在本發(fā)明的抗體存在時(shí)增殖至多30%、至多20%、至多10%、至多5%或不明顯更高。優(yōu)選 在本發(fā)明的抗體存在時(shí)增殖不顯著高于抗體不存在時(shí)。在另外的或備選的實(shí)施方案中，在 激動(dòng)劑試驗(yàn)中，本發(fā)明抗體的hNKG2D激動(dòng)劑活性至多30 %，至多20 %，至多10 %，至多5 % 或不明顯高于對照值。對照優(yōu)選為陰性對照，例如，在抗體不存在時(shí)，在細(xì)胞或另一試劑不 存在時(shí)，和/或在無關(guān)抗體存在時(shí)。本發(fā)明抗體的激動(dòng)劑活性優(yōu)選不明顯高于對照值。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了抗體，所述抗體的阻斷配體誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性的EC50 濃度比結(jié)合NK細(xì)胞或T細(xì)胞的細(xì)胞表面NKG2D的EC50濃度更低、優(yōu)選低得多。例如，對于 0N72，結(jié)合在BaF/3細(xì)胞上表達(dá)的細(xì)胞表面NKG2D的EC50濃度(0. 062 μ g/ml)近似于阻斷 NK細(xì)胞介導(dǎo)的殺死表達(dá)配體(ULBP3)的靶細(xì)胞的EC50濃度(0. 065 μ g/ml)，而與結(jié)合細(xì)胞 表面NKG2D 的 EC50(21F2 0. 033 μ g/ml ；MS 0. 032g/ml)相比，21F2 的阻斷細(xì)胞毒性的 EC50 較低而MS明顯較低(21F2 0. 021 μ g/ml ；MS :0· 012 μ g/ml)(參見實(shí)施例6和實(shí)施例9)。 另外，與21F2和16F16(其濃度相當(dāng)于飽和濃度或更高，圖3)相比，MS以較低濃度(濃度僅 相當(dāng)于細(xì)胞締合的NKG2D受體的飽和約80%，圖3)達(dá)到細(xì)胞毒性的最大阻斷。因此，在一 個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抗體，優(yōu)選人或人源化抗體，所述抗體的阻斷配體誘導(dǎo)的細(xì)胞 毒性的EC50濃度比結(jié)合NK細(xì)胞或T細(xì)胞的細(xì)胞表面NKG2D的EC50濃度更低。阻斷某一 細(xì)胞系或其它合適的制備物的NK細(xì)胞或T細(xì)胞的細(xì)胞毒性的EC50可以是結(jié)合同一細(xì)胞系 或制備物的細(xì)胞表面NKG2D的EC50的例如約95 %以下，約90 %以下，約85 %以下，約80 % 以下，約70%以下，約50%以下或約40%以下。用于測試的示例性的細(xì)胞系包括NK-92和 NKL細(xì)胞。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供以濃度低于使有效hNKG2D受體飽和所必需的 濃度實(shí)現(xiàn)NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性的最大阻斷的抗體。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，抗體還與MS 競爭結(jié)合hNKG2D。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，這類抗體與MS結(jié)合基本相同的hNKG2D表 位?？贵w可通過例如干擾hNKG2D結(jié)合一個(gè)或多個(gè)內(nèi)源hNKG2D配體，來降低或抑制 NKG2D介導(dǎo)的活化。例如，抗體可例如通過降低或抑制MICA的hNKG2D結(jié)合；或MICA和MICB 的 hNKG2D 結(jié)合；或 MICA 和 ULBP3 的 hNKG2D 結(jié)合；或 MICA、MICB 和 ULBP3 的 hNKG2D 結(jié)合； 或 MICA、MICB 和所有 ULBP1、ULBP2、ULBP3 和 ULBP4 的 hNKG2D 結(jié)合；或 MICA、MICB 和一個(gè)或多個(gè)RAETl家族成員的hNKG2D結(jié)合，來降低或抑制MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP4和/ 或RAETl家族成員的hNKG2D結(jié)合。可以采用本文所述的結(jié)合測定法或競爭測定法，評價(jià)抗 體抑制內(nèi)源性NKG2D配體的hNKG2D結(jié)合的能力。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體能夠抑 制至少30%的配體結(jié)合，或至少50%的配體結(jié)合，或至少70%的配體結(jié)合，或至少80%或 至少90%的配體結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體抑制1 μ g MICA-mFc的hNKG2D 結(jié)合的IC50為InM以下，0. 5nM以下，0. 2nM以下，0. InM以下，0. 05nM以下或0. 02nM以下， 0. OlnM以下，0. 005以下或0. 002以下。在另一個(gè)實(shí)施方案中，實(shí)現(xiàn)1 μ g MICA-mFc結(jié)合的完 全阻斷的抗體濃度為5nM以下，InM以下，0. 7nM以下，0. 5nM以下或0. 2nM以下，0. InM以下， 0. 05nM以下或約0. 02nM以下。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供與0N72、BAT221、5C6、1D11、 ECM217和149810的任一種相比，在減少或抑制配體hNKG2D結(jié)合(例如MICA與hNKG2D結(jié) 合)方面一樣有效或更有效的抗體，尤其人抗體。此外或者備選地，本發(fā)明的抗hNKG2D抗體在結(jié)合時(shí)(即在結(jié)合后)能夠減少細(xì)胞 表面hNKG2D的量。在抗體結(jié)合時(shí)減少細(xì)胞表面締合的hNKG2D可能是有利性質(zhì)，因?yàn)樗鼫p 少可供配體結(jié)合和隨后活化的hNKG2D受體的數(shù)目。在不受理論的束縛下，這種減少可能是 由NKG2D下調(diào)、內(nèi)化或其它機(jī)制引起的。如本文所示，具有人Fc區(qū)的抗hNKG2D抗體，例如 人抗體，能夠有效地減少細(xì)胞表面hNKG2D的量。例如，人抗hNKG2D抗體16F16、MS和21F2 全都在血清不存在時(shí)經(jīng)過夜孵育之后減少細(xì)胞表面hNKG2D的量約75%以上，其中MS最有 效，在低濃度下達(dá)到75-90%下調(diào)(圖15-17)。此外，在血清存在時(shí)，對應(yīng)于小于表達(dá)hNKG2D 的BaF/3細(xì)胞上的飽和濃度的MS濃度可達(dá)到最大的下調(diào)(圖16B)。因此，在一個(gè)實(shí)施方 案中，本發(fā)明提供結(jié)合hNKG2D的抗體，所述抗體以低于飽和濃度就能夠達(dá)到最大hNKG2D下 調(diào)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這類抗體還與MS競爭結(jié)合hNKG2D。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這類 抗體還與MS結(jié)合基本相同的hNKG2D表位。與在抗hNKG2D抗體不存在時(shí)或在非特異性對照 抗體存在時(shí)的細(xì)胞表面hNKG2D相比，本發(fā)明的抗體能夠減少細(xì)胞表面hNKG2D達(dá)至少10 %、 至少20%、至少30%、至少50%、至少70%或至少90%。優(yōu)選在不引起NKG2D受體信號轉(zhuǎn) 導(dǎo)活化或者NKG2D受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活化最低、即無激動(dòng)劑活性或激動(dòng)劑活性最低的同時(shí)，抗 體實(shí)現(xiàn)細(xì)胞表面NKG2D的減少。本文描述了用于評價(jià)細(xì)胞表面hNKG2D和抗hNKG2D抗體的 激動(dòng)劑活性的示例性試驗(yàn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抗體，特別是人抗體，所述抗 體能夠比選自0N72、BAT221、5C6、1D11、ECM217和149810的對照抗體更高程度地進(jìn)行減量 調(diào)節(jié)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗hNKG2D抗體能夠以低于飽和濃度的濃度實(shí)現(xiàn)由細(xì) 胞或細(xì)胞系表達(dá)的細(xì)胞表面NKG2D的最大下調(diào)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供與16F16、16F31、MS和/或21F2、更優(yōu)選與MS 和/或21F2競爭和/或與16F16、16F31、MS和/或21F2、更優(yōu)選與MS和/或21F2結(jié)合 hNKG2D上的相同表位的抗體。在如本文所述的標(biāo)準(zhǔn)hNKG2D結(jié)合測定法中，這類抗體可根據(jù) 其與16F16、16F31、MS或21F2交叉競爭的能力來鑒定。試驗(yàn)抗體抑制16F16、16F31、MS或 21F2與hNKG2D結(jié)合的能力表明，試驗(yàn)抗體可與16F16、16F31、MS或21F2競爭結(jié)合hNKG2D， 因此可與16F16、16F31、MS或21F2結(jié)合hNKG2D上的相同表位。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中， 與16F16、16F31、MS或21F2結(jié)合hNKG2D上的相同表位的抗體是人單克隆抗體。這類人單 克隆抗體可以按照實(shí)施例中所述來制備和分離。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，與小鼠單克隆抗體0N72、BAT221、5C6、1D11、ECM217
15和149810的任一種相比，所述抗體結(jié)合不同的表位，比起所列舉的小鼠單克隆抗體的任一 種，更多地與16F16、16F31、MS或21F2交叉競爭。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位包含一個(gè)或多個(gè)選自hNKG2D(SEQ ID NO 2)的以下殘基Lys 150、Ser 151、Tyr 152、Thr 180、Ile 181、Ile 182、Glu 183、Met
184、Gln185、Leu 191、Lys 197、Tyr 199、Glu 201、Thr 205、Pro 206、Asn 207 禾Π Thr 208。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位包含5個(gè)以上選自hNKG2D(SEQ ID NO 2)的以 下殘基Lys 150、Ser 151、Tyr 152、Thr 180、lie 181、lie 182、Glu 183、Met 184、Gln
185、Leu191、Lys 197,Tyr 199,Glu 20UThr 205,Pro 206,Asn 207 和 Thr 208。在一個(gè) 實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位包含8、10、12個(gè)以上選自hNKG2D(SEQ ID NO 2)的以下殘 基Lys 150、Ser 151、Tyr 152、Thr 180、Ile 181、Ile 182、Glu 183、Met 184、Gln 185、 Leu 191、Lys 197,Tyr 199,Glu 20UThr 205,Pro 206,Asn 207 和 Thr 208。在一個(gè)實(shí)施 方案中，本發(fā)明抗體的表位包含hNKG2D(SEQ ID NO 2)的殘基Lys 150,Ser 151、Tyr 152、 Thr 180、Ile 181、Ile 182、Glu 183、Met 184、Gln 185、Leu 191、Lys 197、Tyr 199、Glu 20UThr 205,Pro 206,Asn 207和Thr 208。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位基本由 hNKG2D(SEQ ID NO :2)的以下殘基組成Lys 150,Ser 15UTyr 152,Thr 180、Ile 181、Ile
182、Glu183,Met 184,Gln 185、Leu 191、Lys 197,Tyr 199,Glu 201,Thr 205,Pro 206、 Asn 207和Thr 208。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位由一個(gè)或多個(gè)選自hNKG2D (SEQ ID NO 2)的以下殘基組成Lys 150、Ser 151、Tyr 152、Thr 180、Ile 181、Ile 182、Glu
183、Met184、Gln 185、Leu 191、Lys 197、Tyr 199、Glu 201、Thr 205、Pro 206、Asn 207 和Thr 208。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位由hNKG2D(SEQ ID NO 2)的以下殘基組 成Lys 150、Ser 151、Tyr 152、Thr 180、Ile 181、Ile 182、Glu 183、Met 184、Gln 185、 Leu 191,Lys 197,Tyr 199,Glu 201,Thr 205,Pro 206,Asn 207 和 Thr 208。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位包含一個(gè)或多個(gè)參與氫結(jié)合的選自 hNKG2D(SEQ ID NO :2)的以下殘基Lys 150,Ser 151、Tyrl52、Ile 181、Met 184,Gln 185、 Lys 197、Thr 205和Asn 207。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位包含5以上參與氫 結(jié)合的選自 hNKG2D(SEQ ID NO 2)的以下殘基Lys 150, Ser 151, Tyr 152、lie 181、Met
184、Gln185、Lys 197、Thr 205和Asn 207。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體的表位包含 hNKG2D(SEQ ID NO 2)的Lys 150,Ser 15UTyr 152、Ile 181、Met 184,Gln 185,Lys 197、 Thr 205 和 Asn 207。優(yōu)選的本發(fā)明抗體具有下列性質(zhì)的至少一種，更優(yōu)選兩種、三種、四種、五種以上 (a)防止NKG2D介導(dǎo)的表達(dá)NKG2D的NK細(xì)胞或T細(xì)胞的活化，任選降低配體誘導(dǎo)的細(xì)胞毒 性的EC50低于結(jié)合細(xì)胞的EC50 ； (b)與至少一種NKG2D配體競爭結(jié)合NKG2D，優(yōu)選與至少 MICA和ULBP3競爭；(c)減少表達(dá)NKG2D的NK細(xì)胞或T細(xì)胞表面的NKG2D的量，優(yōu)選達(dá)至 少75 % ； (d)與食蟹猴和/或獼猴NKG2D結(jié)合，優(yōu)選親和力為其與hNKG2D結(jié)合的親和力的不 低于50%; (e)與不止一種形式或構(gòu)象的NKG2D結(jié)合；(f)結(jié)合NKG2D的Kd為InM以下，優(yōu) 選0. InM以下；(g)與16F16、16F31、MS或21F2中的一種或多種競爭結(jié)合hNKG2D，(h)在與 hNKG2D結(jié)合方面，與0N72、BAT221、5C6、1D11、ECM217和149810中的任一種相比，更多地與 16F16、16F31、MS 或 21F2 競爭；(i)阻斷超過 90%的 16F16、MS 或 21F2 與細(xì)胞表面 hNKG2D 結(jié)合；(j)具有不顯著的激動(dòng)劑活性，和(k)與16F16、16F31、MS和/或21F2中的任一種結(jié)合基本相同的表位，優(yōu)選與MS和/或21F2結(jié)合基本相同的表位。本發(fā)明的抗體可具有上 述功能特征的任何組合和/或?qū)嵤├兴龅墓δ芴卣?。結(jié)構(gòu)性質(zhì)優(yōu)選的本發(fā)明抗體是按實(shí)施例中所述來產(chǎn)生、分離和進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能表征的人單 克隆抗體16F16、16F31、MS和21F2。這些抗體的全長序列、可變序列和⑶R序列見表1。表 116F16、16F31、MS禾Π 21F2的全長、可變和CDR氨基酸序列
權(quán)利要求
一種分離的人單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其與人NKG2D(hNKG2D)結(jié)合，并且具有一種或多種選自以下的性質(zhì)(a)降低hNKG2D介導(dǎo)的表達(dá)hNKG2D的NK細(xì)胞或T細(xì)胞的活化；(b)與MICA競爭結(jié)合hNKG2D；(c)減少表達(dá)NKG2D的NK細(xì)胞或T細(xì)胞表面上的NKG2D的量；(d)當(dāng)固定化時(shí)，不顯著共刺激CD3觸發(fā)的外周血單核細(xì)胞(PBMC)的增殖；(e)與食蟹猴和獼猴NKG2D結(jié)合；和(f)結(jié)合hNKG2D的KD為1nM以下。
2.權(quán)利要求1的抗體或抗原結(jié)合片段，其具有性質(zhì)(a) (d)，并且任選(e)和/或⑴。
3.一種分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合hNKG2D，并且當(dāng)加入表達(dá)NKG2D 的NK細(xì)胞或T細(xì)胞中時(shí)，使不超過兩個(gè)的hNKG2D 二聚體交聯(lián)。
4.權(quán)利要求3的抗體或抗原結(jié)合片段，當(dāng)其與hNKG2D二聚體中的第一 hNKG2D單體結(jié) 合時(shí)，阻斷所述抗體或抗原結(jié)合片段與第二 hNKG2D單體結(jié)合。
5.權(quán)利要求4的抗體或抗原結(jié)合片段，在hNKG2D二聚體中的第一 hNKG2D單體和第二 hNKG2D單體上的溶劑排斥面積的比率約為2 1。
6.權(quán)利要求3-5中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段，其是人或人源化抗體或抗原結(jié)合片段。
7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段，其與參比抗體競爭結(jié)合hNKG2D，其 中所述參比抗體包含(a)包含SEQID NO 44的序列的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO 45的序列的輕鏈可 變區(qū)；或者(b)包含SEQID NO 46的序列的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO 47的序列的輕鏈可變區(qū)。
8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段，其結(jié)合的表位包含SEQID N0:2的 Lys 150、Ser 151、Tyr 152、Thr 180、Ile 181、Ile 182、Glu 183、Met 184、Gln 185、Leu 191、Lys 197、Tyr 199、Glu 201、Thr 205、Pro 206、Asn 207 或 Thr 208，或其任何組合。
9.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含的抗原互補(bǔ)位中包含的殘基 對應(yīng)于 SEQ ID N0:44 的 Gln UAsp 26,Asp 27, Ser 30,Ser 31,Tyr 32,Tyr 33,His 50、 Ser 52、Tyr 53、Ser 54、Ser 56、Ala 57、Asn 58、Trp 98 或 Asp 99 或者 SEQ ID NO :45 的 Tyr 33或Trp 97，或其任何組合。
10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含(a)包含SEQID NO 48的序列的重鏈可變區(qū)CDRl ；(b)包含SEQID NO 49的序列的重鏈可變區(qū)⑶R2 ；和(c)包含SEQID NO 50的序列的重鏈可變區(qū)⑶R3 ；和任選，(d)包含SEQID NO 51的序列的輕鏈可變區(qū)⑶Rl ；(e)包含SEQID NO 52的序列的輕鏈可變區(qū)⑶R2 ；和(f)包含SEQID NO 53的序列的輕鏈可變區(qū)⑶R3。
11.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含(a)包含SEQID NO 54的序列的重鏈可變區(qū)⑶Rl ；(b)包含SEQID NO 55的序列的重鏈可變區(qū)⑶R2 ；和(c)包含SEQID NO 56的序列的重鏈可變區(qū)⑶R3 ；和任選，(d)包含SEQID NO 57的序列的輕鏈可變區(qū)⑶Rl ；(e)包含SEQID NO 58的序列的輕鏈可變區(qū)⑶R2 ；和(f)包含SEQID NO 59的序列的輕鏈可變區(qū)⑶R3。
12.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段，其包含(a)包含SEQID NO :44的序列的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO :45的序列的輕鏈可 變區(qū)；或者(b)包含SEQID NO :46的序列的重鏈可變區(qū)，和包含SEQ ID NO :47的序列的輕鏈可變區(qū)。
13.—種產(chǎn)生抗NKG2D抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，所述方法包括將宿主細(xì)胞培養(yǎng) 在合適的條件下，并且回收所述抗體或其抗原結(jié)合片段，所述宿主細(xì)胞包含編碼權(quán)利要求 1-12中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段的核酸。
14.一種用于治療炎癥性疾病或自身免疫疾病的方法，所述方法包括給予患有炎癥 性疾病或自身免疫疾病或者有炎癥性疾病或自身免疫疾病風(fēng)險(xiǎn)的人類受治療者權(quán)利要求 1-12中任一項(xiàng)的抗體或抗原結(jié)合片段。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述炎癥性疾病或自身免疫疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多 發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、銀屑病、乳糜瀉、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、移植排斥反應(yīng) 或移植物抗宿主病。
全文摘要
本發(fā)明提供用于人體治療應(yīng)用的分離的抗人NKG2D單克隆抗體。所述抗體通常是完整人或人源化抗體，當(dāng)給予患者時(shí)，會(huì)使針對所述抗體的免疫應(yīng)答風(fēng)險(xiǎn)降到最低。優(yōu)選的抗體包括人單克隆抗體MS和21F2。如本文所述，其它抗原結(jié)合分子，例如抗原結(jié)合抗體片段、抗體衍生物和多特異性分子可以設(shè)計(jì)自或來源于這類抗體。
文檔編號A61P37/06GK101945893SQ200880127171
公開日2011年1月12日 申請日期2008年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月14日
發(fā)明者A·斯文森, B·厄索, I·L·佩德森, P·A·N·R·瓦格特曼 申請人:諾沃-諾迪斯克有限公司